التفاعل السادس التراص الدموي. فحص الدم للكشف عن حمى التيفوئيد مع مستضد Vi. استخدم في علم الفيروسات لتفاعل امتصاص الدم

الصفحة الرئيسية ← التحليلات ← الطريقة المناعية ← تفاعلات التراص الدموي (طريقة مناعية)

تفاعلات التراصبناءً على تفاعل الكاشف (الأجسام المضادة) مع المستضدات الموجودة على سطح الخلايا أو الجسيمات الغريبة. نتيجة لذلك ، يتم تكوين مجاميع كبيرة الحجم ، والتي تترسب ويمكن رؤيتها حتى بالعين المجردة. وبالتالي ، يتم تحديد فصيلة الدم وفقًا لنظام ABO ، ووجود عامل Rh فيها ، وما إلى ذلك. هذه طريقة تشخيص أكثر حساسية مقارنة بتفاعلات الترسيب ، نظرًا لأن حجم الرواسب (التراص) يتجاوز حجم الرواسب.

التراص الدموي المباشر

يستخدم اختبار التراص الدموي المباشر (RPHA) للكشف عن المستضدات السطحية للكائنات الحية الدقيقة وكريات الدم الحمراء ، وكذلك الأجسام المضادة لها.
تضاف مادة الاختبار (الدم) إلى الأمصال القياسية التي تحتوي على الأجسام المضادة. يرتبط معدل تفاعل التراص المباشر بكمية مادة الاختبار وكمية وتركيز المصل ودرجة الحرارة المحيطة.

التراص الدموي غير المباشر

يتم إجراء تفاعل التراص الدموي غير المباشر للكشف عن الأجسام المضادة في دم المريض باستخدام تشخيص كريات الدم الحمراء. الكاشف هو كريات الدم الحمراء ، يوجد على سطحه مستضد (بروتينات الكائنات الحية الدقيقة والسموم والمواد المسببة للحساسية وما إلى ذلك).
يخفف مصل دم المريض بمحلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ ، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء ويتم متابعة النتيجة. هذه الطريقة التشخيصية شديدة الحساسية تكتشف المستضدات حتى في التركيزات المنخفضة.

تفاعل التراص الدموي (RGA).

في المختبر ، يتم استخدام تفاعلين مختلفين عن التراص الدموي.

يشير RGA الأول إلى السيرولوجي. في هذا التفاعل ، تتراكم كريات الدم الحمراء عند التفاعل مع الأجسام المضادة المقابلة (هيماجلوتينين). يستخدم التفاعل على نطاق واسع لتحديد فصائل الدم.

RHA الثاني ليس مصلي. في ذلك ، لا يسبب تراص كريات الدم الحمراء

الأجسام المضادة ، ولكن المواد الخاصة التي تشكلها الفيروسات. على سبيل المثال ، فيروس الأنفلونزا يتلوى على كريات الدم الحمراء في الدجاج و خنازير غينيا، فيروس شلل الأطفال - كريات الدم الحمراء في الأغنام. هذا التفاعل يجعل من الممكن الحكم على وجود فيروس معين في مادة الاختبار.

يتم إجراء التفاعل في أنابيب اختبار أو على ألواح خاصة بها آبار. يتم تخفيف المادة المراد اختبارها بحثًا عن وجود الفيروس بمحلول متساوي التوتر من 1:10 إلى 1: 1280 ؛ يتم خلط 0.5 مل من كل تخفيف مع حجم متساوٍ من 1-2٪ تعليق كريات الدم الحمراء. في عنصر التحكم ، يتم خلط 0.5 مل من كريات الدم الحمراء مع 0.5 مل من محلول متساوي التوتر. توضع أنابيب الاختبار في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة ، وتترك الألواح في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 دقيقة.

المحاسبة عن النتائج.في نتيجة إيجابيةرد فعل في قاع الأنبوب أو البئر ، يسقط راسب من كريات الدم الحمراء مع حواف متعرجة ("مظلة") ، يغطي قاع البئر بالكامل. في نتيجة سلبيةتشكل كريات الدم الحمراء راسبًا كثيفًا بحواف ناعمة ("زر"). يجب أن يكون نفس الراسب تحت السيطرة. يتم التعبير عن شدة التفاعل بعلامات "+".

تفاعل التراص الدموي

عيار الفيروس هو أقصى تخفيف للمادة التي يحدث فيها التراص.

تفاعل تثبيط التراص الدموي

هذا تفاعل مصلي تتفاعل فيه أجسام مضادة معينة للفيروسات ، تتفاعل مع الفيروس (مستضد) ، وتحييده وتحرمه من القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء ، أي تمنع تفاعل التراص الدموي. يتيح لك هذا التفاعل تحديد نوع الفيروسات ونوعها.

وضع رد الفعل.يتم خلط 0.25 مل من المصل المضاد للفيروسات مع كمية متساوية من المواد المحتوية على الفيروس. يُرج الخليط ويوضع في منظم حرارة لمدة 30 دقيقة ، وبعد ذلك يضاف 0.5 مل من تعليق كريات الدم الحمراء بنسبة 1-2٪.

المحاسبة عن النتائج.مع الإعداد الصحيح للتجربة في التحكم في المصل وخلايا الدم الحمراء ، يجب أن يتكون "زر" - لا يوجد عامل تراص في كريات الدم الحمراء ؛ في التحكم في المستضد ، يتم تشكيل "مظلة" - تسبب الفيروس في تراص كريات الدم الحمراء. إذا كان المصل متماثلًا مع الفيروس الذي تتم دراسته ، يتم تكوين "زر" - حيث قام المصل بتحييد الفيروس.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر

يعتمد تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RIHA) على حقيقة أن كريات الدم الحمراء ، إذا تم امتصاص مستضد قابل للذوبان على سطحها ، تكتسب القدرة على التراص عند التفاعل مع الأجسام المضادة للمستضد الممتص.

وضع رد الفعل.يسخن المصل لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية ، ويخفف بالتتابع بنسبة 1:10 - 1: 1280 ويصب في أنابيب الاختبار أو الآبار في 0.25 مل ، ثم تضاف قطرتان من كريات الدم الحمراء مع مستضدات ممتصة عليها.

ضوابط:تعليق كريات الدم الحمراء مع مستضدات كثف عليها بمصل مناعي واضح ، تعليق من كريات الدم الحمراء مع مستضدات ممتصة عليها بمصل طبيعي ؛ تعليق كريات الدم الحمراء الطبيعية مع المصل المختبَر. في التحكم الأول ، يجب أن يحدث التراص ، في الثانية والثالثة لا ينبغي أن يحدث.

أسئلة التحكم.

1. ما الذي تشير إليه نتيجة RGA الإيجابية بين كريات الدم الحمراء والمواد المختبرة لوجود الفيروس؟

2. هل سيحدث تفاعل تراص كريات الدم الحمراء إذا تمت إضافة الفيروس والمصل المقابل لهم؟ ما اسم رد الفعل الذي يكشف هذه الظاهرة؟

عمل عملي 12.

تفاعل مكمل ملزم.

يعتمد تفاعل الارتباط التكميلي (RCT) على حقيقة أن مركبًا محددًا من الجسم المضاد-المستضد يقوم دائمًا بامتصاص (الروابط) المتممة على نفسه.

يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في تحديد المستضدات والتشخيص المصلي للعدوى ، خاصة الأمراض التي تسببها اللولبيات (تفاعل واسرمان) ، الريكتسيات والفيروسات.

PCS هو تفاعل مصلي معقد. إنه يشتمل على مكمل ونظامين للأجسام المضادة للمستضد. في الأساس ، هذان نوعان من التفاعلات المصلية.

يتكون النظام الأساسي الصحيح من مستضد وجسم مضاد (أحدهما معروف والآخر غير معروف). يتم إضافة كمية معينة من المكمل إليها. إذا تطابق المستضد والجسم المضاد لهذا النظام ، فسيقومان بالاتصال وربط المجاملة. المجمع الناتج مشتت بدقة وغير مرئي.

يُعرف تكوين هذا المركب بمساعدة نظام انحلالي ثانٍ أو نظام مؤشر. ويشمل كريات الدم الحمراء في الأغنام (مستضد) ومصل الدم الانحلالي المقابل (الجسم المضاد) ، أي مركب مناعي جاهز. في هذا النظام ، يمكن أن يحدث تحلل كرات الدم الحمراء فقط في وجود مكمل. إذا كان المكمل مرتبطًا بالنظام الأول ، فلن يكون هناك انحلال دم في النظام الثاني ؛ لا يوجد مكمل مجاني. يتم تسجيل غياب انحلال الدم (محتويات الأنبوب غائم أو توجد رواسب كريات الدم الحمراء في قاع الأنبوب) كنتيجة إيجابية لـ RSK.

إذا كان المستضد في النظام الأول لا يتوافق مع الجسم المضاد ، فلن يتشكل المركب المناعي وسيظل المجمل مجانيًا. يبقى مجملًا مجانيًا ، ويشترك في النظام الثاني ، مما يتسبب في انحلال الدم ، ونتيجة RSK سلبية (محتويات الأنابيب شفافة - "دم ورنيش").

المكونات ، تفاعلات التثبيت التكميلية:

1. المستضد - عادة ما يكون محللًا ، أو مستخلصًا ، أو ناشئًا ،

أقل في كثير من الأحيان تعليق الكائنات الحية الدقيقة.

2. الجسم المضاد - مصل المريض.

3. مكمل - مصل خنزير غينيا.

4. المستضد - كريات الدم الحمراء في الأغنام.

5. الجسم المضاد - الهيموليسين لكريات الدم الحمراء في الأغنام.

6. محلول متساوي التوتر.

في ضوء حقيقة أن RSC تشارك عدد كبير منمكونات معقدة ،

يجب معايرتها مسبقًا وإدخالها في التفاعل بكميات دقيقة وبأحجام متساوية: 0.5 أو 0.25 مل ، أقل من 0.2 أو 1.25 أو 1.0 مل (تعطي الأحجام الأكبر نتيجة أكثر دقة). يتم إجراء معايرة مكونات التفاعل بنفس حجم التجربة ، مع استبدال المكونات المفقودة بمحلول متساوي التوتر.

معلومات ذات صله:

بحث الموقع:

يكون تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي (RNHA أو RPHA) أكثر حساسية وتحديدًا من تفاعل التراص. يتم استخدام هذا التفاعل أيضًا بطريقتين.

1) للكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض ، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء ، حيث يتم امتصاص المستضد على سطح كريات الدم الحمراء المعالجة بالتانين. فيما يتعلق بهذا التفاعل ، غالبًا ما يستخدم مصطلح RPHA.

يتم تخفيف مصل الاختبار في آبار الألواح البلاستيكية ويتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء. مع رد فعل إيجابي ، يظهر غشاء رقيق على طول جدران الحفرة على شكل "مظلة دانتيل" ، مع رد فعل سلبي ، تظهر رواسب كثيفة من كريات الدم الحمراء على شكل "زر".

2) للكشف عن السموم والمستضدات البكتيرية في المادة قيد الدراسة ، يتم استخدام تشخيصات الأجسام المضادة التي يتم الحصول عليها عن طريق امتصاص الأجسام المضادة على كريات الدم الحمراء. فيما يتعلق برد الفعل هذا ، غالبًا ما يتم استخدام مصطلح RNGA. على سبيل المثال ، بمساعدة تشخيص الأجسام المضادة ، يتم الكشف عن مستضد عصية الطاعون ، والسموم الخارجية للخناق ، والسموم الخارجية للبوتولينوم.

ما هو تشخيص كريات الدم الحمراء؟ ما هو تشخيص الجسم المضاد لكرات الدم الحمراء؟

تشخيصات كرات الدم الحمراء هي كريات الدم الحمراء (المعالجة بالتانين أو الفورمالين) مع مستضدات مستخرجة من البكتيريا الممتصة عليها وتستخدم في RPHA (تفاعل التراص الدموي السلبي). في حالة استخدام RPGA للكشف عن مستضد في إفرازات المرضى ، في الأنسجة ، وما إلى ذلك ، يتم استخدام "تشخيصات الأجسام المضادة" ، أي كريات الدم الحمراء الحساسة بالأجسام المضادة.

في RNGA ، يتم الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم باستخدام مستضد تشخيص كريات الدم الحمراء ، وهو عبارة عن كريات حمراء بها مستضدات ممتصة عليها.

تقنية تحديد ردود الفعل. تفاعل التخثر.

- تثبيت كريات الدم الحمراء مع الفورمالديهايد أو الجلوتاريك أو الألدهيدات الأكريليكية. يتم تخزين كريات الدم الحمراء المعالجة لفترة طويلة. في كثير من الأحيان ، تستخدم كريات الدم الحمراء للأغنام والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض ؛
- علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. نتيجة لذلك ، تكتسب كريات الدم الحمراء خاصية امتصاص البروتينات بشكل لا رجعة فيه (الفيروسات والأجسام المضادة) على سطحها ؛
- توعية كريات الدم الحمراء بالفيروسات أو الأجسام المضادة.

تفاعل التخثر (RCA)

يستخدم تفاعل التراص لتحديد المستضدات باستخدام الأجسام المضادة الممتصة على البروتين A لخلايا المكورات العنقودية (تشخيص الجسم المضاد).
يحتوي البروتين A على تقارب لجزء Fc من الغلوبولين المناعي ؛ لذلك ، فإن هذه البكتيريا المعالجة بمصل تشخيص مناعي غير ممتز للأجسام المضادة في المصل ، والتي تتفاعل بعد ذلك مع المراكز النشطة مع الميكروبات المقابلة المعزولة من المرضى. نتيجة للتجلط ، يتم تكوين رقائق تتكون من المكورات العنقودية والأجسام المضادة التشخيصية في المصل والميكروب الذي يتم تحديده.

أمصال التراص: ماذا تحتوي ؛ كيف يتم الحصول عليها ، ولماذا يتم استخدامها ؛ ما هو عيار تراص المصل؟

يتم الحصول على مصل التلصيق عن طريق تحصين الأرانب (عن طريق الوريد أو تحت الجلد أو داخل الصفاق) بتعليق البكتيريا المقتولة ، بدءًا بجرعة 200 مليون ، ثم 500 مليون ، 1 مليار ، 2 مليار جسم جرثومي في 1 مل ، على فترات 5 أيام. بعد 7-8 أيام من آخر تحصين ، يتم أخذ الدم وتحديد عيار الجسم المضاد.

عيار مصل التراص هو الحد الأقصى لتخفيف المصل الذي يحدث فيه التراص مع الكائنات الحية الدقيقة المقابلة.

تستخدم الأمصال المتلصقة في تحديد الميكروب في تفاعل التراص الممتد.

تفاعل التراص الدموي (RHA)

إذا كان الكائن الدقيق قيد الدراسة متراكمًا بواسطة مصل إلى عيار أو نصف قيمة العيار ، فيمكن اعتباره ينتمي إلى الأنواع التي يشار إلى اسمها على ملصق الأمبولة.

ما هي الاختلافات بين الأمصال المتراصة متعددة التكافؤ وأحادي التكافؤ (monoreceptor) ؛ لماذا ينتج عن تحصين أرنب بميكروبات من نوع واحد مصل يحتوي على أجسام مضادة للعديد من المستضدات؟

أمصال أحادية المستقبلات تحتوي على أجسام مضادة لمستضد واحد فقط ، ومصل متعدد التكافؤ ، مما يعطي تفاعلات تراص مع نوعين أو ثلاثة من البكتيريا ذات الصلة التي لها مستضد مشترك. يتم استخدام الأمصال المتلصقة لتحديد الكائنات الحية الدقيقة في تفاعل التراص. عيب هذه الأمصال هو أنها قادرة على إعطاء تفاعلات تراص جماعي ، tk. تحتوي على أجسام مضادة للبكتيريا التي لها مستضدات مشتركة.

تفاعل التراص الدموي. الوصف والتطبيق

يعتمد على حقيقة أن كريات الدم الحمراء ، التي يتم فيها امتصاص المستضدات مسبقًا ، تكتسب القدرة على التراص في وجود الأمصال المتجانسة (الأجسام المضادة).

في هذه الحالة ، تلعب كريات الدم الحمراء دور الناقلات ذات المحددات المحددة ، والتي يحدث تراصها نتيجة تفاعل المستضد + الجسم المضاد.

تسمى كريات الدم الحمراء ، بالسطح الذي ترتبط به المستضدات بشدة ، بتشخيص مستضد كريات الدم الحمراء ، أو كريات الدم الحمراء المحسوسة بواسطة مستضد.

يتم امتصاص نوع آخر من الأجسام المضادة RNHA على سطح كريات الدم الحمراء ويحدث تراصها اللاحق في وجود مستضد متماثل. في هذه الحالة ، تسمى كريات الدم الحمراء بتشخيص الأجسام المضادة ، أو كريات الدم الحمراء التي تتحسس بواسطة الأجسام المضادة.

على أساس هذين النهجين المنهجيين الأساسيين ، تم تطوير العديد من التعديلات على RNGA ويتم استخدامها. لذلك ، يتم استخدام جزيئات اللاتكس القياسية الصغيرة كناقلات. في هذه الحالة ، يسمى التفاعل تفاعل تراص اللاتكس (RLA) أو يتم استخدامه المكورات العنقودية الذهبية- تفاعل التراص ، إلخ. عادة ، يتم إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء في مؤسسات الصناعة البيولوجية ، ويتم بالفعل تثبيت الخبرة الرئيسية لـ RNGA في مختبرات التشخيص.

يتضمن إعداد تشخيص كرات الدم الحمراء الخطوات التالية:

تثبيت كريات الدم الحمراء مع الفورمالديهايد أو الجلوتاريك أو الألدهيدات الأكريليكية. يتم تخزين كريات الدم الحمراء المعالجة لفترة طويلة. في كثير من الأحيان ، تستخدم كريات الدم الحمراء للأغنام والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض ؛
علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. نتيجة لذلك ، تكتسب كريات الدم الحمراء خاصية امتصاص البروتينات بشكل لا رجعة فيه (الفيروسات والأجسام المضادة) على سطحها ؛
توعية كريات الدم الحمراء المدبوغة بالفيروسات أو الأجسام المضادة.

وتجدر الإشارة إلى أن طرق تحضير تشخيص الكريات الحمر اصابات فيروسيةمختلف.

تقنية إعداد RNHA لاكتشاف وتحديد عيار الجسم المضاد هي كما يلي:

إضافة جرعات متساوية من كريات الدم الحمراء المحسوسة بواسطة المستضد إلى التخفيفات المتتالية ذات الضعفين ؛
يُترك الخليط لمدة 2-3 ساعات في درجة حرارة الغرفة أو لمدة 16-18 ساعة عند 4 درجات مئوية ؛
تأخذ في الاعتبار النتائج. إذا كان المصل يحتوي على أجسام مضادة للفيروس الذي تم تحسس كريات الدم الحمراء به ، يتم ملاحظة التراص الدموي ، والذي يتم تقييمه في التهجينات.

يتم أخذ عيار الجسم المضاد في الدم على أنه أعلى تخفيف للمصل الذي لا يزال يوفر التراص الدموي بواسطة تهجينين على الأقل.

RNGA مصحوب بجميع الضوابط ذات الصلة. عادة ما يضعون التفاعل بالطريقة الدقيقة.

تسمح RNHA بحل المهام التشخيصية التالية:

الكشف عن الأجسام المضادة وتحديد عيارها في مصل الدم باستخدام تشخيص مستضد معروف لكريات الدم الحمراء ؛
الكشف عن فيروس غير معروف والتعرف عليه باستخدام تشخيص معروف للجسم المضاد لكريات الدم الحمراء.

مزايا RNGA: حساسية عالية ، سهولة في تقنية الضبط والاستجابة السريعة. ومع ذلك ، من المهم ملاحظة أن هناك صعوبات كبيرة في إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء المستقرة (اعتماد كبير على نقاء المكونات المستخدمة ، والحاجة إلى تحديد طريقة التثبيت ، ودباغة ، وتوعية كريات الدم الحمراء لكل نوع من أنواع الفيروسات) .

إذا وجدت خطأً ، فيرجى تحديد جزء من النص والضغط على Ctrl + Enter.

في تواصل مع

تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAIT)

يعتمد RGA على قدرة كريات الدم الحمراء على الالتصاق ببعضها عند امتصاص مستضدات معينة عليها. اللانتويك ، السائل الأمنيوسي ، تعليق الأغشية المشيمية لأجنة الدجاج ، المعلقات والمستخلصات من الثقافات أو أعضاء الحيوانات المصابة بالفيروسات ، المواد المعدية الأصلية تستخدم كمواد اختبار للتراص الدموي. RGA ليس مصليًا ، لأنه يحدث بدون مشاركة مصل المناعة ويستخدم لتحديد التخفيف العامل للمستضد لتعيين RTGA أو وجود مستضد (فيروس) في مادة الاختبار (على سبيل المثال ، مع الأنفلونزا). يستخدم التفاعل كريات الدم الحمراء للحيوانات والطيور وفصيلة الدم البشرية (0).

لإعداد RGA تقريبي ، يتم تطبيق قطرة بنسبة 5 ٪ من كريات الدم الحمراء وقطرة من مادة الاختبار على شريحة زجاجية ، مختلطة تمامًا. مع نتيجة إيجابية ، بعد 1-2 دقيقة ، لاحظ ظاهريًا ظهور تراص ندف من كريات الدم الحمراء.

لإعداد RHA في صف موسع في آبار ألواح البوليسترين ، يتم تحضير زيادة تخفيف مادة الاختبار بشكل مضاعف في محلول فسيولوجي بحجم 0.5 مل. في جميع الأنابيب يساهم في 0.5 مل من 0.25 - 1 ٪ تعليق كريات الدم الحمراء. تؤخذ النتائج في الاعتبار بعد الترسيب الكامل لكريات الدم الحمراء في المجموعة الضابطة (كريات الدم الحمراء + محلول ملحي). يتم أخذ التفاعل في الاعتبار من خلال طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء. في الحالات الإيجابية ، يتم تمييز درجة التراص بالإيجابيات. أربع إيجابيات تقيم التفاعل ، الذي يكون على شكل غشاء رقيق من كريات الدم الحمراء الملصقة تغطي الجزء السفلي من أنبوب الاختبار (المظلة) ، ويتم تمييز التفاعل مع الفجوات في الفيلم بثلاث إيجابيات ، ووجود فيلم بحواف مزركشة صدفي من كريات الدم الحمراء الملصقة يُشار إليها بإيجابيتين ، الرواسب غير المستقرة من كريات الدم الحمراء المحاطة بمنطقة من الكتل المتراصة من الكريات الحمراء تقابل زيادة واحدة. تظهر رواسب كريات الدم الحمراء المحددة بشكل حاد ، والتي لا يمكن تمييزها عن مجموعة التحكم ، عدم وجود تراص. يتم أخذ العيار على أنه التخفيف المحدود لمواد الاختبار ، مما تسبب في تراص كريات الدم الحمراء بميزتين.

مع نتيجة إيجابية لـ RHA ، استمرت الدراسة لتحديد نوع الفيروس المعزول باستخدام اختبار تثبيط التراص الدموي مع الأمصال الخاصة بالنوع.

يعتمد RTGA على خاصية المصل لقمع التراص الدموي الفيروسي ، حيث يفقد الفيروس الذي تحيده أجسام مضادة معينة قدرته على تراص خلايا الدم الحمراء. للكتابة التقريبية للفيروسات ، يتم استخدام طريقة الإسقاط على الزجاج. من أجل التحديد النهائي لنوع الفيروس المعزول ومعايرة الأجسام المضادة في الأمصال ، يتم وضع RTHA الموسع في أنابيب الاختبار أو في الآبار. لهذا الغرض ، يتم تحضير التخفيفات ذات الشقين من الأمصال في محلول ملحي فسيولوجي وصبها في 0.25 مل. يتم إضافة قطرة واحدة من المادة المحتوية على الفيروس وقطرة واحدة من 1٪ معلق كريات الدم الحمراء إلى التخفيفات المصل.

عند استخدام RTGA لتحديد نوع الفيروس ، يتم استخدام الأمصال الخاصة بالنوع ، والتي تضاف إلى حجم متساوٍ من التخفيف العامل للمستضد. يتم تحديد نوع الانتماء للفيروس المعزول بواسطة مصل المناعة المحدد ، والذي أظهر أعلى عيار من الأجسام المضادة لهذا الفيروس.

يستخدم RGA و RTGA على نطاق واسع لتشخيص الالتهابات الفيروسية ( إلتهاب الدماغ المعدي، الأنفلونزا ، إلخ) لاكتشاف أجسام مضادة معينة وللتعرف على العديد من الفيروسات بواسطة مستضداتها.

تفاعل التألق المناعي (RIF)

يعتمد RIF على مزيج من مستضدات البكتيريا والريكتسيا والفيروسات مع أجسام مضادة محددة تحمل أصباغ الفلورسنت (فلورسين أيزوثيوسيانات ، رودامين ، ب-أيزوثيوسانيت ، ليساتينرودامين ب -200 ، سلفوكلوريد ، إلخ) التي تحتوي على مجموعات تفاعلية (سلفوكلوريد ، إيزوثيوسيانيت ، إلخ) .). تتحد هذه المجموعات مع المجموعات الأمينية الحرة لجزيئات الجسم المضاد ، والتي لا تفقد تقاربها المحدد مع المستضد المقابل عند معالجتها بالفلوروكروم. تصبح مجمعات AG-AT الناتجة مرئية بوضوح ، وهياكل مضيئة زاهية تحت مجهر الفلورسنت (الشكل 48). يمكن لـ RIF اكتشاف كميات صغيرة من المستضدات البكتيرية والفيروسية. يتم استخدام طريقة RIF في نسختين: الطريقة المباشرة وغير المباشرة.

تعتمد الطريقة المباشرة على الارتباط المباشر لمولد الضد مع الجسم المضاد المسمى. طريقة غير مباشرة- في الكشف المرحلي لمركب AG-AT باستخدام الأصباغ الفلورية. تتكون المرحلة الأولى من تكوين مجمعات مناعية لمستضد معين مع أجسام مضادة محددة. المرحلة الثانية هي التعرف على هذا المركب من خلال معالجته بمضادات الغاماغلوبيولين المسمى.

ميزة RIF هي البساطة والحساسية العالية وسرعة الحصول على النتيجة. يتم استخدام RIF كطريقة للتشخيص السريع المبكر للأنفلونزا ، والدوسنتاريا ، والملاريا ، والطاعون ، والتولاريميا ، والزهري ، وما إلى ذلك. يتم استخدام مجهر مضيء لإجراء مثل هذه الدراسة.

المقايسة المناعية الراديوية (RIA)

RIA هي واحدة من أكثر طرق التشخيص المناعي حساسية. يتم استخدامه للكشف عن مستضد فيروس التهاب الكبد B في المرضى التهاب الكبد الفيروسي. للقيام بذلك ، يضاف المصل المرجعي (مصل يحتوي على أجسام مضادة لفيروس التهاب الكبد B) إلى مصل الاختبار. يتم تحضين الخليط لمدة يوم أو يومين عند درجة حرارة 40 ْم ، ثم يضاف مستضد مرجعي (مستضد مُسمى بنظير 125 J) ويستمر الحضانة لمدة 24 ساعة أخرى. تتم إضافة ترسيب مضاد الغلوبولين المناعي مقابل بروتينات المصل المرجعية إلى معقد الأجسام المضادة المستضد الناتج ، مما يؤدي إلى تكوين راسب (الشكل 49). تؤخذ النتيجة في الاعتبار من خلال وجود وعدد النبضات في الراسب المسجل بواسطة العداد. إذا كان هناك مستضد مرتبط بأجسام مضادة محددة في مصل الاختبار ، فإن الأخير لا يرتبط بمولد الضد المحدد ، وبالتالي ، لا يتم اكتشافه في الراسب. وبالتالي ، يعتمد RIA على مبدأ التفاعل التنافسي للمستضد المحدد وكمية معروفة من المستضد المسمى مع المراكز النشطة للأجسام المضادة.

طريقة ELISA (ELISA)

تُستخدم الطريقة للكشف عن المستضدات باستخدام الأجسام المضادة المقابلة المقترنة بإنزيم وضع العلامات (الفجل البيروكسيديز أو الجالاكتوز أو الفوسفاتيز القلوي). بعد دمج المستضد مع المصل المناعي المسمى بالإنزيم ، تتم إضافة الركيزة والكروموجين إلى الخليط. . يتم شق الركيزة بواسطة الإنزيم ، وتتسبب نواتج التحلل في تعديل كيميائي للكروموجين. في هذه الحالة ، يغير الكروموجين لونه - كثافة اللون تتناسب طرديًا مع عدد جزيئات المستضد والأجسام المضادة المرتبطة (الشكل 50).

الأكثر شيوعًا هو ELISA ذو المرحلة الصلبة ، حيث يتم امتصاص أحد مكونات الاستجابة المناعية (مستضد أو جسم مضاد) على مادة حاملة صلبة. تُستخدم الألواح الدقيقة من البوليسترين كناقل صلب. عند تحديد الأجسام المضادة ، يتم إضافة مصل الدم للمرضى ومصل مضاد الجلوبيولين المسمى بإنزيم ومزيج من محاليل الركيزة للإنزيم والكروموجين بالتتابع إلى الآبار باستخدام المستضد الممتص. في كل مرة بعد إضافة المكون التالي ، تتم إزالة الكواشف غير المربوطة من الآبار عن طريق الغسيل الشامل. مع نتيجة إيجابية ، يتغير لون محلول الكروموجين.

يمكن تحسس حامل المرحلة الصلبة ليس فقط بمولد ضد ، ولكن أيضًا بجسم مضاد. بعد ذلك ، يتم إدخال المستضد المطلوب في الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة ، ويضاف مصل المناعة ضد المستضد المسمى بالإنزيم ، ثم يضاف خليط محاليل الركيزة للإنزيم والكروموجين.

يستخدم ELISA لتشخيص الأمراض التي تسببها مسببات الأمراض الفيروسية والبكتيرية.

القسم السابع. أساسيات علم الفيروسات

يستخدم RGA و RTGA على نطاق واسع لتشخيص الالتهابات الفيروسية (التهاب الدماغ الذي ينقله القراد ، الأنفلونزا ، إلخ) من أجل اكتشاف أجسام مضادة معينة وتحديد العديد من الفيروسات بواسطة مستضداتها.

تفاعل التراص الدموي (RHA)

يعتمد RGA على حقيقة أن بعض أنواع البكتيريا والفيروسات لديها القدرة على الامتصاص على سطح خلايا الدم الحمراء. أنواع مختلفةالحيوانات (والطيور) ، مما يجعلها تلتصق ببعضها البعض وتشكل تراصًا (مباشر RGA).

لا يتجلى امتزاز المستضد (البكتيريا والفيروسات) على سطح كريات الدم الحمراء دائمًا من خلال تكوين راسب مرئي ؛ بالإضافة إلى ذلك ، RGA غير محدد ، لأن كريات الدم الحمراء من نفس النوع الحيواني يمكن أن تمتص مستضدات مختلفة.

يكون تفاعل التراص الدموي السلبي (غير المباشر) محددًا. لإعداده ، يتم تحضير تشخيص كريات الدم الحمراء مسبقًا (كريات الدم الحمراء التي يتم امتصاص المستضد عليها). لهذا الغرض ، يتم الحصول على دم الكبش (أو الديك) بشكل معقم ، ويتم إزالته وغسله عدة مرات في محلول فوسفات مؤقت (درجة الحموضة 7.2) باستخدام الطرد المركزي 3-5 أضعاف. تتم إزالة المادة الطافية ، ويتم تعديل تركيز كريات الدم الحمراء إلى 2.5٪ (1:40). يضاف إلى معلق 2.5٪ من كريات الدم الحمراء في حجم متساوٍ (1 مل أو 0.5 مل) معلق من البكتيريا من أنواع الميكروبات المدروسة بتركيز 5-10 مليار خلية لكل 1 مل. تمتص كريات الدم الحمراء بسهولة مستضد طبيعة عديد السكاريد. لامتصاص مستضد ذو طبيعة بروتينية ، يتم معالجة كريات الدم الحمراء مسبقًا بالتانين بتخفيف 1: 20000. تُترك كريات الدم الحمراء جنبًا إلى جنب مع المستضد المضاف للتحسس (الامتزاز) لمدة ساعتين في منظم حرارة (37 درجة مئوية) ، ثم طرد مرة أخرى عند 3-4 آلاف دورة في الدقيقة / دقيقة لمدة 5 دقائق بمحلول فوسفات منظم (الشكل 9.13).

يتم وضع تشخيص الكريات الحمراء الناتج في أنابيب اختبار (أو آبار في لوح زجاج شبكي) ويضاف إليه مصل مناعي قياسي.

في الحالات الإيجابية ، سيحدث RGA - فقدان كريات الدم الحمراء على شكل رواسب قشارية أو حبيبية مميزة موزعة على كامل سطح قاع أنبوب الاختبار (hemagglutinate). هذا يعني أن نوع الميكروب (المستضد) قيد الدراسة خاص بالأجسام المضادة للمصل المناعي. في الحالات السلبية ، تستقر خلايا الدم الحمراء غير الملتصقة في الأسفل على شكل دائرة صغيرة متساوية.

لمزيد من الموثوقية لنتائج RPGA ، رد فعل تأخير(الفرملة) ظاهرة التراص الدموي(RZGA) أو تعديله - تفاعل تحييد الجسم المضاد(ريا).

أرز. 9.13. تفاعل التراص الدموي السلبي (مخطط): Er - كريات الدم الحمراء: AG - مستضد: AT - الجسم المضاد

جوهر RZGAيتكون من حقيقة أن تفاعل التراص يتم ضبطه مع مصل تشخيصي محدد ومستضد تم اختباره (يتم استخدام نوع الميكروب المدروس كمستضد). يتم الاحتفاظ بهذا الخليط لمدة 1-2 ساعة عند 37 درجة مئوية ، ثم تضاف كريات الدم الحمراء. إذا كان مستضد الاختبار متماثلًا مع الأجسام المضادة في المصل التشخيصي ، فإنها تتفاعل مع بعضها البعض ولا تتراكم كريات الدم الحمراء المضافة - تكون نتيجة التفاعل إيجابية. إذا لم يكن مستضد الاختبار متماثلًا مع الأجسام المضادة في المصل أو لم يكن موجودًا في المادة ، فإن كريات الدم الحمراء المضافة تمتص المستضد ويحدث RHA - نتيجة RHA سلبية ، ولم يتم تحديد نوع الميكروب (المستضد) الذي يتم اختباره.

طريقة ضبط الرقم الهيدروجيني أهو أن يأخذوا أحجامًا متساوية ويخلطون المصل المناعي التشخيصي مع تخفيفات مختلفة من مادة الاختبار (المستضد المطلوب) ، ويتركوه للتلامس لمدة 1-2 ساعة ، ثم يضيفون كريات الدم الحمراء المحسّسة بمستضد معين (معروف) خاص بالمصل. الأجسام المضادة (تشخيص كرات الدم الحمراء). عندما يتفاعل المستضد المطلوب مع الأجسام المضادة في الدم ، يتم تحييدها ولا تتراكم كريات الدم الحمراء المضافة ، ولا يحدث RHA - تكون نتيجة PHA إيجابية. إذا كانت مادة الاختبار لا تحتوي على مستضد خاص بالأجسام المضادة للمصل المستخدم ، فلن يكون هناك تحييد للأجسام المضادة. لذلك ، عند إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء ، يظهر تراص كرات الدم الحمراء (التراص الدموي) ، وتكون نتيجة RHA سلبية. اختبار تحييد الجسم المضاد هو طريقة حساسة للغاية لاكتشاف المستضد ليس فقط في تعليق البكتيريا الحية (أو الميتة) ، ولكن أيضًا في تعليق الأنسجة الأرضية. مختلف الهيئات، أسرار وإفرازات كائن حي مريض.

رد فعل فيدال. من الأسبوع الثاني للمرض ، تتراكم الأجسام المضادة للعامل المعدي في دم المرضى. للتعرف عليها ، يتم فحص مصل دم المريض في تفاعل التراص. تستخدم مزارع السالمونيلا المقتولة - التشخيص - كمستضد.

لإعداد تفاعل فيدال ، يتم استخدام مصل المريض ومجموعة من مجموعات التشخيص ومحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يتم جمع الدم (2-3 مل) من لب الإصبع أو الوريد المرفقي في أنبوب معقم وتسليمه إلى المختبر. في المختبر ، يوضع أنبوب الاختبار في منظم الحرارة لمدة 20-30 دقيقة لتشكيل جلطة ، ثم يتم وضع دائرة حول الجلطة باستخدام ماصة باستور لفصلها عن جدار أنبوب الاختبار ، وتوضع في البرد لمدة 30- 40 دقيقة. يُمتص المصل المنفصل ويستخدم لتكوين تفاعل تراص مع تشخيصات من السالمونيلا التيفوئيد والنظيرة التيفية. للحصول على مصل الدم ، يمكن طرد الدم.

عندما تحدث عملية معدية - حمى التيفوئيد أو حمى نظيرة التيفية - يتم إنتاج الأجسام المضادة O- و H لمسببات الأمراض التي تحمل الاسم نفسه في الجسم.

تظهر الأجسام المضادة لـ O أولاً وتختفي بسرعة إلى حد ما. تستمر الأجسام المضادة لـ H لفترة طويلة. نفس الشيء يحدث مع التطعيم إذن رد فعل إيجابييشير فيدال مع مستضدات O- و H إلى وجود مرض ، ويمكن أن يكون التفاعل مع مستضدات H فقط في كل من أولئك الذين أصيبوا بالمرض (رد فعل مخدر) وفي أولئك الذين تم تطعيمهم (التطعيم). بناءً على ذلك ، يتم وضع تفاعل فيدال بشكل منفصل مع مستضدات O و H (التشخيص).

منذ سريريًا حمى التيفودو نظير التيفوئيد A و B متشابهان ، ثم لتحديد طبيعة المرض ، يتم اختبار مصل المريض في وقت واحد مع التشخيص من السالمونيلا التيفوئيد والنظيرة التيفية A و B.

يتم استخدام تفاعل فيدال على نطاق واسع لأنه بسيط ولا يتطلب شروطًا خاصة.

هناك طريقتان لإعداد التفاعل: الإسقاط والحجم (انظر الفصل 12). في الممارسة العملية ، يتم استخدام الطريقة الحجمية في كثير من الأحيان. عند إعداد تفاعل تراص خطي ، يجب أن يتوافق عدد الصفوف مع عدد المستضدات (التشخيص). يعتبر العامل المسبب للمرض من الكائنات الحية الدقيقة ، والتشخيص الذي يتراكم منه مصل المريض. في بعض الأحيان يلاحظ التراص الجماعي ، لأن العوامل المسببة للتيفوئيد والحمى نظيرة التيفية لها مستضدات جماعية مشتركة. في هذه الحالة ، تعتبر نتيجة التفاعل في السلسلة التي لوحظ فيها التراص في تخفيف أكبر للمصل إيجابية (الجدول 36).

الجدول 36. النتيجة المحتملة لتفاعل التراص

ملحوظة. في الممارسة العملية ، يتم وضع رد فعل فيدال مع أربعة تشخيصات: حمى التيفود "O" و "H" ، ونظير التيفوئيد A و B - مع تشخيص "OH".

إذا حدث التراص فقط في تخفيفات صغيرة من المصل - 1: 100 ، 1: 200 ، ثم لتمييز رد الفعل في حالة المرض عن التطعيم أو اللقاح ، يلجأون إلى إعادة تفاعل التراص بعد 5-7 أيام. في المريض ، يرتفع عيار الجسم المضاد ، لكن في مريض تم تطعيمه أو تعافيه لا يتغير. وبالتالي ، فإن زيادة عيار الأجسام المضادة في مصل الدم تعمل كمؤشر للمرض.

تظهر Vi-agglutinins في دم المريض استجابة لإدخال مسببات أمراض التيفوئيد التي تمتلك مستضد Vi في الجسم. يتم تحديدها من الأسبوع الثاني من المرض ، لكن عيارها لا يتجاوز عادة 1:10. يرتبط اكتشاف الأجسام المضادة لـ Vi بوجود مسببات أمراض التيفوئيد في الجسم ؛ لذلك ، فإن تحديد هذه الأجسام المضادة له أهمية وبائية كبيرة ، لأنه يجعل من الممكن التعرف على ناقلات البكتيريا.

تفاعل سادسا- التراص الدموي. هذا هو رد الفعل الأكثر حساسية للكشف عن الأجسام المضادة.

مبدأ التفاعل هو أن خلايا الدم الحمراء البشرية (المجموعة الأولى) أو الأغنام ، بعد معالجة خاصة ، يمكن أن تمتص المستضد Vi على سطحها وتكتسب القدرة على التراص مع الأجسام المضادة المقابلة.

تسمى كريات الدم الحمراء ذات المستضدات الممتصة على السطح بتشخيص كرات الدم الحمراء.

لإعداد تفاعل التراص الدموي Vi-hemagglutination ، خذ:

1) مصل دم المريض (1-2 مل) ؛ 2) كرات الدم الحمراء السالمونيلا السادس التشخيص. ح) مصل السادس. 4) مصل O ؛ 5) محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يوضع التفاعل في أنابيب اختبار تراص أو في ألواح بلاستيكية بها آبار.

يؤخذ الدم من المريض بنفس طريقة أخذ فيدال. احصلي على المصل. يتم تحضير التخفيفات التسلسلية ذات الشقين من المصل ، بدءًا من 1:10 إلى 1: 160.

يضاف 0.5 مل من كل تخفيف إلى البئر و 0.25 مل من تشخيص كريات الدم الحمراء. يوضع التفاعل بحجم 0.75 مل.

الضوابط هي: 1) مصل مستقبلات مونو مستقبلات التراص القياسي + التشخيص - يجب أن يكون التفاعل إيجابيًا حتى عيار المصل ؛ 2) التشخيص في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (التحكم) - يجب أن يكون التفاعل سلبياً.

يتم خلط محتويات الآبار جيدًا ، وتوضع في منظم الحرارة لمدة ساعتين وتترك في درجة حرارة الغرفة حتى اليوم التالي (لمدة 18-24 ساعة).

تبدأ المحاسبة بالتحكم. يتم تقييم التفاعل اعتمادًا على درجة التراص التشخيصي.

تؤخذ النتائج في الاعتبار وفقًا للنظام الرباعي:

تتراكم كريات الدم الحمراء بالكامل - رواسب في قاع الحفرة على شكل "مظلة" ؛

+++ "مظلة" أصغر ، لم تكن كل كريات الدم الحمراء متصقة ؛

++ "مظلة" صغيرة ، يوجد في قاع الحفرة رواسب من كريات الدم الحمراء غير المتراصة ؛

رد الفعل سلبي. لم تتراكم كريات الدم الحمراء واستقرت في قاع البئر على شكل زر.

أسئلة التحكم

1. في أي فترة من المرض يتم تشخيص رد فعل فيدال؟

2. ما هي المكونات اللازمة لأداء تفاعل فيدال؟

3. ما التشخيصات المستخدمة لرد فعل فيدال؟

4. أي من التفاعلات المصلية هي الأكثر حساسية في تشخيص التيفوئيد والعدوى نظيرة التيفوئيد؟

5. ما هو التشخيص المستخدم في صياغة تفاعل Vi-hemagglutination؟

6. ما المصل المستخدم لتحديد وجود مستضد Vi في الثقافة المدروسة؟

7. ما هي أهمية تعريف النوع Vi-phage؟

خذ من تشخيص المعلم O- و H من السالمونيلا التيفوئيد ، نظير التيفوئيد A و نظير التيفويد B ومصل المريض. ضع رد فعل فيدال.

الوسائط الغذائية

يتم إنتاج البيئات EMS ، Ploskirev ، أجار البزموت والكبريتيت من قبل الصناعة الطبية في شكل مسحوق جاف. يتم تحضيرها وفقًا للتعليمات الموجودة على الملصق: يتم وزن كمية معينة من المسحوق ، ويتم سكب الكمية المناسبة من الماء وغليها وصبها في أطباق بتري المعقمة.

الأربعاء راسل. في 950 مل من الماء المقطر ، أضف 40 جم من وسط المغذيات الجافة وأضف 5 جم من أجار المغذيات. يُسخن حتى يغلي ويذوب المساحيق. قم بإذابة 1 جم × في 50 مل من الماء المقطر. ساعات من الجلوكوز ويضاف إلى الخليط الجاهز. يُسكب الوسط في أنابيب اختبار معقمة من 5-7 مل ، ويتم تعقيمها بالبخار المتدفق (يومين لمدة دقيقتين) ويتم شطفها بحيث يبقى العمود. يتم تحضير وسيط راسل مع المانيتول والسكروز بنفس الطريقة.

وسط Olkenitsky من أجار جاف. يتم إذابة 2.5 جرام من أجار المغذيات الجافة في 100 مل من الماء المقطر. تضاف جميع المكونات الموضحة في الوصفة (الملصق) إلى الأجار المبرد إلى 50 درجة مئوية. يتم تعقيم الوسيط الذي يتم سكبه في أنابيب الاختبار بالبخار المتدفق (3 أيام لمدة 20 دقيقة) ثم يتم شطفه. يجب أن يكون الوسط النهائي بلون وردي باهت.