نشانگرهای آپوپتوز و تکثیر سلولی مشکلات مدرن علم و آموزش نشانگرهای آپوپتوز

هم تسریع و هم کاهش سرعت آپوپتوز می تواند تأثیر چشمگیری بر روند تعدادی از فرآیندهای پاتولوژیک در بدن داشته باشد. موادی که در تنظیم آپوپتوز نقش دارند معمولاً پروتئین هستند و سنتز آنها توسط ژن های مربوطه کنترل می شود. ژن های مشابهی که سطح آپوپتوز را تنظیم می کنند را می توان در موجودات زنده در سطوح بسیار متفاوتی از نردبان تکامل یافت. ژن‌هایی که آپوپتوز را تحریک می‌کنند شامل ژن‌های p53، Bax و bcl-xS می‌شوند. از سوی دیگر، ژن‌هایی که پروتئین‌هایی را سنتز می‌کنند که آپوپتوز را مهار می‌کنند (Bcl-2، Ced-9، BHRF1، MCL-1) توصیف شده‌اند. پروتئین های پرو و ​​ضد آپوپتوز قادر به ترکیب با یکدیگر هستند و همو و هترودیمرها را تشکیل می دهند. به عنوان مثال، هنگام ترکیب پروتئین مهارکننده آپوپتوز Bcl-2 با پروتئین فعال کننده آپوپتوز Bax، نتیجه (مهار یا فعال شدن آپوپتوز) مشخص خواهد شد که کدام پروتئین در این ترکیب غالب خواهد بود.

بارزترین و آموزنده ترین پروتئین هایی که منعکس کننده فرآیندهای مصنوعی در حال انجام در سلول ها و بافت ها هستند، پروتئین های خانواده Bcl-2 هستند که جایگاه مرکزی را در مطالعه تنظیم فرآیند آپوپتوز اشغال می کنند. توصیه می شود مکانیسم تنظیم این فرآیند را از موقعیت روابط ساختاری و عملکردی بین پروتئین های این خانواده در نظر بگیرید که ترکیب آنها را در یک خانواده - پروتئین های Bcl-2 امکان پذیر می کند. پروتئین‌های این خانواده Bcl-2 در تعادل دینامیکی ثابت هستند و همو و هترودیمرها را تشکیل می‌دهند که در نهایت بر توسعه آپوپتوز سلولی تأثیر می‌گذارد. بنابراین، اعتقاد بر این است که نسبت اشکال فعال این پروتئین ها تعادل بین زندگی و مرگ سلول را تعیین می کند.

اکنون مشخص شده است که پروتئین های خانواده Bcl-2 یا القاء کننده آپوپتوز (Bad، Bax، J3ik، Bid، Bak) یا مهار کننده (Bcl-2، Bcl-X) هستند. پروتئین خانواده Bcl-2 متعلق به کلاس پروتئین های G است. پروتئین 26 کیلوژول کد شده توسط ژن Bcl-2 حاوی یک دامنه گذرنده است و در غشای میتوکندری، شبکه آندوپلاسمی اطراف هسته، غشای هسته ای و کروموزوم های میتوزی قرار دارد.

Bcl-2 یک عامل بقای سلولی است که از آن در برابر مرگ برنامه ریزی شده محافظت می کند و خواص انکوژنی را نشان می دهد، زیرا از آپوپتوز جلوگیری می کند. ژن Bcl-2 به عنوان یک تنظیم کننده منفی آپوپتوز عمل می کند. مشخص شده است که کاهش غلظت Bcl-2 منجر به مرگ سلولی آپوپتوز می شود، در حالی که بیان بیش از حد آن سلول ها را از مرگ محافظت می کند.

توالی وقایعی که سلول را به سمت آپوپتوز سوق می دهد در نتیجه برهمکنش پروتئین های خانواده TNF با گیرنده های خاص به خوبی مورد مطالعه قرار گرفته است. یک نماینده روشناین گروه از پروتئین ها سیستم Apo-1/Fas/FasL هستند. لازم به ذکر است که این سیستم هیچ عملکرد شناخته شده دیگری جز القای آپوپتوز سلولی ندارد.

Apo-1/Fas/CD-95 گیرنده ای است که ساختار آن متعلق به خانواده گیرنده های TNF است. برهمکنش Apo-1/Fas (گیرنده) با FasL (لیگاند) یا با آنتی بادی های مونوکلونال منجر به آپوپتوز سلولی می شود. Apo-1/Fas به طور اساسی در سطح بسیاری از انواع سلول بیان می شود: تیموسیت ها، رده های سلولی لنفوبلاستوئید، لنفوسیت های T و B فعال شده، و همچنین فیبروبلاست ها، سلول های کبدی، کراتینوسیت ها و سلول های میلوئیدی. Human Apo-1/Fas از 325 باقیمانده اسید آمینه تشکیل شده است و یک پروتئین غشایی نوع I است. آن ها در ساختار آن می توان حوزه های خارج سلولی، ترانس غشایی و سیتوپلاسمی را تشخیص داد. همسانی توالی اسید آمینه در بین گیرنده های خانواده TNF بالا است. تقریباً 80 باقیمانده اسید آمینه، حوزه مرگ (DD) را تشکیل می‌دهند که در تعاملات پروتئین-پروتئین با پروتئین‌های سیتوپلاسمی شرکت می‌کند و سیگنال مرگ را تولید می‌کند. ژن Apo-1/Fas در انسان روی بازوی بلند کروموزوم 10 قرار دارد و از 9 اگزون تشکیل شده است.

FasL یک سیتوکین است و از خانواده سیتوکین های TNF است. FasL روی لنفوسیت‌های T فعال و سلول‌های کشنده طبیعی، و همچنین بر روی سلول‌های سرتولی و سلول‌های پارانشیم اتاق قدامی چشم بیان می‌شود که به این سلول‌ها اجازه می‌دهد هر سلول بیان‌کننده Fas، از جمله لنفوسیت T فعال را از بین ببرند. این مکانیسم ظاهر مکان های محافظت شده از سیستم ایمنی را تعیین می کند. FasL به دو شکل وجود دارد - نامحلول یا متصل به غشاء و محلول، که توسط متالوپروتئیناز از سلول جدا می شود. شکل محلول sFasL انسانی فعالیت خود را حفظ می کند. همانند سایر لیگاندهای گیرنده خانواده TNF، هوموتریمر sFasL به 3 مولکول Apo-1/Fas متصل می شود.

هنگامی که لیگاند به گیرنده متصل می شود، الیگومریزاسیون پروتئین های سیتوپلاسمی رخ می دهد، مانند DD (دامنه مرگ)، مربوط به گیرنده، پروتئین آداپتور - FADD (دامنه مرگ مرتبط با Fas)، حاوی DED - دامنه عامل مرگ و پروکاسپاز-8. در نتیجه این فرآیند، پروتئاز اختصاصی آپوپتوز، کاسپاز-8، فعال می شود و فرآیندهای مشخصه آپوپتوز ایجاد می شود. جهش در ژن fas یا ژن FasL منجر به ایجاد می شود بیماری های خود ایمنی.

Apo-1/Fas پروتئینی است که حاوی یک ناحیه گذر غشایی منفرد است که به FasL متصل می شود تا آپوپتوز را در سلول های هدف القا کند. همچنین یک شکل محلول و بدون گذرنده از Apo-1 (sApo-1/Fas) وجود دارد که در سرم و سایر مایعات بدن وجود دارد. با توجه به ادبیات، این فرم ترشحی (sApo-1/Fas) می‌تواند از سلول‌ها در برابر آپوپتوز ناشی از Apo-1/لیگاند محافظت کند و با برش یک باقیمانده اسید آمینه از حوزه گذرنده تشکیل می‌شود.

در سال‌های اخیر، شناسایی آپوپتوز اغلب با تعیین فعالیت کاسپازها، چه آغازگر و چه عامل، انجام می‌شود. بیشتر کارهای انجام شده بر روی مطالعه فعالیت کاسپاز، کاسپاز 3 را در نظر می گیرد، زیرا مسیرهای مختلف مرگ آپوپتوز روی آن همگرا می شوند و فعال شدن آن نشان دهنده وجود آپوپتوز است. با این حال، اگر مطالعه شامل تعیین فعالیت کاسپاز-8 باشد، علاوه بر شناسایی مرگ برنامه ریزی شده سلولی، می توان مسیر شروع آن را نیز تعیین کرد، زیرا فعال شدن کاسپاز 8 نشان دهنده مکانیسم گیرنده (خارجی) برای شروع فرآیند است. این دقیقا همان چیزی است که یک مزیت جدی است این روش.

تا به امروز، بیش از 60 مورد توسعه یافته است روش های مختلفشناسایی و مطالعه سلول های آپوپتوز در شرایط آزمایشگاهی ادبیات چندین روش روش شناختی برای تشخیص درون حیاتی سلول های آپوپتوز در داخل بدن را توصیف می کند. این روش ها بر اساس کیفی یا کمی سازیرویدادهای ناشی از تغییرات در غشای خارجی سلول ها، قطعه قطعه شدن انتخابی DNA هسته ای، تغییر در ساختار اجزای داخل سلولی یا توزیع مجدد آنها و همچنین کاهش pH سیتوپلاسمی. علاوه بر این، اشکال غیر معمول آپوپتوز وجود دارد که در آن تغییرات آپوپتوز نشانگر وجود ندارد.

به دلایل واضح، مطالعه مکانیسم های آپوپتوز RGCs در POAG در انسان در داخل بدن غیرممکن است. به عنوان یک شاخص غیرمستقیم هنگام مطالعه نقش آپوپتوز در پاتوژنز POAG، نشانگرهای آپوپتوز در لنفوسیت های خون محیطی، که مشخص کننده آمادگی دومی برای آپوپتوز است، ارزیابی شد. برای تعیین سلول های آپوپتوز از موارد زیر استفاده می شود: اسکن لیزری و فلوسیتومتری، انتشار تک فوتون سی تی اسکن، تصویربرداری رزونانس مغناطیسی (MRI)، طیف سنجی تشدید مغناطیسی، توموگرافی گسیل پوزیترون. همچنین برای شناسایی مرگ سلولی آپوپتوز، میکروسکوپ نوری و فلورسانس با استفاده از روش‌های تثبیت و رنگ‌آمیزی مرسوم، روش‌های میکروسکوپ الکترونی، تشخیص تخریب DNA الیگونوکلئوزومی در محل، تشخیص ایمونوهیستوشیمی پروتئین‌ها - نشانگرهای دخیل در مرگ برنامه‌ریزی شده سلولی، یا DNA قطعه قطعه شده، تعیین فعالیت کاسپاز

مطالعه آپوپتوز بر روی فرآورده های رنگ آمیزی شده با روش های استاندارد به دلیل سادگی نسبی این روش ها بسیار مورد استفاده قرار می گیرد. نتایج به دست آمده از شمارش سلول های آپوپتوز در قالب شاخص به اصطلاح آپوپتوز بیان می شود. معیارهای مرگ برنامه ریزی شده سلولی می تواند شامل حاشیه کروماتین و پیکنوز، تغییر در خطوط هسته، تغییر در خطوط سلولی و تکه تکه شدن، و ظهور هسته های آزادانه باشد.

میکروسکوپ فلورسانس اغلب به عنوان یک روش ذهنی برای تشخیص مرگ برنامه ریزی شده سلولی استفاده می شود. هر دو سلول های رنگ آمیزی حیاتی در آماده سازی تعلیق و ثابت مورد مطالعه قرار می گیرند. هنگام کار با سلول های زنده، برچسب گذاری Annexin V به طور گسترده ای مورد استفاده قرار می گیرد، که تشخیص فسفاتیدیل سرین را که در طول آپوپتوز در سمت بیرونی غشای پلاسما ظاهر می شود، ممکن می سازد.

هنگام تجزیه و تحلیل سلول ها در زیر میکروسکوپ فلورسانس، ویژگی های زیر در نظر گرفته می شود: اندازه هسته (کاهش)، ماهیت توزیع کروماتین (تراکم به توده) شکل نامنظم، تراکم)، اجسام کروماتین (حفظ جداسازی غشاء)، ماهیت لومینسانس DNA. DNA آپوپتوتیک متراکم و به رنگ زرد-سبز روشن به نظر می رسد. در سلول های زنده، آکریدین نارنجی فلورسانس سبز منتشر تولید می کند.

با استفاده از مطالعات ایمونوهیستوشیمی، وجود پروتئین‌هایی که آبشاری از فرآیندهای بیوشیمیایی را تشکیل می‌دهند که منجر به آپوپتوز می‌شوند مشخص می‌شود. این گروه از روش ها اغلب شامل TUNEL و ELISA است.

بسیاری از محققین نقش اصلی را به آپوپتوز در تغییرات ساختاری دیسک می‌دهند عصب باصره(OND)، ناشی از از دست دادن GCS. نقش آپوپتوز در ایجاد بیماری های دژنراتیو بدون شک است. مواد تجربی قانع‌کننده‌ای وجود دارد که نشان‌دهنده مشارکت فرآیند آپوپتوز در مکانیسم GON در POAG است. با این حال، به طور کلی، مطالعات بالینی عوامل آپوپتوز در بیماران مبتلا به مراحل مختلف گلوکوم بسیار محدود است، که مطالعه نقش آنها را در پاتوژنز GON دشوار می کند.

صفحه منبع: 265

CAD (DNase فعال شده با کاسپاز) به قطعاتی با اندازه مضرب 180-200 نوکلئوتید. در نتیجه آپوپتوز، اجسام آپوپتوز تشکیل می شوند - وزیکول های غشایی حاوی اندامک های دست نخورده و قطعات کروماتین هسته ای. این اجسام توسط سلول های مجاور یا ماکروفاژها از طریق فاگوسیتوز غرق می شوند. از آنجایی که ماتریکس خارج سلولی تحت تأثیر آنزیم های سلولی قرار نمی گیرد، حتی با تعداد زیادی سلول آپوپتوز، التهاب مشاهده نمی شود.

فرآیند آپوپتوز برای تنظیم فیزیولوژیکی تعداد سلول‌های بدن، برای تخریب سلول‌های قدیمی، برای تشکیل لنفوسیت‌هایی که به آنتی‌ژن‌هایشان (اتوآنتی‌ژن‌ها) واکنش نشان نمی‌دهند، برای ریزش پاییزی برگ‌های گیاه، برای اثر سیتوتوکسیک لنفوسیت های T کشنده، برای رشد جنینی بدن (ناپدید شدن غشای پوست بین انگشتان در جنین پرنده) و غیره.

اختلال در آپوپتوز سلولی طبیعی منجر به تکثیر سلولی کنترل نشده و ظهور تومور می شود.

1. معنای آپوپتوز

آپوپتوز بخشی جدایی ناپذیر از زندگی بیشتر موجودات چند سلولی است. بخصوص نقش مهمدر فرآیندهای توسعه بازی می کند. به عنوان مثال، اندام چهارپایان به صورت رشد بیل شکل شکل می گیرد و تشکیل انگشتان به دلیل مرگ سلول های بین آنها رخ می دهد. سلول هایی که دیگر مورد نیاز نیستند نیز در معرض آپوپتوز قرار می گیرند، بنابراین دم در قورباغه ها به ویژه در طول دگردیسی از بین می رود. در بافت عصبی مهره داران در طول رشد جنینی، بیش از نیمی از نورون ها بلافاصله پس از تشکیل در اثر آپوپتوز می میرند.

آپوپتوز همچنین بخشی از سیستم کنترل "کیفیت" سلول ها است، به شما امکان می دهد سلول هایی را که به درستی قرار ندارند، آسیب دیده، غیرعملکردی یا بالقوه خطرناک برای بدن هستند، از بین ببرید. به عنوان مثال، لنفوسیت های B هستند که اگر گیرنده های مفید آنتی ژنی را حمل نکنند یا خود واکنش نشان دهند، می میرند. اکثر لنفوسیت‌هایی که در طول عفونت فعال می‌شوند پس از غلبه بر آپوپتوز نیز از طریق آپوپتوز می‌میرند.

در موجودات بالغ، تنظیم همزمان تکثیر سلولی و آپوپتوز، حفظ اندازه کل فرد و اندام های فردی آن را ممکن می سازد. به عنوان مثال، پس از تجویز داروی فنوباربیتال که تکثیر سلول‌های کبدی را تحریک می‌کند، کبد موش‌ها بزرگ می‌شود. با این حال، بلافاصله پس از پایان اثر این ماده، تمام سلول های اضافی دچار آپوپتوز می شوند و باعث می شوند که کبد به اندازه طبیعی خود بازگردد.

آپوپتوز همچنین زمانی اتفاق می‌افتد که سلول مقدار زیادی آسیب داخلی را که نمی‌تواند ترمیم کند، «احساس» کند. به عنوان مثال، در صورت آسیب DNA، یک سلول می تواند به یک سلول سرطانی تبدیل شود؛ برای جلوگیری از این اتفاق، در شرایط عادی، «خودکشی می کند». تعداد زیادی از سلول های آلوده به ویروس نیز در اثر آپوپتوز می میرند.

2. نشانگرهای سلول های آپوپتوز

نشانگرهای آپوپتوز

تشخیص تکه تکه شدن DNA در سلول های آپوپتوز با استفاده از روش TUNEL نمونه ای از بافت کبد موش، هسته سلول آپوپتوز قهوه ای رنگ است، میکروسکوپ نوری.

تشخیص تکه تکه شدن DNA در سلول های آپوپتوز با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز سمت چپ: DNA جدا شده از سلول های آپوپتوز - "نردبان DNA" قابل مشاهده است. وسط: نشانگر؛ مورد: نمونه DNA کنترل از سلول های درمان نشده. رده سلولی H4IIE (هپاتوم موش صحرایی)، القا کننده آپوپتوز - پاراکوات، تجسم با استفاده از اتیدیوم بروماید.

بالا: تشخیص تراکم و تکه تکه شدن کروماتین با رنگ آمیزی با رنگ فلورسنت (Hoechst 34580). میانه: تشخیص انتقال فسفاتیدیل سرین به لایه بیرونی پلاسمالما با رنگ آمیزی با Annexin V. پایین: میکروگراف میدان روشن سلول های آپوپتوز. رده سلولی - جورکات، القاکننده آپوپتوز - TRAIL، هم کانونیو میکروسکوپ نوری نوری

سلول هایی که در اثر آپوپتوز می میرند را می توان با تعدادی از ویژگی های مورفولوژیکی تشخیص داد. آنها کوچکتر و متراکم تر می شوند (پیکنوز)، گرد می شوند و شبه پودیا را از دست می دهند، اسکلت سلولی در آنها از بین می رود، غشای هسته ای متلاشی می شود، کروماتین متراکم می شود و تکه تکه می شود. تعداد زیادی وزیکول روی سطح سلول ها ظاهر می شود؛ اگر سلول ها به اندازه کافی بزرگ باشند، به قطعات احاطه شده توسط غشاها - اجسام آپوپتوز تجزیه می شوند.

در سلول های آپوپتوز علاوه بر مورفولوژیک، تعداد زیادی تغییرات بیوشیمیایی نیز رخ می دهد. بخش هایی از DNA توسط نوکلئازهای ویژه در مناطق پیوند دهنده بین نوکلئوزوم ها به قطعات بریده می شوند طول مساوی. بنابراین، هنگام جداسازی تمام DNA از یک سلول آپوپتوز با استفاده از الکتروفورز، یک "نردبان" مشخصه را می توان مشاهده کرد. روش دیگر برای تشخیص تکه تکه شدن DNA، علامت گذاری انتهای آزاد آن با استفاده از روش TUNEL است. تیترانسفراز deoxynucleotidyl terminal d U TP n ick ه nd لتابعیت ) .

غشای پلاسمایی سلول های آپوپتوز نیز دستخوش تغییراتی می شود. در شرایط عادی، فسفولیپید فسفاتیدیل سرین با بار منفی فقط در لایه داخلی آن (بازگشت به سیتوزول) وجود دارد، اما در طول آپوپتوز به لایه بیرونی "پرش" می کند. این مولکول به عنوان یک سیگنال "مرا بخور" به فاگوسیت های مجاور عمل می کند. غرق شدن سلول های آپوپتوز ناشی از فسفاتیدیل سرین، برخلاف سایر انواع فاگوسیتوز، منجر به آزاد شدن واسطه های التهابی نمی شود. تغییر توصیف شده در پلاسمالما زمینه ساز روش دیگری برای شناسایی سلول هایی است که در اثر آپوپتوز می میرند - رنگ آمیزی با انکسین V، که به طور خاص به فسفاتیدیل سرین متصل می شود.

3. کاسپاز - واسطه های آپوپتوز

سیستم‌های سلولی که آپوپتوز را واسطه می‌کنند در همه حیوانات مشابه هستند و خانواده پروتئین‌های کاسپاز جایگاه مرکزی را اشغال می‌کنند. کاسپازها پروتئازهایی هستند که دارای باقیمانده سیستئین در مرکز فعال هستند و بسترهای خود را در یک باقیمانده اسید آسپارتیک خاص برش می دهند (از این رو نام: جاز جانب سیستئینو aspاز جانب آسپارتیک اسد). کاسپازها در سلول به صورت پروکاسپازهای غیرفعال سنتز می شوند که می توانند به بستری برای سایر کاسپازهای فعال شده تبدیل شوند که آنها را در یک یا دو مکان در باقی مانده آسپارتات برش می دهد. دو قطعه تشکیل شده - یکی بزرگتر و دیگری کوچکتر - به یکدیگر متصل می شوند و یک دایمر را تشکیل می دهند که با همان دیمر مرتبط است. تترامر تشکیل شده در این روش یک پروتئاز فعال است که می تواند پروتئین های سوبسترا را برش دهد. علاوه بر نواحی مربوط به زیر واحدهای اصلی و فرعی، پروکاسپازها گاهی اوقات حاوی پرودامین های مهاری نیز هستند که پس از برش تجزیه می شوند.

در نتیجه برش و فعال شدن برخی از کاسپازها توسط برخی دیگر، یک آبشار پروتئالیتیک تشکیل می شود که به طور قابل توجهی سیگنال را افزایش می دهد و آپوپتوز را از یک نقطه خاص به یک فرآیند غیرقابل برگشت تبدیل می کند. آن دسته از پروکاسپازهایی که این آبشار را آغاز می کنند، آغازگر و زیرلایه های آنها را افکتور می نامند. پس از فعال شدن، کاسپازهای افکتور می توانند سایر پروکاسپازهای موثر یا پروتئین های هدف را بشکنند. اهداف کاسپازهای موثر که در طول آپوپتوز از بین می روند، به ویژه پروتئین های لایه هسته ای هستند که تجزیه آنها منجر به از هم پاشیدگی این ساختار می شود. این پروتئین همچنین تجزیه می شود و در شرایط عادی، اندونوکلئازهای CAD را مهار می کند و در نتیجه تکه تکه شدن DNA می شود. کاسپازها و پروتئین‌های چسبنده اسکلت سلولی و بین سلولی شکافته می‌شوند و باعث می‌شوند سلول‌های آپوپتوز گرد شده و از سلول‌های همسایه جدا شوند و در نتیجه به اهداف آسان‌تری برای فاگوسیت‌ها تبدیل شوند.

مجموعه کاسپازهای مورد نیاز برای انجام آپوپتوز به نوع بافت و مسیری که از طریق آن مرگ سلولی فعال می شود بستگی دارد. به عنوان مثال، در موش‌ها، زمانی که ژن کدکننده کاسپاز-3 «خاموش» می‌شود، آپوپتوز در مغز رخ نمی‌دهد، اما به طور طبیعی در بافت‌های دیگر رخ می‌دهد.

ژن‌های پروکاسپاز در سلول‌های سالم فعال هستند و بنابراین پروتئین‌ها به طور مداوم برای بروز آپوپتوز وجود دارند؛ فقط فعال شدن آنها برای شروع خودکشی سلولی مورد نیاز است. پروکاسپازهای آغازگر شامل یک پرودامین طولانی حاوی کارت ( دامنه استخدام کاسپاز ، دامنه استخدام کاسپاز). CARD به پروکاسپازهای آغازگر اجازه می دهد تا زمانی که سلول سیگنالی را دریافت می کند که آپوپتوز را تحریک می کند، به پروتئین های آداپتور متصل شوند تا مجتمع های فعال سازی تشکیل دهند. در کمپلکس‌های فعال‌سازی، چندین مولکول پروکاسپاز در مجاورت یکدیگر قرار می‌گیرند که برای وارد شدن به حالت فعال کافی است و پس از آن یکدیگر را قطع می‌کنند.

دو مسیر سیگنالینگ مورد مطالعه برای فعال‌سازی آبشار کاسپاز در سلول‌های پستانداران، بیرونی و درونی (میتوکندری) نامیده می‌شوند که هر کدام از پروکاسپازهای آغازگر خود استفاده می‌کنند.

4. مسیرهای فعال کردن آپوپتوز

4.1. مسیر بیرونی

سلول می تواند یک سیگنال القا کننده آپوپتوز را از خارج دریافت کند، به عنوان مثال، از لنفوسیت های سیتوتوکسیک. در این حالت، به اصطلاح مسیر خارجی فعال می شود ( مسیر بیرونیشروع با گیرنده های مرگ. گیرنده های مرگ پروتئین های گذرنده ای هستند که به خانواده گیرنده های فاکتور نکروز تومور (TNF) تعلق دارند، مانند خود گیرنده TNF و گیرنده مرگ Fas. آنها هوموتریمرهایی را تشکیل می دهند که در آنها هر مونومر دارای یک دامنه اتصال به لیگاند خارج سلولی، یک دامنه گذر غشایی و یک حوزه مرگ سیتوپلاسمی است و پروکاسپازها را از طریق پروتئین های آداپتور جذب و فعال می کند.

لیگاندهای گیرنده مرگ نیز هموتریمر هستند. آنها به یکدیگر مرتبط هستند و به خانواده مولکول های سیگنال دهنده فاکتور نکروز تومور تعلق دارند. به عنوان مثال، لنفوسیت‌های سیتوتوکسیک لیگاندهای Fas را روی سطح خود حمل می‌کنند که می‌توانند به گیرنده‌های مرگ Fas در پلاسمالمای سلول‌های هدف متصل شوند. در این حالت، دامنه های درون سلولی این گیرنده ها به یک پروتئین آداپتور متصل می شوند. FADD، دامنه مرگ مرتبط با Fas و اینها به نوبه خود پروکاسپاسهای آغازگر 8 و/یا 10 را جذب می کنند. در نتیجه این مجموعه رویدادها، یک مجموعه سیگنال دهی مرگ ایجاد می شود - DISC ( کمپلکس سیگنالینگ القا کننده مرگ ). پس از فعال شدن در این کمپلکس، کاسپازهای آغازگر پروکاسپازهای موثر را قطع کرده و آبشار آپوپتوز را تحریک می کنند.

بسیاری از سلول ها مولکول هایی را سنتز می کنند که تا حدی آنها را از فعال شدن مسیر آپوپتوز خارجی محافظت می کند. نمونه ای از چنین محافظتی بیان گیرنده های به اصطلاح فریب است ( گیرنده های طعمهدارا بودن حوزه‌های اتصال لیگاند خارج سلولی، اما نه حوزه مرگ سیتوپلاسمی، و بنابراین نمی‌تواند باعث آپوپتوز شود و با گیرنده‌های مرگ مرسوم برای لیگاندها رقابت کند. سلول‌ها همچنین می‌توانند پروتئین‌هایی تولید کنند که مسیر آپوپتوز بیرونی را مسدود می‌کنند، مانند FLIP که از نظر ساختاری مشابه پروکاسپازهای 8 و 10 است، اما فعالیت پروتئولیتیکی ندارد. از اتصال پروکاسپازهای آغازگر به کمپلکس DISC جلوگیری می کند.

4.2. مسیر درونی

آپوپتوزوم

آپوپتوز همچنین می تواند از داخل سلول ایجاد شود، به عنوان مثال در صورت آسیب، آسیب DNA، کمبود اکسیژن، مواد مغذییا سیگنال های بقای خارج سلولی در مهره داران، این مسیر سیگنال دهی درونی نامیده می شود. مسیر ذاتی) یا میتوکندری، رویداد کلیدیاین شامل آزاد شدن مولکول های خاصی از فضای بین غشایی میتوکندری است. قبل از چنین مولکول های زوکرم سیکروم c وجود دارد که در بیشتر موارد به لانژوگ انتقال الکترون میتوکندری می رود، پروتئین موجود در سیتوپلاسم عملکرد دیگری دارد - به پروتئین آداپتور Apaf می رسد. عامل فعال کننده آپوپتوز پروتئاز-l ) باعث الیگومریزه شدن آن به یک ساختار هفت عضوی چرخ مانند به نام آپوپتوزوم می شود. آپوپتوزوم آغازگر پروکاسپاز 9 را جذب و فعال می کند، که سپس می تواند پروکاسپاز آغازگر را فعال کند.

در برخی از سلول ها، مسیر آپوپتوز بیرونی باید مسیر آپوپتوز درونی را فعال کند تا به طور موثر سلول را بکشد. مسیر ذاتی به شدت توسط پروتئین های خانواده Bcl-2 تنظیم می شود.

4.2.1. تنظیم مسیر ذاتی توسط پروتئین های خانواده Bcl-2

خانواده Bcl-2 شامل پروتئین های حفاظت شده تکاملی است که وظیفه اصلی آن تنظیم آزادسازی سیتوکروم c و سایر مولکول ها از فضای بین غشایی میتوکندری است. در میان آنها مولکول های طرفدار آپوپتوز و ضد آپوپتوز وجود دارد که می توانند در ترکیبات مختلف با یکدیگر تعامل داشته باشند، یکدیگر را سرکوب کنند، تعادل بین فعالیت های خود را ایجاد کنند و سرنوشت سلول را تعیین کنند.

حدود 20 پروتئین از این خانواده در حال حاضر شناخته شده است، که همگی حاوی حداقل یکی از چهار حوزه همسانی Bcl2 آلفا-مارپیچ به نام BH1-4 هستند. همسانی bcl2). پروتئین های آنتی آپوپتوز از خانواده Bcl2 شامل هر چهار دامنه، از جمله خود Bcl-2، و همچنین Bcl-X L، Bcl-w، Mcl-1 و A1 هستند. پروتئین های پرواپوپتوز به دو گروه تقسیم می شوند که اعضای گروه اول شامل سه حوزه BH (BH1-3) به ویژه Bak، Bax و Bok هستند (این دومی فقط در بافت های اندام های تولید مثلی بیان می شود). پرتعدادترین در میان خانواده Bcl-2، دومین گروه از پروتئین های پرواپوپتوز است که فقط حاوی دامنه BH3 (فقط BH3) است، این شامل Bim، Bid، Bad، Bik/Nbk، Bmf، Nix/BNIP3، Hrk، Noxa، پوما.

در شرایط عادی (یعنی زمانی که سلول دچار آپوپتوز نمی شود)، پروتئین های ضد آپوپتوز مانند Bcl-2 و Bcl-X L به پروتئین های پرو آپوپتوز BH123 (Bax و Bak) متصل می شوند و از پلیمریزه شدن آنها در میتوکندری بیرونی جلوگیری می کنند. غشا برای تشکیل منافذ در نتیجه عمل یک محرک آپوپتوز خاص، پروتئین های پرو آپوپتوز که فقط حاوی دامنه BH3 هستند فعال می شوند یا شروع به سنتز در سلول می کنند. آنها به نوبه خود پروتئین های ضد آپوپتوز را مهار می کنند و اثر بازدارندگی Bak و Bax را از بین می برند یا مستقیماً با دومی تعامل می کنند و الیگومریزاسیون و تشکیل منافذ آنها را تقویت می کنند. به دلیل نفوذپذیری غشای خارجی، سیتوکروم c و همچنین سایر واسطه های آپوپتوز مانند AIF وارد سیتوزول می شوند. عامل القا کننده آپوپتوز ).

به عنوان مثال، هنگامی که سیگنال های بقا در سلول وجود نداشته باشد، بیان پروتئین BH3 Bim با واسطه MAP کیناز JNK فعال می شود، که مسیر آپوپتوز ذاتی را تحریک می کند. در صورت آسیب DNA، سرکوبگر تومور p53 تجمع می یابد، که رونویسی ژن های کد کننده پروتئین های BH3 Puma و Noxa را تحریک می کند، که همچنین آپوپتوز را واسطه می کنند. پروتئین BH3 دیگر، Bid، ارتباط بین مسیرهای خارجی و داخلی آپوپتوز را فراهم می کند. پس از فعال شدن گیرنده های مرگ و در نتیجه کاسپاز-8، گیرنده دوم Bid را قطع می کند تا شکل کوتاه شده tBid (قطع Bid) را تشکیل دهد که به داخل میتوکندری حرکت می کند، جایی که Bcl-2 را سرکوب می کند.

آپوپتوزیک شکل قابل برنامه ریزی و با واسطه ژنتیکی مرگ سلولی است که در آن سیگنال های خارجی یا داخلی به سلول انگیزه ای برای تشکیل یا فعال کردن آنزیم هایی می دهد که منجر به خود تخریبی می شود. از نظر مورفولوژیکی، آپوپتوز با انقباض سلولی، تراکم و تکه تکه شدن هسته، تخریب اسکلت سلولی و بیرون زدگی تاولی غشای سلولی مشخص می شود. یکی از ویژگی های آپوپتوز این است که یک سلول در حال مرگ یکپارچگی غشای خود را تا زمانی که فرآیند کامل شود حفظ می کند و تنها پس از آن تخریب غشای آن سیگنالی برای فاگوسیت های مجاور برای جذب قطعات باقی مانده و تکمیل فرآیند تخریب سلولی است. سلول‌های آپوپتوز که فوراً تحت فاگوسیتوز قرار نمی‌گیرند، به قطعات کوچک و متصل به غشاء به نام «جسم آپوپتوز» تبدیل می‌شوند. یکی از ویژگی های مهم آپوپتوز این است که حذف سلول های در حال مرگ بدون ایجاد التهاب اتفاق می افتد.

آپوپتوز نقش مهمی در فرآیندهای فیزیولوژیکی ایفا می کند: ارگانوژنز، رشد جنینی، تنظیم ترکیب و تعداد جمعیت سلولی در بافت یک ارگانیسم بالغ، تغییرات هورمونی مختلف در بدن. نقش آپوپتوز نیز در فرآیندهای پاتولوژیک مختلف مهم است. در رشد تومور به طور کامل مورد مطالعه قرار گرفته است.

فرآیند آپوپتوز را می توان به دو مرحله تقسیم کرد:

· تشکیل و هدایت سیگنال های آپوپتوز - مرحله تصمیم گیری.

· برچیدن ساختارهای سلولی– فاز افکتور

اجرای مکانیسم های آپوپتوز با فعال شدن آنزیم های سلولی درون زا - سیستئین پروتئازها (کاسپازها) همراه است. کاسپازها در سلول ها (پروکاسپازها) در حالت غیر فعال هستند. فعال سازی از طریق شکاف پروتئولیتیک و دیمر شدن متعاقب آن با تشکیل زیر واحدهای فعال صورت می گیرد. اهداف کاسپازها پروتئین هایی هستند که مسئول عملکردهای حیاتی مختلف سلول هستند. در حال حاضر 14 نوع کاسپاز شرح داده شده است که ویژگی های کاربردیرا می توان به 3 گروه تقسیم کرد:

فعال کننده های سیتوکین ها (کاسپازهای 1، 4، 5، 13)

کاسپازها - محرک های فعال سازی کاسپازهای موثر (کاسپازهای 2، 8، 9، 10)

· کاسپازهای موثر - انجام دهنده آپوپتوز (3، 6، 7)

یکی از غشا گیرنده های سلولیمسئول مکانیسم های آپوپتوز پروتئینی به نام گیرنده Fas (CD95/APO1) است. لیگاند گیرنده Fas پروتئین Fas لیگاند (Fas-L) است که به خانواده فاکتورهای تومور نکروزه تعلق دارد و می تواند به صورت پروتئین غشایی و یا به صورت محلول ارائه شود. اتصال گیرنده Fas به لیگاند Fas منجر به فعال شدن مکانیسم های آپوپتوز با فعال شدن القاء کننده های کاسپاز می شود. با فعال شدن بعدی کاسپازهای موثر، زنجیره ای از واکنش های پروتئولیتیک آغاز می شود که هدف آن "از بین بردن" آپوپتوز سلول است: تکه تکه شدن DNA، برش مستقیم پروتئین های ساختاری سلول، اختلال در تنظیم سنتز پروتئین. بنابراین، مشارکت کاسپازهای موثر در آپوپتوز منجر به پارگی سلول آپوپتوز با سلول‌های اطراف، سازمان‌دهی مجدد اسکلت سلولی، کاهش قابلیت‌های ترمیم و همانندسازی DNA، پارگی غشای هسته‌ای و تخریب DNA، انتشار سیگنال‌هایی که سلول را نشان می‌دهد، می‌شود. آپوپتوز، و تکه تکه شدن سلول به اجسام آپوپتوز. تصادفی نیست که کاسپازهای مؤثر «کاسپازهای اعدامی» نامیده می شوند.

روش های مطالعه آپوپتوز کاملاً متنوع است. در ابتدا، رایج ترین راه برای تعیین آپوپتوز، الکتروفورز کسر DNA استخراج شده بود، که امکان شناسایی گسستگی DNA با وزن مولکولی کم توسط مول را فراهم می کند. جرم (در نتیجه تخریب DNA بین نوکلئوزومی). در مطالعات مورفولوژیکی، از روش TUNEL برای تشخیص شکست های DNA استفاده می شود که مبتنی بر تشکیل درج های الیگونوکلئوتیدهای نشاندار شده در محل های شکست DNA است که تشکیل آن توسط آنزیم TdT کاتالیز می شود.

در حال حاضر، روش های مبتنی بر فلوسیتومتری به طور فزاینده ای برای ثبت آپوپتوز لنفوسیت استفاده می شود. این گروه شامل روشی مبتنی بر تشخیص از دست دادن بخشی از DNA توسط سلول ها (سلول های هیپودیپلوئید) با استفاده از رنگ فلورسنت - پروپیدیوم یدید است که در زیر توضیح داده شده است. روش های دیگری بر اساس فلوسیتومتری نیز برای تعیین آپوپتوز استفاده می شود. آپوپتوز لنفوسیتی را می توان در مراحل اولیه با استفاده از انکسین V نشاندار شده با فلوئوروکروم تشخیص داد که به فسفاتیدیل سرین متصل می شود که بر روی غشای سلول های تحت آپوپتوز ظاهر می شود. با تعیین بیان گیرنده Fas (CD95) در سطح آنها و در میتوکندری پروتونکوژن bcl-2 می توان ایده تقریبی از "تمایل" لنفوسیت ها به ایجاد آپوپتوز به دست آورد.

اهمیت بالینی ارزیابی آپوپتوز در طول معاینه بالینی و ایمونولوژیکی بیماران بدون شک است، زیرا اختلال آن با تعدادی از بیماری ها همراه است. تضعیف آپوپتوز به دلیل تشکیل بیماری های خود ایمنی (به دلیل اختلال در روند حذف کلون های خود اختصاصی لنفوسیت ها) است. بنابراین، ثبت ضعیف شدن آپوپتوز می تواند به عنوان منبع اطلاعاتی در مورد مکانیسم های پاتوژنتیک بیماری های خودایمنی مانند لوپوس اریتماتوز سیستمیک باشد. روماتیسم مفصلیو همچنین سندرم لنفوپرولیفراتیو خودایمنی که اساس آن جهش ژن هایی است که گیرنده های سیگنال های آپوپتوز را تعیین می کنند. آپوپتوز مختل یک مکانیسم مهم در ایجاد فرآیندهای بدخیم است. در سلول های تومور، جهش ژن p53 اغلب شناسایی می شود که پروتئینی را رمزگذاری می کند که سیگنالی در مورد وجود شکستگی های ترمیم نشده در DNA و جهش های کروموزومی، منجر به ایجاد آپوپتوز می شود. در نتیجه سلول های معیوب ژنتیکی دور ریخته نمی شوند و به منبع تشکیل تومور تبدیل می شوند.

در تعدادی از بیماری های دیگر، برعکس، افزایش آپوپتوز مشاهده می شود. این در طی فرآیندهای عفونی رخ می دهد (اپوپتوز عظیم سلول های T اغلب توسط سوپرآنتی ژن های میکروبی ایجاد می شود)، سپسیس و انواع مختلف بیماری های ویروسیاز جمله ایدز. آپوپتوز در تعدادی از بیماری های خونی و نقص ایمنی اولیهزمانی که علت آن تولید ناکافی فاکتورهای بقای سلولی است که نقش آن را سیتوکین ها ایفا می کنند. بنابراین، در یکی از اشکال نقص ایمنی ترکیبی شدید همراه با جهش ژن IL-7 یا زنجیره γ رایج گیرنده های سیتوکین، مرگ پیش سازهای لنفوئیدی به دلیل کمبود IL-7 وجود دارد.

با این حال، به طور کلی مهم ترین ارزیابی "آپوپتوز فعال" است، که لنفوسیت ها زمانی که توسط میتوژن ها تحریک می شوند، تحت تاثیر قرار می گیرند. واقعیت این است که آپوپتوز، همراه با تکثیر، نوعی پاسخ لنفوسیت ها به محرک های فعال سازی است. در مراحل اولیه تمایز، پاسخ آپوپتوز غالب است و نتیجه آن ایجاد تحمل نسبت به آنتی ژن القاء کننده است. لنفوسیت های بالغ به تحریک عمدتاً با تکثیر (که در خدمت مرحله اولیهو یک پیش نیاز برای توسعه یک پاسخ ایمنی است)، اما احتمال مشخصی از ورود آنها به آپوپتوز فعال سازی باقی می ماند. از آنجایی که آپوپتوز به عنوان یک فرآیند جایگزین برای تکثیر عمل می کند، نسبت آنها می تواند به عنوان معیاری برای اثربخشی پاسخ سلول به سیگنال های فعال کننده عمل کند. هرچه سهم آپوپتوز در پاسخ لنفوسیت ها به میتوژن بیشتر باشد، آنتی ژن اختصاصی کمتر موثر است. دفاع ایمنی. بنابراین، تعیین آپوپتوز در طول فعال شدن لنفوسیت‌ها توسط میتوژن‌ها، آموزنده‌ترین روش است، مشروط به ارزیابی موازی پاسخ تکثیری سلول‌ها به همان محرک.

در طول فرآیند آپوپتوز، زنجیره پیچیده ای از واکنش ها در یک سلول در سطح مولکولی رخ می دهد که منجر به تغییر در فرآیندهای متابولیکی و ویژگی های فنوتیپی سلول ها می شود. این تغییرات را می توان با روش های بیوشیمیایی، میکروسکوپی یا سیتومتری تعیین کرد و به عنوان نشانگر آپوپتوز استفاده می شود.

یکی از نشانگرهای اولیه آپوپتوز ظاهر شدن بر روی غشای سیتوپلاسمی سلول است. گیرنده های انکسین. در سلول‌های آپوپتوز، فسفولیپید فسفاتیل‌دیزرین (PD) تغییر جهت داده و روی سطح غشای سلولی موضعی می‌یابد. محلی سازی PS روی سطح غشاء از شروع مشاهده می شود
مرحله اولیهآپوپتوز تا تجزیه کامل سلولی نوترکیب-
پروتئین ny annexin V (35-36 کیلو دالتون) که میل ترکیبی بالایی دارد
مقاومت در برابر PS در حضور یون های Ca +2. تماس با FS روی سطح
سلول های ty، انکسین V، کونژوگه به ​​یک فلوروکروم، خدمت می کند
نشانگر آپوپتوز Annexin V معمولاً در ترکیب با
پروپیدیوم یدید (PI)، که امکان شناسایی همزمان را فراهم می کند
سلول های دست نخورده (هر دو انکسین V و PI منفی)، سلول ها
در آپوپتوز "اوایل" هستند (آنکسین V مثبت،
منفی برای PI)، و سلول ها در اواخر آپوپتوز یا
در نکروز (مثبت برای انکسین V و PI).

CD95 Fas یا APO-1 یک گلیکوپروتئین گذرنده (45 کیلو دالتون) است که عضوی از خانواده گیرنده فاکتور نکروز تومور (TNF-α) است. آنتی ژن CD95 به مقدار قابل توجهی روی تیموسیت ها، لنفوسیت های CD4 +، CD8 + خون محیطی و به میزان کمتری روی لنفوسیت های B و سلول های NK بیان می شود. این آنتی ژن بر روی گرانولوسیت ها و مونوسیت ها نیز بیان می شود، اما بیان آن در پلاکت ها و گلبول های قرمز یافت نمی شود. گیرنده CD95 همچنین بر روی سلول های بافت های طبیعی و تومورها مشاهده می شود. اتصال CD95 توسط لیگاند Fas (Fas-L، CD95L) باعث القای آپوپتوز در سلول های بیان کننده آن می شود. آنتی بادی های مونوکلونال CD95 شناسایی جمعیت سلول های آماده آپوپتوز را با استفاده از فلوسیتومتری یا میکروسکوپ فلورسانس ممکن می سازد.

CD95L (Fas-L)- لیگاند Fas نامیده می شود، یک پروتئین غشایی (40 کیلو دالتون) است. همچنین یک فرم محلول از CD95L (sFas-L) وجود دارد که یک پروتئین (26 کیلو دالتون) از خانواده گیرنده های (TNF-α) است. این آنتی ژن توسط لنفوسیت های E سیتوتوکسیک و سلول های NK بیان می شود و همچنین بر روی بسیاری از سلول های تومور شناسایی شده است. اتصال Fas-L به گیرنده CD95 باعث ایجاد فرآیند آپوپتوز در سلول های هدف می شود. آنتی بادی های مونوکلونال CD95L شناسایی جمعیتی از سلول های آماده آپوپتوز را با استفاده از فلوسیتومتری یا میکروسکوپ فلورسانس ممکن می سازد.

Bcl-2- پروتئینی (26 کیلو دالتون) که بیان بیش از حد آن آپوپتوز را مسدود می کند. Bcl-2 یک پروتئین درون سلولی است که روی میتوکندری قرار دارد، بنابراین، برای تشخیص آن با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال، لازم است که نفوذپذیری اولیه غشای سلولی انجام شود.

پایان کار -

این موضوع متعلق به بخش:

روش های ارزیابی وضعیت ایمنی - کتاب درسی برای دانشجویان دانشکده های پزشکی، اطفال و پزشکی-پیشگیرانه

دانشگاه پزشکی ایالتی کورسک آژانس فدرال بهداشت و توسعه اجتماعی.. گروه ایمونولوژی و آلرژی بالینی..

اگر به مطالب اضافی در مورد این موضوع نیاز دارید یا آنچه را که به دنبال آن بودید پیدا نکردید، توصیه می کنیم از جستجو در پایگاه داده آثار ما استفاده کنید:

با مطالب دریافتی چه خواهیم کرد:

اگر این مطالب برای شما مفید بود، می توانید آن را در صفحه خود در شبکه های اجتماعی ذخیره کنید:

توییت

تمامی موضوعات این بخش:

وضعیت ایمنی و روش های ارزیابی آن
وضعیت ایمنی (IS) مجموعه ای از پارامترهای آزمایشگاهی است که فعالیت کمی و عملکردی سلول های سیستم ایمنی را مشخص می کند. شاخص های IP بسیار بالا هستند

اشیاء و روش های تحقیق ایمنی
موضوعات مطالعه روش های مطالعه ویژگی های فنوتیپیسلول های ایمونوکامپتنت فلو سیتوفلورومتری IMM

لنفوسیت ها
به عنوان بخشی از سلول های سیستم ایمنی، ایمونوسیت های واقعی همه انواع لنفوسیت ها هستند. انواع دیگر لکوسیت ها (نوتروفیل ها، ائوزینوفیل ها، بازوفیل ها، مونوسیت ها)، ماکروفاژها، پلاکت ها، ماست سل ها

سلول های MFS
مونوسیت های خون محیطی و ماکروفاژهای بافتی از سلول های بنیادی پرتوان مشتق می شوند. هنگامی که مونوسیت ها وارد جریان خون می شوند، طی 2-3 روز در بافت ها ته نشین می شوند و در آنجا به بافت تبدیل می شوند

سیستم ضد میکروبی وابسته به اکسیژن
مکانیسم های وابسته به اکسیژن گلوکز باکتری کش + NADP + → پنتوز فسفات + NADPH سیتوکروم b245 NADP + O2 ͛

سلول های واسطه
گرانولوسیت‌ها لکوسیت‌های پلی‌مورفونکلئر هستند که در خون گردش می‌کنند و مانند سلول‌های مونوسیت ماکروفاژ از یک سلول بنیادی میلوئیدی در مغز استخوان به وجود می‌آیند. سه نوع گرانو وجود دارد

روش های ایمونوفنوتیپ لنفوسیتی
هنگام مطالعه لنفوسیت ها، تعداد آنها در خون محیطی و فعالیت عملکردی آنها ارزیابی می شود. تعیین تعداد سلول ها با در نظر گرفتن آنتی ژن های تمایز روی و انجام می شود

جداسازی بخش سلول های تک هسته ای
روش جداسازی سلول های تک هسته ای بر اساس شناوری متفاوت سلول های خونی مختلف است. استفاده از گرادیان با چگالی مشخص، جداسازی سلول های تک هسته ای (لنفوسیت ها، مونوسیت ها، سلول های خونی) را ممکن می سازد.

فلوسیتومتری
روش فلوسایتومتری بر اساس اندازه گیری خواص نوری سلول ها است. سلول ها به تنهایی وارد جریان آرام در یک سلول جریان کوارتز می شوند، جایی که از نور متمرکز عبور می کنند.

روش ایمونوفلورسانس غیر مستقیم
ایمونوفلورسانس غیرمستقیم روشی مبتنی بر استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال نشاندار شده با فلوروکروم است که نتایج را با در نظر گرفتن لومینسانس خاص سلول ها در طول میکروسکوپ لومینسانس ارزیابی می کند.

روش ایمونوسیتوشیمی
روش های ایمونوسیتوشیمیایی مبتنی بر استفاده از آنزیم هایی مانند پراکسیداز و آلکالین فسفاتاز است. در حال حاضر، متداول ترین روش مورد استفاده PA (پراکسیداز-آنتی پراکسیداز)، st.

روش های مطالعه فعالیت عملکردی لنفوسیت ها
فعالیت عملکردی لنفوسیت ها با اثرات زیر ارزیابی می شود: توانایی تشخیص آنتی ژن ها، فعال سازی، تکثیر و تمایز سلول ها. توانایی تشخیص لنفوسیت

واکنش تبدیل لنفوسیت بلاست
تماس یک لنفوسیت با یک آنتی ژن خارجی یا میتوژن غیراختصاصی با واکنش فعال سازی و تبدیل بلاست (BTLR) همراه است. تکثیر سلولی با انتقال لنفوسیت های کوچک به بلاست

کشت مخلوط لنفوسیت ها
کشت همزمان لنفوسیت‌هایی که دارای مولکول‌های MHC-II از هاپلوتیپ‌های مختلف هستند باعث تبدیل بلاست و تکثیر آنها می‌شود. سلول های پاسخ دهنده متعلق به لنفوسیت های T هستند و توسط خارجی تحریک می شوند

پروتئین های پلاسمای خون
بیش از دویست پروتئین در پلاسمای انسان وجود دارد که بیشتر آنها از نظر ساختاری و عملکردی جدا شده و توصیف شده اند. پروتئین های پلاسما عمدتاً توسط گلیکوپروتئین ها نشان داده می شوند. با الکتروفو

گلوبولین ها
α1-آنتی تریپسین یک α1-گلوبولین است که بیش از 80 درصد از فعالیت آنتی پروتئاز سرم را تشکیل می دهد و جزء اصلی نوار α است. در نوشابه آب پنیر

گلوبولین ها
نیمه عمر هاپتوگلوبین 2-4 روز است. مقدار طبیعی هاپتوگلوبین در سرم 0.3 - 2.0 گرم در لیتر است. اصلی آن ارزش عملکردی- اتصال هموگلوبین آزاد در سرم

روش های الکتروفورز پروتئینی
الکتروفورز به طور گسترده ای برای تعیین نیمه کمی پروتئین های سرم و برای تشخیص پاراپروتئین ها استفاده می شود. الکتروفورز با سرم انجام می شود، نه با پلاسما، بنابراین

ایمونوگلوبولین ها
ایمونوگلوبولین ها (Ig) پروتئین های خاصی هستند که توسط سیستم ایمنی بدن در نتیجه واکنش به آنتی ژن های خارجی تولید می شوند و در سرم خون و سایر مایعات بیولوژیکی تجمع می یابند.

ایمونوگلوبولین های انسانی
خواص IgM IgG IgA IgD IgE شکل مولکولی پنتامر

روش های تعیین ایمونوگلوبولین ها
برای تعیین کمی محتوای Ig طبقات مختلف در سرم خون و سایر مایعات بیولوژیکی کاربرد گستردهگزینه های مختلفی برای تنظیم واکنش بارش در ژل پیدا کرد

پارپروتئین ها
پاراپروتئین ها ایمونوگلوبولین ها یا قطعات آنها تولید می شوند سلول های پلاسما، از یک رده سلولی خاص از لنفوسیت های B (مونوکلون) تشکیل شده است. پارپروتئین ها اغلب شکست می خورند

کرایوگلوبولین ها
کرایوگلوبولین ها پروتئین های پاتولوژیک پلاسما (10-80 میلی گرم در میلی لیتر) هستند که این خاصیت را دارند که در دمای کمتر از 37 درجه سانتی گراد به حالت ژله ای تبدیل شوند. اکثر کرایوگلوبولین ها کمپلکس های پلی کلونال هستند

روش های تعیین کمپلکس های ایمنی
اتصال Ig به آنتی ژن یک فرآیند فیزیولوژیکی است که منجر به تشکیل کمپلکس های ایمنی (IC) با هدف حذف آنتی ژن از بدن می شود. با این حال، تحت شرایط خاص

تعیین اتوآنتی بادی ها در تشخیص بیماری های بافت همبند سیستمیک
بر اساس مفاهیم مدرن، خودایمنی به شرایطی اطلاق می شود که در آن آنتی بادی ها یا لنفوسیت های حساس در بدن در برابر آنتی ژن های طبیعی بافت های خود ظاهر می شوند.

نشانگرهای سرولوژیکی اصلی بیماری های خود ایمنی
آنتی ژن نام اصلی ساختار مولکولی تابع ارزش تشخیصی

تعیین ANA در واکنش ایمونوفلورسانس غیرمستقیم
در یک آزمایش معمولی، سرم بیمار با سوبستراهای آنتی ژنی (بافت کبد یا کلیه حیوان، کشت سلولی Hep-2) انکوبه می شود تا به طور خاص مواد موجود را متصل کند.

ایمونوفلورسانس غیر مستقیم
ویژگی لومینسانس اختصاصی بودن آنتی ژن اهمیت بالینی dsDNA محیطی یا حاشیه ای، l

تعیین ANA و ENA با الایزا فاز جامد
سیستم تست ELISA ANA (UBI MAGIWELL) - برای تجزیه و تحلیل غربالگری آنتی بادی های ضد هسته ای تعیین نیمه کمی را فراهم می کند. طیف گسترده ایآنتی‌بادی‌های این کمپلکس در چاه‌ها جذب می‌شوند

بیماری های خود ایمنی
نوع پاتولوژی نتایج تحقیقات ایمونولوژیک. نوع آنتی بادی ها و فراوانی آنها (%)

سیستم سیتوکین
سیتوکین ها دسته ای از واسطه های پپتیدی محلول سیستم ایمنی هستند که برای توسعه، عملکرد و تعامل آن با سایر سیستم های بدن ضروری هستند. تعریف می کنند

اینترلوکین ها
IL-1 یک واسطه تنظیم کننده ایمنی است که در طی واکنش های التهابی، ضایعات بافتی و عفونت ها (سیتوکین پیش التهابی) آزاد می شود. IL-1 تکثیر و تمایز را تحریک می کند

اینترفرون ها
اینترفرون (IFN) به عنوان یک پروتئین با فعالیت ضد ویروسی کشف شده است. اثر ضد ویروسی IFN به دلیل توانایی آن در تداخل با تکثیر داخل سلولی ویروس در مرحله است

عوامل نکروز تومور
فاکتور نکروز تومور (TNF) واسطه اصلی تولید شده توسط بدن در پاسخ به باکتری های گرم منفی است. ماده فعال باکتری های گرم منفی LPS است که جزء سیستم سلولی است.

عوامل محرک مستعمره
تعدادی از سیتوکین های تولید شده در طول توسعه پاسخ ایمنی اثر تحریک کننده ای بر تمایز پیش سازهای مغز استخوان دارند. این سیتوکین ها سیتوکین های محرک کلنی نامیده می شوند.

عوامل رشد
فاکتور رشد تبدیل کننده (TGFβ) خانواده ای از پپتیدهای مرتبط با اثرات متعدد بر روی فرآیندهای عمومی تنظیم کننده رشد و مورفوژنز است. TGFβ - سیتوکین اصلی

روش های تعیین سیتوکین ها
تعیین محتوای سیتوکین در مایعات بیولوژیکی مختلف انجام شده است پراهمیتدر ارزیابی فعالیت عملکردی سلول های ایمنی و تنظیم پاسخ ایمنی. در کلمات جداگانه

سیستم مکمل
سیستم کمپلمان مجموعه ای از پروتئین های سرم خون است که قادر به خودسازماندهی و واسطه واکنش های ایمنی هومورال و فاگوسیتوز است. در حال حاضر مشخص است که

روشهای تعیین فعالیت مکمل
فعالیت کل (تیتر) مکمل در واکنش همولیز با استفاده از گلبول های قرمز گوسفند تعیین می شود. مکمل موجود در سرم آزمایش باعث همولیز در گوسفند حساس می شود

تیتر مکمل در 50% HE
همولیز، % همولیز K، % همولیز K، % همولیز K، % K

تعیین اجزای مکمل
برای تعیین اجزای مکمل از الایزا و روش کدورت سنجی استفاده می شود که اجرای آن در دستورالعمل های پیوست شده به سیستم های تست تشخیصی توضیح داده شده است. که در عمل بالینیبر

اجزای مکمل
جزء مکمل تظاهرات بالینیکمبود C1 معمولاً باعث اختلالات مهم بالینی نمی شود، زیرا غذا می خورد

روش های مطالعه فعالیت فاگوسیتی گرانولوسیت ها
مهمترین ویژگیعملکرد گرانولوسیت ها ارزیابی فعالیت فاگوسیتیک آنها است. کاهش آن ممکن است در نتیجه کمبود فاکتورهای اپسونیزاسیون سرم (آنتی بادی ها، مکمل).

تست NST
تست تترازولیوم نیتروبلو (تست NBT) برای شناسایی به اصطلاح گرانولوسیت ها و مونوسیت های فعال استفاده می شود. فعال شدن فاگوسیت ها بر اساس افزایش شدید واکنش های اکسیداتیو است

روش تحقیق
معرف ها و مواد لازم: KN 42 OPO 44 0، Na 42 OPO 44 0، NaCI، گلوکز، نیترو بلو تترازولیوم، هپارین، متیل الکل، محلول آبی 1% متیلن گرین (در صورت

تعیین میلوپراکسیداز
میلوپراکسیداز تعدادی از سوبستراها (بنزیدین، اورتوفنیل دیامین) را در حضور پراکسید هیدروژن اکسید می کند که با واکنش رنگی همراه است. میلوپراکسیداز آنزیمی است که در گرانول های فاژ وجود دارد

لومینسانس شیمیایی
لومینسانس خود به خودی که در طی واکنش های شیمیایی به دلیل انرژی مواد واکنش دهنده رخ می دهد، نورتابی شیمیایی (CL) نامیده می شود. در تمام بافت ها و سلول های یک موجود زنده ذاتی است، تا زمانی که در آنها وجود داشته باشد

تعیین محتوای IgE
در میان روش‌های ایمونولوژیک برای ارزیابی پارامترهای غیراختصاصی وضعیت ایمنی در اکثر بیماری‌های آتوپیک، تعیین مقدار IgE تام از اهمیت بالایی برخوردار است. با این حال، من موافقم

آزمایش گرانولاسیون بازوفیل
در بیماران آلرژیک، بخش قابل توجهی از IgE توسط لکوسیت های مختلف از طریق گیرنده های Fc ​​محدود می شود. وجود سلول های حاوی آنتی بادی نشان دهنده حساسیت آنها به آلرژن مربوطه است. ب

تست تحریک آنتی ژن سلولی بازوفیل - CAST
در مورد واکنش‌های آلرژیک با واسطه IgE، مکانیسم تحریک با اتصال ماده حساسیت‌زا به مولکول‌های خاص IgE روی سطح بازوفیل یا بازوفیل آغاز می‌شود. ماست سل ها. E

واکنش مهار مهاجرت لکوسیت
این واکنش برای شناسایی لنفوسیت های حساس به آلرژن مشکوک انجام می شود. لنفوسیت های حساس، هنگام تعامل با یک آلرژن خاص، واسطه ها (FPML) را آزاد می کنند.

وظیفه شماره 1
یک بیمار 23 ساله از کورک های مکرر موضعی روی صورت و پاها شکایت دارد. به سرماخوردگی های مکرر (تا 7-8 بار در سال)، بثورات تبخال روی لب ها اشاره می کند.

مشکل شماره 2
بیمار N.، 22 ساله، با شکایت از عفونت های ویروسی حاد تنفسی مکرر (تا 7 بار در سال)، که اغلب با تشدید برونشیت انسدادی مزمن همراه است، به یک ایمونولوژیست مراجعه کرد. انجام آنتی باکتریال

مشکل شماره 3
بیمار T.، 27 ساله، به طور مکرر در مورد عفونت های ویروسی حاد تنفسی عود کننده، تراکئوبرونشیت، ضعف و بی حالی با پزشک مشورت کرد. از سرگذشت مشخص شد که در طول سال شش بار، دو بار، از ARVI رنج می برد

مشکل شماره 4
بیمار K، 45 ساله. تشخیص: لوپوس اریتماتوز سیستمیک. یک مطالعه ایمونولوژیک نشان داد: لکوسیت - 5.5 x 109 / L لنفوسیت - 37٪، abs. 2.03 x 109

مشکل شماره 5
یک کودک 5 ساله متعلق به گروه کودکان مکرر و طولانی مدت، عود ARVI یک بار در ماه، کانون های عفونت مزمن است. سینوزیت مزمن، آدنوئیدیت)، غدد لنفاوی دهانه رحم بزرگ شده است

در طول معاینه ایمونولوژیک
آزمایشات سطح اول تعداد کل گلبول های سفید خون. Leukoformula T-lymphocytes لنفوسیت های B

تجزیه و تحلیل عمومی خون
واحدهای Norm SI هموگلوبین M F 130.0-160.0 120.0-140.0 گرم در لیتر

نشانگرهای CD اصلی سلول های سیستم ایمنی
نشانگر CD جمعیت سلولی درصد سلول های CD2 T و سلول های NK

زیرجمعیت لنفوسیت در کودکان
لنفوسیت ها 4-5 روز - 3 ماه 4-8 ماه 1-2 سال 2-5 سال بالای 5 سال همه

سطح ایمونوگلوبولین ها در سرم خون بزرگسالان
IgM IgG IgA IgE 1.3 - 1.7 گرم در لیتر 12 - 14 گرم در لیتر 2.1 - 2.9 گرم در لیتر

پانل MAST آلرژی (تست آلرگوجاذب چندگانه) برای شناسایی ایمونوگلوبولین های خاص به آلرژن های گروه های مختلف
پانل Food Ig E پانل توسعه یافته روسی Ig E پانل Food Ig G پانل روسی جهانی Ig E

واژه نامه اصطلاحات
Avidity قدرت اتصال یک آنتی ژن به یک آنتی بادی است که با میل ترکیبی و ظرفیت آنتی بادی ها تعیین می شود. آگلوتیناسیون - تجمع به

فهرست اختصارات و نمادها
AG – آنتی ژن AOK – سلول تشکیل دهنده آنتی بادی APC – سلول ارائه دهنده آنتی ژن AT – آنتی بادی VLS – وابران رگ لنفاوی ZVK - ویروس آلوده

1

45 کودک 3 تا 15 ساله مورد بررسی قرار گرفتند. هدف از این مطالعه تعیین آمادگی آپوپتوز لنفوسیت ها و نوتروفیل های خون محیطی با تعیین نشانگرهای آپوپتوز CD95، CD95L، BSL2 بود. هنگام ارزیابی آپوپتوز سلول های ایمنی، کاهش آمادگی برای مرگ سلولی برنامه ریزی شده لنفوسیت ها و افزایش گرانولوسیت های نوتروفیل مشاهده شد. بارزترین تغییرات در گروه سنی 7 تا 15 سال با سابقه بیماری بیش از 3 سال ثبت شده است. داده‌های به‌دست‌آمده ممکن است نشانه‌ای از سرکوب مرگ برنامه‌ریزی‌شده لنفوسیت‌های خود واکنشی در بافت پانکراس باشد که به طولانی‌تر شدن پاسخ ایمنی کمک می‌کند. افزایش نسبت سلول‌های لکوسیتی که CD95L را بیان می‌کنند ممکن است به افزایش فرآیندهای مرگ سلولی برنامه‌ریزی‌شده در سلول‌های β جزایر پانکراس که با سلول‌های دارای ایمنی مناسب نفوذ کرده‌اند، کمک کند.

آپوپتوز نوتروفیل

آپوپتوز لنفوسیتی

دیابت نوع 1

1. Pekareva E. V. نشانگرهای آپوپتوز در بیماران دیابت قندینوع 1 در شروع بیماری / E. V. Pekareva و همکاران // دیابت شیرین. – 2009. – شماره 4. – ص 86-89.

2. Pekareva E. V. نقش آپوپتوز در پاتوژنز دیابت نوع 1 / E. V. Pekareva، T. V. Nikonova، O. M. Smirnova // دیابت شیرین. – 1389. – شماره 1. – ص45-48.

3. Adeghate E. به روز رسانی در مورد علت و اپیدمیولوژی دیابت شیرین / E. Adeghate, P. Schattner, E. Dunn // Ann NY. Acad Sci, 2006. – Vol. 1084. - ص 1-29.

4. اهمیت بالینی آپوپتوز نوتروفیل در خون محیطی بیماران مبتلا به دیابت نوع 2 / S. Sudo و همکاران. // آزمایشگاه هماتول. 2007; 13 (3): 108-12 (کاهش یافته).

5. Filep J. G. آپوپتوز نوتروفیل: هدفی برای افزایش حل التهاب / J. G. Filep, E. l. Kebir // J. Cell Biochem. – 2009. – جلد. 108. - ص 1039-1046.

6. پاسخ نوتروفیل پلی‌مورفونوکلئر انسانی به Burkholderia pseudomallei در افراد سالم و دیابتی / S. Chanchamroen و همکاران. // Immun را آلوده کنید. – 2009. – جلد. 77. - ص 456-463 (آپوپتوز کاهش می یابد).

7. تأثیر آپوپتوز لنفوسیتی در دیابت شیرین / K. A. Awadhesh et al. // مجله آسیایی علوم پزشکی. – 2011. – شماره 2. – ص 1-6.

8. التهاب در موش های دیابتی نوع 1 پایدارتر است / D. T. Graves و همکاران. // جی. دنت. Res., 2005. – Vol. 84. - ص 324-328.

9. Juliana C. Alves عفونت در بیماران مبتلا به دیابت شیرین: مروری بر پاتوژنز / C. Juliana، C. Janine، C. Alves // هندی J. Endocrinol. متاب. – مارس 2012. - تامین کننده l1. – شماره 16. – ص 27–36.

10. Luo H. R. آپوپتوز نوتروفیل سازنده: مکانیسم ها و تنظیم / H. R Luo, F. Loison // Am. J. هماتول. – 2008. – جلد. 83. - ص 288-295.

معرفی

دیابت نوع 1 (T1DM) یک بیماری چند ژنیک و چند عاملی است که با تشکیل اتوآنتی بادی ها و لنفوسیت های T خودواکنشی به سلول های β پانکراس مرتبط است.

پیوندهای پیشرو در پاتوژنز ضایعات خود ایمنیاختلال در تنظیم ایمنی و مرگ سلولی برنامه ریزی شده است.

آپوپتوز کنترل شده امروزه به عنوان مکانیسم اصلی برای حفظ تعادل بهینه سلول ها در محل التهاب، محدود کردن گسترش کلون های فعال شده و جلوگیری از ایجاد واکنش های خود ایمنی در نظر گرفته می شود. اگر نقصی در اجرای آن رخ دهد، سلول‌های ایمنی فعال شده می‌توانند تجمع کنند و منجر به بروز بیماری‌های خودایمنی شوند.

هدف از مطالعهبررسی نشانگرهای فعال‌سازی آپوپتوز CD95، CD95L، Bsl2 بر روی لنفوسیت‌های خون محیطی و نوتروفیل‌ها در دیابت نوع 1 در کودکان.

مواد و روش تحقیق

یک نظرسنجی از 45 کودک مبتلا به دیابت نوع 1 3-15 ساله انجام شد. گروه اول شامل 20 کودک 3-6 ساله (پیش دبستانی)، گروه II - 12 کودک 7-15 ساله (کودکان مدرسه) با طول مدت بیماری کمتر از 3 سال، گروه III - 13 کودک 7-15 ساله (کودکان مدرسه) با سابقه بیماری بیش از 3 سال. گروه کنترل شامل 30 کودک سالم 3-6 (15) و 7-15 (15) سال بود. این مطالعه بر اساس بخش غدد درون ریز بیمارستان بالینی شهر کودکان به نام انجام شد. جی.کی فیلیپسکی، استاوروپل.

برای ارزیابی مرگ برنامه ریزی شده سلولی، تعداد لنفوسیت ها و گرانولوسیت های نوتروفیل بیانگر نشانگرهای آپوپتوز شناسایی شد. لنفوسیت ها بر روی یک گرادیان چگالی Ficoll-Paque، نوتروفیل ها - بر روی یک گرادیان چگالی دوگانه Ficoll-Paque و Ficoll-urografin (GE Healthcare، سوئد) جدا شدند. سوسپانسیون سلولی سه بار در محیط RPMI-1640 (Vector-Best, Russia) شستشو شد. در کشت لنفوسیت‌ها و نوتروفیل‌ها، تعداد سلول‌های بیان‌کننده CD95، CD95L، Bsl2 با فلوسیتومتری با استفاده از آنتی‌بادی‌های مونوکلونال (Invitrogen، ایالات متحده آمریکا) ارزیابی شد.

برای تجزیه و تحلیل آماری داده ها از بسته نرم افزاری Primer of Biostat 4.0 Attestat 10.5.1 استفاده شد. برای ارزیابی تفاوت های بین گروهی، از تحلیل واریانس اندازه گیری های مکرر با محاسبه معیارهای نیومن-کولز و دان استفاده شد.

مقادیر کمی به صورت غیر نرمال توزیع شده و به عنوان دامنه متوسط ​​و بین چندتی (صدک 25 و 75) (Me (Q1-Q)) ارائه شد. تفاوت در p<0,05.

نتایج و بحث آن

این کار کاهش تعداد لنفوسیت های بیان کننده گیرنده های Fas (CD95) را در بیماران همه گروه ها در مقایسه با کودکان سالم نشان داد (جدول 1). حداقل شاخص ها در کودکان 7-15 ساله با سابقه بیماری بیش از 3 سال مشاهده شد (جدول 1).

میز 1

شاخص‌های آپوپتوز لنفوسیتی در کودکان مبتلا به دیابت نوع 1

	گروه های بالینی
3-6 سال	T1DM (I) (n=20)	17,7(15,9-19,43) * **	7,4(5,81- 8,94) * **	70,2(68,56-71,76) * **
	گروه کنترل	28,0(26,08-30,0)	9,2(8,04- 10,25)	65,9(62,82-69,05)
7-15 سال		20,5(17,94-23,02) * **	11,6(10,12-13,14) * **	70,3(65,72-74,9) * **
		13,9(10,04-17,73) * **	15,6(14,26-16,87) * **	79,5(75,47-83,59) * **
	گروه کنترل	26,5 (24,20-28,84)	8,14 (6,49-9,78)	60,3(56,97-63,66)

*- پ<0,05 - по сравнению с контрольной группой, **- پ<0,05 - по сравнению с группой

هنگام ارزیابی سطح بیان مارکرهای ضد آپوپتوز (Bsl2)، افزایش آن در لنفوسیت های کودکان همه گروه ها آشکار شد، در دانش آموزان مدرسه ای با طول مدت بیماری بیش از 3 سال، که همچنین نشان دهنده نقض Fas- است. آپوپتوز وابسته در کودکان مبتلا به دیابت نوع 1، که منجر به کند کردن روند مرگ سلولی اشکال خود واکنشی لنفوسیت ها می شود.

نتایج ما ممکن است نشانه غیرمستقیم سرکوب مرگ برنامه ریزی شده لنفوسیت های فعال در بافت پانکراس باشد که به طولانی شدن پاسخ ایمنی کمک می کند.

سطح آمادگی آپوپتوز سلول های لنفاوی بستگی به طول مدت بیماری دارد و در کودکان مبتلا به T1DM برای بیش از 3 سال کاهش می یابد.

قبلا نشان داده شده بود که در دیابت ملیتوس مقاومت لنفوسیت ها به آپوپتوز وجود دارد که ممکن است ماهیت و مدت پاسخ خود ایمنی را توضیح دهد.

در کشت لنفوسیت های کودکان مبتلا به دیابت، افزایش درصد لنفوسیت های بیان کننده CD95L (جدول 1) در مقایسه با گروهی از کودکان سالم مشاهده شد. بالاترین میزان در کودکان 15-7 ساله با سابقه بیماری بیش از 3 سال تعیین شد (جدول 1).

مشخص است که در T1DM، جزایر پانکراس توسط سلول‌های ایمنی که طیف وسیعی از سیتوکین‌ها را تولید می‌کنند، نفوذ می‌کنند که با بیان ناهنجار گیرنده‌های غشایی همراه است. تحت تأثیر افزایش غلظت گلوکز و سیتوکین ها، سلول های β شروع به بیان CD95 روی سطح خود می کنند که عملاً به طور معمول وجود ندارد.

افزایش بیان CD95L روی سلول‌های لنفاوی ممکن است به فرآیند آپوپتوز بارزتر در سلول‌های β پانکراس و حذف بعدی آنها کمک کند.

در سال های اخیر نشان داده شده است که گرانولوسیت های نوتروفیل نقش فعالی در تشکیل التهاب خود ایمنی دارند. واکنش نوتروفیل ها با هدف بومی سازی و حذف اتوآنتی ژن ها تا حد زیادی به قدرت و مدت اثر آنتی ژنی بر روی سیستم ایمنی و همچنین سطح اولیه فعالیت عملکردی سلول ها بستگی دارد.

ما دریافته‌ایم که سیر دیابت در کودکان با افزایش درصد نوتروفیل‌های بیان‌کننده نشانگرهای آپوپتوز (CD95) و کاهش نسبت سلول‌های دارای پروتئین ضد آپوپتوز Bsl2 در سطح آنها همراه است (جدول 2).

جدول 2

شاخص های آپوپتوز نوتروفیل در کودکان مبتلا به دیابت نوع 1

	گروه های بالینی
3-6 سال	T1DM (I) (n=20)	75,1(71,49-78,72) * **	9,5 (8,63- 10,32) * **	3,68 (3,46-3,90 * **
	گروه کنترل	59,2 (56,31- 62,01)	7,35 (6,58- 8,12)
7-15 سال	T1DM، تجربه بیماری کمتر از 3 سال (II) (n=12)	77,6(71,15-83,99) * **	9,5(8,14-10,92) * **	3,99(2,9- 5,08) * **
	T1DM، تجربه بیماری بیش از 3 سال (III) (n=13)	87,9(84,24-91,63) * **	12,1(10,22-13,96) * **	2,78(2,36-3,19) * **
	گروه کنترل	58,43(54,95- 1,90)

*- پ<0,05 - по сравнению с контрольной группой, **- پ<0,05 - по сравнению с группой III (آزمون نیومن-کولز، تست دان).

با ویژگی های مقایسه ای بین گروهی، حداکثر مقادیر CD95 (ص<0,05) и минимальные Bsl2 (p<0,05) отмечены у детей 7-15 лет с длительностью заболевания более 3-х лет.

افزایش درصد لکوسیت‌های پلی‌مورفونوکلئر با CD95L در سطح آنها مشاهده شد. بیشترین میزان در دانش آموزان با سابقه بیماری بیش از 3 سال مشاهده شد.

نتایج مطالعات آپوپتوز PMN در دیابت ملیتوس ارائه شده در ادبیات متناقض است. شواهدی مبنی بر افزایش میزان آپوپتوز نوتروفیل های خون محیطی در دیابت T1 و T2 وجود دارد.

با این حال، تعدادی از مطالعات کاهش آپوپتوز گرانولوسیت های نوتروفیل را در بیماران مبتلا به دیابت نوع 1، به ویژه در شرایط هیپرگلیسمی، که احتمالاً شروع کننده فرآیندهای التهاب مزمن همراه با آسیب بافتی است، و همچنین مستعد ابتلا به عفونت های باکتریایی طولانی مدت در بیماران مبتلا به دیابت نوع 1 را نشان داده است. 1 دیابت

نتایج ما نشان می‌دهد که بیماران مبتلا به T1DM مستعد افزایش PMN به آپوپتوز هستند، که ممکن است تظاهری از یک واکنش محافظتی با هدف از بین بردن "زیاد" نوتروفیل‌های فعال باشد، که تشکیل آن آسیب بافتی را افزایش می‌دهد.

افزایش پتانسیل آپوپتوز گرانولوسیت های نوتروفیل بازتابی از دخالت فعال PMN در ایمونوپاتوژنز بیماری است.

افزایش بیان CD95L بر روی گرانولوسیت‌های نوتروفیل در بیماران دیابتی ممکن است نه تنها به حذف سلول‌های پانکراس، بلکه سلول‌های لکوسیتی خود کمک کند.

بنابراین، هنگام ارزیابی آپوپتوز سلول های ایمنی در کودکان مبتلا به دیابت نوع 1، کاهش آمادگی برای مرگ سلولی برنامه ریزی شده لنفوسیت ها و افزایش لکوسیت های پلی مورفونکلئر ایجاد شد.

بارزترین تغییرات در گروه سنی 7-15 سال با سابقه بیماری بیش از 3 سال ثبت شده است. در کودکان همه گروه‌ها، افزایش نسبت سلول‌های لکوسیتی که CD95L را بر روی سطح آنها بیان می‌کنند، مشاهده شد.

مشخص شده است که PMN ها پیوندی بین ایمنی ذاتی و تطبیقی ​​هستند و نقش اصلی را در محافظت ضد باکتری ایفا می کنند.

افزایش فعالیت آپوپتوز آنها می تواند باعث مقاومت کم مرتبط با سن و حساسیت کودک به بیماری های عفونی شود.

کاهش تعداد سلول های لنفوئیدی حساس به القای آپوپتوز نشانه غیرمستقیم سرکوب مرگ برنامه ریزی شده سلولی و اختلال در حذف اشکال فعال لنفوسیت ها است.

نتیجه گیری

1. در کودکان مبتلا به دیابت نوع 1، کاهش آمادگی آپوپتوز لنفوسیت های خون محیطی، افزایش گرانولوسیت های نوتروفیل وجود دارد که با تغییر در بیان CD95 و Bsl2 همراه است و بستگی به مدت زمان دارد. بیماری.

2. افزایش بیان CD95L بر روی لنفوسیت‌ها و گرانولوسیت‌های نوتروفیل در دیابت نوع 1 ممکن است به افزایش فرآیندهای مرگ سلولی برنامه‌ریزی‌شده در سلول‌های β جزایر پانکراس نفوذ کرده با سلول‌های دارای ایمنی کمک کند.

داوران:

Shchetinin E.V.، دکتر علوم پزشکی، پروفسور، معاون علمی و نوآوری دانشگاه پزشکی ایالتی سنت، رئیس بخش HBO آموزش عالی حرفه ای "دانشگاه پزشکی دولتی استاوروپل" وزارت بهداشت فدراسیون روسیه ، استاوروپل.

Golubeva M.V.، دکترای علوم پزشکی، پروفسور، رئیس بخش بیماری های عفونی کودکان موسسه آموزشی عالی حرفه ای HBO "دانشگاه پزشکی دولتی استاوروپل" وزارت بهداشت فدراسیون روسیه، استاوروپل.

پیوند کتابشناختی

Barycheva L.Yu., Erdni-Goryaeva N.E. نشانگرهای آپوپتوز سلول های ایمنی در دیابت نوع 1 در کودکان // مشکلات مدرن علم و آموزش. – 2013. – شماره 4.;
آدرس اینترنتی: http://science-education.ru/ru/article/view?id=9953 (تاریخ دسترسی: 2019/07/18). مجلات منتشر شده توسط انتشارات "آکادمی علوم طبیعی" را مورد توجه شما قرار می دهیم.