Тромбоциты в мазке. Определение количества тромбоцитов в крови. Методы определения длительности кровотечения

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

Предметные стекла простые и шлифованные.
Смесители для эритроцитов.
Камеры Горяева.
Микроскопы.
Микроскоп с фазовоконтрастным устройством.
Черная бумага.
Ножницы.
Осветитель для микроскопа.
Сернокислый магний (MgS04).
Кокаин.
Хлористый натрий.
Лимоннокислый натрий.
Дистиллированная вода.
Метиловый спирт или смесь Никифорова (смесь равных частей 96° этилового спирта и эфира).
Основной раствор краски Романовского.
Иммерсионное масло.
Набор инструментов для укола в палец.

Тромбоциты - это небольшие образования величиной 2-3 мю. В них различают периферическую часть, напоминающую цитоплазму (гиаломер), и центральную зернистую часть, похожую на ядро (грануломер). Морфологические особенности гиаломера и грануломера зависят от возраста и состояния организма.

Для подсчета тромбоцитов требуются следующие реактивы:

14% раствор сернокислого магния (MgS04): 14 г MgS04 помещают в колбу на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл. Раствор магнезии может быть заменен 5% раствором лимоннокислого натрия [(приготовление см. статью « »]. Эти реактивы препятствуют склеиванию тромбоцитов.
Реактив для подсчета тромбоцитов в счетной камере Горяева: 3 г кокаина и 0,4 г хлористого натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

Взятие крови для подсчета тромбоцитов в мазке

Подсчет в крови тромбоцитов производят по указанию врача. На очищенный спиртом и эфиром палец больного помещают каплю стерильного 14% раствора сернокислого магния или 5% раствора лимоннокислого натрия и через каплю реактива делают укол в палец. Выступившую каплю крови смешивают с помощью парафинированной стеклянной палочки или пастеровской пипетки с реактивом, готовят мазки крови и окрашивают их в течение 40-60 минут краской Романовского, разведенной на нейтральной дистиллированной воде так же, как для мазков крови.

Тромбоциты окрашиваются в розовато-фиолетовый цвет. Параллельно в смеситель берут кровь для подсчета эритроцитов (см. тему « »).

Подсчет тромбоцитов производят с ограничителем поля зрения (по Фонио). Для этого из кусочка бумаги вырезают кружок, по размеру равный 15-копеечной монете, складывают пополам и вчетверо, вершину конуса срезают, в результате чего в центре круга образуется «окошко» (рис. 35). Ограничитель поля зрения вставляют в окуляр (на металлический мостик), предварительно сняв верхнюю линзу окуляра. Вновь навинтив верхнюю линзу, вставляют окуляр в тубус микроскопа. С ограничителем поля зрения насчитывают в среднем 50 эритроцитов в каждом поле зрения микроскопа. Пользуясь иммерсионной системой, одновременно в мазке подсчитывают эритроциты и тромбоциты. Подсчет тромбоцитов заканчивают, насчитав 1000 эритроцитов. По ходу подсчета результаты записывают на бумаге. Затем в камере Горяева подсчитывают количество эритроцитов в 1 мм3 крови. Зная количество эритроцитов в 1 мм3 и количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов, производят расчет.

Пример расчета. На 1000 эритроцитов подсчитано 70 тромбоцитов. Количество эритроцитов в 1 мм3 крови (подсчитаны в камере Горяева) составляет 4 200 000. Количество тромбоцитов в 1 мм3 равно:
70x4200000/1000 = 294 000.

Практически количество подсчитанных тромбоцитов умножают на первые четыре цифры числа эритроцитов, подсчитанных в камере Горяева. Норма тромбоцитов при подсчете по этому методу 200 000-400 000 в 1 мм3.

Подсчет тромбоцитов в счетной камере

Подсчет тромбоцитов в счетной камере производят следующим образом. Кровь набирают в смеситель для эритроцитов до метки 0,5, а раствор кокаина - до метки 101 и оставляют на 30 минут. Меланжер встряхивают, выпускают первые две капли, а третью каплю вносят в камеру Горяева, которую помещают на 5 минут во влажную камеру. Подсчет тромбоцитов производят так же, как и подсчет эритроцитов. Поэтому к подсчитанному количеству тромбоцитов приписывают четыре нуля. Подсчет можно производить как при обычном освещении микроскопа, так и с помощью фазовоконтрастного устройства. В камере Горяева тромбоциты имеют вид блестящих округлых образований, в несколько раз меньших, чем эритроциты. Этот метод отличается точностью и быстротой.

Норма тромбоцитов при подсчете по этому методу 150000-250000 в 1 мм3 крови.

Существуют различные методики подсчёта:

В камере Горяева.
По Фонио.
При помощи люминесцентной микроскопии.
С применением электронно-автоматических счётчиков.

Подсчёт обычно производится по методу швейцарского хирурга начала 20 века А.Фонио.

Метод Фонио

Подсчёт тромбоцитов по Фонио ― это самый распространённый метод.

Преимущество которого заключается в том, что тромбоциты учитываются не в жидком объёме, а в окрашенном мазке:

клеточные элементы хорошо видны;
исследовать материал можно в любое время, а не сразу после получения биологического материала;
облегчается их «привязкой» к одной тысяче эритроцитов в 1 мл крови.

Кожу пациента протирают досуха.

Возможны два варианта действий лаборанта:

На место взятия анализа наносится небольшая капля 14% магнезии для предупреждения свёртывания крови. Полученную каплю крови смешивают с раствором и распределяют по предметному стеклу. Мазок сушат и окрашивают.
В пробирку вносят 25 мкл 14% магнезии или 6% ЭДТА и полный стеклянный капилляр крови, полученной из пальца, смешивают инвитро и готовят мазок. Время его высушивания зависит от реактива (2-3 часа при магнезии, 45 минут при ЭДТА). Затем окрашивают.

При исследовании мазка применяют окуляры с полем зрения, разделённым на квадраты, что облегчает подсчёт клеточных элементов.

В каждом квадрате считают эритроциты и тромбоциты. Подсчёт ведётся до обнаружения ровно одной тысячи эритроцитов.

Число тромбоцитов составляет абсолютную величину в промилле по отношению к эритроцитам (‰).

Зная общие цифры эритроцитов в 1 мкл крови, нужно умножить его на результат промилле для определения содержания в 1 мкл крови тромбоцитов:

Т = , где Т ― количество тромбоцитов, Э ― число эритроцитов в 1 мкл.

Исследование по Фонио может иметь погрешности, связанные с плохим качеством мазка и неравномерным распределением по стеклу тромбоцитов.

Подсчёт в камере Горяева является более точным, его погрешность всего 6,5%, но он более трудоёмкий и должен проводиться немедленно после взятия крови.

Для проведения метода кровь разводят реактивом для лизиса эритроцитов в 200 раз, вносят пипеткой в сетки камеры, настраивают фазово-контрастное устройство и под микроскопом считают тромбоциты в 25 больших квадратах.

Для нахождения числа тромбоцитов в 1 мкл крови полученные цифры перемножают на 2000.

Коррекция уровня тромбоцитов

При несоответствии числа тромбоцитов по Фонио норме нужна помощь врача.

Повысить уровень тромбоцитов можно при помощи некоторых кортикостероидов, витаминов, препаратов-коагулянтов Дицинон, Этамзилат, Викасол, Револейт, Содекор.

Для укрепления сосудистой стенки полезна аскорбиновая кислота. В рационе должны быть мясо, морепродукты, гранаты, тыква, шиповник, свёкла, зелень.

Для снижения уровня тромбоцитов назначают препараты магния. В диете должны присутствоватьтакие продукты как лук, чеснок, рыбий жир, оливковое и льняное масло, томатный сок, яблочный уксус, зелёный чай.

Правильный сбалансированный рацион ― залог здорового равновесия свёртывающей системы крови.

Общий анализ крови включает исследование количественного состава клеток крови: эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

Состав крови

В лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, но методы микроскопического анализа остаются наиболее информативными и точными. Один из таких методов – микроскопия мазка по Фонио для подсчета количества тромбоцитов.

Микроскопию мазка используют в тех случаях, когда результаты исследований автоматического подсчета гемоанализаторами значительно отклоняются от нормы. Тромбоциты по Фонио подсчитываются по формуле, привязанной к значению абсолютного количества эритроцитов в крови. Поэтому методика является частью общего исследования крови и выполняется после автоматического подсчета количества других клеток крови (эритроцитов).

Тромбоциты

Тромбоциты – безъядерные клетки, образуемые из мегакариоцитов костного мозга. После созревания и попадания в кровь клетка живет 5-7 суток. Старые клетки утилизируются печенью и селезенкой. Процесс старения у этих клеток особо выражен.

Тромбоциты, как и другие клетки крови, делятся на юные, зрелые и старые. В норме в крови содержится не менее 95% зрелых клеток. Выброс в кровь незрелых клеток может быть вызван фактором раздражения (множественные повреждения сосудов). В крови могут быть обнаружены и дегенеративные, старые клетки, что свидетельствует о патологии процесса созревания и утилизации.

Тромбоциты – главные участники процессов тромбообразования. Вместе с тем, выделяя особые ферменты, они стимулируют деление клеток и регенерацию тканей, регулируют уровень проницаемости мембран клеток, поддерживают эластичность стенок сосудов.

По их количеству можно определить состояние здоровья сердечно-сосудистой системы. Повышенное количество называют тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

Функции клеток

Тромбоциты хорошо окрашиваются красителями. В зависимости от степени зрелости клетки окрашиваются с разной интенсивностью, что упрощает дифференциальную диагностику их морфологического состава.

Метод подсчета тромбоцитов по Фонио

Клетки подсчитывают разными способами. Камера Горяева и метод Фонио принципиально похожи и являются самыми распространенными. Суть метода Фонио заключается в параллельном подсчете окрашенных клеток эритроцитов и тромбоцитов в полях сетки микроскопа. В камере Горяева эта сетка нанесена лазером на само стекло.

Подсчет тромбоцитов по Фонио выполняют с использованием недорогих реактивов:

В качестве коагулянта применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА);
Для фиксации мазка используют раствор Лейшмана (раствор эозин-метиленовой синьки в метаноле).
Эозиновый краситель Гимзы для окраски по Романовскому.

Метод подсчета тромбоцитов по методу Фонио популярен не только из-за простоты и низкой себестоимости. В отличие от подсчета тромбоцитов в камере Горяева микроскопию мазка по Фонио можно выполнить через несколько часов или дней после сдачи анализа. Лабораториям, заваленным текущими заявками, это позволяет снизить пиковые нагрузки, связанные с утренними наплывами пациентов.

Кроме того, возможность повторной микроскопии через несколько дней позволит сравнить показания или уточнить результат подсчета.

Выполнение анализа

Для анализа используется капиллярная кровь (из пучки пальца).

После прокола пучки первая капля не используется, ее удаляют ваткой. Для мазка берут вторую каплю. Обычно коагулянт добавляют в выступившую каплю крови и сразу помещают образец на стекло. Но лаборант может смешивать кровь с коагулянтом в пробирке.

Мазки фиксируются и окрашиваются методом Паппенгейма. При нанесении на приготовленный мазок крови нескольких капель раствора фиксатора клетки приклеиваются к стеклу. Гематологические фиксаторы способны прокрашивать клетки, что ускоряет процесс подготовки мазка.

Затем на мазок наносят несколько капель краски Гимзы-Романовского и выдерживают 2-3 ч. (с использованием магнезии) или 30-45 мин. (с использованием в качестве коагулянта ЭТА). В результате клетки крови окрашиваются и хорошо просматриваются для ручного подсчета.

После промывания мазок высушивают в сушильном шкафу и приступают к исследованию при помощи микроскопа, оснащенного иммерсионным объективом и сегментированными окулярами.

Подсчет тромбоцитов

Сетка, нанесенная на окуляры, облегчает подсчет тромбоцитов в мазке крови. Лаборант считает число клеточных элементов по секторам этой сетки.

Мазок под микроскопом

Параллельный подсчет количества эритроцитов и тромбоцитов начинают с одного сектора, и, передвигая окуляр, переходят к следующему сектору. Подсчет заканчивают, когда число эритроцитов достигнет 1000.

Важно! Погрешность метода обусловлена тем, что при подсчете учитывают только скопления этих клеток. Отдельно расположенные одиночные клетки не учитывают.

После того как получено число тромбоцитов, привязанное к 1000 клеток эритроцитов, приступают к вычислению абсолютного количества клеток в единице объема крови. Для этого понадобится значение абсолютного количества эритроцитов крови данного пациента, полученное в автоматическом анализаторе.

Расчет выполняют по такой формуле: значение абсолютного количества эритроцитов делят на 1000 и умножают на число подсчитанных при микроскопии тромбоцитов:

где T – число подсчитанных тромбоцитов, E – абсолютное число эритроцитов.

Достоверность результатов

Низкое качество оборудования и нечеткое следование методике исследования может повлиять на достоверность результата. Причины получения искаженных данных:

Использование некачественных химикатов;
Неправильная подготовка растворов;
Несоблюдение сроков окрашивания;
Неправильный режим сушильной камеры.

В условиях массового выполнения микроскопии особое значение имеет правильная организация работы, маркировка и хранение образцов.

Получение объективных результатов зависит не только от правильного выполнения всех требований методики лаборантом, но и от самого пациента. Он должен ответственно подойти к процедуре обследования и подготовиться к сдаче анализа:

Забор крови выполняют на голодный желудок, поэтому пациент должен отказаться от приема пищи за 8 часов до визита в лабораторию.
Если образ жизни пациента или условия его работы связаны с постоянными физическими нагрузками, рекомендуется за 2 дня до анализа их ограничить.
Любители алкоголя должны помнить, что прием этилового спирта провоцирует многократный подъем тромбоцитов.
Эмоциональные стрессы тоже негативно сказываются на картине крови, поэтому несколько дней в преддверии сдачи анализов нужно провести в спокойной обстановке.

Описания некоторых лекарств (гепарин, простагландин, аденозин) содержат информацию о том, что препарат временно может влиять на состав крови. Пациент обязательно должен поставить врача в известность о любых принимаемых препаратах. Врач оценит вероятность искажения результатов анализа и примет взвешенное решение о временной отмене этого средства.

Расшифровка результатов, причины отклонений

В стандартном лабораторном бланке тромбоциты обозначаются PLT. Единица, в которой представлены результаты, – тысячи единиц на микролитр. Обычно в лабораторных бланках для сравнения указана и норма.

Таблица нормального состава крови

Норма для мужчин – 200–400 тыс./микролитр;
Для женщин – от 180 до 320 тыс./ микролитр.

Норма для детей:

У новорожденных до 2 недель – от 100 до 420 тыс./ микролитр;
У малышей до года – от 150 до 350 тыс./ микролитр;
У детей до 5 лет – 180-380 тыс./ микролитр;
У детей до 7 лет – от 180 до 150 тыс./ микролитр.

В период менструации отмечается нормальное (физиологическое) понижение клеток (75-200 тыс./мкл). Двукратное сокращение количества тромбоцитов связано с необходимостью отторжения эпителия матки. Снижение тромбоцитов у беременных (100-300 тыс./мкл) тоже считается нормальным.

Во время менструации сдавать анализ на тромбоциты не рекомендуется.

Высокие тромбоциты

Тромбоцитоз, вызванный патологией стволовых клеток в костном мозге, называют первичным.

Физиологическое повышение тромбоцитов как реакцию организма на травму, употребление алкоголя, инфекцию или отравление называют вторичной. Механизм такой реакции связан с усиленным выбросом тромбопоэтина, который стимулирует деление и рост тромбоцитов в костном мозге.

Тромбоцитоз может возникнуть в результате таких заболеваний:

Туберкулез;
Миелолейкоз;
Анемия;
Артрит;
Эритроцитоз;
Лимфогранулематоз;
Острые инфекции;
Рак печени, почек.

Отравление, стресс и интенсивная физическая нагрузка способны вызвать увеличение количества тромбоцитов.

Важно! При обильных кровопотерях на фоне уменьшения объема крови уровень тромбоцитов снижается только в первые часы, а через несколько часов уровень может повыситься в несколько раз.

Низкие тромбоциты

Причиной тромбоцитопении зачастую становится бесконтрольное самолечение препаратами, побочным эффектом которых и становится развитие тромбоцитопении.

Причиной тромбоцитопении могут быть такие заболевания:

Болезни печени (гепатит, цирроз);
Нарушение функции щитовидной железы (гипертиреоз, гипотиреоз);
Отдельные виды лейкоза;
Мегалобластная анемия;
Алкоголизм.

При затяжной тромбоцитопении стенки сосудов становятся хрупкими, незначительные порезы и повреждения сосудов приводят к длительному кровотечению.

Для уточнения причины низких тромбоцитов и назначения терапии пациенту придется пройти множество дополнительных обследований (УЗИ печени, селезенки, тест на антитела, МРТ). Анализ крови на число тромбоцитов по Фонио нужно будет сдавать регулярно.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Когда тромбоциты понижены, врач назначает медикаментозную терапию. Но пациент может сделать процесс лечения эффективнее:

Снизить потребление соли, алкоголя, исключить из рациона морскую капусту, красные сорта винограда;
Включить в ежедневный рацион рыбу, печень, гречку, орехи, яблоки, сельдерей, сладкий перец.
Не принимать лекарства, которые вызывают тромбоцитопению (антибиотики, антидепрессанты).
Принимать синтетические витаминные комплексы, включающие витамины группы А, В, С.

При высоких показателях снизить уровень тромбоцитов можно при помощи нормализации образа жизни, уменьшения стрессов, травм. Из медикаментов снизить тромбоциты поможет ацетилсалициловая кислота. Дозы препарата назначает только врач.

Тромбоцитами по Фонио называется исследование, которое позволяет выявить истинную концентрацию тромбоцитов в крови и определить первопричины многих патологий. Эти клетки крови оказывают большое влияние на способность крови свёртываться.

В данной статье мы расскажем о сути анализа тромбоцитов по методу Фонио и правильную интерпретацию его результатов.

Суть данного анализа

Далеко не каждый пациент знает, что представляет собой подсчёт количества тромбоцитов по Фонио. Он осуществляется на 1000 эритроцитов в материале, смешанном со специальным реактивом-красителем. После этого полученное число пересчитывается в отношении на 1 мкл или 1 литр крови.

Достоинством этого метода является достаточно точное определение количества этих кровяных клеток, что, естественно, ведет к более точной постановке диагноза.

Разберемся, как именно осуществляют подсчет тромбоцитов по Фонио.

Как проводят анализ?

Общее количество тромбоцитов в определенном представляет собой коагулограмму. Для проведения данного анализа забирают капиллярную кровь из пальца. Сдавать этот анализ необходимо каждому обследуемому пациенту, так как его результаты могут помочь лечащему врачу установить наличие или отсутствие многих опасных заболеваний.

Во время сдачи анализа на уровень тромбоцитов в крови следует учитывать следующее:

Концентрация этих кровяных телец оказывается максимальной после приёма пищи и физических нагрузок. По этой причине сдавать материал необходимо по истечении не менее восьми часов после последней трапезы.
Данное требование относится и к физическим нагрузкам: если пациент сдаст кровь в состоянии возбуждения или после тяжелых физических нагрузок, то результат может оказаться ложным.
Кровь необходимо сдавать рано утром.
Для достижения максимальной точности анализ необходимо провести еще дважды с промежутком в 3-5 дней.

Подсчет результатов

Для подсчета количества тромбоцитов по Фонио используют 2,6%-й раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА) и 14%-й раствор сульфата магния. Реактивы набирают с помощью пипетки к СОЭ-метру (или капилляра Панченкова).

Сначала в пробирку вводят один из реактивов, который в капилляре должен находиться на уровне деления 75. Туда же добавляют кровь, взятую пипеткой (до уровня деления К).
Компоненты тщательно перемешиваются, а затем подготавливаются тонкие мазки.
После этого мазки окрашивают по методике Романовского-Гимзе в течение 35-45 минут, если был использован ЭДТА, или на протяжении двух-трёх часов, если применялся магния сульфат. В течение этого временного промежутка тромбоциты окрашиваются в фиолетово-розовый цвет.

Как проводится подсчёт тромбоцитов по методу Фонио? Для этого в микроскопа проводят подсчет тромбоцитов и эритроцитов до 1000 красных кровяных клеток. Число тромбоцитов в плазме крове узнают, умножая их количество в мазке на число эритроцитов в 1 мкл, а затем полученное значение делят на 1000. Специфический цвет помогает врачу более точно подсчитать количество исследуемых клеток.

Исследование обладает высокой точностью, поэтому большое количество врачей используют результаты, полученные данным способом.

Норма тромбоцитов по Фонио интересует многих.

Особенности метода

Данная методика на сегодняшний день является самой популярной и распространенной. Основное отличие этой методики заключается в том, что форменные элементы подсчитываются в окрашенном мазке крови.

Данный метод обладает следующими достоинствами по сравнению с другими:

лаборант может очень хорошо рассмотреть все клетки крови под микроскопом;
кровь можно исследовать в любое удобное время, не привязываясь к моменту получения материала;
клетки подсчитываются по достаточно простой формуле, помимо этого, число зависит от 1000 эритроцитов в микролитре крови.

Что выявляет анализ тромбоцитов по Фонио?

О чём свидетельствуют пониженные показатели?

Если уровень тромбоцитов у обследуемого пациента понижен, то это свидетельствует о наличии тромбоцитопении, которая развивается от:

воздействия ионизирующего излучения (радиации);
отравления свинцом и прочими веществами;
различных заболеваний системы крови;
от наличия у пациента коллагенозов;
развивающегося нефрита хронической формы.

У людей с пониженным уровнем тромбоцитов достаточно часто возникают гематомы, кровоподтеки и внутренние кровотечения, что является признаком пониженной эластичности и сопротивляемости сосудов. Также часто можно наблюдать петехии - точечные красные или фиолетовые пятна на коже.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио может выявить повышение их числа.

О чем говорит повышенный уровень тромбоцитов?

Тромбофилия - высокий уровень тромбоцитов в крови, наблюдается в следующих состояниях:

приём некоторых лекарственных препаратов;
после проведения оперативного вмешательства;
после удаления у пациента селезёнки;
вследствие травм, сопровождавшихся большой потерей крови;
при развитии у человека железодефицитной анемии;
при наличии у пациента развивающихся злокачественных новообразований.

Очень опасна для жизни и здоровья пациента, поскольку в таком случае значительно возрастает риск возникновения тромбоза - образования внутри сосуда сгустка крови, препятствующего нормальному кровотоку.

Повышенное количество тромбоцитов может оказаться весьма опасным для беременных женщин. Такое явление может привести к следующим крайне неприятным последствиям:

выраженная форма токсикоза у беременных;
самопроизвольное прерывание беременности;
варикоз во время беременности;
развитие тромбоза ног при беременности;
увеличение размеров кровяного сгустка, образовавшегося внутри сосуда;
инфаркт.

Также при наличии воспаления легких, печени, оболочек мозга, токсоплазмоза, уровень тромбоцитов в крови может повыситься. В таком состоянии повышается и уровень лейкоцитов.

Нормальные показатели у детей и взрослых

Нормальный показатель тромбоцитов по Фонио колеблется в пределах от 120 до 400 тыс. в 1 куб. миллиметре крови. Но стоит не забывать, что для определенных групп населения полученные показатели будут значительно различаться. Такие различия считаются вариациями нормы.

Норма для детей старше 1 года составляет 180-320 тыс. в 1 куб. миллиметре крови. Для новорожденных детей предел показателя тромбоцитов несколько шире - от 100 до 420 тыс. в 1 куб. миллиметре.

Для мужчин нормальный показатель тромбоцитов колеблется в пределах от 180 до 400 тыс. Максимальная концентрация этих кровяных клеток наблюдается в возрасте 40 лет. В последующем количество тромбоцитов несколько понижается, но не опускается ниже 320 тыс.

Нормальный показатель рассматриваемых элементов крови для женщин колеблется в пределах 180-340 тыс. Максимальная концентрация наблюдается в возрасте 16 лет. При менструации норма снижается до 150 тыс. В подростковом возрасте это число может упасть даже до 75 тыс.

Анализ крови на тромбоциты по Фонио очень информативен.

Что влияет на концентрацию?

Многие факторы причастны к повышению уровня тромбоцитов. Так, все инфекционные заболевания организма в острой форме приводят к увеличению количества данных кровяных клеток в крови. То же самое наблюдается и при наличии нарушений кроветворной системы и онкологических заболеваний.

Также количество тромбоцитов в крови часто меняется у людей, переживающих постоянные стрессовые ситуации. Помимо этого, некоторым покажется странным, что во время больших кровопотерь количество этих кровных клеток возрастает, но это говорит о том, что организм человека таким образом компенсирует потери крови.

Повышенная концентрация тромбоцитов также наблюдается у людей, долгое время употребляющих спиртные напитки.

При длительном и бесконтрольном приёме препаратов, оказывающих тромоцитопеническое действие, картина крови значительно изменится. Такое же происходит и при заболевании некоторых органов, к примеру, печени, щитовидной железы и др. Иногда порезы или кровотечения из носа могут негативно повлиять на количество тромбоцитов в крови, понижая их количество.

Что нужно делать для нормализации показателя тромбоцитов?

Понятное дело, что меры по нормализации концентрации тромбоцитов будут несколько отличны для разных вариантов полученных результатов. Но все они окажутся бесполезными, если вредные факторы продолжают воздействовать на организм. В первую очередь необходимо избегать физических и эмоциональных перегрузок.

Итак, увеличить уровень тромбоцитов можно следующими способами:

Исключить из рациона питания спиртные напитки, морскую капусту, соления и красный виноград.
Включить в свой рацион свежую рыбу, болгарский перец, печень, гречку и яблоки.
Иногда лечащий врач может назначить специальные лекарственные препараты для подъёма уровня тромбоцитов. Категорически не стоит заниматься самолечением!
Не принимать лекарства, которые в качестве побочного эффекта могут вызвать тромбоцитопению.
Употреблять витамины группы А, В и С.

Для понижения количества тромбоцитов необходимо в первую очередь наладить здоровый образ жизни и исключить стрессовые ситуации. Категорически запрещается заниматься травмоопасными видами спорта. Понизить уровень тромбоцитов поможет:

употребление препаратов ацетилсалициловой кислоты;
отказ от бананов, граната, манго, плодов шиповника;
включение в рацион свеклы, черники, клюквы, облепихи;
употребление поливитаминов и препаратов магния.

Выводы

Таким образом, исследование обладает высокой точностью. И если в результате оно показало отклонения от нормы, то в срочном порядке необходимо скорректировать этот показатель, дабы избежать опасных последствий.

Теперь понятно, что значит тромбоциты по Фонио.

Их количество в крови может свидетельствовать о состоянии здоровья, а отклонения от нормы – первая причина развития патологических процессов сердечно-сосудистой системы. Данные клетки синтезируются из плазмы мегакариоцитов – крупных клеток костного мозга. Продолжительность жизни не велика – всего 5-7 дней, после чего они утилизируются селезенкой и частично печенью. Тромбоцитам свойственно старение, от которого зависит качественный состав крови. Чтобы определить уровень содержания тромбоцитов в крови, используют лабораторный анализ Фонио, при котором исчисление производится наиболее точно. Особенности этого метода и способы вычислений разберем далее.

Исследование по Фонио

Такой способ лабораторного исследования предполагает забор крови из пальца, после чего ее смешивают с реактивами и рассматривают мазок под микроскопом. Определение числа тромбоцитов исчисляется по формуле, в эквиваленте отношения к эритроцитам, как наиболее тяжелым и объемным кровяным клеткам. То есть, каждый мазок рассматривают в перерасчете на 1000 эритроцитов. Такое соотношение позволяет более точно выявить наличие патологий синтеза тромбоцитарных клеток, а также снижает риски выявления псевдобтромбоцитоза.

Если рассматривать это соотношение более подробно, то вначале исчисляется общее количество эритроцитов в мазке, после чего показатель умножается на мл или мкл крови. Полученную величину сопоставляют с количественным составом тромбоцитов.

Суть метода основывается на взаимозависимости фракций крови. Иными словами, при повышенном содержании тромбоцитов, эритроцитов также будет больше. Прямая пропорциональность позволяет определять не только тромбоцитарный уровень в мазке крови, но и пересчитывать его на литры и микролитры.

Это удобно, поскольку нет необходимости брать много крови и обследовать ее всю, на что уйдет масса времени, сил лаборанта, а также реактивов, от чего стоимость анализа будет значительно выше, нежели имеется сейчас.

Последовательность проведения анализа

Для анализа тромбоцитарного уровня по Фонио обычно имеются показания, поэтому пациента заблаговременно подготавливают к забору крови. Предлагается отказаться от лекарственных препаратов, алкоголя, жирной и сладкой пищи, а также газированных напитков за 24 часа до проведения исследования.

Для анализа потребуются следующие реактивы:

раствор сульфата магния – выступает в качестве коагулянта;
краситель Романовского-Гимзы – возволяет разглядеть тромбоциты в общей массе крови, цвет которых измениться под воздействием красителя.

Кровь на анализ берут из безымянного пальца, который хорошо дезинфицируют спиртом или муравьиной кислотой.

После этого производится прокол скарификатором пучки. Первую появившуюся кровь снимают сухой ватой, поскольку она не пригодна для анализа. В появившуюся на поверхности пальца вторую каплю, вводят специальный раствор сульфата магния, после чего производят забор образованной субстанции специальным стеклянным периходником в пробирку. Палец пациента обрабатывается спиртом, дабы избежать инфицирования.

Из полученных образцов готовят мазки, нанося небольшое количество крови на предметное стекло, а также внося краситель, который поможет при подсчете фракций. Продолжительность окраски составляет от 35 минут до 2 часов, в зависимости от качества реактивов.

Ход определения

Зрительно определить тромбоциты несложно. В зависимости от возраста, клетки могут окраситься в фиолетовый или розовый оттенок. Их границы четки, а в центре отмечается наличие специфических гранул. Форма округлая вытянутая, иногда с наличием ровных овалов.

На определенном фиксированном участке считают количество эритроцитов, а также, сколько на них приходиться тромбоцитов. Такая процедура производится до тех пор, пока не будет подсчитано ровно 1000 эритроцитов. Во внимание берут только близлежащие клетки, которые образуют группы. Единичные включения не несут никакой ценности и не составят биологической нагрузки при исследовании.

Предметное стекло перемещают под микроскопом до тех пор, пока не получиться нужная отметка. Для этого меняются поля зрения, что доступно современной технике. В некоторых клиниках данный подсчет производиться автоматически. Специальные микроскопы способны самостоятельно распознавать различные фракции крови, а также определять их соотношение в общей массе.

Получив необходимые показатели, уровень тромбоцитов рассчитывают по формуле:

х – искомый уровень тромбоцитов;
а – количество тромбоцитов в мазке на 1000 эритроцитов;
b – количество эритроцитов в 1 л крови;
1000 – показатель содержания эритроцитов в мазке.

Расчет количества тромбоцитов

Чтобы было понятнее, как производиться расчет, разберем на примере. В ходе лабораторного исчисления было установлено, что количество тромбоцитов (указывается в промилле, поскольку величина относительная количеству эритроцитов) 75. На 1 мкл количество эритроцитов составляет 5х10, из чего следует, что количество тромбоцитов: 753,5х10/1000. В итоге получается, что в 1 мкл крови содержится 262х10, что считается нормой.

Особенности и преимущества метода исследования

Лабораторное определение и подсчет тромбоцитов по Фонио имеет несколько преимуществ:

Точность анализа – достигается за счет использования формулы расчета, компоненты которых легко можно подсчитать в капле крови.
Быстрота проведения – от момента забора крови до получения результата может понадобиться не более 2 часов, а с использованием высокоточного оборудования процедура займет всегоминут.
Не требуется дорогостоящих реактивов – достаточно ввести коагулянт, чтобы спровоцировать активность тромбоцитов, а также подкрасить мазок крови специальным раствором, который улучшит процесс распознания безъядерных клеток.

Главная особенность исследования заключается в получении наиболее точных результатов, нежели при развернутом анализе крови (коагулограмма).

Что влияет на качество анализа?

Выделяют 3 основополагающих фактора, которые могут значительным образом повлиять на качество и результат анализа определения количества тромбоцитов по Фонио:

Подготовка пациента к анализу – забор крови не производят в состоянии алкогольного опьянения (уровень тромбоцитов наряду с лейкоцитами увеличении в 3-4 раза), а также при сильной физической усталости и наличии продолжительного стресса со всеми вытекающими. Эти состояния могут провоцировать чрезмерную выработку тромбоцитов, которая является исключительно периодической и не несет в себе информацию о реальном положении вещей. Перед забором крови лучше ничего не есть, а также отказаться от приема любых лекарств. Оптимальное время для взятия образца – 7-9 часов утра.
Качество реактивов – при использовании некачественных реактивов могут присутствовать отклонения от нормы. В подобном случае пациенту предлагают сдавать анализ на Фонио трижды, с периодичностью 2-3 дня. Это позволит наиболее полно и точно оценить состояние здоровья, а также минимизировать погрешность.
Особые состояния организма – при менструации у женщин, беременности, в лактационный период результативность методики стремительно снижается. Дело в том, что гормоны, которые управляют женским организмом, постоянно подстраиваются под биологические процессы, контролируя их функциональность. У мужчин такие состояния могут наблюдать при сильной физической нагрузке, особенно это касается спортсменов и тяжеловесов.

Выявить истинные проблемы со здоровьем поможет только комплексное обследование всего организма, предпосылкой проведения которого является неудовлетворительный результат анализа крови по Фонио.

Таким образом, данный метод исследования уровня тромбоцитов не только удобен и прост в проведении, но и позволяет получать точные результаты.

Исчисления одной капли крови можно сопоставить с литром или микролитром, поэтому сразу будут видны отклонения от нормы, если они есть. Стоимость процедуры невелика, а продолжительность ожидания результатов не превышает 3 часов. Это позволяет быстро получить нужные данные в критических состояниях пациента, когда каждая секунда может стать последней. Простота формулы позволяет самостоятельно исчислять уровень тромбоцитов, но на сегодняшний день большинство клиник пользуются специальными электронными микроскопами, способными производить все подсчеты и самостоятельно выдавать конечный результат.

Добавить комментарий Отменить ответ

При использовании данного сайта, вы подтверждаете свое согласие на использование файлов cookie в соответствии с настоящим уведомлением в отношении данного типа файлов. Если вы не согласны с тем, чтобы мы использовали данный тип файлов, то вы должны соответствующим образом установить настройки вашего браузера или не использовать сайт.

Нормы тромбоцитов, анализ по методу Фонио, способы нормализации

Тромбоциты

Метод подсчета тромбоцитов по Фонио

Подсчет тромбоцитов по Фонио выполняют с использованием недорогих реактивов:

В качестве коагулянта применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА);
Для фиксации мазка используют раствор Лейшмана (раствор эозин-метиленовой синьки в метаноле).
Эозиновый краситель Гимзы для окраски по Романовскому.

Выполнение анализа

Для анализа используется капиллярная кровь (из пучки пальца).

Затем на мазок наносят несколько капель краски Гимзы-Романовского и выдерживают 2-3 ч. (с использованием магнезии) илимин. (с использованием в качестве коагулянта ЭТА). В результате клетки крови окрашиваются и хорошо просматриваются для ручного подсчета.

Подсчет тромбоцитов

Сетка, нанесенная на окуляры, облегчает . Лаборант считает число клеточных элементов по секторам этой сетки.

Важно! Погрешность метода обусловлена тем, что при подсчете учитывают только скопления этих клеток. Отдельно расположенные одиночные клетки не учитывают.

где T – число подсчитанных тромбоцитов, E – абсолютное число эритроцитов.

Достоверность результатов

Использование некачественных химикатов;
Неправильная подготовка растворов;
Несоблюдение сроков окрашивания;
Неправильный режим сушильной камеры.

Забор крови выполняют на голодный желудок, поэтому пациент должен отказаться от приема пищи за 8 часов до визита в лабораторию.
Если образ жизни пациента или условия его работы связаны с постоянными физическими нагрузками, рекомендуется за 2 дня до анализа их ограничить.
Любители алкоголя должны помнить, что прием этилового спирта провоцирует многократный подъем тромбоцитов.
Эмоциональные стрессы тоже негативно сказываются на картине крови, поэтому несколько дней в преддверии сдачи анализов нужно провести в спокойной обстановке.

Расшифровка результатов, причины отклонений

Норма для мужчин – 200–400 тыс./микролитр;
Для женщин – от 180 до 320 тыс./ микролитр.

Норма для детей:

У новорожденных до 2 недель – от 100 до 420 тыс./ микролитр;
У малышей до года – от 150 до 350 тыс./ микролитр;
У детей до 5 лет –тыс./ микролитр;
У детей до 7 лет – от 180 до 150 тыс./ микролитр.

В период менструации отмечается нормальное (физиологическое) понижение клеток (тыс./мкл). Двукратное сокращение количества тромбоцитов связано с необходимостью отторжения эпителия матки. Снижение тромбоцитов у беременных (тыс./мкл) тоже считается нормальным.

Во время менструации сдавать анализ на тромбоциты не рекомендуется.

Высокие тромбоциты

Тромбоцитоз, вызванный патологией стволовых клеток в костном мозге, называют первичным.

Тромбоцитоз может возникнуть в результате таких заболеваний:

Отравление, стресс и интенсивная физическая нагрузка способны вызвать увеличение количества тромбоцитов.

Важно! При обильных кровопотерях на фоне уменьшения объема крови уровень тромбоцитов снижается только в первые часы, а через несколько часов уровень может повыситься в несколько раз.

Низкие тромбоциты

Причиной тромбоцитопении могут быть такие заболевания:

Болезни печени (гепатит, цирроз);
Нарушение функции щитовидной железы (гипертиреоз, гипотиреоз);
Отдельные виды лейкоза;
Мегалобластная анемия;
Алкоголизм.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Снизить потребление соли, алкоголя, исключить из рациона морскую капусту, красные сорта винограда;
Включить в ежедневный рацион рыбу, печень, гречку, орехи, яблоки, сельдерей, сладкий перец.
Не принимать лекарства, которые вызывают тромбоцитопению (антибиотики, антидепрессанты).
Принимать синтетические витаминные комплексы, включающие витамины группы А, В, С.

Нужно внести коррективы в свой рацион:

Исключить шиповник, гранат, бананы, манго;
Употреблять продукты, содержащие ацетилсалициловую, яблочную или лимонную кислоту и разжижающие кровь (клюква, свекла, облепиха, томаты, зеленый чай);
Контролировать объем употребляемой жидкости, так как обезвоживание приводит к повышению вязкости крови.

Эти меры помогают нормализовать уровень тромбоцитов, нарушения которого носят вторичный (реактивный) характер. Первичные тромбоцитопении и тромбоцитозы подлежат длительной диагностике и терапии.

Определение числа тромбоцитов в крови

Число тромбоцитов: микроскопический метод.

Определение числа тромбоцитов - важнейший метод исследования, способный обнаружить наиболее частое нарушение гемостатического потенциала крови - тромбоцитопению. В настоящее время для определения числа тромбоцитов имеется несколько лабораторных технологий (автоматизированный, по Фонио и др.). Наибольшую точность имеет микроскопический метод при подсчете в камере, однако этот метод требует от врача-лаборанта опыта, напряжения зрения, концентрации внимания.

Принцип метода

Принцип метода основан на определении числа тромбоцитов путем их подсчета в камере Горяева обычной световой микроскопией или с помощью микроскопа с фазово-контрастной приставкой после разведения крови и гемолиза эритроцитов раствором оксалата аммония.

С целью повысить точность микроскопического метода число тромбоцитов подсчитывают в двух камерах, затем вычисляют среднюю арифметическую.

Реактивы и оборудование

1% раствор оксалата аммония.
Смеситель Сали.
Камера Горяева (2 шт.).
Световой микроскоп с увеличением х 40 или микроскоп с фазово-контрастной приставкой (например, КФ-4 или др.).

Образцы крови для исследования

Определение числа тромбоцитов возможно в крови, стабилизированной цитратом натрия или нанесенным на стенки пластиковой пробирки мелкодисперсным порошком этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА). При использовании микроскопического метода предпочтительнее брать кровь на цитрате натрия, чтобы исключить влияние ЭДТА на результаты подсчета тромбоцитов.

Техника выполнения

В сухую пластиковую пробирку вносят 1,98 мл 1% оксалата аммония и 0,02 мл крови. Медленно и аккуратно перемешивают смесь в течение 2 мин, а затем ее инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. Далее заполняют две камеры Горяева содержимым пробирки и на 10 мин помещают их в чашку Петри, в которой находится влажная марля или смоченный фильтр. После этой инкубации, которая необходима для оседания тромбоцитов, подсчитывают их число в 25 квадратах. Среднюю арифметическую результатов подсчета в двух камерах умножают на 1000. При исследовании цитратной крови результат увеличивают на 10 % и умножают на 1000, что позволяет корректировать разведение венозной крови раствором натрия цитрата.

Оценка результатов исследования

У здорового человека число тромбоцитов в периферической крови колеблется в довольно широком диапазоне - от 150 до 400 х 109/л.

Недопустимо исследование числа тромбоцитов в охлажденных образцах крови. При гемолизе возможно занижение числа тромбоцитов. В ряде случаев при исследовании числа тромбоцитов на гематологических анализаторах встречается так называемая псевдотромбоцитопения, обусловленная агрегацией и группировкой тромбоцитов в присутствии ЭДТА. Эту проблему решает забор крови на цитрате натрия.

Для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов на гематологических анализаторах существуют контрольные образцы с разным содержанием этих клеток. О возможности использования этих образцов для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов микроскопическим методом не существует общепринятых рекомендаций. Для повышения точности результатов микроскопического исследования следует периодически контролировать воспроизводимость результатов определения числа тромбоцитов разными лаборантами в течение рабочего дня и на основе полученных данных повышать точность и снижать вариацию при выполнении этой методики Коэффициент вариации микроскопического метода у опытных лаборантов не превышает 10 %.

Интерпретация результатов исследования

В клинической картине тяжелого течения идиопатической тромбоцитопенической пурпуры доминирует геморрагический синдром. При вторичных тромбоцитопениях геморрагический синдром, как правило, умеренный, и сочетается с клиническими симптомами основного заболевания, обусловившими тромбоцитопению. В тех случаях, когда число тромбоцитов менее 100 х 109/л длительно наблюдается без каких-либо проявлений фонового заболевания, следует думать об идиопатической тромбоцитопенической пурпуре.

Тромбоцитозы также наблюдаются при миелопролиферативных заболеваниях. Нередко на фоне миелопролиферации отмечают нарушения реологических свойств крови за счет полиглобулии. В последнем случае, а также при числе тромбоцитов более 700 х 109/л у пациентов повышается риск тромбозов. Однако на фоне миелопролиферативных заболеваний, сопровождающихся тромбоцитозом более 1500 х 109/л, парадоксально наблюдается геморрагический синдром.

При тромбоцитопении и наличии геморрагического анамнеза с раннего детского возраста весьма важно оценить размер тромбоцитов, в т. ч. MPV (средний объем) в мазке крови, а также наличие каких-либо включений в тромбоциты.

Причины ошибок

Использование одной камеры, меньшее число подсчитываемых квадратов.
Неточность градуировки разных смесителей.
Ошибки преаналитического этапа исследования, в т. ч. неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
Недостаточная квалификация лаборанта.

Другие аналитические технологии

Практически все гематологические анализаторы неплохо измеряют число эритроцитов и лейкоцитов в крови, хорошие результаты точности и воспроизводимости демонстрирует метод определения концентрации гемоглобина, реализованный в таких приборах. Однако и в настоящее время еще встречаются образцы анализаторов, которые число тромбоцитов при тромбоцитопениях подсчитывают неточно, и, как правило, наблюдается завышение числа тромбоцитов при их автоматизированном подсчете. Особенно ярко этот недостаток проявляется при работе с образцами крови, в которых число тромбоцитов ниже 50 х 109/л. Этот недостаток есть следствие того, что тромбоциты гораздо мельче других клеток крови, поэтому сложнее выполнить их корректный подсчет в той же камере и такими же техническими приемами, что и другие клетки крови. Следует отметить также, что на показатели точности подсчета тромбоцитов на гематологическом анализаторе весьма существенное влияние оказывают качество и надежность используемых калибраторов. Именно поэтому в сложных диагностических ситуациях или при глубокой тромбоцитопении в анамнезе для уточнения числа тромбоцитов следует применять микроскопический метод.

Подсчет клеток крови в окрашенных мазках имеет низкую точность и воспроизводимость, поэтому он не может быть рекомендован для применения в современных клиниках.

Оцените материал

Перепечатка материалов с сайта строго запрещена!

Информация на сайте предоставлена для образовательных целей и не предназначена в качестве медицинской консультации и лечения.

Ручной подсчет тромбоцитов

Принцип. Подсчет количества тромбоцитов на 1000 эритроцитов в окрашенных мазках крови и перерасчет их числа на 1 мкл или 1 л, в соответствии с количеством эритроцитов в этом объеме крови.

Реактивы: 1) 14% раствор сульфата магния; 2) 2,6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА).

Ход определения. В пробирку вносят реактив 1 или 2, взятый капилляром Панченкова до отметки «75», затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром до отметки «К (0)». Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе (см. «Окраска мазков крови») в течение 2–3 ч (при использовании реактива 1) или 35–45 мин (при использовании реактива 2).

Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая тромбоциты в тонких местах препарата (эритроциты должны располагаться изолированно друг от друга). Тромбоциты окрашиваются в розовато-фиолетовый цвет, имеют округлую форму, размер 2–4 мкм, в центре клетки отчетливо определяется зернистость - грануломер, периферическая часть имеет более светлую окраску, незернистая - гиаломер.

Подсчет производят следующим образом. В каждом поле зрения микроскопа считают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов. Для удобства и большей точности счета рекомендуется пользоваться окуляром с уменьшенным полем зрения. При его отсутствии можно уменьшить поле зрения приемом, описанным в «Подсчет ретикулоцитов». Параллельно берут кровь для подсчета числа эритроцитов в камере Горяева.

Расчет. Зная количество эритроцитов в 1 мкл (или 1 л) крови и количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов, легко рассчитать и содержание тромбоцитов в крови:

где X - количество тромбоцитов в 1 мкл (1 л) крови; а - количество тромбоцитов, подсчитанных в мазке крови на 1000 эритроцитов; b - количество эритроцитов в 1 мкл (1 л) крови; 1000 - количество эритроцитов, подсчитанных в мазке крови.

Ручной подсчет тромбоцитов

где Х - число лейкоцитов в 1 мкл крови, а - число лейкоцитов в 100 больших квадратах, 20 - разведение крови, 100- число подсчитанных квадратов, 250 -объем одного большого квадрата 1/250.

Таким образом, количество лейкоцитов, подсчитанных в 100 больших квадратах, умножают на 50.

При наличии в периферической крови ядросодержащих клеток красного ряд, они не лизируются и подсчитываются вместе с лейкоцитами. В этом случае, чтобы определить истинное количество лейкоцитов, из общего числа посчитанных клеток вычитают количество клеток красного ряда.

Например: Общее количество лейкоцитов при подсчете в камере (или на анализаторе) – 45*109/л. При подсчете лейкоцитарной формулы найдено, что на 100 лейкоцитов присутствует 50 эритробластов (нормобластов).

Рассчитываем истинное количество лейкоцитов в крови:

150 клеток (общее количество - 45*109/л (количество клеток в 1 мкл, лейкоцитов и нормобластов, полученное при подсчете в камере полученное при подсчете или на анализаторе)

100 клеток (лейкоциты) - Х (истинный лейкоцитоз крови)

Таким образом, истинное число лейкоцитов в крови составляет 30 * 109/л.

Основные источники ошибок при подсчете лейкоцитов в камере:

Неправильное соотношение объемов крови и уксусной кислоты, взятые в пробирку.

Неправильно подготовленный раствор уксусной кислоты (при концентрации большей, чем 5%, часть лейкоцитов может лизироваться, что приведет к занижению результата).

Длительное нахождение пробы при температуре выше 28°С, что может ускорить лизис

лейкоцитов в образце и привести к занижению результата.

Неправильное заполнение камеры Горяева. Как и при подсчете эритроцитов, камеру необходимо оставлять на 1 минуту для оседания клеток.

Недостаточно хорошо отмытая после предыдущего определения камера Горяева. Оставшиеся в камере лейкоциты могут завышать результаты анализа. (Луговская и др., 2002)

2.3 Методы подсчета количества тромбоцитов.

Для определения количества тромбоцитов используют следующие методы: подсчет в счет ной камере, мазках крови и гематологическом анализаторе. Каждая группа методов имеет преимущества и недостатки.

Подсчет тромбоцитов в камере достаточно точен, не требует для расчета количества эритроцитов. С другой стороны этот метод более трудоемкий, поскольку тромбоциты в нативном виде представлены мелкими и плохо контрастированными элементами. Недостаток метода в необходимости подсчета тромбоцитов в ближайшие часы после взятия крови.

Определение количества тромбоцитов в мазках крови значительно уступает по своей точности камерному методу или автоматическим счетчикам. Ошибки при подсчете в мазках крови могут быть обусловлены плохим качеством мазка и связанным с этим неравномерным распределением тромбоцитов, неточным определением количества эритроцитов крови. Существенное неудобство метода - необходимость одновременного подсчета тромбоцитов и эритроцитов в крови. Преимущество его - возможность исследования тромбоцитов в любое время, независимо от момента взятия крови.

Метод определения тромбоцитов с помощью гематологического анализатора позволяет достаточно точно определить количество тромбоцитов, их средний объем и распределение по объему. (Луговская и др., 2002)

Метод подсчета в камере.

Принцип: Определение количества тромбоцитов в 1 л крови с учетом ее разведения и объема квадрата счетной сетки камеры Горяева с применением фазово-контрастного устройства для контрастирования тромбоцитов.

Реактивы: Применяют 1% раствор оксалата аммония, который быстро и полностью лизирует эритроциты. Раствор кипятят и фильтруют. Хранят в холодильнике.

Ход определения: Исследуемую кровь разводят в 200 раз; для этого в сухую пробирку набирают 4 мл реактива и 0,02 мл крови. Перемешивают и оставляют на 25-ЗО мин для гемолиза эритроцитов. Подготавливают счетную камеру. Перемешивают разведенную кровь и заполняют камеру: подносят каплю крови с помощью стеклянной палочки или пастеровской пипетки к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы кровь равномерно без пузырьков воздуха заполняла всю поверхность сетки, не затекая в бороздки. Помещают счетную камеру во влажную камеру на 5 мин для оседания тромбоцитов (чашка Петри с уложенной по краям смоченной водой фильтровальной бумагой). Подготавливают фазово-контрастное устройство в соответствии с инструкцией, приложенной к нему. Тромбоциты считают в 25 больших квадратах.

Тромбоциты выглядят в счетной камере в виде мелких, хорошо преломляющих свет образований.

Расчет тромбоцитов проводят по формуле:

где Х - число тромбоцитов в 1 мкл крови; а - число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших квадратах,разведение крови, 25 - число сосчитанных квадратов,объем одного большого квадрата 1/250 мкл. Число подсчитанных тромбоцитов умножают на 2000.

Воспроизводимость. Ошибка метода составляет 6,5%. (Клиническая лабораторная аналитика, 1999)

Метод подсчета в мазках крови (по Фонио).

Принцип: Метод основан на подсчете числа тромбоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов с расчетом на 1 мкл (или 1 л) крови, исходя из содержания в этом объеме количества эритроцитов.

Реактивы: Применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА).

Ход определения: Реактив набирают в капилляр Панченкова до метки “75 и вносят в пробирку, затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром, до метки “0”. Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 2-3 ч (при использовании раствора сульфата магния) и в течениемин (при приме нении ЭДТА). Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата (эритроциты должны быть расположены разрозненно).

Подсчет проводят следующим образом: в каждом поле зрения микроскопа считают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов.

Расчет: количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов составляет А‰ Зная число эритроцитов в 1 л крови, подсчитывают количество тромбоцитов в 1 л крови.

Например: А=60‰; число эритроцитов 5 *1012/л

Составляют пропорцию:

Х - 5*1012/л, откуда

Нормальные величины тромбоцитов 180,0-320,0 * 109/л

В настоящее время существуют готовые наборы для подсчета тромбоцитов (фирма «Гем»). (Луговская и др., 2002)

Для подсчета и анализа клеток крови используют ручные микроскопические методы и гематологические счетчики разного уровня автоматизации. В настоящее время необходимо внедрение технологий автоматического изучения клеточного состава крови, для того чтобы добиться высокого качества и точности исследований, исключая ошибки, зависящие от работы лаборантов. Клинические лаборатории нуждаются в разработке новых более совершенных методов.

Подсчет тромбоцитов в мазке крови

Тромбоциты – это дискообразные пластинки, не имеющие ядра, которые находятся в крови человека и вырабатываются клетками костного мозга, а также участвуют в процессе остановки кровотечения.

Уменьшение или увеличение числа клеток является опасным для организма человека, поэтому огромное значение имеет определение количества тромбоцитов.

Методики определения числа клеток

Применяются разные методики подсчета тромбоцитов. Сейчас подсчитывание в мазке крови ведется несколькими способами:

Подсчитывание по методике Фонио;
Вычисление количества тромбоцитов камерой с использованием методики Горяева;
Подсчитывание с помощью автоматических электронных счетчиков;
С использованием люминесцентного микроскопа.

Болезнь, при которой увеличивается количество клеток, называется тромбоцитоз. При снижении – в крови возникает тромбоцитопения.

Норма у здорового человека:

Подсчитывание числа тромбоцитов по Фонио

Исследование по методике Фонио применяется наиболее часто. Оно базируется на определении количества пластинок в окрашенных мазках крови с использованием химреактивов:

сульфат магния 14%;
этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) натрия 6%.

Ход исследования

Сульфат магния или ЭДТА при помощи капилляра Панченкова помещают в стеклянную пробирку, туда же помещают капиллярную кровь, которую берут, используя тот же капилляр.

Кровь с реактивом перемешивают, а затем из полученного раствора готовят материал для определения.

Для этого на предметное стекло наносятся тонкие мазки, они фиксируются и окрашиваются:

с применением магния сульфата – 2-3 часа;
с использованием ЭДТА –минут.

После высыхания мазки разглядывают под микроскопом, у которого имеется иммерсионный объектив для увеличения изображения и усиления яркости.

Кровяные пластинки должны располагаться по отдельности, чтобы этого добиться используется самое тонкое место мазка.

Как считать тромбоциты в мазке крови?

Для подсчета мазок передвигается под объективом микроскопа, чтобы были подсчитаны 1000 эритроцитов. Затем считают находящиеся среди них кровяные пластинки.

При известном количестве эритроцитов в одном литре крови, можно произвести подсчет абсолютного числа тромбоцитов.

Определение количества при помощи камеры Горяева

По методу Горяева тромбоцитарные пластинки считает камера с применением цитратного вещества. Число клеток определяют в 1 МК/л или в литре крови.

Для этого используют следующие химреактивы:

Химреактив №1:

гидрохлорид кокаина 3 г;
хлорид натрия 0,25 г;
фурацилин 0,25 г;
вода 100 мл.

Химреактив №2:

1% раствор оксалата аммония. Раствор надо прокипятить, профильтровать и после этого он хранится на холоде. При помощи этого реактива растворение эритроцитов происходит быстрее.

Ход исследования

Используют материал, взятый из вены в пробирку с цитратом. Этим веществом служит ЭДТА. При взятии из пальца тромбоциты могут давать сгустки.

Нужно взять 4 мл химреактива №1 или №2, добавить 0,02 мл крови, получится разведение в 200 раз. Кровь с реактивом слегка взбалтывают, оставляют на полчаса, за это время происходит лизис.

В подготовленную камеру помещают материал из подготовленной крови, а затем опускают во влажную чашку Петри на 5 минут для оседания тромбоцитарных клеток.

В камере клетки хорошо видны, благодаря тому, что используется фазово-контрастные линзы объектива.

Частицы пыли и грязи должны быть хорошо вымыты, чтобы не оставлять след на стеклянной таре и самой камере, иначе их при подсчете можно принять за тромбоциты.

Подсчитывание с помощью счетчиков

Счетчик называется автоматический гематологический аппарат. С его помощью можно определить количество кровяных пластинок, также сделать гистограмму (распространение по величине).

Аппаратное исследование достаточно точное, делается экспресс-методом, который выдает результаты в течение 1 минуты.

Более дешевые модели счетчиков только определяют число, а усовершенствованные приборы делают качественный обзор целого комплекса клеток, куда входит:

При помощи аппаратного гематологического счетчика можно также построить график расположения клеток по размеру.

Методика люминесцентной микроскопии с помощи лампы считается устаревшим. Для определения тромбоцитов получил меньшее распространение и сейчас почти не используется.

Для обзора и подсчитывания клеток крови используют различные методы микроскопического исследования, а также гематологические электронные счетчики.

Внедрение новых технологий для изучения состава клеток позволит исключить ошибки лаборантов и добиться более высокой точности и качества диагностики.

Количество тромбоцитов (Plt)

Plt – мелкие клетки-пластинки, быстро реагирующие на воспалительный процесс, активацию свертывания или возникающее кровотечение. Тромбоциты формируют первичный тромб в области повреждения сосуда.

В ручном режиме для подсчета тромбоцитов предполагается взятие отдельной капли крови для изготовления и окраски мазка и последующего подсчета тромбоцитов.

p>В автоматическом режиме при анализе в «RBC-кювете» частицы размером 2–20 фл относятся к тромбоцитам. Полученные необработанные данные проверяются с помощью математических критериев и экстраполируются в виде логарифмически нормального распределения от 0 до 70 фл.

В некоторых анализаторах для более точного подсчета тромбоцитов выполняется обработка пробы специальными антителами, активными в отношении поверхностных рецепторов тромбоцитов.

Пониженные значения – тромбоцитопения – состояние, при котором число тромбоцитов не превышает 150*10 9 /л (150 тыс/мкл). Клинические признаки кровоточивости развиваются при снижении количества тромбоцитов до 50*10 9 /л (50 тыс/мкл). Уменьшение числа тромбоцитов может быть обусловлено:

повышением разрушения тромбоцитов;
повышением потребления тромбоцитов;
недостаточным образованием кровяных пластинок.

Повышенные значения – тромбоцитоз – увеличение количества тромбоцитов в периферической крови более 400*10 9 /л (400 тыс/мкл), могут быть первичными и вторичными.

Первичные тромбоцитозы характерны для всех хронических миелопролиферативных заболеваний (хронический миелолейкоз, идиопатический миелофиброз, эссенциальная тромбоцитемия, эритремия).

Вторичные тромбоцитозы встречаются:

при острых и хронических воспалительных процессах (ревматоидный артрит, узелковый периартериит, неспецифический язвенный колит, остеомиелит и др.), а также при сепсисе;
амилоидозе;
железодефицитных состояниях на фоне хронической кровопотери;
злокачественных новообразованиях как проявление паранеопластической реакции;
гемолитической анемии;
после острой кровопотери, спленэктомии;
при лечении некоторыми препаратам (витамин В12, андрогены, адреналин, эритропоэтин и др.).

О ВОЗМОЖНЫХ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯХ НЕОБХОДИМО ПРОКОНСУЛЬТИРОВАТЬСЯ СО СПЕЦИАЛИСТОМ

Центральный офис:, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе энтузиастов», «Перово»