ConferenzaN19. Spirochete (treponema, borrelia, leptospira).
Le spirochete sono batteri sottili, avvolti a spirale da poche a diverse centinaia di micrometri di lunghezza, mobili, gram-negativi, chemioorganotrofi. Esistono tre tipi principali di movimenti: rotazione rapida attorno all'asse longitudinale, flessione, cavatappi (elicoidale). I rappresentanti dei generi Treponema, Borrelia, Leptospira e Spirillum sono di importanza medica.
Genere Treponema .
Il genere è rappresentato da batteri a forma di spirale strettamente attorcigliati lunghi 5-20 µm. La specie patogena per l'uomo più nota è T. pallidum (treponema pallido), la sottospecie T. pallidum pallidum è l'agente eziologico sifilide.
I treponemi patogeni sono differenziati per patogenicità per vari tipi animali da laboratorio, la capacità di fermentare il mannitolo, utilizzare il lattato e formare metaboliti specifici.
"Lues Venerae" - "piaga dell'amore" - uno dei nomi della sifilide (lues).
Morfologia.
L'agente eziologico della sifilide ha una forma a spirale con riccioli della stessa altezza (più di 10). La natura della mobilità è costituita da movimenti elicoidali e di flessione fluidi (treponema - dal latino - un filo di flessione). Secondo Romanovsky - Giemsa è dipinta in un colore rosa pallido (pallidum - dal lat. - pallido). Facilmente identificabile mediante microscopia in campo oscuro e dopo impregnazione d'argento.
Il treponema pallido è estremamente esigente per le condizioni di coltivazione e non è in grado di crescere a lungo sui terreni nutritivi. Ha un tasso di riproduzione molto lento. In condizioni di laboratorio può essere coltivato sui conigli, infettandoli per via intratesticolare (orchite con accumulo di treponema). Le proprietà biochimiche sono scarsamente studiate a causa di problemi di coltivazione e non sono praticamente utilizzate per caratterizzare T.pallidum.
caratteristiche antigeniche.
I treponemi hanno antigeni cross-reattivi con altre spirochete (borrelia, leptospira). A causa della presenza di fosfolipidi (cardiolipina, ecc.) Nelle pareti cellulari dei treponemi pallidi, simili alle cellule dei mammiferi, in risposta a questi antigeni, il corpo produce non solo specifico per l'agente eziologico della sifilide, ma anche cross-reattivo a cardiolipina e altri fosfolipidi dei tessuti umani e dei cosiddetti animali Wassermann anticorpi. Sono rilevati in CSC con antigene cardiolipina (da cuori di animali). Anticorpi specifici contro l'agente eziologico della sifilide vengono rilevati in RNIF e immunoblot.
L'antigene Wasserman è un fosfolipide che fa parte delle membrane mitocondriali (cardiolipina). Si ottiene dal miocardio bovino, un tessuto ricco di mitocondri. A causa della comunanza antigenica con i fosfolipidi tissutali, gli anticorpi anti-treponem cardiolipina reagiscono con la cardiolipina tissutale (mitocondriale). I veri autoanticorpi contro la cardiolipina tissutale si formano nella "sindrome antimitocondriale (antifosfolipidica)", causando reazioni positive di Wasserman (falso positivo - in relazione all'agente eziologico della sifilide) nelle collagenosi (lupus eritematoso sistemico, artrite reumatoide), lebbra e altri infezioni gravi associato a danno tissutale, con anemia emolitica, con tossicodipendenza.
caratteristiche patogene.
Lo sviluppo della sifilide è determinato da due meccanismi principali: una tendenza alla generalizzazione (elevata invasività) e l'attivazione periodica di un agente patogeno che persiste a lungo nel corpo ("uscita da un'imboscata").
A causa dell'instabilità dell'agente patogeno nell'ambiente esterno, l'infezione avviene per contatto diretto (nella stragrande maggioranza dei casi, sessualmente). Penetrando attraverso le mucose e le lesioni cutanee minori, l'agente patogeno penetra rapidamente nei tessuti, si diffonde linfogenamente e poi ematogenamente (generalizzazione).
I primi segni della malattia ( sifilide primaria) avviene dopo un periodo di incubazione (in media da 3 a 4 settimane). Nel sito di introduzione (invasione primaria), l'agente patogeno si moltiplica e si verifica chancre- un nodulo denso, indolore, rossastro che si trasforma in un'ulcera. Allo stesso tempo, a seguito della penetrazione del treponema nei linfonodi, si sviluppa linfoadenite regionale e inoltre - poliadenite. La generalizzazione dell'infezione si verifica anche prima della comparsa di sifiloma e linfoadenite, ad es. la sifilide è una malattia sistemica fin dall'inizio.
Dopo che la clinica della sifilide primaria si è attenuata, dopo un po 'di tempo (da diverse settimane a diversi mesi), si verifica una ricaduta dell'infezione associata alla replicazione multiorgano dei treponemi ( sifilide secondaria). Ci sono lesioni della pelle e delle mucose (sifilidi secondarie, che contengono un gran numero di treponema), lesioni di organi interni, linfonodi, ossa, articolazioni e molti altri. Data la varietà delle lesioni, la sifilide secondaria è chiamata il "grande imbroglione".
Dopo la sifilide secondaria, alcuni pazienti sviluppano nuovamente la sifilide latente (l'agente patogeno rimane sottoterra per anni), che nella metà dei portatori può trasformarsi in sifilide terziaria. È caratterizzato dalla formazione di focolai di infiammazione granulomatosa - gomma contenente poco treponema (praticamente non contagioso). Il decadimento della gomma porta alla distruzione dell'osso e dei tessuti molli e al danno vitale organi importanti. A differenza della sifilide primaria e secondaria, la sifilide terziaria è un processo cronico che non finisce mai da solo.
Poco si sa sui fattori di patogenicità del T. pallidum e sui meccanismi che gli consentono di eludere per lungo tempo la sorveglianza immunologica. È incoraggiante che questo patogeno mantenga un'elevata sensibilità agli antibiotici. La sifilide moderna risponde ancora bene al trattamento se il processo non raggiunge lesioni organiche irreversibili.
Diagnostica di laboratorio.
Nella sifilide primaria e secondaria, l'agente patogeno può essere rilevato nelle lesioni mediante microscopia. Più ottimale per il rilevamento del treponema pallido microscopia in campo oscuro e ad immunoluminescenza. Con il primo metodo è necessario escludere possibili artefatti (fili di fibrina, ad esempio), la presenza di treponemi saprofiti. T. rifrangente colonizza gli organi genitali esterni, è caratterizzato da elevata mobilità e assenza di movimenti di flessione. T. denticola colonizza la cavità orale, i suoi riccioli sono più corti e diretti ad un angolo più acuto. IN cavità orale si trova anche l'uomo T. vincentii, che in associazione con altri microrganismi può causare angina necrotica ulcerosa.
Oltre all'agente eziologico della sifilide, esistono treponemi di altre sottospecie di T. pallidum, geneticamente e antigenicamente molto simili, che provocano lesioni umane in paesi con clima caldo ( framboesia, bergel, pinta).
Se colorato secondo Romanovsky - Giemsa, T.pallidum è colorato di rosa, i treponemi non patogeni sono blu o viola, T.refringens è colorato di rosso con fucsina. La diagnostica fluorescente è ampiamente utilizzata per rilevare il treponema in vari materiali clinici. Tra i metodi per rilevare l'agente patogeno, la PCR ha la massima sensibilità e sufficiente specificità.
Metodi diagnostici di base - sierologico, cioè. rilevamento di anticorpi sierici. Applicare RSK con cardiolipina e antigene treponemico, test di flocculazione (test di microagglutinazione per anticorpi cardiolipina), RNGA. Test più specifici e sensibili sono i test basati su immunofluorescenza indiretta (RIF), reazione di immobilizzazione del treponema pallido, ELISA basato su proteine ricombinanti del treponema.
Nella sierodiagnosi della sifilide è necessario tener conto della sieronegatività della sifilide primaria nelle prime settimane di malattia. È necessaria una combinazione di metodi basati sulla rilevazione di anticorpi contro gli antigeni della cardiolipina e del treponema. I test della cardiolipina diventano rapidamente sieronegativi dopo l'eliminazione del patogeno (dopo alcuni mesi), gli anticorpi antitreponemici persistono molto più a lungo. Essenziale per determinare l'attività del processo è la definizione antitreponemicoIgM- anticorpi(quando viene rilevata la sifilide congenita, soprattutto perché gli anticorpi IgM non attraversano la placenta dalla madre al feto; nello studio del liquido cerebrospinale - per la diagnosi di neurosifilide, ecc.).
Trattamento.
Più spesso vengono utilizzate penicilline depositate con azione prolungata, con intolleranza: macrolidi, tetracicline, cefalosporine.
Non esiste una prevenzione specifica.
Morfologia e classificazione.
Spirale che ne ha fino a 10 Non forma corretta grandi riccioli, batteri gram-negativi con una natura rotazionale-traslazionale dei movimenti. Anaerobi, che spesso richiedono terreni di coltura complessi.
Borrelia patogeno per l'uomo sono agenti patogeni febbri ricorrenti (febbri ricorrenti) o borreliosi. B. ricorrenze trasmesso all'uomo dai pidocchi, provoca febbre epidemica o schifosa ricorrente. Le restanti borreliosi umane sono divise in due gruppi indipendenti: la borreliosi trasmessa da zecche argas (AKB), causata da più di 12 specie di borreliosi, e la borreliosi trasmessa da zecche ixodid (IBD), causata da B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii , B.afzelii e alcuni altri.
Gli AKB sono associati agli acari argas del genere Ornithodorus, che vivono nelle regioni tropicali e subtropicali dell'Africa, dell'Asia e dell'America, e sono caratterizzati da ricorrenti attacchi di febbre (come nella malaria). L'ITB è causato da zecche del genere Ixodes (gruppo I.ricinus / I.persulcatus), distribuite principalmente nella zona forestale dell'Eurasia e dell'America.
beni culturali.
I rappresentanti di questo genere sono esigenti per le condizioni di coltivazione, in particolare Borrelia del gruppo IKB. Richiedono condizioni anaerobiche facoltative, temperatura più 33 gradi Celsius, terreni speciali (BSK-2) contenenti terreno 199, glucosio, albumina, cisteina, siero di coniglio, gelatina e altri componenti.
proprietà antigeniche.
Hanno antigeni cross-reattivi con altre spirochete, antigeni specifici per genere e specie. Allocare antigeni flagellina H- (flagellati) (hanno bassa specificità) e antigeni proteici di superficie (OspA, OspC, più specifici, utilizzati per l'identificazione interspecifica e intraspecifica).
La patogenesi delle lesioni.
Dopo aver succhiato la zecca, la Borrelia con la saliva entra nel macroorganismo, si moltiplica alla porta d'ingresso dell'infezione, interessando la cute (eritema) e i linfonodi più vicini (fase adattamento primario). Superate le barriere cutanee e linfatiche, la Borrelia entra nel flusso sanguigno, provocando la spirochetemia, manifestata da una sindrome tossica generale (stadio diffusione primaria). Con il progredire del processo, la Borrelia penetra nelle barriere del tessuto ematoso (anche attraverso la barriera emato-encefalica) e causa danni a vari organi e sistemi. In alcuni casi, l'infezione diventa cronica, causando danni al sistema nervoso e cardiovascolare, al sistema muscolo-scheletrico, lesioni cutanee secondarie, ecc. manifestazioni neurologiche, per esempio).
Epidemiologia.
ITB - infezioni focali naturali trasmissibili obbligate, distribuite principalmente in temperato zona climatica emisfero settentrionale, zona paesaggistica forestale e associata all'aspirazione di zecche del genere Ixodes. I focolai ITB sono spesso associati a focolai di encefalite da zecche, poiché hanno gli stessi vettori in Eurasia: zecche I. reticulatus (zecca della taiga) e I. ricinus (zecca della foresta europea).
Diagnostica di laboratorio.
Borrelia può essere isolata utilizzando il terreno BSK2 in pazienti da focolai di lesioni cutanee, da sangue e liquido cerebrospinale (nelle forme meningee), nello studio di portatori (inclusi quelli prelevati dall'uomo) e di ospiti a sangue caldo (il più alto tasso di inoculazione è dalla vescica) in focolai naturali.
Borrelia può essere trovata in zecche ixodidi mediante microscopia ottica (colorazione Romanovsky-Giemsa), microscopia in campo oscuro e luminescente, PCR.
Il metodo principale della diagnostica sierologica è la reazione dell'immunofluorescenza indiretta (RNIF) con l'antigene corpuscolare di B.afzelii, che consente di rilevare gli anticorpi contro la Borrelia del gruppo IKB.
Trattamento.
Applicare la terapia preventiva (con risultati positivi dello studio della zecca succhiata) e il trattamento di pazienti con ITB con tetracicline, penicilline e cefalosporine. Non sono state sviluppate misure preventive specifiche.
Genere Leptospira
Morfologia.
Proprietà culturali e biochimiche.
Chemoorganotrofi, aerobi. I Leptospira sono tipici idrofili, persistono a lungo in substrati umidi, acqua e terreno umido. La temperatura ottimale va da più 28 a 30 gradi Celsius, pH 7,2 - 7,4. Coltivato principalmente su terreno liquido con l'aggiunta di siero di sangue di coniglio (tersky medium).
proprietà antigeniche.
Le leptospira patogene sulla base delle proprietà antigeniche sono suddivise in sierogruppi e sierotipi.
Caratteristiche ecologiche - epidemiologiche.
I principali serbatoi di infezione sono animali selvaggi, principalmente roditori e insettivori (focolai naturali, spesso associati ad habitat vicino all'acqua), così come animali da fattoria e domestici(suini, bovini, cani). Negli animali, la leptospira persiste a lungo nei reni e viene espulsa a lungo nell'ambiente esterno con l'urina. Una persona viene infettata in focolai naturali (più spesso durante i lavori agricoli) e in focolai domestici (più spesso focolai di balneazione o casi di leptospirosi causati professionalmente). Ratti e cani grigi svolgono un ruolo significativo nell'infezione. Esistono connessioni tra alcune leptospire serovar e alcune specie animali (ad esempio, L.canicola - cani).
La patogenesi delle lesioni.
La leptospira entra nel corpo attraverso le mucose o il danno (microtrauma) della pelle. La leptospira patogena, a causa della mobilità attiva, supera le barriere protettive, penetra nel sangue (leptospiremia) ed entra in vari organi, principalmente reni e fegato. Di particolare importanza sono lesioni endoteliali capillari con emorragie di varia gravità fino alla sindrome emorragica, danno al fegato con lo sviluppo di ittero associato a danni agli epatociti ed emolisi dei globuli rossi, danno ai reni, principalmente l'epitelio dei tubuli renali, sostanza corticale e sottocorticale con sviluppo di insufficienza renale (anuria, uremia), manifestazioni meningee.
Diagnostica di laboratorio.
Il metodo principale della diagnostica microscopica è la microscopia in campo oscuro.
L'isolamento dell'agente patogeno viene effettuato mediante colture sul terreno Tersky, saggio biologico su criceti dorati. Esaminare l'urina, il sangue, il liquido cerebrospinale, lo strato corticale del rene.
Il principale metodo di diagnostica sierologica è la reazione di agglutinazione-lisi (RAL) con un set di colture di Leptospira dei principali sierogruppi. Il metodo è specifico, ma richiede tempo, poiché è necessario mantenere un set diagnostico di leptospire, agglutinare i sieri studiati con leptospire di tutti i principali sierogruppi, seguiti dalla microscopia in campo oscuro. Con un risultato positivo, si osserva la leptospira che si attacca sotto forma di ragni o palline, seguita dalla lisi. Attualmente, l'ELISA è utilizzato anche per la sierodiagnosi.
Trattamento.
Vengono utilizzati antibiotici (penicilline, tetracicline).
sifilide
contagioso malattie veneree, chiamato Treponema pallido caratterizzato da danni alla pelle, agli organi interni, alle ossa, sistema nervoso. C'è la sifilide acquisita e congenita.
Sifilide. Tassonomia.
Il treponema pallido appartiene alla famiglia Spirochetacee, Dipartimento Graciliciti.
Sifilide. Morfologia.
Bassa capacità di colore. Un batterio sottile a forma di spirale, lungo da 4-14 micron, con piccoli riccioli uniformi, è estremamente mobile. Macchiato secondo Romanovsky-Giemsa in un debole colore rosa.
Sifilide. Coltivazione.
Anaerobio obbligato, cresce male su speciale. ambienti di fossa.
Sifilide. Struttura antigenica.
È caratterizzato da legami antigenici con altri triponemi, nonché lipoidi di tessuti animali e umani. Diversi AG sono stati trovati nel patogeno, uno del gatto. Lipoid AG - identico all'estratto lipoide del cuore bovino.
Sifilide. resistenza.
Debolmente resistente a ambiente, a 55 anni muore entro 15 minuti, sensibile all'essiccazione, alla luce, ai sali di mercurio, al bismuto, all'arsenico, alla penicillina. Rimane sugli oggetti domestici fino a quando non si asciuga, è ben conservato nel tessuto di un cadavere.
Sifilide. Epidemiologia.
La fonte dell'infezione è una persona malata. L'infezione viene trasmessa sessualmente, raramente attraverso oggetti domestici, l'infezione è possibile attraverso baci, latte di una madre che allatta e trasfusioni di sangue.
Sifilide. Patogenesi e clinica.
Penetra nel corpo attraverso la pelle o le mucose, si diffonde attraverso organi e tessuti, causandone il danno. Il periodo di incubazione è di 3-4 settimane. Dopo il periodo di incubazione, procede ciclicamente sotto forma di periodi primari, secondari e terziari.
Nel sito di introduzione (sui genitali, sul labbro), appare una lesione primaria - un duro sifiloma - un sigillo con un'ulcera sulla superficie.
Il periodo secondario dura 3-4 anni, è caratterizzato da un'eruzione cutanea, compromessa condizione generale organismo.
Periodo terziario: compaiono danni alla pelle, alle mucose, agli organi interni, alle ossa, al sistema nervoso, formazioni soggette a decadimento, manifestazione.
Sifilide. Immunità.
Non sterile si sviluppa, dopo il trattamento non persiste, sono possibili malattie ripetute.
Sifilide. Diagnostica di laboratorio.
Viene utilizzata la microscopia in campo oscuro. Entro la fine del 1° e 2° periodo, si stabiliscono i fiumi sierologici Wasserman e le reazioni sedimentarie di Kahn. Negli esami di massa viene utilizzata una microreazione su vetro con una goccia di sangue e AG speciale. Usa anche l'immobilizzazione.
Sifilide. Trattamento.
Antibiotici penicillina e preparazioni di bismuto, iodio.
Sifilide. Prevenzione.
Non ce n'è uno specifico. Non specifico: rispetto delle norme igieniche, protezione durante i rapporti sessuali, un complesso di misure sanitarie e igieniche di carattere generale.
Il contenuto dell'articolo
Treponema pallido
Morfologia e fisiologia
T.pallidum ha una forma a spirale, un cilindro protoplastico, che si attorciglia in 8-12 spirali. 3 flagelli periplasmatici si estendono dalle estremità della cellula. Il treponema pallido non percepisce bene i coloranti all'anilina, quindi è macchiato con vernice Romanovsky-Giemsa. Tuttavia, il metodo più efficace è studiarlo in un microscopio a campo oscuro oa contrasto di fase. Microaerofilo. Non cresce su mezzi nutritivi artificiali. T. pallidum viene coltivato nel tessuto del testicolo del coniglio, dove si moltiplica bene e conserva pienamente le sue proprietà, provocando nell'animale l'orchite. Antigeni. La struttura antigenica di T. pallidum è complessa. È associato alle proteine della membrana esterna, le lipoproteine. Questi ultimi sono antigeni cross-reattivi comuni all'uomo e al bestiame. Sono usati come antigene nel test di Wassermann per la sierodiagnosi della sifilide.Patogenicità e patogenesi
I fattori di virulenza del Treponema pallidum includono proteine della membrana esterna e LPS, che mostrano le loro proprietà tossiche dopo essere state rilasciate dalla cellula. Allo stesso tempo, a quanto pare, anche la capacità del treponema di formare frammenti separati durante la divisione, penetrando in profondità nei tessuti, può essere attribuita a fattori di virulenza. Ci sono tre fasi nella patogenesi della sifilide. Nella sifilide primaria si osserva la formazione di un focolaio primario: un duro sifiloma nel sito della porta d'ingresso dell'infezione, con successiva penetrazione nei linfonodi regionali, dove l'agente patogeno si moltiplica e si accumula. La sifilide primaria dura circa 6 settimane. Il secondo stadio è caratterizzato dalla generalizzazione dell'infezione, accompagnata dalla penetrazione e dalla circolazione dell'agente patogeno nel sangue, che è accompagnata da eruzioni cutanee. La durata della sifilide secondaria nei pazienti non trattati varia da 1-2 anni. Nella terza fase si riscontrano granulomi infettivi (gengive soggette a carie), localizzati negli organi interni e nei tessuti. Questo periodo in pazienti non trattati dura diversi anni e termina con danni al sistema nervoso centrale (paralisi progressiva) o midollo spinale(nappina dorsale).Immunità
Con la sifilide, c'è una risposta immunitaria umorale e cellulare. Gli anticorpi risultanti non hanno proprietà protettive. La risposta immunitaria cellulare è associata alla fissazione del patogeno e alla formazione di granulomi. Tuttavia, non si verifica l'eliminazione del treponema dal corpo. Allo stesso tempo, condizioni ambientali sfavorevoli inducono la formazione di cisti da treponemi, che sono localizzati nella parete vasi sanguigni. Si ritiene che ciò indichi il passaggio della malattia allo stadio di remissione. Insieme alle cisti, i treponemi formano forme a L. Con la sifilide si forma la terapia ormonale sostitutiva, che può essere rilevata da un test allergico cutaneo con sospensione di treponema ucciso. Si ritiene che la manifestazione del periodo terziario della sifilide sia associata alla terapia ormonale sostitutiva.Ecologia ed epidemiologia
La sifilide è una tipica infezione antroponotica. Si ammalano solo le persone che in natura sono un serbatoio di infezione. La trasmissione dell'infezione avviene sessualmente e molto meno spesso, attraverso la biancheria intima e altri oggetti. In ambiente esterno(aria) il treponema muore rapidamente.Sifilide e altre treponematosi
La sifilide è una malattia venerea infettiva cronica di una persona, ha un decorso progressivo ciclico, colpisce la pelle, le mucose, organi interni e sistema nervoso. L'agente eziologico della malattia è Treponema pallidum Ci sono tre periodi principali nello sviluppo della sifilide, metodi diagnostica di laboratorio che hanno caratteristiche proprie. IN primo periodo malattia, il materiale per la diagnosi di laboratorio è l'isolamento da un hard chancre, punteggiato da linfonodi, raschiamento con roseolo, sifilide simile. Con il secondario e periodi terziari esaminare il siero del sangue e il liquido cerebrospinale A causa del fatto che l'isolamento delle colture pure di treponema è normale laboratori batteriologici impossibile, durante il periodo primario della malattia (raramente in seguito), viene eseguito un metodo diagnostico batterioscopico. A partire dal periodo secondario, vengono utilizzati principalmente metodi sierologici.Ricerca batterioscopica
Prima di prendere il materiale patologico, pulire prima l'ulcera sifilitica con un batuffolo di cotone per rimuovere la placca grassa e la microflora contaminante. Quindi il fondo del sifiloma duro viene irritato con un bisturi o una spatola di metallo, oppure l'ulcera viene spremuta vigorosamente dai lati con le dita in un guanto di gomma per trasudare l'essudato della ferita. Con una piccola quantità liquido chiaro può essere aggiunto a una goccia di soluzione di cloruro di sodio allo 0,85%. Se è impossibile prelevare materiale dal fondo dell'ulcera (fimosi, cicatrizzazione dell'ulcera, ecc.), i linfonodi regionali vengono perforati in un campo visivo oscuro (meglio!), oppure utilizzando un microscopio a contrasto di fase o anoptrale. Il treponema pallido nel campo visivo scuro sembra una spirale delicata sottile leggermente lucida con riccioli primari arrotondati uniformi ripidi. I movimenti sono fluidi, quindi si piega ad angolo. Ma le oscillazioni simili a pendoli, che ne sono particolarmente caratteristiche. L'agente eziologico della sifilide deve essere distinto dal Treponema refringens (che colonizza i genitali esterni), che è più spesso, più ruvido, con grandi riccioli irregolari e ha movimenti irregolari attivi, ma non si piega. I treponemi della simbiosi fusosp-irochetous si distinguono per uno schema sottile, riccioli delicati e movimento irregolare.Quando si diagnostica la sifilide orale, il treponema pallido dovrebbe anche essere differenziato dai treponemi dentali, in particolare T. dentium, e anche da T. buccalis. Il primo di essi è generalmente difficile da distinguere dal sifilitico. È vero, è più corto, ha 4-8 riccioli affilati, non c'è movimento a pendolo. T. buccalis è più grosso, ha ricci iniziali grossolani e movimento irregolare.In caso di dubbio, bisogna tenere presente che tutti i treponemi saprofiti, a differenza di quelli chiari, si colorano bene con i coloranti all'anilina. Non penetrano nei linfonodi, quindi lo studio delle punture ha un grande valore diagnostico. L'individuazione di treponemi tipici nella punta dei linfonodi conferma senza dubbio la diagnosi di sifilide. I suoi vantaggi risiedono nel fatto che il materiale viene esaminato rapidamente e la morfologia dei treponemi nello stato vivente è la più caratteristica. Le macchie di inchiostro secondo il metodo Burri non vengono più utilizzate. vari metodi colorazione. Il treponema pallido non percepisce bene i coloranti all'anilina. Dei tanti metodi di colorazione proposti migliori risultati ottenuto utilizzando la colorazione Romanovkim-Giemsa. I colpetti fatti sono fissati con alcool metilico o nella miscela di Nikiforov. I risultati di chiarezza si ottengono quando il colorante Romanovsky-Giemsa viene versato nella preparazione. Per fare questo, frammenti di fiammiferi vengono posti in una capsula di Petri, su di essi viene posizionato un vetrino con uno striscio rivolto verso il basso e si versa la tintura fino a bagnare lo striscio. Il tempo di colorazione è raddoppiato. Al microscopio, i treponemi pallidi hanno un colore rosa pallido, mentre altri tipi di treponemi diventano blu o blu-viola Si può anche usare il metodo di argentatura di Morozov. I treponemi mantengono completamente le loro caratteristiche morfologiche e appaiono marroni o quasi neri al microscopio. Ma i preparati argentati non vengono conservati a lungo. IN Ultimamente i metodi di colorazione del treponema sono usati raramente.Se la sifilide viene trattata con farmaci chemioterapici, è quasi impossibile identificare l'agente patogeno in materiali patologici anche con l'aiuto di un campo visivo oscuro. Al ricevimento analisi negativaè necessario ripeterlo.Diagnosi sierologica della sifilide
Quando si conducono reazioni sierologiche, vengono ora utilizzati i seguenti metodi di ricerca unificati in Ucraina: reazione di fissazione del complemento (RCC), immunofluorescenza (RIF), immobilizzazione del treponema (PIT), microreazione di precipitazione (MPR) e test immunoenzimatico (ELISA). la reazione principale e più comune era considerata la reazione di fissazione del complemento o la reazione di Wasserman (РВ, RW). Per la sua impostazione, il siero del sangue di un paziente con sifilide e liquido cerebrospinale viene utilizzato in caso di danno sistema nervoso... Il metodo per impostare la reazione di Wasserman non differisce dalla tecnica di conduzione di RSC. L'unica differenza è che per RO viene utilizzato non solo un treponemico specifico, ma un antigene cardiolipina non specifico: 5-10 ml di sangue vengono prelevati dalla vena cubitale a stomaco vuoto o non prima di 6 ore dopo un pasto. Non prelevare sangue da pazienti con temperatura elevata, dopo aver bevuto alcolici e cibi grassi, nelle donne in gravidanza 10 giorni prima del parto e nelle donne in travaglio. Il siero estratto dal sangue viene riscaldato ad una temperatura di 56°C per 30 minuti per inattivare il proprio complemento. RO è necessariamente impostato con due antigeni: specifico e non specifico L'antigene treponemico specifico per ultrasuoni viene preparato da colture di treponema pallido (ceppo di Reiter) cresciute in provetta ed esposte agli ultrasuoni. Viene prodotto sotto forma di polvere liofilizzata. L'antigene cardiolipina non specifico viene preparato mediante estrazione alcolica dei lipidi da un cuore bovino e purificazione da miscele di zavorra, confezionate in fiale da 2 ml. Per introdurre l'antigene nel RO, è titolato secondo queste istruzioni. Immediatamente prima di allestire il RV, la titolazione del complemento e del siero emolitico viene eseguita secondo lo stesso schema dell'RSK. La reazione di Wasserman è posta sia qualitativamente che quantitativamente. Una reazione qualitativa viene eseguita in tre provette con due antigeni secondo il solito schema I risultati della reazione sono valutati secondo un sistema 4 plus: una reazione positiva - quando c'è un ritardo completo o significativo nell'emolisi (4 +, 3 +); reazione debolmente positiva - ritardo parziale dell'emolisi (2 +); reazione dubbia - un leggero ritardo nell'emolisi (1 +). In caso di emolisi completa il RO è considerato negativo Ogni siero che ha dato una reazione qualitativa positiva deve essere indagato anche con metodo quantitativo con la sua diluizione sequenziale da 1:10 a 1:640 che viene fornito completo (4+) o badge (3+) ritardo dell'emolisi. Il metodo quantitativo per impostare RO ha importanza per valutare l'efficacia del trattamento della sifilide. Una rapida diminuzione del titolo di reazione indica il successo della terapia. Se il titolo sierico non diminuisce per lungo tempo, ciò indica una mancanza di efficacia dei farmaci utilizzati e la necessità di modificare la tattica del trattamento Con pylori per sifilide primaria sieronegativa o latente, terziaria o congenita, si consiglia di mettere la reazione di Wasserman al freddo secondo lo stesso schema. In caso di sospetta neurosifilide, la RO viene eseguita con liquido cerebrospinale, che è inattivato perché non contiene il proprio complemento. Il liquido cerebrospinale non diluito viene introdotto nella reazione e in diluizioni di 1: 2 e 1: 5. La reazione di Wasserman diventa positiva 2-3 settimane dopo la comparsa di un'ulcera dura. Nella sifilide secondaria, è positivo nel 100% dei casi, nel terziario - nel 75% Inoltre, nel complesso delle reazioni sierologiche (CSR), viene utilizzata una reazione di microprecipitazione con plasma sanguigno o siero inattivato come test di screening.Microreazione di precipitazione
Microreazione di precipitazione con antigene cardiolipina. Il principio della reazione è che quando un'emulsione di antigene cardiolipina viene aggiunta al plasma sanguigno o al siero di un paziente affetto da sifilide, si forma un precipitato (complesso antigene-anticorpo), che precipita sotto forma di scaglie. Colore bianco. Usano questa tecnica: tre gocce di plasma (o siero inattivato) vengono pipettate nel pozzetto della piastra, quindi viene aggiunta una goccia dell'emulsione dell'antigene cardiolipina standard. I componenti della reazione vengono miscelati agitando la piastra per 5 minuti, dopodiché si aggiungono tre gocce di soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% e si lascia a temperatura ambiente per altri 5 minuti. Controllo obbligatorio con siero sanguigno debolmente positivo. I risultati vengono valutati ad occhio nudo su una fonte di luce artificiale. Quando nel pozzo compaiono grandi scaglie, la reazione è considerata positiva (4 +, 3 +), media e piccola - come debolmente positiva (2 +, 1 +). A risultato negativo non si forma alcun precipitato La microreazione di precipitazione può anche essere effettuata con un metodo quantitativo per stabilire il titolo degli anticorpi precipitanti e valutare l'efficacia del trattamento su questa base. Titoli MRP più elevati si ottengono con il plasma che con il siero. All'estero, un analogo di MRP con siero del paziente è VDRL (laboratorio di ricerca sulle malattie veneree) e con plasma - RPR (Rapid plasma reagin).Reazione di immunofluorescenza (RIF)
Il gruppo di reazioni specifiche ampiamente utilizzate per la diagnosi sierologica della sifilide comprende una reazione di immunofluorescenza indiretta. Come antigene, utilizza una sospensione di treponema pallido patogeno del ceppo Nichols dal parenchima dei testicoli di coniglio il 7° giorno dopo l'infezione. La reazione è inserita in due modifiche: RIF-ABS e RIF-200. Nella prima variante viene utilizzato un sorbente anticorpale (sonicat), un antigene treponemico ultrasonico per CSC. È prodotto dall'impresa Kaunas per la produzione di preparati batterici (Lituania). Con l'opzione RIF-200, il siero del paziente viene diluito 200 volte per rimuovere l'effetto degli anticorpi antitreponemici di gruppo.Il RIF-ABS viene installato su vetrini sottili e ben sgrassati. Sul retro dei bicchieri con un tagliavetro sono segnati 10 cerchi con un diametro di 0,7 cm All'interno del cerchio viene applicato al vetro un antigene - una sospensione di treponemi pallidi - in quantità tale che ci sono 50- 60 di loro nel campo visivo. Gli strisci vengono asciugati all'aria, fissati su una fiamma e 10 min in acetone. Aggiungere 0,2 ml di assorbente (sonicato) e 0,5 ml di siero del sangue del paziente in una provetta separata, miscelare bene. La miscela viene applicata su uno striscio (antigene) in modo da ricoprirlo uniformemente, incubato per 30 minuti in camera umida a 3-7°C (fase II della reazione). Successivamente, lo striscio viene lavato con tampone fosfato, essiccato e ad esso viene applicato siero fluorescente antishobulin per 30 minuti, posto in una camera umida a 37 ° C (fase II). La preparazione viene nuovamente lavata con tampone fosfato, essiccata ed esaminata al microscopio a fluorescenza. reazione positiva i treponemi pallidi emettono una luce verde-dorata, con una negativa non si illuminano.La tecnica per impostare RIF-200 è la stessa di RIF-ABS, solo il siero del sangue del paziente viene preliminarmente diluito 200 volte con tampone fosfato. Quando si esegue una reazione di immunofluorescenza con il liquido cerebrospinale di un paziente con sifilide del sistema nervoso, vengono utilizzati RIF-c e RIF-10, ad es. il liquor viene introdotto nella reazione non inattivato e diluito, o diluito 1:10.Test di immobilizzazione del treponema pallidum (PIT)
La reazione di immobilizzazione dei treponemi pallidi (PIT) si basa sul fenomeno della perdita della loro mobilità in presenza di anticorpi antitreponemici immobilizzanti del siero e del complemento del paziente in condizioni di anaerobiosi. Come antigene nella reazione, viene utilizzata una sospensione di treponemi pallidi dal tessuto testicolare di un coniglio infetto da un ceppo di laboratorio di Nichols. La sospensione viene diluita con una soluzione sterile di cloruro di sodio allo 0,85% in modo che vi siano 10-15 spirochete nel campo visivo Per eseguire la reazione, vengono prelevati 0,05 ml di siero del sangue del paziente, 0,35 ml di antigene e 0,15 ml di complemento. miscelato in una provetta sterile. L'esperienza è accompagnata da controlli di siero, antigene e complemento. I tubi vengono posti in un anaerostato, vengono create condizioni anaerobiche e mantenute in un termostato per 18-20 ore ad una temperatura di 35 ° C. Quindi, vengono preparate le perdite di carico da ciascun tubo, vengono contati almeno 25 treponemi e quanti di loro sono mobili e quanti sono immobili. La percentuale di immobilizzazione specifica dei treponemi pallidi è calcolata dalla formula: x = (A-B) / B * 100, dove X è la percentuale di immobilizzazione, A è il numero di treponemi mobili nella provetta di controllo, B è il numero di treponemi mobili treponemi in provetta. La reazione è considerata positiva quando la percentuale di immobilizzazione è pari o superiore a 50, debolmente positiva - da 30 a 50, dubbia - da 20 a 30 e negativa - da 0 a 20. Ovchinnikov. Le condizioni anaerobiche dell'esperimento vengono create ponendo la miscela di reazione (siero, antigene, complemento) in melangeurs, le cui due estremità sono chiuse con un anello di gomma. La tecnica della melangerina consente di fare a meno di attrezzature e apparecchi complessi per la creazione di anaerobiosi, ma fornisce risultati che non sono disponibili per la classica tecnica microaneurostatica L'immobilizzazione del treponema e le reazioni di immunofluorescenza sono considerate le più specifiche nella diagnosi sierologica della sifilide. Eppure, PIT, nonostante la sua specificità, non è raccomandato per l'uso in un'ampia pratica a causa della complessità dell'impostazione.Saggio immunoenzimatico (ELISA)
Il saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) viene eseguito sia con l'antigene kadriolipina (reazione di screening non specifica) che con treponema (reazione specifica), che conferma la diagnosi di sifilide.Principio metodo indiretto ELISA consiste nel fatto che il siero in esame viene aggiunto all'antigene adsorbito sulla fase solida nei pozzetti della compressa. Se contiene anticorpi contro il treponema, si forma un complesso antigene-anticorpo (fase II). Dopo aver lavato via gli anticorpi non specifici non legati, si aggiunge ai pozzetti siero antiglobulina coniugato con un enzima (il più delle volte con perossidasi di rafano). Il coniugato è saldamente attaccato al complesso antigene-anticorpo (fase II) Dopo aver lavato via il coniugato non legato, si aggiunge ai pozzetti il substrato di colorazione OFD - ortofenilendiammina (fase III). La reazione della perossidasi viene arrestata aggiungendo acido solforico. Per il controllo, mettono gli stessi campioni con sieri positivi e ovviamente negativi.La contabilizzazione dei risultati dell'analisi viene effettuata utilizzando un fotometro che determina la densità ottica in modalità a due onde (492 nm e 620 nm). Oltre a un fotometro, per impostare una reazione di anticorpi enzimatici sono necessarie pipette automatiche a uno e otto canali con punta in polipropilene e set appropriati di sistemi di test diagnostici.Il metodo ELISA è ampiamente utilizzato nella diagnosi sierologica della sifilide. È ugualmente efficace nel rilevare la malattia in periodo di incubazione(1-2 settimane dopo l'infezione), con manifestazioni cliniche della malattia e delle sue forme latenti. Molto spesso, l'ELISA viene utilizzato negli esami di screening della popolazione, in particolare nelle stazioni di trasfusione di sangue, mentre nella pratica di laboratorio vengono talvolta utilizzate anche la reazione di adesione immunitaria (RIP) e la reazione di emoagglutinazione indiretta (RNHA). Il primo si basa sul fatto che i treponemi testicolari patogeni del ceppo Nichols, se miscelati con il siero del paziente in presenza di complemento ed eritrociti umani, aderiscono alla superficie dei globuli rossi. RNHA è ampiamente utilizzato per la diagnosi della sifilide grazie alla sua semplicità metodologica. Diventa positivo già tre settimane dopo l'infezione. Risultato positivo le reazioni rimangono per anni dopo il recupero. Un analogo di questa reazione all'estero è TRHA (Treponema pallidum haemoagglutination).Treponema palladio; T. enterico
Morfologia: treponemi tipici con 8-12 bobine, l'apparato motorio - 3 flagelli periplasmatici su ciascun polo della cellula. La macchia Gram non è percepita, secondo Romanovsky-Giemsa - leggermente rosa, rilevata dall'impregnazione con argento.
beni culturali: ceppo virulento su animale domestico. media non cresce, l'accumulo di cultura avviene infettando il coniglio nel testicolo. I ceppi virulenti sono coltivati su terreni con tessuto cerebrale e renale.
Proprietà biochimiche : microaerofilo
Struttura antigenica: salato, ha specifici antigeni proteici e lipoidi, quest'ultimo è identico nella composizione alla cardiolipina estratta dal cuore bovino (difosfatilglicerina)
Fattori di patogenicità: le adesine sono coinvolte nel processo di attaccamento, le lipoproteine sono coinvolte nello sviluppo di processi immunopatologici.
resistenza: sensibile all'essiccazione, alla luce del sole, rimane sugli oggetti fino all'asciugatura. In condizioni sfavorevoli, passa nelle forme L e forma cisti.
Patogenesi: Chiamano sifilide. Dal sito del cancello d'ingresso, i treponemi entrano nei linfonodi regionali, dove si moltiplicano. Inoltre, T. penetra nel flusso sanguigno, dove si attacca agli endoteliociti, causando endarterite, portando a vasculite e necrosi tissutale. Con il sangue, T. si diffonde in tutto il corpo, seminando organi: fegato, reni, ossa, sistema cardiovascolare e nervoso.
Immunità: l'immunità protettiva non è sviluppata. In risposta agli antigeni patogeni, si sviluppano la terapia ormonale sostitutiva e i processi autoimmuni. L'immunità umorale è prodotta contro l'antigene lipoide di T. ed è un titolo di IgA e IgM.
esame microscopico. Viene eseguito con la sifilide primaria durante la comparsa di un duro colpo. Materiale per la ricerca: secrezione di ulcera, contenuto dei linfonodi regionali, da cui viene preparata ed esaminata in campo oscuro una preparazione a goccia "schiacciata". Con un risultato positivo, sono visibili sottili fili ritorti lunghi 6-14 micron, con 10-12 piccoli riccioli uniformi della forma corretta. Il treponema pallido è caratterizzato da movimenti pendolari e di flessione in avanti. Con lo sviluppo di lesioni sulla mucosa orale con sifilide secondaria, nonché con la localizzazione di un duro sifiloma nella cavità orale, è necessario differenziare il treponema pallido dai treponemi saprofiti, che sono rappresentanti della normale microflora. In questo caso, il decisivo valore diagnostico ha il rilevamento del tipico treponema nel puntato dei linfonodi regionali.
Sierodiagnostica. La reazione di Wasserman è impostata simultaneamente con 2 antigeni: 1) specifico, contenente l'antigene patogeno - treponema distrutto dagli ultrasuoni; 2) non specifico - cardiolipina. Il siero investigato è diluito in un rapporto di 1:5 e RSK è posto secondo il metodo generalmente accettato. Con una reazione positiva si osserva un ritardo nell'emolisi, con una reazione negativa si verifica l'emolisi degli eritrociti; l'intensità della reazione è stimata di conseguenza da (+ + + +) a (-). Il primo periodo della sifilide è sieronegativo ed è caratterizzato da una reazione di Wasserman negativa. Nel 50% dei pazienti, la reazione diventa positiva non prima di 2-3 settimane dopo la comparsa di un hard chancre. Nel secondo e terzo periodo della sifilide, la frequenza delle reazioni positive raggiunge il 75-90%. Dopo il corso del trattamento, la reazione di Wasserman diventa negativa. Parallelamente alla reazione di Wasserman, viene eseguita una reazione di microprecipitazione con un antigene cardiolipina non specifico e il siero o il plasma inattivato studiato. 3 gocce di siero vengono applicate al pozzetto su una lastra di plexiglas (o su vetro comune) e viene aggiunta 1 goccia di antigene cardiolipina. La miscela viene accuratamente miscelata e i risultati vengono presi in considerazione. Una reazione positiva con il siero del sangue di un paziente affetto da sifilide è caratterizzata dalla formazione e dalla perdita di scaglie misure differenti; con un risultato negativo si osserva un'opalescenza leggera uniforme.
RIF - reazione di immunofluorescenza indiretta - è specifico nella diagnosi della sifilide. Come antigene viene utilizzata una sospensione di treponemi tissutali. Viene utilizzata la reazione RIF_200. Il siero del paziente viene inattivato allo stesso modo della reazione di Wassermann e diluito in un rapporto di 1:200. Gocce di antigene vengono applicate su vetrini, essiccate e fissate per 5 minuti in acetone. Quindi il siero del paziente viene applicato al farmaco, dopo 30 minuti viene lavato e asciugato. Il passo successivo è il trattamento del preparato con siero fluorescente contro le globuline umane. Esaminare la preparazione utilizzando un microscopio a fluorescenza, osservando il grado di luminescenza del treponema.
Anche la reazione RIT dell'immobilizzazione del treponema è specifica. Una coltura viva di treponema si ottiene coltivando in un testicolo di coniglio. Il testicolo viene schiacciato in un mezzo speciale in cui i treponemi rimangono mobili. La reazione è impostata come segue: una sospensione di treponemi tissutali (mobili) viene combinata in una provetta con il siero in esame e viene aggiunto complemento fresco. Il siero viene aggiunto a una provetta di controllo anziché al siero di prova. persona sana, in un altro - invece di un nuovo complemento, viene aggiunto un complemento inattivo - inattivo. Dopo la conservazione a 35 °C in condizioni anaerobiche (anaerostato), da tutte le provette viene preparata una goccia “frantumata” e viene determinato in campo scuro il numero di treponemi mobili e immobili.
Trattamento: Penicilline, tetracicline, farmaci contenenti bismuto.
SPIROCHETE PATOGENE
Le spirochete, a differenza dei batteri, sono un gruppo meno comune di microrganismi.
Tutte le spirochete non formano spore o capsule. Non si colorano secondo Gram (gram-negativi). È difficile da coltivare su terreni nutritivi. Spirochete - i saprofiti si trovano in serbatoi ricchi di rifiuti organici, nel limo, nella cavità orale e nell'intestino umano. Da soli caratteristiche morfologiche le spirochete patogene sono divise in tre gruppi.
- Treponema, avente la forma di una spirale regolare. Ciò include la sifilide spirocheta.
- Borrelia, avente la forma di un filo arricciato con pieghe e riccioli più larghi. Questo gruppo include spirochete febbre ricorrente e la spirocheta di Vincent.
- Leptospira, che presentano numerosi piccoli riccioli e caratteristiche terminazioni a forma di uncino (ittero infettivo da leptospira).
SIFILIDE SPIROCHETE
L'agente eziologico della sifilide è la spirocheta pallida Spirochaeta pallida, descritta per la prima volta da F. Shaudin ed E. Hoffmann nel 1905. 2 anni prima, sperimentando sulle scimmie, D.K. Zabolotny scoprì la spirocheta della sifilide.
Morfologia e proprietà tintorie. Una spirocheta pallida è un filo sottilissimo e molto delicato che rifrange debolmente la luce con pieghe piccole, uniformi e regolari (Fig. 104 e 105 sull'inserto).
Riso. 104. Treponema pallidum nel campo oscuro.
In media ha da 6 a 14 micron di lunghezza e 0,25 micron di spessore. Ha ricevuto il nome pallido in relazione alla scarsa colorazione con coloranti all'anilina e scarsa visibilità nello stato vivente. Queste proprietà sono dovute al basso contenuto di nucleoproteine e alla ricchezza di lipidi nel corpo della spirocheta. Per macchiarlo, usa il metodo Romanovsky (Fig. 105) o macchialo, dopo averlo precedentemente esposto a una specie di mordente. metodo migliore il rilevamento di pallidum spirochete è uno studio nel campo visivo oscuro. Nel materiale fresco, se esaminata in un ultramicroscopio con un campo visivo oscuro, la spirocheta pallida mostra movimenti attivi attorno all'asse longitudinale, nonché movimenti di traslazione e rotazione.
Coltivazione. Sui normali mezzi nutritivi, la spirocheta della sifilide non si moltiplica. V. M. Aristovsky e A. A. Geltser hanno utilizzato con successo un mezzo nutritivo liquido costituito da siero di coniglio con l'aggiunta di un pezzo di tessuto cerebrale. La superficie del terreno dopo la semina viene riempita con vaselina. Nelle culture, le spirochete sono più grossolane, più corte e differiscono nel polimorfismo. Le colture risultanti sono prive di proprietà patogene e sono chiamate "culturali" in contrasto con "tessuto", che conservano proprietà patogene.
proprietà e sono supportate nei laboratori da passaggi sui conigli.
resistenza. La spirocheta pallida non è molto resistente all'essiccazione e alta temperatura. Il riscaldamento fino a 45-48° lo uccide entro un'ora, fino a 55° in 15 minuti. A basse temperature meno sensibile. A 10° rimane vitale fino a diversi giorni. I disinfettanti sono dannosi. Tra le sostanze chimiche, una soluzione all'1-2% di fenolo ha l'effetto più forte.
Patogenicità per gli animali. I. I. Mechnikov e D. K. Zabolotny per la prima volta riuscirono a ottenere la sifilide sperimentale nelle grandi scimmie. I conigli possono essere infettati introducendo materiale patologico nella cornea, nella camera anteriore dell'occhio, nella pelle, nelle mucose, ecc. In questo caso, gli animali sviluppano una lesione primaria sotto forma di tipica sclerosi (ulcera) nel sito di vaccinazione.
Patogenesi e clinica della sifilide. L'unica fonte di infezione è una persona con la sifilide. La malattia può essere trasmessa sia per contatto diretto (più spesso sessuale), sia attraverso oggetti contaminati da secrezioni sifilitiche. Mangiare da utensili condivisi, condividere un cucchiaio, ecc. (contatto indiretto) può contribuire alla diffusione della sifilide domestica.
La spirocheta pallida entra nel corpo attraverso le mucose e la pelle danneggiate. Dopo 3-4 settimane, la sclerosi primaria appare nel sito del cancello d'ingresso - un hard chancre (un'ulcera con bordi densi e un fondo - da cui il nome hard chancre), che caratterizza il periodo primario della sifilide.
In futuro, il microbo entra nel corpo attraverso le vie linfatiche e circolatorie e si diffonde in tutto il corpo: inizia il secondo periodo. Questo periodo è caratterizzato da danni alla pelle e alle mucose, su cui compaiono roseole, papule, vescicole e pustole - sifilidi. Il secondo periodo dura da 2-3 mesi a diversi anni. Se la sifilide non è stata curata abbastanza, inizia il terzo periodo: gommoso. I gommosi (granulomi) sono ammassi cellulari costituiti da linfociti, epitelioidi e plasmacellule. Possono essere nello spessore della pelle, delle mucose, interne
organi, ecc. Le gengive a volte raggiungono grandi formati, i piccoli vasi vicino a loro diminuiscono gradualmente nel lume e alla fine si chiudono. A questo proposito, la nutrizione delle cellule gommose è disturbata e la loro profonda distruzione avviene con la formazione di ulcere e cicatrici in qualsiasi tessuto e organo.
In alcuni casi, la sifilide passa nel quarto periodo, che è caratterizzato da lesioni del sistema nervoso centrale sotto forma di paralisi progressiva e tabe dorsali. Le manifestazioni cliniche della sifilide si distinguono per il fatto che nella maggior parte dei casi le lesioni della pelle e delle mucose che compaiono sono indolori, scompaiono anche senza intervento medico, si ripresentano e infine danno gravi lesioni terzo e quarto periodo.
Immunità. immunità innata alla sifilide negli esseri umani non è osservata. La malattia trasferita inoltre non lascia il tipo di immunità acquisita che caratterizza la maggior parte delle malattie infettive. In caso di infezione secondaria di un paziente con sifilide, le spirochete non muoiono, ma persistono e si diffondono in tutto il corpo, infettando organi e tessuti insieme alle restanti spirochete dell'infezione primaria. Tuttavia, con l'infezione secondaria da sifilide, non esiste una forma primaria di reazione - sifilide. Questa condizione immunologica è chiamata "immunità da chanker".
Per "immunità" nella sifilide si intende la ristrutturazione immunologica del corpo, in relazione alla quale cambiano la natura dei cambiamenti patologici e il quadro clinico stesso. Per quanto riguarda il meccanismo di questa "immunità", non è dovuto a fattori umorali, sebbene nel siero dei pazienti si trovino anticorpi (lisine, agglutinine).
Diagnostica di laboratorio. Nel primo periodo della sifilide, la diagnosi viene effettuata utilizzando un esame batterioscopico in un campo oscuro o in macchie macchiate di materiale da un hard chancre.
Per la ricerca è necessario estrarre il fluido tissutale dalle parti profonde della lesione contenente un numero maggiore di spirochete. A tal fine, la superficie del sifiloma viene prima accuratamente pulita con un tampone sterile imbevuto di soluzione salina, quindi viene espulsa una piccola quantità di fluido tissutale schiacciando leggermente il fondo dell'ulcera. Se questo fallisce, il fondo dell'ulcera viene irritato raschiando leggermente con un bisturi o un cucchiaio affilato. Il liquido risultante viene aspirato con una pipetta Pasteur.
Una goccia di liquido viene esaminata al meglio in un campo oscuro, dove sono chiaramente visibili la morfologia delle spirochete luminose e i loro movimenti caratteristici.
Le spirochete saprofitiche trovate sui genitali e nella cavità orale (sui genitali - Sp. refringens, nella cavità orale - Sp. microdentium) differiscono dalla spirocheta pallida per la loro morfologia e la natura del movimento. sp. refringens ha un corpo più grossolano con grandi spirali, non ha movimento in avanti, Sp. microdentium differisce dalla pallida spirocheta nella natura del suo movimento.
Si possono preparare anche macchie di inchiostro Burri (vedi pagina 51), dove la forma delle spirochete bianco-grigiastre e i loro vortici sono chiaramente visibili su uno sfondo nero.
Per studiare la preparazione colorata si preparano degli strisci sottili: ponendo una goccia di liquido su un vetrino, stenderla sulla superficie con il bordo del secondo vetro (proprio come preparare uno striscio da una goccia di sangue). Gli strisci vengono essiccati all'aria, fissati in alcool metilico e colorati per 12-15 ore secondo Romanovsky (p. 52): la spirocheta pallida vira al rosa, il che permette di distinguerla dalle altre spirochete saprofite che virano al blu (vedi Fig. 105).
Riso. 105. Spirocheta pallida con secrezione di sifiloma. Colorare secondo Romanovsky.
Una colorazione così lunga del preparato è spiegata dal fatto che la pallida spirocheta non percepisce bene i coloranti all'anilina.
Nel secondo periodo della sifilide, quando i sifilidi compaiono sulla pelle e sulle mucose, viene prelevato anche il succo di tessuto dalle aree colpite ed esaminato per la presenza di spirochete.
Dopo 4-5 settimane dall'inizio dell'infezione, può essere eseguito un test sierologico, che è il metodo più comune per diagnosticare la sifilide.
La sierodiagnosi della sifilide si basa sulla formulazione della reazione di Wasserman e delle reazioni sedimentarie.
Reazione di Wassermann. La tecnica della reazione di Wassermann non differisce dalla tecnica della reazione di fissazione del complemento. Una differenza significativa è il metodo di preparazione degli antigeni e la loro titolazione.
Estratti lipoidi da tessuti patologici o normali sono usati come antigeni per la reazione di Wasserman. I cosiddetti antigeni specifici preparati da organi sifilitici sono più attivi, per cui il loro titolo raggiunge solitamente i millesimi di millilitro (titolo 0,007, 0,05 per 1 ml, ecc.). Gli antigeni non specifici sono meno attivi, quindi il loro titolo è inferiore ed è compreso tra centesimi di millilitro (ad esempio, titolo 0,01, 0,02 per 1 ml).
Quando si imposta la reazione di Wasserman, vengono utilizzati 3 antigeni (n. 1, 2 e 3 cardiolipina). Antigene n. 1 specifico. Contiene lipidi della spirocheta sifilitica ottenuti per estrazione dal tessuto testicolare di un coniglio infetto da sifilide. Gli antigeni n. 2 e 3 non sono specifici e contengono lipidi di tessuto normale (estratti alcolici di muscoli cardiaci bovini con l'aggiunta di 0,25-0,3% di colesterolo). L'antigene cardiolipina è una preparazione purificata, deve essere diluito rapidamente e dopo la diluizione dovrebbe essere leggermente opalescente, ma non torbido. Il titolo dell'antigene indica la quantità che dovrebbe essere in 1 ml di soluzione fisiologica e che non ritarda l'emolisi in presenza del sistema emolitico e del complemento.
Ad esempio, se sull'ampolla è indicato un titolo antigenico di 0,05 ml, ciò significa che durante il funzionamento l'antigene deve essere diluito con soluzione salina in modo che vi siano 0,05 ml di antigene in un ml di liquido.
A causa del fatto che gli antigeni possono avere varie proprietà anti-complementari, prima della reazione di Wasserman, il complemento viene titolato non solo nella sua forma pura, ma anche in presenza di antigeni. Poiché la reazione di Wasserman è fissata con 3 antigeni, il complemento deve essere titolato separatamente con ciascun antigene.
Modifica della reazione di Wasserman - Reazione di Grigoriev-Rapoport (Tabella 25). Questa reazione si basa sull'utilizzo dell'attività complementare del siero testato. La reazione utilizza (entro e non oltre 36 ore dal ricevimento) il siero attivo (non riscaldato) del paziente. Per eseguire la reazione sono necessari antigeni, siero emolitico e sangue di pecora defibrinato e non lavato filtrato attraverso due strati di garza.
Schema di reazione Grigoriev - Rapoport
Ingredienti (in ml) | provette | ||
Siero di prova attivo | |||
salino | |||
| Antigene specifico, diluito per titolo | |||
Antigene non specifico, diluito per titolo | |||
Temperatura ambiente 22° per 25 minuti |
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Sistema emolitico | |||
Temperatura ambiente 22° per 25 minuti. |
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Nei casi in cui non c'è emolisi nel siero di controllo, la reazione viene ripetuta e 0,2 ml di siero ovviamente negativo attivo vengono aggiunti a 0,2 ml del siero in esame, e quindi il volume della soluzione fisiologica aggiunta diminuisce di conseguenza.
I risultati dell'esperimento vengono presi in considerazione immediatamente dopo la fine della reazione sulla base delle letture delle prime due provette contenenti l'antigene. Un risultato positivo è caratterizzato da un completo ritardo nell'emolisi, un risultato negativo è caratterizzato da un'emolisi completa. Il controllo del siero (terza provetta senza antigene) dovrebbe avere un'emolisi completa.
Oltre a queste reazioni, le reazioni sedimentarie sono ampiamente utilizzate per la sierodiagnosi della sifilide, la cui essenza è l'interazione del siero del paziente inattivato con l'antigene, a seguito della quale un precipitato precipita nella provetta. Di queste, le reazioni di Kahn e Sachs-Vitebsky hanno la massima applicazione.
La reazione di Kahn. I seguenti ingredienti sono necessari per impostare la reazione di Kahn: 1) siero di sangue inattivato di una persona malata, 2) uno speciale antigene di Kahn e 3) soluzione fisiologica.
L'antigene Kana è un estratto lipoide del muscolo cardiaco di pecora a cui è stato aggiunto il colesterolo. Prima dell'esperimento, a seconda del titolo indicato sull'etichetta, l'antigene viene diluito come segue. L'antigene viene versato in una provetta pulita e asciutta e la soluzione fisiologica viene versata nell'altra nella quantità indicata sull'etichetta (1-1.1-1.2). Quindi la soluzione fisiologica della seconda provetta viene rapidamente versata nella prima provetta contenente l'antigene (e non viceversa). La miscela risultante viene agitata, versandola da provetta a provetta 6-8 volte e lasciata per 10 minuti a temperatura ambiente per la maturazione.
Impostare l'esperienza. Sei provette di agglutinazione sono poste in un rack. Le prime tre provette (1a, 2a e 3a) sono sperimentali, le successive tre (4a, 5a e 6a) sono di controllo (controllo dell'antigene). L'antigene diluito dopo la sua maturazione viene introdotto con una micropipetta in 3 provette sperimentali e 3 provette di controllo. La micropipetta con l'antigene deve essere abbassata sul fondo della provetta asciutta senza toccarne le pareti: ciò garantisce l'accuratezza della misurazione dell'antigene. 0,5 ml vengono versati nella 1a provetta, 0,025 e 3a - 0,0125 ml di antigene - la stessa quantità di antigene viene versata rispettivamente in 3 provette di controllo. 0,15 ml del siero da testare vengono aggiunti a tutte le provette sperimentali, la stessa quantità di soluzione fisiologica viene aggiunta alle provette di controllo. Il rack con le provette viene agitato vigorosamente per 3 minuti per miscelare il siero con l'antigene, e posto in termostato a 37° per 10 minuti. Dopo aver rimosso dal termostato, aggiungere 1 ml di soluzione fisiologica alla prima provetta sperimentale e alla prima di controllo, 0,5 ml di soluzione fisiologica alla seconda e alla terza provetta sperimentale di controllo. Il contenuto delle provette viene nuovamente agitato e si tiene conto dei risultati delle reazioni (lo schema della reazione di Cahn è presentato nella Tabella 26).
Nota. Con qualsiasi numero di sieri analizzati, viene posizionato un controllo dell'antigene. Nei casi positivi della reazione, viene posizionato un siero di controllo. A tale scopo, viene versato in una provetta in una quantità di 0,1 ml, vengono aggiunti 0,3 ml di soluzione salina e agitati per tre minuti.
La reazione viene registrata ad occhio nudo, utilizzando una lente d'ingrandimento o un agglutinoscopio.
Tabella 26
Schema di reazione di Cahn 
Quando si tiene conto della reazione ad occhio nudo, ogni provetta viene rimossa dal rack e, leggermente inclinata, viene tenuta leggermente al di sopra del livello degli occhi davanti alla sorgente luminosa. La precipitazione di scaglie (precipitato) nelle provette con il siero di prova è un'indicazione di una reazione di Kahn positiva ed è indicata da più. Una reazione nettamente positiva è indicata da quattro vantaggi (+ + + +) - è caratterizzata dalla precipitazione di scaglie chiaramente visibili in tutte le provette e da un liquido leggermente opalescente. Una reazione positiva è indicata da tre più (+ + +) ed è caratterizzata da flocculazione meno pronunciata in tutte le provette. Una reazione debolmente positiva, indicata da due più (+ +), è caratterizzata da una sedimentazione più debole e dalla presenza di piccole particelle in un liquido torbido. La formazione di particelle sospese molto piccole in un liquido torbido è indicata da un segno più (+). L'assenza di sedimenti e particelle liberamente sospese nel liquido è un indicatore di una reazione negativa ed è indicata da un segno meno (-). Non si devono osservare scaglie nelle provette di controllo.
REAZIONE SEDIMENTARIA CITOCOLICA (Tabella 27) di Zaks-Vitebsky. Per questa reazione è necessario disporre del siero di prova inattivato e dell'antigene del citocolo di Sachs-Vitebsky, che è un estratto di lipoidi dai muscoli del cuore del bovino, a cui viene aggiunto il colesterolo.
Tabella 27
Schema della reazione citocolica di Sachs - Vitebsky