میکروبیولوژی پاراپرتوسیس. ویژگی های میکروبیولوژیکی عامل سیاه سرفه. زیست شناسی میله، خواص فرهنگی

اولین اطلاعات تاریخیبروز سیاه سرفه به قرون وسطی باز می گردد، زمانی که اپیدمی های این بیماری در هلند، فرانسه و انگلیس توصیف شد.

در سال 1906، ژول بورده، باکتری شناس بلژیکی و اکتاو ژانگو، دانشمند فرانسوی، برای اولین بار در جهان عامل بیماری را که بعدها باسیل Bordet-Gangou نام گرفت، جدا و توصیف کردند.بعدها، جنس باکتری Bordetella به افتخار J. Bordet نامگذاری شد. واکسیناسیون انبوه علیه سیاه سرفه در اواسط قرن بیستم آغاز شد.

سیاه سرفه یک فرآیند عفونی حاد در سیستم تنفسی انسان است که غشای مخاطی برونش ها، برونشیول ها و همچنین حنجره و نای را تحت تاثیر قرار می دهد و با سرفه حمله ای تشنجی همراه است. سیاه سرفه توسط باکتری Bordetella pertussis ایجاد می شود.

ویژگی های میکروبیولوژیکی عامل سیاه سرفه

جنس Bordetella شامل چندین پاتوژن بیماری‌های تنفسی انسان است که Bordetella pertussis عامل سیاه سرفه و Bordetella parapertussis عامل بیماری پاراپرتوسیس (بیماری از نظر بالینی مشابه، اما به شکل خفیف بروز می‌کند) از اهمیت اولیه برخوردار هستند. .

باکتری های این جنس گرم منفی هستند (در صورت رنگ آمیزی رنگ را حفظ نمی کنند)، میله ای شکل، اندازه کوچک و بی حرکت هستند.

باسیل سیاه سرفه - Bordetella pertussis - با اندازه کوچک آن (بیش از 1 میکرون)، قادر به تشکیل یک میکروکپسول محافظ و پوشیده از میکروویلی است. این باکتری فقط در حضور اکسیژن (هوازی) قادر به تکثیر است و در محیط های غذایی کاملاً نیازمند است. کلنی های سیاه سرفه شبیه مروارید یا قطرات جیوه هستند: نقره ای، کوچک، کروی و مخروطی شکل.

عناصر ساختاری اصلی باسیل سیاه سرفه - یک میکروکپسول محافظ، میکروویل، دیواره سلولی (غشاهای بیرونی و داخلی) - بار آنتی ژنی میکروارگانیسم را حمل می کنند و سموم تولید می کنند و پاسخ ایمنی و تظاهرات بالینی بیماری را ارائه می دهند.

برخلاف عامل واقعی سیاه سرفه، B.parapertussis اندازه بزرگی دارد، در کلنی های مختلف روی محیط های غذایی رشد می کند و مهمتر از همه، در ساختار آنتی ژن های آن متفاوت است.

ساختار آنتی ژنی باکتری های جنس Bordetella بسیار پیچیده است. کپسول حاوی 14 آگلوتینوژن (آنتی ژن کپسولی) است که فاکتور نامیده می شود. بنابراین فاکتورهای 1، 2، 3 مختص B.pertussis، فاکتور آنتی ژنی 14 مشخصه B.parapertussis و فاکتور 7 برای کل جنس Bordetella مشترک در نظر گرفته می شود.

در مجموع، باسیل سیاه سرفه دارای 8 آگلوتینوژن است، اما پیشروهای آن 1، 2 و 3 هستند.بسته به ترکیب این آنتی ژن ها در یک سلول باکتری، 4 سروتیپ متمایز می شوند: 1،2،0. 1,0,3; 1,2,3; 1,0,0. دو سروتیپ اول بیشتر از بیماران واکسینه شده و بیمار جدا می شوند فرم های نور، دومی - در بیماران با اشکال شدید.

عوامل بیماری زایی باسیل سیاه سرفه:

در اجرای عمل یک سلول باکتری بر روی بدن انسان، عوامل بیماری زایی باسیل سیاه سرفه نقش اصلی را ایفا می کنند.

از جمله آنها عبارتند از:

اپیدمیولوژی سیاه سرفه

منبع عفونت یک فرد بیمار است (عفونت آنتروپونوز). در حال حاضر، ناقل باکتری Bordetella ثابت نشده است. دوره عفونت از 1 تا 25 روز بیماری طول می کشد.

به طور سنتی، سیاه سرفه را "عفونت دوران کودکی" می نامند زیرا در واقع 95 درصد موارد این بیماری در کودکان و تنها 5 درصد در بزرگسالان تشخیص داده می شود. با این حال، شواهدی وجود دارد که نشان می دهد تعداد واقعی موارد بیماری در بزرگسالان بیشتر از آمار رسمی است. این به دلیل این واقعیت است که پزشکان هنگام معاینه یک بزرگسال به دلیل تعصبات خود در مورد حساسیت کودکان به این عفونت، احتیاط ضعیفی دارند. علاوه بر این، در بزرگسالان، این بیماری به صورت پاک شده، تحت پوشش عفونت حاد تنفسی رخ می دهد، که تشخیص را دشوار می کند.

بیشترین تعداد موارد ابتلا به این بیماری در گروه سنی زیر 1 سال ثبت شده است. این به دلیل دوره ناقص واکسیناسیون در نوزادان در این سن و حساسیت بالای آنها است. دانش آموزان مقطع ابتداییهمچنین یک گروه در معرض خطر هستند: ایمنی پس از واکسیناسیون به طور قابل توجهی در سن 5-7 سالگی ضعیف می شود، بنابراین، در بین کودکان این گروه سنی بسیاری از افراد غیر ایمنی جمع می شوند و از گردش پاتوژن حمایت می کنند.

مکانیسم انتقال سیاه سرفه آئروسل است، راه انتقال قطرات معلق در هوا است.

مسری بودن (عفونی بودن) بسیار بالاست و شاخص سرایت 70-100 درصد است. در صورت عدم ایمنی نسبت به سیاه سرفه (اگر فرد واکسینه نشده باشد یا بیمار نشده باشد)، حساسیت به 90٪ می رسد.

عامل ایجاد کننده سیاه سرفه هنگام سرفه به طور گسترده در محیط منتشر می شود. با سیاه سرفه تشنجی، یک آئروسل درشت تشکیل می شود که به سرعت در شعاع 2 متری ته نشین می شود. توانایی نفوذ به دستگاه تنفسی کم است: ذرات بزاق و خلط در دستگاه تنفسی فوقانی، جایی که فرآیند عفونی نمی تواند رخ دهد، حفظ می شود. بنابراین تماس بسیار طولانی و نزدیک برای ابتلا به سیاه سرفه لازم است.

پایداری محیطی پایین است. باکتری سیاه سرفه با قرار گرفتن در معرض آن به سرعت می میرد پرتو های فرابنفشو حرارت دادن (در دمای 50 درجه در عرض 30 دقیقه می میرد)، به سرعت توسط محلول های ضد عفونی کننده فعال غیرفعال می شود. در خلط خشک شده روی وسایل خانه خیلی سریع می میرد، اما در خلط مرطوب می تواند تا چند روز زنده بماند. فصلی: پاییز-زمستان با اوج در نوامبر-دسامبر.

ایمنی پس از بیماری متشنج و پایدار است.عفونت مجدد در موارد نقص ایمنی امکان پذیر است، اما چنین مواردی نیاز به بررسی آزمایشگاهی دارد.

ارتباط بیماری

سیاه سرفه یک بیماری قابل پیشگیری با واکسن است. در پایان دهه 90. در قرن بیستم، افزایش تدریجی بروز سیاه سرفه آغاز شد و در حال حاضر میزان بروز آن به طور پیوسته در حال افزایش است. بنابراین، میزان بروز در فدراسیون روسیهدر سال 2015، 4.42 مورد به ازای هر 100000 نفر جمعیت، در سال 2014 - 3.23 در هر 100000، در سال 2012 - 3.15 در هر 100000 نفر بوده است. در سال 2014، 1 مورد مرگ ثبت شده است.

در ساختار بر حسب سن، سهم کودکان زیر یک سال در سال 2015 82 درصد، در سال 2014 - 54 درصد بوده است.

دلایل افزایش بروز سیاه سرفه:

همچنین لازم به ذکر است که ارقام واقعی برای تعداد بیماری ها ممکن است به طور قابل توجهی بیشتر از آمارهای آماری باشد، زیرا در حقیقت، تشخیص سیاه سرفه همیشه امکان پذیر نیست: این بیماری ممکن است یک سیر غیر معمول داشته باشد، علائم ممکن است شبیه به سرفه سیاه باشد. شهرهای کوچکهیچ یک روش های مدرنتشخیص

پاتوژنز سیاه سرفه

زمان از ورود سیاه سرفه به مجاری تنفسی تا اولین ظهور علائم (دوره کمون) بین 3 تا 14 روز است.

اپیتلیوم محل اتصال و تکثیر باکتری ها در دستگاه تنفسی است. این فرآیند در نای و حنجره کمتر، در نایژه ها و نایژه ها بارزتر است.

پاتوژن در خون ظاهر نمی شود. روند تولید مثل 2-3 هفته طول می کشد و با تولید فعال اگزوتوکسین ها - آدنیلات سیکلاز خارج سلولی و سم سیاه سرفه همراه است. سم سیاه سرفه تاثیر بسیار منفی بر سیستم تنفسی، قلبی، ایمنی و عصبی دارد. ظاهر برونش اسپاسم برجسته، انقباض عروق، که منجر به افزایش فشار خون، جزء سلولی ایمنی به طور قابل توجهی مهار می شود.

پس از پایان چرخه تولید مثل، بوردتلا از بین می رود و سلول ها را ترک می کند. تعداد زیادی ازعوامل بیماری زایی قبل از تشنج شروع می شود دوره کاتارال 10-13 روز طول می کشد (هرچه کوتاهتر باشد، پیش آگهی بدتر است). غشای مخاطی نکروز می شود، از بین می رود و ممکن است زخم ظاهر شود. پلاک های خلط چرکی تشکیل می شود که مجرای برونش ها و آلوئول ها را مسدود می کند که می تواند به فروپاشی آنها کمک کند.

قرار گرفتن مداوم دستگاه گیرنده دستگاه تنفسی با سموم باکتریایی منجر به افزایش تحریک پذیری عصب واگ می شود. تکانه های عصبی دائما وارد می شوند مدولا، در نتیجه کانون تحریک مرکز تنفسی - غالب ظاهر می شود.

در نتیجه، رفلکس سرفه به خودی خود ادامه می دهد و نیازی به مشارکت باکتری ندارد. سرفه اسپاستیک و تشنجی می شود که مشخصه سیاه سرفه است. ممکن است از هر عامل تحریک کننده ای ظاهر شود: درد، لمس و غیره. یک دوره سرفه تشنجی اسپاسمودیک شروع می شود که در افراد واکسینه شده 1-1.5 هفته و در افراد واکسینه نشده تا 6 هفته طول می کشد.

از آنجایی که بسیاری از مراکز مهم دیگر برای تنظیم فعالیت های زندگی در نزدیکی مرکز تنفسی قرار دارند، هیجان و سرایت به آنها باعث استفراغ، افزایش فشار خون و اسپاسم عضلات صورت و بدن می شود.

پس از سرفه تشنجی، دوره بهبودی به تدریج شروع می شود که بسته به وضعیت ایمنی و عوارض از 2 هفته تا 6 ماه طول می کشد.

سموم سیاه سرفه دارند تاثیر منفیروی فلور روده و تحرک روده که منجر به دیس بیوز و اسهال می شود. مشخص شده است که حالت نقص ایمنی ثانویه در سیاه سرفه ناشی از آپوپتوز است سلول های ایمنی. این امر بروز مکرر کلامیدیا، پنومونی مایکوپلاسما و برونشیت و ایجاد انسداد برونش را توضیح می دهد.

عامل ایجاد کننده سیاه سرفه از جنس Bordetella است.میکروبیولوژی چندین نوع پاتوژن را مورد مطالعه قرار می دهد که در طول توسعه خود ایمنی متقابل ایجاد نمی کنند. متخصصان یک پاتوژن از گونه Bordetella pertussis را شناسایی می کنند که می تواند باعث ایجاد سیاه سرفه در بدن شود؛ علاوه بر این، گونه Bordetella parapertussis شناسایی شده است که باعث سرفه سیاه می شود. محققان نوع سومی از این میکروارگانیسم ها (Bordetella bronchiseptica) را می شناسند که باعث ایجاد برونکوپنومونی در جوندگان می شود. این نوع میکروارگانیسم پاتولوژیک می تواند در آن آزاد شود محیط خارجیدر نتیجه سیاه سرفه

خواص مورفولوژیکی و بیوشیمیایی باکتری ها، مطالعات فرهنگی

Bordetella pertussis یک میله تخم مرغی است که متعلق به باکتری های گرم منفی است و انتهای آن گرد است. این میکروارگانیسم شامل نمی شود ساختار خارجیتشکیلاتی به شکل تاژک و هاگ که قادر به تشکیل کپسول هستند.

میکروارگانیسم منحصراً هوازی است. بهینه رژیم دمامحیط رشد یک میکروارگانیسم 37 درجه سانتیگراد است. رشد باکتری بسیار آهسته و فقط در محیط های غذایی اتفاق می افتد، در حالی که باکتری کلنی هایی را تشکیل می دهد که از بیرون شبیه یک قطره جیوه است. این باکتری با تبدیل R-S مشخص می شود. ارگانیسم باکتری قادر به تجزیه گلوکز و لاکتوز برای تشکیل اسید، بدون فرآیند سنتز گاز است.

Bordetella، به عنوان هوازی سخت، می تواند بر روی محیط های غذایی ویژه زیر کشت شود:

• آگار سیب زمینی با افزودن 20-25 درصد خون انسان;
• کازئین آگار

برای سرکوب رشد سایر نمایندگان میکروارگانیسم ها، افزودنی های پنی سیلین به یک محیط غذایی خاص اضافه می شود. میکروارگانیسم‌های سیاه سرفه و پاراپرتوسیس روی محیط گلیسیرین سیب‌زمینی با افزودن خون انسان در طول فرآیند رشد، کلنی‌های براق کوچکی را تشکیل می‌دهند که شکل آن‌ها نزدیک به یک قطره جیوه است و روی یک محیط کازئین زغالی، باکتری‌ها کرم مایل به خاکستری ایجاد می‌کنند. مستعمرات

هر دو نوع باکتری دارای خواص همولیتیک هستند. B. pertussis قادر به تفکیک است: ذرات باکتری تازه به‌دست‌آمده دارای شکل S هستند (فاز اول که دارای خواص مورفوبیولوژیکی مشخصی است). فاز دوم و سوم اشکال انتقالی هستند.

باکتری‌های فاز چهارم به‌عنوان R-form طبقه‌بندی می‌شوند؛ میکروارگانیسم‌هایی که در آخرین مرحله بیماری منتشر می‌شوند، دارای این مرحله هستند. تشخیص مثبت در طول تشخیص باکتریسیاه سرفه تنها زمانی تشخیص داده می شود که میکروارگانیسم در مرحله اول شناسایی شود.

ساختار آنتی ژنی، بیماری زایی، مقاومت و اپیدمیولوژی

ذرات باکتری ساختار آنتی ژنی پیچیده ای دارند؛ متخصصان در زمینه میکروبیولوژی چندین آنتی ژن رایج برای جنس و آنتی ژن های خاص مشخصه نوع خاصی از ذرات باکتری و آنتی ژن های معمولی را تشخیص می دهند. باکتری ها حاوی مواد فعال زیستی هستند که با خواص سمی مشخص می شوند. اصلی ترین این مواد عبارتند از:

• ماده درمونکروتیک حرارت پذیر؛
• ماده پایدار در برابر حرارت - اندوتوکسین؛
• هماگلوتینین؛
• عامل حساس کننده هیستامین؛
• آنتی ژن محافظ؛
• عامل تحریک کننده لنفوسیتوز

همچنین بخوانید: سرخجه در کودکان چگونه درمان می شود؟

علاوه بر این، میکروارگانیسم دارای یک آنتی ژن O است که مقاوم در برابر حرارت و مختص جنس است و 14 آنتی ژن K کپسولی قابل انتقال حرارت سطحی.

عوامل اصلی بیماری زایی عبارتند از:

• اندوتوکسین پایدار در برابر حرارت - سمی که می تواند شروع و پیشرفت تب را تحریک کند.
• یک سم پروتئینی که فعالیت ضد فاگوسیتیک دارد و به تحریک لنفوسیتوز کمک می کند.
• آنزیم های تهاجمی؛
• آنزیم هایی که به افزایش نفوذپذیری عروق کمک می کنند.
• عواملی با خواص حساسیت به هیستامین؛
• عواملی که باعث مرگ سلول های اپیتلیال می شوند.

هماگلوتینین و پروتئین های غشای خارجی ذره باکتری در فرآیند چسبندگی ذرات باکتری شرکت می کنند.

میکروارگانیسم نسبت به عوامل محیطی بسیار ناپایدار است.

این باکتری به سرعت تحت تأثیر مواد ضدعفونی کننده از بین می رود.

سیاه سرفه یک عفونت آنتروپونوز است. منبع عفونت افراد بیمار و ناقلان باکتری هستند.

عفونت انسان از طریق نفوذ میکروارگانیسم از طریق دستگاه تنفسی در طول انتقال از طریق هوا رخ می دهد.

سیاه سرفه یک بیماری فراگیر است و این بیماری مسری است. سرفه پاراویو کمتر شایع است و بسیار خفیف تر است.

پاتوژنز بیماری در بدن انسان

عامل سیاه سرفه یک میکروب غیر تهاجمی است، یعنی این باکتری ها به سلول های هدف نفوذ نمی کنند. نقطه ورود عفونت مجاری تنفسی است. در لایه اپیتلیال به دلیل وجود عوامل چسبنده، بوردتلا در سطح مژک های سلول های لایه اپیتلیال جذب می شود. اینجاست که میکروارگانیسم ها تکثیر می شوند و سموم ترشح می کنند. پس از آزاد شدن سموم و آنزیم های مهاجم، پیشرفت شروع می شود فرآیند التهابیو تورم غشای مخاطی.

با پیشرفت التهاب و ادم، برخی از سلول های اپیتلیال می میرند. در طول توسعه بیماری، تحریک مداوم گیرنده های عصبی به دلیل سموم آزاد شده رخ می دهد. دستگاه تنفسیو غشای مخاطی آن که باعث تحریک سرفه می شود. در ایجاد سرفه، اهمیت زیادی به خواص حساس کننده سموم آزاد شده در طول زندگی B. pertussis داده می شود.

نقش اصلی در توسعه پاتوژنز سیاه سرفه متعلق به مواد سمی است که باعث تحریک مداوم انتهای عصبی واقع در غشای مخاطی حنجره، نای و برونش می شود. این تحریک باعث تحریک سرفه در فردی که از سیاه سرفه رنج می برد. انتقال تکانه های تحریکی که تحت تأثیر سم سیاه سرفه ایجاد می شود به سیستم عصبی مرکزی انجام می شود که منجر به تشکیل واکنشی در قالب یک کانون احتقانی می شود که باعث سرفه در بیمار می شود. تحریک که تحت تأثیر سموم ایجاد می شود و باعث سرفه می شود، علامت اصلی این اختلال است.

در صورت آلوده شدن به سیاه سرفه، پاتوژن یک دوره نهفتگی 3-15 روزه را پشت سر می گذارد. دوره بیماری را می توان به سه دوره تقسیم کرد:

• دوره کاتارال؛
• دوره سرفه؛
• دوره حل و فصل

عامل ایجاد سیاه سرفه کوکو باکتری های کوچکی هستند که به صورت منفرد یا جفت قرار دارند. آنها بی حرکت هستند، هاگ تشکیل نمی دهند، کپسول دارند و می نوشند. گرم منفی Chemoorganotrophs، فقط متابولیسم اکسیداتیو، هوازی سخت. عامل ایجاد کننده سیاه سرفه در محیط های غذایی ساده رشد نمی کند. برخی از اسیدهای آمینه به عنوان فاکتورهای رشد مورد نیاز هستند. رشد در محیط های غذایی ساده توسط مواد حاصله مهار می شود اسیدهای چرب. برای خنثی کردن آنها از خون استفاده می شود. زغال چوبییا رزین های تبادل یونی پاتوژن بر روی آگار سیب زمینی گلیسیرین با افزودن خون (محیط Bordet-Gengou)، بر روی آگار خون و آگار کازئین- زغال چوب نیمه مصنوعی بدون افزودن خون کشت می شود. کلنی های باکتری سیاه سرفه کوچک، گرد، با لبه های صاف، براق و شبیه قطرات جیوه یا دانه های مروارید هستند. کشت های تازه جدا شده مستعمرات شکل S را تشکیل می دهند (فاز 1)؛ با کشت بیشتر می توانند فرم های R را تشکیل دهند (فاز 2). ناحیه ای از همولیز بر روی محیط های خونی تشکیل می شود. B. pertussis از نظر آنزیمی غیر فعال است، قندها را تجزیه نمی کند، فعالیت پروتئولیتیک ندارد و نیترات ها را کاهش نمی دهد.

آنتی ژن ها

ساختار آنتی ژنی باکتری های جنس Bordetella بسیار پیچیده است. آنها 14 جزء آنتی ژنی یا آگلوتینوژن را شناسایی کرده اند. آگلوتینوژن عمومی 7 است. آگلوتینوژن خاص گونه برای عامل ایجاد کننده سیاه سرفه آگلوتینوژن 1، برای B. parapertussis - 14، برای B. bronchiseptica - 12 است. که رایج ترین آنها 2 و 3 است. از نظر محتوایی این آگلوتینوژن ها با 4 سرووار متمایز می شوند.

بیماری زایی و بیماری زایی

عوامل بیماریزا شامل توانایی پاتوژن برای چسبیدن به دلیل پیلی روی سلولهای اپیتلیال است دستگاه تنفسی. هماگلوتینین رشته ای مرتبط با پیلی است که B. pertussis را با باکتری های دیگر می چسباند تا بیوفیلم هایی متشکل از میکروب های مختلف را تشکیل دهند. سموم پروتئینی را تشکیل می دهد که محکم به سیتوپلاسم متصل می شوند: سم تراشه (مسدود کننده عملکردی) که باعث تحریک گیرنده های عصبی غشای مخاطی دستگاه تنفسی می شود که منجر به حملات سرفه می شود. توکسینمی به دلیل تأثیر آن بر مراکز تنفسی و عروقی منجر به اسپاسم عروقی برونش های کوچک، انقباضات تشنجی می شود. علاوه بر این، این سم سیستم آدنیلات سیکلاز و تجمع cAMP را فعال می کند که منجر به اختلال در متابولیسم آب نمک می شود؛ درمونکروتوکسین که به دلیل فعالیت ATPase روی سلول های میوکارد اثر می گذارد. اثرات حساس کننده هیستامین و تحریک لکوسیتوز این سموم ذکر شده است. توانایی B. pertussis برای نفوذ به سلول های اپیتلیال، جایی که آنها باقی می مانند. مدت زمان طولانیو همچنین فاگوسیتوز ناقص در نتیجه بقای آنها در ماکروفاژها. پلی ساکارید کپسولی از باکتری ها در برابر فاگوسیتوز محافظت می کند. تمام ژن هایی که بیماری زایی را کنترل می کنند در یک اپرون قرار دارند. اثر سمیپاتوژن منجر به تحریک گیرنده های عصبی غشای مخاطی دستگاه تنفسی، سرفه و تحریک مرکز تنفسی و در نتیجه اسپاسم برونش های کوچک می شود.

مصونیت

با سیاه سرفه، یک پاسخ ایمنی هومورال رخ می دهد که با تشکیل ایمنی هومورال شدید همراه است. هیچ بیماری عود کننده ای مشاهده نشد.

اکولوژی و اپیدمیولوژی

Bordetella pertussis و parapertussis ساکنان آن هستند بخش های بالاییدستگاه تنفسی B. bronchiseptica در دستگاه تنفسی سگ ها و سایر حیوانات زندگی می کند. منبع عفونت کودکان بیمار و ناقلان باکتری هستند. بوردتلا به سرعت در هوا می میرد. عفونت از طریق قطرات معلق در هوا از طریق تماس مستقیم با کودک بیمار یا ناقل رخ می دهد.

سیاه سرفه و سرفه پارگی

سیاه سرفه(سیاه سرفه) - حاد، عمدتا برای کودکان بیماری عفونیکه توسط Bordetella pertussis ایجاد می شود، با مکانیسم انتقال هوا، التهاب کاتارال مجاری تنفسی و حملات سرفه اسپاسمودیک همراه با تلافی مشخص می شود. Bordetella parapertussis و Bordetella bronchiseptica باعث سیاه سرفه مشابه، اما با دوره خفیف تر بیماری می شوند. هر سه گونه بوردتلا شبیه به یکدیگر و متعلق به یک جنس هستند. اینها میله های تخم مرغی گرم منفی کوچکی هستند که اغلب به صورت دوقطبی رنگ آمیزی می شوند. پاتوژن ها با مخاط و خلط عمدتاً در دوره های کاتارال و کمتر در دوره های اسپاسمودیک ترشح می شوند. به دلیل وجود اشکال پاک شده و غیر معمول، شباهت علائم برای تشخیص آنها بسیار مهم است. روش های آزمایشگاهیپژوهش. تجزیه و تحلیل میکروبیولوژیکی به طور همزمان برای جداسازی هر سه پاتوژن انجام می شود.

گرفتن مواد آزمون

مخاط از دیواره پشتی حلق با یک سواب پنبه خلفی حلقی استریل، ترجیحاً در هنگام حمله سرفه، با استفاده اجباری از کاردک گرفته می شود. هنگام استفاده از سواب‌های نازک (مثلاً نیکروم) Drotintsy، می‌توانید مواد را از راه‌های پایین بینی نیز عبور دهید. برای کاشت فوری، از یک سواب خشک استفاده کنید. اگر این امکان پذیر نباشد، تامپون از قبل با محلول آلژینات کلسیم یا محلول ایزوتونیک کلرید سدیم مرطوب می شود، زیرا پشم پنبه از رشد بوردتلا پرتوسیس جلوگیری می کند. مواد گرفته شده باید در مدت 4-2 ساعت به آزمایشگاه تحویل داده شود و از هیپوترمی محافظت شود و حتی بهتر است با استفاده از نوارهای سرفه از بیمار استفاده شود. برای این کار در هنگام سرفه یک ظرف پتری را با یک ماده مغذی باز کرده و به فاصله 8-4 سانتی متر جلوی دهان و بینی بیمار برای 8-6 شوک سرفه نگه دارید.برای تحقیق می توانید خلط ( مخاط) با مکیدن آن با سرنگ با لوله لاستیکی از نواحی سوپراگلوت. روش های اساسی تشخیص آزمایشگاهیسیاه سرفه باکتریولوژیک و سرولوژیکی است. برای تشخیص سریع، به ویژه در دوره اولیهبیماری ها، از واکنش ایمونوفلورسانس استفاده کنید. برای انجام این کار، اسمیر از مواد مورد آزمایش با سرم های فلورسنت ویژه درمان می شود و زیر میکروسکوپ فلورسنت بررسی می شود. 50 میدان دید را در نظر بگیرید. نتیجه مثبت در نظر گرفته می شود که 2-3 سلول باکتریایی درخشان در میدان دید تشخیص داده شود.

تحقیقات باکتریولوژیک

برای جداسازی پاتوژن، از محیط‌های سنتی زیر استفاده می‌شود: آگار گلیسیرین سیب‌زمینی با خون خرگوش (Bordet-Gangou)، آگار کربن انتخابی تجاری (SCA) یا آگار خون شیر. برای سرکوب رشد میکرو فلور گرم مثبت دستگاه تنفسی، توصیه می شود پنی سیلین را به محیط اضافه کنید. هنگام کاشت به روش "صفحه سرفه"، آنتی بیوتیک را در حجم 0.5 میلی لیتر (10 واحد) روی سطح آگار قرار داده و به طور یکنواخت با کاردک مالیده می شود. هنگام کاشت با سواب ابتدا یک سکته مغزی به صورت یک مسیر مرکزی ایجاد کنید و سپس یک حلقه از آن به صورت عمود ایجاد کنید. برای افزایش دفعات جداسازی پاتوژن، کشت به طور همزمان روی 2 فنجان (یکی بدون پنی سیلین) انجام می شود. کشت در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت سه تا پنج روز انجام می شود، کلنی های روی محیط زیر میکروسکوپ استریوسکوپی یا با استفاده از ذره بین بررسی می شوند. آنها کوچک، محدب، براق، به رنگ خاکستری، شبیه قطرات جیوه یا مادر مروارید هستند. در محیط Bordet-Gengou، ناحیه کوچکی از همولیز در اطراف مستعمرات ظاهر می شود. کلنی های Bordetella parapertussis تا حدودی بزرگ و قهوه ای رنگ هستند. آیا اسمیر از کلنی های معمولی تهیه می شود؟ رنگ آمیزی گرم و میکروسکوپی بررسی شد. در همان زمان، واکنش آگلوتیناسیون روی شیشه با سرم سیاه سرفه و پاراپرتوسیس با رقت 1:10 انجام می شود. اگر نتیجه مثبت باشد، کشت خالص بوردتلا جدا شده و با توجه به تعدادی ویژگی مشخص می شود.بوردتلا کربوهیدرات ها را تخمیر نمی کند، ایندول را تشکیل نمی دهد و نیترات ها فقط توسط Bordetella bronchiseptica کاهش می یابد. از اهمیت اولیه در شناسایی ویژگی‌های واکنش‌های رشد و آگلوتیناسیون با گونه‌های غیرجذب و در صورت امکان با سرم‌های تک گیرنده جذب‌شده به آنتی‌ژن‌های 1، 12، 14 است. به منظور شناسایی کشت‌های جدا شده (حتی در مرحله تشکیل کلنی) می توان از واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم با آنتی بادی گلبول قرمز استفاده کرد.

مطالعه سرولوژیکی

آزمایش سرولوژی عمدتاً برای تشخیص گذشته نگر یا در مواردی که کشت Bordetella جدا نشده است انجام می شود. آنتی بادی های پاتوژن ها در هفته سوم بیماری و بعد از آن تشکیل می شوند. برای شناسایی آنها از آگلوتیناسیون، تثبیت کمپلمان و به ویژه واکنش های هماگلوتیناسیون غیرمستقیم استفاده می شود. در رابطه با واکسیناسیون انبوه کودکان علیه سیاه سرفه، کلیه آزمایشات سرولوژیک باید با روش سرم های جفتی انجام شود. تشخیص تنها با افزایش 4 برابری تیتر آنتی بادی در طول زمان تأیید می شود. در کودکان دو سال اول زندگی، واکنش های سرولوژیکی اغلب منفی است.

تست های آلرژی

آزمایش های آلرژی با تزریق داخل جلدی 0.1 میلی لیتر آگلوتینوژن (10 واحد) بیشتر در طول بررسی های اپیدمیولوژیک انبوه انجام می شود.

پیشگیری و درمان

برای پیشگیری از واکسن، از واکسن DTP (سیاه سرفه-دیفتری-کزاز جذب شده) حاوی باکتری سیاه سرفه در فاز 1 (شکل S) استفاده می شود. برای درمان، ایمونوگلوبولین ضد سیاه سرفه و آنتی بیوتیک ها استفاده می شود: تتراسایکلین ها، ماکرولیدها (اریترومایسین).

- بوردتلا سیاه سرفه- در سال 1906 توسط Bordet و Zhangu از خلط یک کودک مبتلا به سیاه سرفه جدا شد. در سال 1937، میکروبی از یک بیمار مبتلا به سیاه سرفه توصیف شد، شبیه به باکتری سیاه سرفه (سیاه سرفه) که به آن باکتری پاراپرتوسیس (پاراپرتوسیس) می گویند، اما نه یکسان. مرفولوژی:یک میله تخم مرغی گرم منفی کوتاه به ابعاد 0.2 در 0.4-1.2 میکرون. هنگام رنگ آمیزی با تولویدین بلو، گرانول های متاکروماتیک دوقطبی تشخیص داده می شوند. یک کپسول نیز در چوب سیاه سرفه یافت می شود.

بیولوژی میله، خواص فرهنگی:

طبق گفته لزلی و گاردنر، کشت های تازه جدا شده میکروب سیاه سرفه، به شکل S یا فاز 1، تنها بر روی یک محیط غذایی متشکل از سیب زمینی-گلیسیرین آگار با افزودن خون رشد می کنند (محیط Bardet-Gengou).

کلنی های باسیل سیاه سرفه

صاف، براق، شفاف، گنبدی شکل با رنگ مرواریدی یا جیوه ای به قطر حدود 1 میلی متر. ستون های باکتری پاراپرتوسیس ظاهربسیار شبیه باکتری های سیاه سرفه هستند، اما اندازه آنها بزرگتر است و زودتر از کلنی های سیاه سرفه ظاهر می شوند.

باکتری سیاه سرفه و همچنین باکتری های آتیپیک و پاراپرتوسیس در محیط های غذایی معمولی رشد می کنند. روی یک محیط نیمه مصنوعی - کازئین- زغال آگار (CCA) - کلنی های میکروب سیاه سرفه کوچک (0.5-1 میلی متر)، محدب، به وضوح خطوط، براق، صاف، کرم مایل به خاکستری به رنگ و قوام چسبناک هستند.

کلنی های میکروب سیاه سرفه و parapertussis در محیط Bordet-Gengou توسط یک منطقه مشخصه همولیز احاطه شده اند (منطقه به شدت محدود نشده است و به طور پراکنده در محیط پخش می شود). میکروب های سیاه سرفه قند را کاهش نمی دهند، ایندول را تشکیل نمی دهند، نیترات ها را کاهش نمی دهند و از سیترات ها استفاده نمی کنند. میکروب سیاه سرفه یک هوازی اختیاری است. شرایط بهینه کشت 35-36 درجه سانتی گراد است.

ویژگی های دیفرانسیل

باکتری سیاه سرفه و باکتری parapertussis به عنوان داده های حاصل از مطالعات سرولوژیکی (واکنش آگلوتیناسیون و ویژگی های بیوشیمیایی) خدمت می کنند. پایه ای امکانات، امکان تمایز فرهنگ سیاه سرفه و پاراپرتوسیس را فراهم می کند: پاراپرتوسیس در اولین زیر کشت ها روی آگار ساده (بدون خون)، روی آگار کازئین زغال سنگ و آگار گوشت-پپتون (به ویژه با افزودن تیروزین) و همچنین روی یک تکه سیب زمینی رشد می کند. با تشکیل یک رنگدانه قهوه ای، اوره را تجزیه کرده و از سیترات ها استفاده می کند.

میکروب سیاه سرفه در آگار ساده رشد نمی کند، رنگدانه تشکیل نمی دهد و اوره را تجزیه نمی کند. علاوه بر این، سرم آنتی بادی پاتوژن های سیاه سرفه و پاراپرتوسیس را تا حدودی تیتر Vio آگلوتینه می کند. آنها همچنین اوره آز را آزمایش می کنند - اوره و فنل فتالئین با کشت آزمایش به لوله آزمایش اضافه می شود، لوله آزمایش تکان داده می شود و در ترموستات قرار می گیرد. واکنش (تغییر رنگ) ممکن است در عرض 15-20 دقیقه رخ دهد. نتیجه نهایی پس از 2 ساعت در نظر گرفته می شود.یک واکنش مثبت - مایع زرشکی می شود - مشخصه کشت باکتری پاراپرتوسیس است.

مقاومت در برابر عوامل فیزیکی و شیمیایی.

ساختار آنتی ژنیک

میکروب سیاه سرفه از نظر خواص آنتی ژنیک از یک نوع است، اما در پیچیدگی ساختار آنتی ژنی آن متفاوت است - تا 12 جزء آنتی ژنی را می توان در آن شناسایی کرد. میکروب سیاه سرفه آنتی ژن های خاص خود را دارد و با پاراپرتوسیس مشترک است. آنتی ژن های مشترک هم در هر دو گونه (آنتی ژن O) و هم در هر یک از آنها به طور جداگانه وجود دارد. فراکسیون هایی با خواص ایمنی از میکروب های سیاه سرفه جدا شدند: آگلوتینوژن، هماگلوتینین و آنتی ژن محافظ.

بیماری زایی، حدت، تشکیل سم.که درفقط انسانها در شرایط طبیعی مستعد سیاه سرفه هستند. الگوی بیماری نزدیکترین علائم به سیاه سرفه به طور تجربی در میمون ها بازتولید شد. جنین مرغ، موش صحرایی و خوک گینهدر صورت معرفی، فرهنگ ها در اثر مسمومیت می میرند. تزریق داخل جلدی کشت میکروب سیاه سرفه به حیوانات آزمایشگاهی باعث ایجاد نکروز در نتیجه آزاد شدن اجزای سمی آن در هنگام تخریب سلول های میکروبی می شود.

عوامل ایجاد کننده این بیماری ها متعلق به جنس Bordetella است.

1. Bordetella pertussis - عامل ایجاد کننده سیاه سرفه که توسط Bordet و Zhangu در سال 1906 توصیف شد.

2. Bordetella parapertussis - عامل ایجاد کننده پاراپرتوسیس که توسط Eldering و Kondrick در سال 1937 توصیف شد.

3. Bordetella bronchiseptica - باعث بیماری در حیوانات می شود. در انسان، این باکتری ها باعث برونکوپنومونی همراه با سیاه سرفه می شوند. این بیماری برای اولین بار توسط براون در سال 1926 در انسان توصیف شد (نادر).

مرفولوژی. باکتری های سیاه سرفه میله های کوچک تخم مرغی به ابعاد 0.3-0.5 × 1-1.5 میکرون هستند. عامل ایجاد کننده سرفه پاراسیاه تا حدودی بزرگتر است. هر دو میکروب هاگ ندارند و بی حرکت هستند. با رنگ آمیزی خاص، کپسول قابل مشاهده است. گرم منفی آنها در قطب ها با شدت بیشتری رنگ می شوند.

اولترابرش ها پوسته کپسول مانند، دانه های پول و واکوئل را در هسته نشان می دهند.

کشت. عوامل ایجاد کننده سیاه سرفه و سرفه پارائوبی هوازی هستند. آنها در مورد مواد مغذی سختگیر هستند. برای کشت آنها از محیط Bordet-Giangu (گلیسیرین-آگار خون سیب زمینی) استفاده می شود. در حال حاضر، آنها از محیط CCA (کازئین- زغال آگار) استفاده می کنند - این یک محیط نیمه مصنوعی بدون خون است. منبع اسیدهای آمینه در اینجا کازئین هیدرولیزات است. محیط AMC با محیط Bordet-Giangu در یک روش ساخت ساده تر و در دسترس تر متفاوت است.

برای مهار رشد فلور خارجی، پنی سیلین با 0.25 - 0.5 IU در هر 1 میلی لیتر محیط یا متی سیلین - 2.5-4 میکروگرم در هر 1 میلی لیتر به محیط اضافه می شود. پنی سیلین را می توان روی سطح رسانه در ظروف اعمال کرد.

محیط های تلقیح شده در یک ترموستات در دمای 35-36 درجه سانتیگراد، pH 6.8-7.4 انکوبه می شوند. محصولات باید از خشک شدن محافظت شوند؛ برای انجام این کار، یک ظرف حاوی آب را در ترموستات قرار دهید.

کلنی های B. pertussis بعد از 48-72 ساعت و B. parapertussis - بعد از 24-48 ساعت ظاهر می شوند.

در محیط KUA، کلنی های B. pertussis کوچک، 1-2 میلی متر قطر هستند، B. parapertussis تا حدودی بزرگتر هستند. کلنی های هر دو میکروب براق و به رنگ کرم مایل به خاکستری هستند (در آگار کازئین زغال سنگ شبیه قطرات جیوه هستند). هنگامی که کلنی ها برداشته می شوند، یک بقایای چسبناک و خامه ای باقی می ماند. هنگام بررسی مستعمرات زیر میکروسکوپ استریوسکوپی، مخروطی از نور قابل مشاهده است (کلنی ها سایه می اندازند). هنگامی که موقعیت منبع نور (لامپ) تغییر می کند، سایه نیز موقعیت خود را تغییر می دهد وجود مخروط نور (دم) ارزش تشخیصی دارد.

B.parapertussis آنزیم تیروزیناز تولید می کند، بنابراین در محیط های حاوی تیروزین، آن را شکافته و محیط را رنگی می کند. رنگ قهوه ای. تغییر رنگ محیط یک علامت تشخیصی افتراقی است.

در یک محیط مایع، باکتری سیاه سرفه و پاراپرتوسیس کدورت یکنواخت و رسوب کف را تشکیل می دهند. در آگار خون آنها یک منطقه همولیز ایجاد می کنند.

محصولات تازه جدا شده اغلب شکل S صاف دارند (فاز I). زمانی که تحت شرایط نامساعد یا در موادی که در داخل آن کشت می شود تاریخ های دیرهنگامبیماری ها، اشکال جدا شده ممکن است ظاهر شوند (فاز II-IV).

خواص آنزیمی. پاتوژن های سیاه سرفه کربوهیدرات ها را تجزیه نمی کنند و پروتئین ها را تخمیر نمی کنند. باکتری پاراپرتوسیس آنزیم های اوره آز و تیروزیناز را تولید می کند.

باکتری سیاه سرفه و پاراپرتوسیس آنزیم های بیماری زایی تولید می کنند: هیالورونیداز، پلاسماکوآگولاز و لسیتیناز.

تشکیل سم. در آزمایشات حیوانی، چهار نوع سم پروتئینی در باسیل سیاه سرفه شناسایی شد: 1) سم درمونکروز حساس به حرارت. 2) اندوتوکسین گرما پایدار. 3) عامل محرک لکوسیتوز (تحریک کننده لکوسیتوز). تجویز تزریقی آن باعث مرگ حیوانات آزمایشگاهی شد. 4) فاکتور حساس کننده به هیستامین - هنگامی که روی موش تجویز می شود، حساسیت آنها به هیستامین افزایش می یابد.

دو نوع اول سم نیز مشخصه عامل ایجاد کننده سرفه پارگی است.

ساختار آنتی ژنیک. باکتری های جنس Bordetella دارای ساختار آنتیرنیک پیچیده ای هستند. مهمترین آنتی ژن برای تشخیص آزمایشگاهی آگلوتینوژن ها هستند. آگلوتینوژن عمومی 7 است. آگلوتینوژن خاص گونه برای Bordetella pertussis 1، برای Bordetella parapertussis - 14، برای Bordetella bronchoseptica - 12 است.

از سرم های تک اختصاصی 1، 14، 12 برای تمایز گونه ها استفاده می شود (سرم ها توسط موسسه اپیدمیولوژی و میکروبیولوژی N. F. Gamaleya تولید می شوند).

نمایندگان Bordetella علاوه بر آنتی ژن های خاص گونه، آگلوتینوژن های دیگری نیز دارند که ترکیبات مختلف آنها سرووار را تعیین می کند (جدول 48).

بر اساس ترکیب سه آگلوتینوژن اصلی 1،2،3، تعیین شده در یک واکنش آگلوتیناسیون با سرم های تک اختصاصی، B. pertussis به سه سرووار متمایز می شود: 1،2،3. 1,2,0; 1,0,3.

مقاومت در برابر عوامل محیط . عوامل ایجاد کننده سیاه سرفه و پارگی سرفه مقاومت کمی دارند. در دمای 56 درجه سانتیگراد در 20-30 دقیقه می میرند. دمای پاییننیز تأثیر مخربی بر آنها دارد. نور مستقیم خورشید آنها را در 1-2 ساعت می کشد. اشعه ماوراء بنفش - پس از چند دقیقه. در خلط خشک این باکتری ها برای چند ساعت باقی می مانند. محلول های معمولی ضدعفونی کننده ها به سرعت آنها را از بین می برند.

هر دو نوع میکروب نسبت به آنتی بیوتیک ها حساسیت کمی دارند و به پنی سیلین حساس نیستند.

حساسیت حیوانات. که در شرایط طبیعیحیوانات در برابر عوامل بیماری زا از این نوع حساس نیستند. در شرایط آزمایشی امکان تکثیر سیاه سرفه در میمون ها و سگ های جوان وجود دارد و باعث مرگ موش ها می شود.

منابع عفونت. یک مرد بیمار بیماران در دوره کاتارال به خصوص مسری هستند.

مسیرهای انتقال. مسیر هوابرد. نقش اجسام مختلف به دلیل ناپایداری باکتری سیاه سرفه در محیط خارجی بعید است.

پاتوژنز. عوامل ایجاد کننده سیاه سرفه و سرفه پارافین می باشد بیماری حادهمراه با سرفه تشنجی هنگامی که بر روی غشای مخاطی دستگاه تنفسی فوقانی قرار می گیرند، باکتری ها در آنجا تکثیر می شوند و تا حدی از بین می روند. سم آزاد شده روی سیستم عصبی مرکزی عمل می کند، گیرنده های عصبی غشای مخاطی دستگاه تنفسی فوقانی را تحریک می کند، که رفلکس سرفه را فعال می کند. در نتیجه، حملات سرفه تشنجی رخ می دهد. در طول روند بیماری، چندین دوره مشاهده می شود: کاتارال، سرفه اسپاسمودیک و رفع روند.

مصونیت. پس از یک بیماری، ایمنی پایدار ایجاد می شود که توسط عوامل هومورال و سلولی تعیین می شود.

جلوگیری. شناسایی و جداسازی بیماران. به کودکان ضعیفی که با فرد مبتلا به سیاه سرفه در تماس بوده اند، ایمونوگلوبولین داده می شود. اقدامات اصلی پیشگیری ویژه ایمن سازی کودکان با DTP (واکسن سیاه سرفه-دیفتری-کزاز) است. این واکسن سه بار در سن 6 ماهگی تزریق می شود و پس از آن واکسیناسیون مجدد انجام می شود.

رفتار. در مراحل اولیه بیماری از ایمونوگلوبولین ضد سیاه سرفه استفاده می شود. برای درمان از اریترومایسین و آمپی سیلین استفاده می شود.

کنترل سوالات

1. خواص مورفولوژیکی عامل ایجاد کننده سیاه سرفه و پاراپرتوسیس را شرح دهید.

2. روی چه محیطی و الگوی رشد میکروب سیاه سرفه و پاراپرتوسیس چگونه است؟

3. پایداری پاتوژن های سیاه سرفه و پاراپرتوسیس در محیط خارجی.

4. ویژگی های دیفرانسیلعوامل بیماری زا سیاه سرفه و سرفه سیاه

5. منابع عفونت، راه های انتقال، پاتوژنز سیاه سرفه.

بررسی میکروبیولوژیکی

هدف از این مطالعه: شناسایی عامل بیماری زا و افتراق عوامل بیماری زا سیاه سرفه از سرفه سیاه سرفه.

مواد برای تحقیق

ترشح از غشای مخاطی نازوفارنکس.

روش تحقیق اصلی

میکروبیولوژیک

پیشرفت مطالعه

روز دوم - سوم مطالعه

کشت ها از ترموستات خارج می شوند و با استفاده از ذره بین یا میکروسکوپ دوچشمی استریوسکوپی مشاهده می شوند. اگر کلنی های مشکوک وجود داشته باشد، آنها در AMC جدا می شوند: در ظروف پتری، تقسیم به بخش، یا در لوله های آزمایش. محصولات در یک ترموستات قرار می گیرند. اگر تعداد زیادی کلنی وجود دارد، می توانید از برخی از آنها اسمیر تهیه کنید، آنها را رنگ کنید و زیر میکروسکوپ نگاه کنید. اگر میله های گرم منفی کوچک وجود داشته باشد، واکنش آگلوتیناسیون آزمایشی با سرم ژنریک 7 تک اختصاصی انجام می شود. واکنش آگلوتیناسیون مثبت نشان می دهد که کشت جدا شده متعلق به جنس Bordetella است. برای تعیین نوع بوردتلا، واکنش آگلوتیناسیون با گونه های تک گونه سرم 1 و 14 انجام می شود. واکنش ها بر روی یک لام شیشه ای انجام می شود. نتیجه مثبتواکنش آگلوتیناسیون به ما اجازه می دهد تا یک پاسخ اولیه بدهیم.

روز چهارم تحقیق

محصولات از ترموستات خارج شده و مورد بررسی قرار می گیرند: ابتدا با چشم غیر مسلح، با توجه به رنگ محیط (در صورت وجود رنگ قهوه ای)، سپس رشد با استفاده از میکروسکوپ استریوسکوپی بررسی می شود.

در صورت وجود کلنی های مشکوک، از کشت جدا شده اسمیر تهیه می شود، با گرم رنگ آمیزی شده و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. سپس دوباره (از کشت خالص)، واکنش آگلوتیناسیون روی شیشه با سرم های 1، 2، 3 و 14 تک اختصاصی انجام می شود. نتایج آگلوتیناسیون این امکان را فراهم می کند که B. pertussis از B. parapertussis و در صورت B. سیاه سرفه، سپس سرووار را تعیین کنید: 1- سرووار 1 - (1،2،3)، سرووار دوم - (1،2،0)، سرووار 3 - (1،0،3). تعیین سرووار اهمیت اپیدمیولوژیکی دارد.

برای شناسایی نهایی کشت جدا شده (با آگلوتیناسیون مثبت با سرم های تک اختصاصی)، آزمایشی برای وجود اوره آز انجام می شود و بر روی یک آگار کج حاوی 0.1٪ تیروزین تلقیح می شود (شکل 49 را ببینید).

تست اوره آز. 0.3-0.4 میلی لیتر از محلول اوره 2٪ در یک لوله آزمایش کوچک ریخته می شود، یک حلقه کشت اضافه می شود و 2-3 قطره فنل فتالئین اضافه می شود. لوله آزمایش تکان داده می شود و در ترموستات قرار می گیرد. واکنش بعد از 2 و 24 ساعت در نظر گرفته می شود.باکتری سیاه سرفه رنگ محیط را تغییر نمی دهد. باکتری Parapertussis دارای آنزیم اوره آز است که اوره را تجزیه می کند و آمونیاک ایجاد می کند. آمونیاک نشانگر را تغییر می دهد و محیط قرمز می شود.

با تیروزین تست کنید. کشت جدا شده بر روی MPA مایل در لوله های آزمایش با تیروزین 0.1٪ تلقیح شده و در ترموستات قرار می گیرد. روز بعد، لوله آزمایش را از ترموستات خارج کرده و آن را بررسی کنید. وجود رشد در لوله آزمایش و رنگ قهوه ای محیط نشان دهنده رشد پاتوژن های پاراپرتوسیس است. پاتوژن های سیاه سرفه در این محیط رشد نمی کنند.

روز پنجم تحقیق

در صورت عدم وجود کلنی مشکوک پاسخ منفی داده می شود.

تشخیص سریع

با روش تحقیق باکتریولوژیک در عرض 3-4 روز می توان جواب گرفت.

1. استفاده از روش ایمونولومینسانس این امکان را فراهم می کند که چندین ساعت پس از مصرف مواد با شناسایی مستقیم میکروب ها در اسمیرهای ساخته شده از سواب، پاسخ داده شود.

2. اگر رشد قابل مشاهده ای وجود نداشته باشد، می توان از تلقیحات روی محیط KUA اثر اسمیر ایجاد کرد: برای انجام این کار، محل تلقیح را با یک درپوش لاستیکی استریل لمس کنید و اثر را به یک لام شیشه ای منتقل کنید. اسمیر اثر انگشت توسط ایمونوفلورسانس بررسی می شود. باکتری B. pertussis یا B. parapertussis در اسمیر یافت می شود.

کنترل سوالات

1. در صورت مشکوک شدن به سیاه سرفه، چه موادی برای تحقیق وجود دارد؟

2. در مواقعی که مشکوک به سیاه سرفه است، از چه روش های جمع آوری مواد برای شناسایی عامل بیماری زا استفاده می شود؟

3. برای سرکوب رشد میکرو فلور خارجی چه چیزی به محیط اضافه می شود؟

1. 10 فنجان محیط KUA، یک بطری پنی سیلین حاوی 300000 واحد مصرف کنید. پنی سیلین را رقیق کنید تا 0.1 میلی لیتر حاوی 7.5 واحد باشد. مقدار کل متوسط ​​را محاسبه کنید.

2. ترشحات نازوفارنکس را از یکدیگر جمع آوری کرده و روی محیط KUA کشت دهید.

3. یک فنجان با کشت باکتری سیاه سرفه یا پاراپرتوسیس از معلم بگیرید و با استفاده از میکروسکوپ استریوسکوپی ماهیت کلونی ها را مطالعه کنید. کاشت کلنی های مشکوک در بخش محیط AMC (جداسازی کشت خالص).

4. از معلم یک کشت خالص از پاتوژن های سیاه سرفه یا پاراپرتوسیس که در بخش AMC محیط رشد کرده اند، بگیرید و با سرم تشخیص سیاه سرفه یک واکنش آگلوتیناسیون انجام دهید.

در حضور واکنش مثبتآگلوتیناسیون، آزمایش اوره آز و کشت روی محیط با تیروزین (0.1%).

رسانه فرهنگ

AMC. چهارشنبه توسط موسسه اپیدمیولوژی و میکروبیولوژی به نام تهیه شده است. N. F. Gamaleya. محیط نهایی AMC سیاه است؛ آب میعان نباید حاوی ذرات زغال سنگ باشد. پس از آماده شدن، محیط را می توان برای مدت طولانی (تا یک ماه یا بیشتر) نگهداری کرد و از خشک شدن آن محافظت کرد.