La maggior parte delle persone almeno una volta nella vita viene testata per le infezioni mediante PCR. Ma poche persone sanno cos'è e qual è l'essenza dello studio.
La diagnosi delle infezioni mediante PCR si basa sulla rilevazione del DNA o dell'RNA di un microrganismo patogeno. Può essere rilevato in qualsiasi materiale clinico ottenuto con un metodo invasivo o non invasivo. Rivela il materiale genetico dell'agente patogeno, che viene ripetutamente copiato. Viene determinato un certo frammento del codice genetico corrispondente allo standard.
Se è presente nel materiale clinico, il risultato sarà positivo.
Vantaggi della diagnostica PCR delle infezioni genitali:
- elevata accuratezza e contenuto informativo;
- rischio minimo di un risultato falso positivo o falso negativo;
- utilizzando la PCR, la diagnosi delle infezioni può essere effettuata in qualsiasi materiale clinico;
- quasi tutti i patogeni possono essere rilevati;
- lo studio viene eseguito rapidamente: i risultati possono essere ottenuti entro poche ore dall'analisi.
Attualmente, la diagnosi PCR delle infezioni è uno dei metodi principali per rilevare la maggior parte delle malattie a trasmissione sessuale.
Analisi dell'infezione mediante PCR con quantificazione
Molto spesso, i medici prescrivono test PCR qualitativi per le infezioni. Cioè, il risultato può essere positivo o negativo. Ma in alcuni casi è necessario uno studio quantitativo.
Differisce dal fatto che, oltre al fatto della presenza dell'agente patogeno nelle strutture del sistema genito-urinario, viene determinata la sua concentrazione nel materiale clinico.
La PCR quantitativa per le infezioni è necessaria in questi casi:
- quando si diagnosticano infezioni considerate opportunistiche (in questo caso possono causare processi infiammatori solo con un aumento eccessivo della popolazione di batteri);
- valutare la dinamica del decorso del processo patologico e l'efficacia della terapia;
- valutare la prognosi della malattia, determinare il rischio di complicanze, selezionare una terapia adeguata.
Fa male fare uno striscio per l'infezione da PCR
La maggior parte dei test è indolore o causa un disagio minimo al paziente. Di per sé, la PCR non può in alcun modo causare dolore, perché viene eseguita in un laboratorio, lontano dal paziente.
Solo la procedura per l'assunzione di materiale clinico può essere spiacevole. E può essere diverso. Ovviamente, se l'urina o l'eiaculato vengono prelevati per l'analisi, l'analisi non sarà dolorosa. Allo stesso tempo, se si esamina il liquido cerebrospinale, raschiando dall'uretra, il segreto della ghiandola prostatica, il campionamento del biomateriale sarà più o meno spiacevole. Molto spesso, vengono prelevati raschiati di cellule uretrali per diagnosticare infezioni a trasmissione sessuale. Questa procedura è solitamente spiacevole, ma nella nostra clinica è indolore.
Qual è la differenza tra uno striscio e un'infezione PCR da esame del sangue
Come già accennato, per la diagnosi può essere utilizzato diverso materiale clinico. In uno striscio dell'uretra, vengono determinati quei patogeni presenti nelle strutture dell'uretra. Ma non sono sempre lì. Pertanto, è spesso necessario esaminare un altro biomateriale, ad esempio il sangue.
Ecco alcune infezioni che possono essere prese in uno striscio:
- Analisi PCR delle infezioni batteriche - gonorrea, clamidia, ureaplasmosi, micoplasmosi;
- tricomoniasi;
- virus - HPV, herpes;
- funghi - candida.
Ecco alcune infezioni che possono essere donate nel sangue:
- Analisi PCR delle infezioni virali - HIV, epatite virale, herpes, citomegalovirus;
- patologie batteriche - sifilide (raramente);
- eventuali patologie veneree in caso di loro generalizzazione (gonorrea, candidosi).
In pratica, molto spesso, la PCR del sangue viene eseguita quando si sospettano infezioni virali, che potrebbero non essere rilasciate nell'ambiente esterno attraverso l'uretra.
Chi ha bisogno di diagnosticare un'infezione mediante PCR
Le principali indicazioni per l'analisi PCR per le infezioni:
- controllo dopo il trattamento;
- la presenza di sintomi di una malattia a trasmissione sessuale;
- storia di rapporti non protetti con un nuovo partner;
- rilevamento di infezioni in un partner permanente;
- esame prima della gravidanza, fecondazione in vitro, operazioni chirurgiche;
- diagnosi di infertilità al fine di determinarne le cause.
Alcune persone vengono esaminate senza indicazioni, a scopo preventivo.
Questo perché la maggior parte delle malattie sessualmente trasmissibili può manifestarsi senza sintomi. Tuttavia, si diffondono ancora nella popolazione, causano complicazioni e rappresentano un pericolo per la salute riproduttiva. Pertanto, ogni persona che conduce una vita sessuale attiva, cambiando partner di tanto in tanto, dovrebbe essere esaminata a intervalli regolari per rilevare eventuali infezioni. Si consiglia di essere esaminati una volta all'anno. Un'analisi PCR standard per 12 infezioni richiederà al massimo mezz'ora del tuo tempo. Ma consentirà il rilevamento tempestivo di malattie pericolose.
Analisi dell'infezione da PCR: come prepararsi per uno striscio e sangue
Prima di fare uno striscio, non devi fare sesso per 2 giorni e non urinare per 2 ore.
Non è necessario prepararsi per un esame del sangue. Indipendentemente dal materiale clinico che doni, non dovresti assumere antibiotici fino alla fine della diagnosi.
Come valutare il risultato di un test PCR per le infezioni
Quando si esegue la diagnostica PCR delle infezioni, l'interpretazione dei risultati viene eseguita solo da un medico. A prima vista, non presenta alcuna difficoltà.
In effetti, sotto forma di analisi, il risultato è molto spesso positivo o negativo. Ma è importante tenere conto dei sintomi complessi, dei dati di altri test, dei dati storici. A volte ci sono risultati falsi positivi dell'analisi PCR per le infezioni. In altri casi, i risultati dell'analisi PCR per le infezioni sono falsi negativi.
Nel primo caso viene rilevata un'infezione che in realtà non c'è. Nel secondo caso, l'agente patogeno presente nel corpo non viene rilevato. Affinché il risultato sia affidabile, è importante capire quando un test PCR è positivo per infezione dopo infezione. Si consiglia di eseguire la diagnostica non prima di 2 settimane dopo il rapporto sessuale non protetto.
Analisi PCR per infezioni - quale medico prescrive
La diagnosi delle infezioni mediante PCR è utilizzata in molti rami della medicina. Una delle principali aree di applicazione è la venereologia. Tali test sono prescritti da un venereologo, meno spesso da un ginecologo o urologo.
Se stai cercando dove eseguire un test PCR per le infezioni, vieni nella nostra clinica.
I nostri vantaggi:
- campionamento indolore di materiale clinico;
- test diagnostici rapidi;
- niente code
- elevata accuratezza diagnostica;
- la possibilità di ottenere un consulto medico e, se necessario, prescrivere un trattamento.
La tempistica dell'analisi dell'infezione da PCR di solito non supera 1 giorno. In alcuni casi, i risultati possono essere ottenuti entro poche ore. Ma il prezzo della diagnostica urgente è più alto. Nella nostra clinica vengono effettuati studi per singole malattie, nonché complesse analisi PCR per 12 infezioni.
Il costo delle procedure diagnostiche dipende da una serie di fattori:
- urgenza della diagnosi;
- materiale clinico utilizzato;
- il numero di agenti patogeni
La nostra clinica collabora con diversi laboratori. Questo ci consente di fornire una vasta gamma di servizi diagnostici e prezzi bassi per la ricerca.
Se è necessario eseguire test PCR per infezioni, contattare venereologi competenti.
L'analisi PCR è un test diagnostico ad alta precisione che consente di rilevare i patogeni delle malattie infettive dal loro materiale genetico (RNA, DNA) in un campione di fluido biologico prelevato da una persona.
La reazione a catena della polimerasi consente di diagnosticare un'ampia gamma di malattie di eziologia virale, comprese quelle presenti nel corpo umano da molto tempo, che si verificano in modo latente. Molto spesso, l'analisi PCR è prescritta nella pratica ginecologica e urologica.
Principali indicazioni
L'analisi PCR è prescritta per il sospetto delle seguenti patologie:
- epatite virale (A, B, C);
- infezione da citomegalovirus;
- infezioni gastrointestinali (enterovirus);
- herpes zoster (lichene);
- Malattia di Filatov (tonsillite monocitica);
- neurollosi (granulomatosi dei neonati).
La possibilità di utilizzare non solo il sangue venoso come biomateriale amplia notevolmente l'elenco delle patologie diagnosticate dalla PCR. Questo elenco include:
- vaginosi batterica;
- salmonellosi;
- difterite;
- varie forme di tubercolosi;
- virus del papilloma umano;
- malattie sessualmente trasmissibili;
- micoplasma hominis;
- ureaplasma urelitico.
Come prepararsi allo studio
La preparazione per la diagnostica PCR dipende dal materiale biologico che verrà esaminato. Quando si dona il sangue 3 giorni prima, si esclude l'assunzione di alcol, fluidificanti del sangue, si raccomanda di seguire una certa dieta. Quando si prende uno striscio dall'uretra e dalla vagina per 3-5 giorni, l'intimità è esclusa e la pulizia non dovrebbe essere eseguita in questo momento. Gli strisci non vengono somministrati durante il periodo delle mestruazioni, prima e entro 5 giorni dalla fine.
Caratteristiche di analisi
Il materiale biologico per la ricerca PCR può essere sangue, saliva, strisci. La scelta dipende dal tipo di virus o patologia infettiva. Se si sospetta una malattia a trasmissione sessuale, vengono fornite l'urina mattutina e il raschiamento dalla mucosa della parete vaginale. Con herpes, epatite, HIV - sangue venoso, in un volume di almeno 5 ml. In caso di danno al sistema nervoso centrale, il biomateriale è il liquido cerebrospinale.
La PCR viene utilizzata nella diagnosi delle patologie intrauterine del feto (il materiale è tessuto placentare), con infezioni di tipo polmonare (viene esaminato il fluido dalla cavità pleurica o dall'espettorato).
Esistono diversi metodi per condurre l'analisi PCR:
- diagnostica in tempo reale;
- determinazione della sequenza aminoacidica e nucleotidica del DNA;
- metodo di sequenziamento del DNA;
- nanofluidica.
Molto spesso viene utilizzato uno studio in tempo reale, è uno dei metodi più informativi, fornisce la percentuale più bassa di risultati falsi positivi. L'analisi viene effettuata durante il giorno.
In conclusione, viene indicata una delle opzioni per il risultato dello studio: positiva (conferma la presenza di un processo patologico) o negativa (indica la sua assenza).
La reazione a catena della polimerasi (PCR, PCR), scoperta dall'americana Carrie Mullis nel 1983, e il metodo di rilevamento del DNA sviluppato sulla sua base, hanno portato allo scienziato il Premio Nobel per la Chimica nel 1993. Oggi è uno dei metodi più accurati nella diagnosi di laboratorio delle malattie infettive. Ti permette di scoprire cosa è rimasto nascosto prima dell'avvento della PCR.
Perché un metodo così meraviglioso non ha soppiantato altri tipi di diagnostica di laboratorio, ma è usato alla pari con loro e in qualche modo perde persino contro di loro?
Esistono diversi metodi per rilevare le infezioni nei fluidi corporei dei pazienti.
- metodi microscopici.
Usando un microscopio, un assistente di laboratorio cerca microrganismi patogeni in uno striscio appositamente colorato: un campione di secrezione dall'uretra o dalla parete della mucosa. Economico, semplice, ma poco informativo. Pertanto, è possibile distinguere Trichomonas, gonococchi, clamidia, ureaplasma e gardnerella. E questo è tutto.
- Metodi colturali (colture).
Lo stesso identico striscio viene applicato a un mezzo nutritivo in una capsula di Petri e guarda cosa cresce. Tutti i microrganismi formano colonie diverse per colore, forma, dimensione e consistenza. È da queste colonie che viene determinato: chi era nella macchia. Inoltre, in generale, poco costoso, ma lungo, la coltivazione di microrganismi può durare da 3 a 8 settimane - durante questo periodo le condizioni del paziente possono deteriorarsi in modo significativo. E c'è un'altra sfumatura: crescerà solo ciò che era nella macchia e in una certa quantità. Se c'erano troppo pochi batteri patogeni, non sarà possibile identificarli.
- Analisi del sangue.
Eventuali agenti patogeni lasciano dopo il contatto con il corpo umano le loro tracce immunitarie nel suo sangue: antigeni o anticorpi. Il metodo non è il più economico, ma veloce. Ma anche qui va tenuto presente che fino a un certo punto l'infezione potrebbe già essere nel corpo, e anticorpi e antigeni non sono ancora stati rilevati: è passato troppo poco tempo o una concentrazione troppo bassa di microrganismi patogeni. Inoltre, questo metodo non consente di distinguere tra i tipi di singoli microrganismi, che non sono sempre pericolosi per l'uomo.
Quindi, tutti i metodi hanno i loro svantaggi. Tra quelli chiave ci sono i seguenti:
- Bassa sensibilità, cioè un certo numero minimo di microrganismi è richiesto nel campione per essere rilevato.
- Bassa specificità, cioè se due diversi tipi di batteri (uno è pericoloso, l'altro no) hanno le stesse proteine sulla superficie cellulare, quindi non tutte le analisi consentono di scoprire quale di queste specie si trova nel corpo.
Entrambi questi problemi possono essere risolti con il metodo PCR.
Il metodo si basa sul fatto che ogni organismo vivente (micro o macro) ha un DNA unico (o RNA - se parliamo di alcuni virus). Questo è il miglior indicatore della presenza di un microrganismo estraneo nel corpo umano che si possa immaginare. Anche se nel campione sono presenti tracce di DNA, significa che l'organismo ha già incontrato questa infezione in un modo o nell'altro. E come puoi "vedere" queste tracce? Devono iniziare a "moltiplicarsi".
Il metodo PCR consiste nei seguenti passaggi.
- Fase 1. Preparazione del campione, ovvero estrazione del DNA.
Supponiamo di cercare un batterio specifico nel campione, ad esempio la clamidia (Chlamydia trachomatis - l'agente eziologico della clamidia). In questa fase, non sappiamo se il suo DNA è nel campione. Il campione viene elaborato in modo speciale per concentrare il DNA, se presente, nel volume minimo di fluido PCR.
- Fase 2. Amplificazione (moltiplicazione) del DNA mediante PCR.
In primo luogo, il DNA a doppio filamento viene "srotolato" aumentando la temperatura e si ottengono filamenti a singolo filamento. Successivamente, alla soluzione vengono aggiunti speciali brevi frammenti di acido nucleico - primer. Saranno il seme per la sintesi del secondo filamento di DNA su una "base" a singolo filamento. Quindi, c'è una base, c'è un seme, resta da aggiungere i nucleotidi da cui verrà completata la seconda catena e il dispositivo che sarà coinvolto in questa costruzione. L'enzima DNA polimerasi agisce come tale dispositivo e il processo di completamento della costruzione del DNA a singolo filamento in doppio filamento è la reazione a catena della polimerasi.
All'inizio del ciclo avevamo due DNA a singolo filamento, alla fine avremo due DNA a doppio filamento. E questo ciclo si ripete molte volte fino a quando la quantità di DNA è sufficiente per le analisi di laboratorio. Per moltiplicare il DNA vengono utilizzati dispositivi speciali: amplificatori. In questa fase, inoltre, i ricercatori non sanno ancora quale DNA hanno amplificato o se nel campione è presente DNA di clamidia.
Va inoltre aggiunto che esistono molte varietà del metodo PCR, che vengono utilizzate a seconda del compito assegnato al ricercatore.
- Fase 3. Rilevamento (determinazione) del DNA.
In questa fase, è precisamente ciò che sta accadendo per scoprire se nel campione è presente il DNA del batterio desiderato. In precedenza, per questo veniva utilizzato il metodo dell'elettroforesi e in seguito gli scienziati iniziarono a utilizzare sonde di DNA, speciali frammenti di DNA etichettati che interagiscono solo con una sezione specifica del DNA analizzato e consentono quindi di determinare sequenze nucleotidiche specifiche. Infine, i marcatori fluorescenti vengono ora utilizzati per la diagnostica rapida, che consentono di determinare il risultato della PCR direttamente nella provetta di reazione. Se c'era DNA di clamidia nel campione, l'assistente di laboratorio lo saprà.
Cosa può fare la PCR
Il metodo PCR consente di identificare i microrganismi patogeni e di analizzarli per la loro resistenza (resistenza) ai farmaci. A questo proposito, rispetto alla coltura e ad altri metodi, la PCR è molto più rapida e accurata. I metodi PCR sono sempre più utilizzati nella pratica medica. Ad esempio, ora con il suo aiuto in alcuni casi è possibile determinare la presenza (o l'assenza) di marcatori genetici di resistenza.
Vantaggi della PCR:
- Sensibilità.
Anche una sola copia del suo DNA è sufficiente per rilevare la presenza di un microrganismo patogeno nel corpo di un paziente. 1 microrganismo per campione: questo è sufficiente per la PCR, questo approccio non è possibile per altri metodi diagnostici.
- Specificità.
Come accennato in precedenza, l'unicità del DNA di ogni tipo di microrganismo consente di rilevarli anche in presenza di grandi volumi di DNA alieno, superfluo, "zavorra" che interferisce con l'analisi.
- La velocità dell'analisi.
L'intero processo di diagnostica PCR non richiede più di 1 giorno lavorativo.
- Prestazione.
La diagnostica PCR, oggi, è un processo completamente automatizzato.
Cosa la PCR non può
Il metodo PCR è davvero una brillante invenzione della biologia molecolare del XX secolo. Ma a volte è così buono che non è adatto per la diagnosi.
Svantaggi della PCR:
- Specificità.
È incredibilmente alta, ma troppo stretta. Quando si semina in una capsula di Petri, tutto ciò che era nel campione crescerà. E quando conduci la PCR, puoi trovare solo quello che stavi cercando, per cosa sono state utilizzate le sonde del DNA. È impossibile condurre un'analisi PCR per la clamidia e rilevare accidentalmente l'epatite.
- Sensibilità.
Esistono molti microrganismi che i medici chiamano patogeni opportunisti. Fanno parte della normale microflora umana, purché la loro concentrazione non superi determinati limiti. La PCR mostrerà sicuramente la loro presenza, ma questo non significa affatto che una persona sia malata. Tali microrganismi includono micoplasma, ureaplasma, gardnerella, ecc.
- Problema di contaminazione.
La contaminazione è la contaminazione di un campione con campioni di DNA provenienti dall'esterno. La diagnosi mediante PCR deve essere effettuata in laboratori appositamente preparati e in condizioni sterili. Anche una singola copia di DNA "esterno" da un altro campione, dall'aria di laboratorio o dai guanti di un tecnico di laboratorio può portare a risultati falsi positivi, se sono presenti i primer corretti.
- Influenza sulla PCR di altri componenti del campione.
La sensibilità della PCR può essere notevolmente ridotta dall'esposizione ad altre sostanze. Ad esempio, alcuni farmaci (anticoagulanti) inibiscono la reazione di amplificazione. Per identificare tali situazioni, esistono metodi di controllo speciali. Ma il rischio di ottenere risultati falsi negativi rimane ancora.
- Prezzo.
Questo è un metodo costoso. L'attrezzatura stessa e i relativi reagenti, così come la formazione degli assistenti di laboratorio che sanno come maneggiarli, sono molto costosi per cliniche e laboratori. In Russia, tali apparecchiature non vengono prodotte e l'uso di reagenti domestici peggiora la qualità dell'analisi.
conclusioni
- La PCR è un eccellente metodo moderno e costoso per la diagnosi di agenti patogeni di varie malattie infettive.
- Il metodo PCR non è sempre richiesto per la diagnosi. Se il medico non ritiene necessario indirizzarti per l'analisi, fidati della sua opinione. Con l'automedicazione e l'autotest per la ricerca PCR in un laboratorio di rete, c'è un alto rischio che tu venga curato per anni per una malattia inesistente.
- Se il laboratorio ti ha dato un risultato che dubiti, ripetere l'analisi in un altro laboratorio. I rischi di risultati falsi positivi e falsi negativi non sono stati annullati, nonostante tutta la modernità e la producibilità del metodo.
- Analisi generali
- Biochimica del sangue
- Ormoni
PCR(reazione a catena della polimerasi) - un metodo di analisi basato sull'ottenimento di un risultato affidabile da un numero minimo di frammenti di DNA del materiale in esame, confermando che questo acido nucleico appartiene a un certo tipo di organismo vivente (batteri, virus, protozoi, funghi) .
L'inventore del metodo PCR nel 1983 ha ricevuto il Premio Nobel per il metodo più accurato e altamente informativo per la diagnosi di malattie infettive, per l'affidabilità del metodo al 100%.
La base del metodo PCR
Nel corso dello studio, un frammento di DNA viene duplicato in un ambiente creato artificialmente, al di fuori del corpo. Come risultato dell'analisi, sotto l'influenza di enzimi specifici, le molecole di DNA aumentano fino alla quantità necessaria per l'identificazione mediante esami microscopici.
Il programma copia solo quelle molecole di DNA che sono presenti nel materiale analizzato. Questa caratteristica del metodo consente non solo di determinare i tipi di infezione, ma viene anche utilizzata per stabilire la paternità, nell'ingegneria genetica.
Il metodo PCR consente di identificare infezioni latenti e infezioni i cui agenti patogeni hanno un lungo periodo di crescita, che li rende invisibili durante la coltura batteriologica.
Applicazione del metodo PCR
Il metodo PCR è possibile determinare qualsiasi tipo di agente infettivo. Molti microrganismi assumono una forma a L al momento dell'esposizione ai farmaci antibatterici e rimangono nascosti al microscopio e alle analisi immunologiche.
La PCR è particolarmente ampiamente utilizzata per la diagnosi di malattie infiammatorie latenti o lente, se non è possibile isolare l'infezione in altro modo. Prima di tutto, questo vale per le seguenti infezioni sessuali:
- epatite C e B
- infezione da papillomavirus,
- gardnerellosi,
- herpes.
Nelle attività terapeutiche, i test PCR vengono utilizzati per diagnosticare:
- polmonite,
- pleurite, difficile da trattare,
- per l'isolamento di Helicobacter pylori nella gastrite cronica con tendenza all'erosione,
- per il rilevamento della predisposizione alle malattie oncologiche – rilevamento degli oncovirus.
Il materiale per l'analisi PCR è:
- sangue,
- , cervice, vagina,
- secrezione di ghiandole, saliva, espettorato,
- scarico da erosioni e ulcere, altri.
Dove sottoporsi al test mediante PCR
Il metodo PCR è una complessa catena sequenziale di molte fasi e cicli. Per l'analisi vengono utilizzati composti chimici specifici per terreni ed enzimi. L'analisi deve essere eseguita da un medico di laboratorio che abbia seguito una formazione specifica per la ricerca di laboratorio su apparecchiature di alta precisione utilizzando la tecnologia informatica.
Informazioni "Il tuo dottore" contiene informazioni su cliniche private che hanno nel loro arsenale apparecchiature di laboratorio e reagenti che soddisfano i requisiti per l'analisi dei materiali mediante PCR. Tutte le manipolazioni per il prelievo di sangue o altro materiale vengono eseguite in queste istituzioni utilizzando strumenti e materiali sterili, in conformità con i requisiti del Ministero della Salute della Federazione Russa per combattere la diffusione di malattie infettive.
In molte cliniche del Vash Doctor Help Center, per prelevare il sangue vengono utilizzati sistemi di vuoto, che eliminano completamente l'errore teoricamente possibile a seguito dell'esame e aumentano significativamente l'obiettività dell'analisi.
Data di pubblicazione: 2019-06-12
Questo articolo è pubblicato solo a scopo didattico e non costituisce materiale scientifico o consulenza medica professionale.