برای ارزیابی وضعیت متابولیسم پروتئین و همچنین عملکرد اندام های فردی، در سرم خون تعیین می شود. پروتئین کلو فراکسیون های آن، اوره، کراتینین و سایر اجزای نیتروژن باقیمانده.
برای تعیین پروتئین کل سرم خون از روش های احتراق (کجلدالمتری)، رفرکتومتری، اسپکتروفتومتری و ... استفاده می شود و در آزمایشگاه های دامپزشکی عمدتاً از روش های رفرکتومتری و رنگ سنجی (بیورت) استفاده می شود. هنگام تعیین فراکسیون های پروتئینی سرم خون، از روش های الکتروفورتیک (روی ژل آگار، در ژل پلی آکریل آمید، روی کاغذ، استات سلولز)، کدورت سنجی (نمکی کردن با نمک های خنثی)، ته نشینی (تفکیک پروتئین ها به کسری با اولتراسانتریفیوژ) و غیره استفاده می شود. .
که در عمل بالینیروش های الکتروفورتیک و کدورت سنجی اغلب برای جداسازی پروتئین ها استفاده می شود. با الکتروفورز روی کاغذ، 5 فراکسیون اصلی آلبومین، ap، (X2، P- و 7-گلوبولین ها) به دست می آید. معایب این روش طول مدت آنالیز است (نتایج تحقیق فقط در روز 2-3 بدست می آید). با الکتروفورز بر روی ژل آگار، جداسازی شفاف‌تری از فراکسیون‌های پروتئینی نسبت به کاغذ حاصل می‌شود، با این حال، پیچیدگی فرآیند تهیه ژل اجازه نمی‌دهد این روش به طور گسترده در عمل آزمایشگاهی معرفی شود. با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل پلی آکریل آمید می توان حدود 30 فراکسیون پروتئینی را بدست آورد.عیب روش سختی آن است. کمی سازیکسرهای حاصل
روش الکتروفورز بر روی استات سلولز به عنوان یکپارچه شناخته شده است. در غیاب دستگاه الکتروفورز در آزمایشگاه، روش‌هایی برای رسوب دادن پروتئین‌ها با نمک‌های خنثی و به دنبال آن اندازه‌گیری کدورت سنجی سطح کدورت محیط روی FEC استفاده می‌شود. نسبت آلبومین ها و گلوبولین ها در سرم خون با آزمایشات پروتئینی رسوبی (سوبلیمیت، با سولفات روی، تیمول و غیره) تعیین می شود.
نیتروژن باقیمانده به مقدار نیتروژنی اطلاق می شود که پس از رسوب پروتئین در خون باقی می ماند. این شامل نیتروژن اوره، اسیدهای آمینه، کراتینین، کراتین، اسید اوریک، اندیکان، آمونیاک، پلی پپتیدها، نوکلئوتیدها، آمین های بیوژنیک و سایر محصولات متابولیسم پروتئین. قسمت اصلی نیتروژن باقیمانده خون نیتروژن اوره است که حداقل 1/2 از کل نیتروژن غیر پروتئینی خون را تشکیل می دهد.
حدود 1/4 از نیتروژن باقیمانده نیتروژن از اسیدهای آمینه، کراتین و کراتینین است. تعیین تک تک کسرهای نیتروژن باقیمانده، به ویژه اوره، نیتروژن آمین، کراتین و کراتینین، اسید اوریک و اندیکان، از اهمیت بالینی بالایی برخوردار است.
برای تعیین اوره در خون، ادرار و سایر مایعات بیولوژیکی از دی استیل مونوکسیم، اوره آز، هیپوکلریت، هیپوبرومید، زانتهیدرول و سایر روش ها استفاده می شود. متداول ترین روش رنگ سنجی است که بر اساس برهمکنش اوره با دی استیل مونوکسیم برای تشکیل محصولات رنگی (واکنش فیرون) است. با این حال، روش‌های تعیین اوره با استفاده از آنزیم اوره آز دقیق‌تر و خاص‌تر هستند.
برای تعیین پروتئین، آلبومین، اوره، کراتینین و همچنین سایر شاخص های بیوشیمیایی، می توان از نورسنج های بازتابنده و نوارهای تشخیصی سیستم "شیمی خشک" و اتوآنالایزرهای بیوشیمیایی استفاده کرد. لوله های جمع آوری خون نباید حاوی مواد شوینده یا سایر مواد شوینده باشند. آنها را بسته نگه دارید.
روش‌های ارزیابی وضعیت متابولیسم پروتئین:
- روش‌هایی برای ارزیابی وضعیت متابولیسم آب- الکترولیت و مواد معدنی
- بیماری های متابولیسم پروتئین، کربوهیدرات و چربی چاقی - چربی
- ارزیابی وضعیت پوشش گیاهی پس از آتش سوزی شدید ذغال سنگ نارس
- تعیین فراکسیون پروتئین در سرم خون به روش کدورت سنجی (نفلومتریک).
- تجربه ارزیابی کمی شرایط دینامیکی و پایداری کاشت کاج در اشیاء هیدروملیوراسیون
تعیین پروتئین کل در سرم، پلاسما، خون و سایر مایعات بیولوژیکی.
تمام روش های شناخته شده برای تعیین غلظت پروتئین کل در سرم خون به گروه های اصلی زیر تقسیم می شوند:
1. آزوتومتری، بر اساس تعیین میزان نیتروژن پروتئین - روش کجلدال و اصلاحات آن.
2. روش های تعیین تراکم سرم نادرست است، زیرا چگالی نه تنها به محتوای پروتئین بستگی دارد.
3. توزین - پروتئین های سرم خون رسوب می کنند، تا وزن ثابت خشک می شوند و روی ترازوی تحلیلی وزن می شوند. روش ها کار فشرده هستند و نیاز دارند مقدار زیادسرم
4. Refractometric - کامل نیست، زیرا بخشی از شکست توسط سایر اجزای سرم تعیین می شود.
5.رنگ سنجی - رایج ترین روش بیورت است که یکپارچه است.
6. روش های دیگر - نفلومتری، پلاریمتری، اسپکتروفتومتری - به طور گسترده مورد استفاده قرار نمی گیرند.
صنعت داخلی تولید کیت هایی را برای بررسی غلظت پروتئین کل سرم خون با استفاده از واکنش بیورت راه اندازی کرده است. از همین اصل برای اندازه گیری سطح پروتئین کل در مایعات بیولوژیکی با استفاده از معرف های عرضه شده توسط شرکت های مختلف استفاده می شود.
تعیین پروتئین کل در سرم خون با استفاده از واکنش بیورت.
معرف ها
محلول 1.0.9% کلرید سدیم / 0.9 گرم کلرید سدیم در 100 میلی لیتر آب مقطر.
محلول هیدروکسید سدیم 2.0.2 نیوتن، بدون دی اکسید کربن / 20 میلی لیتر هیدروکسید سدیم 1 نیوتن، با آب مقطر جوشانده به 100 میلی لیتر می رسد.
3. معرف بیوره: 4.5 گرم نمک روشل در 40 میلی لیتر محلول هیدروکسید سدیم 0.2 نیوتن حل می شود، سپس 1.5 گرم سولفات مس و 0.5 گرم هیدروکسید سدیم اضافه می شود. در ظرف شیشه ای تیره نگهداری شود، محلول پایدار است.
محلول 4.0.5% یدید پتاسیم در محلول هیدروکسید سدیم 0.2N.
5. محلول کاری معرف بیوره: 20 میلی لیتر معرف بیوره با 80 میلی لیتر محلول یدید پتاسیم مخلوط می شود. راه حل قفسه.
6. محلول استاندارد آلبومین از سرم انسان یا گاو: محلول آلبومین 10 درصد در محلول کلرید سدیم 9/0 درصد /1 میلی لیتر محلول حاوی 1/0 گرم پروتئین - 100 گرم در لیتر/.
اصل روش.
پروتئین ها در یک محیط قلیایی با سولفات مس واکنش می دهند و ترکیبات رنگی ایجاد می کنند رنگ بنفش\واکنش بیورت/.
روش تعیین: 0.1 میلی لیتر سرم را به 5 میلی لیتر محلول کاری معرف بیورت اضافه کنید و مخلوط کنید، از تشکیل کف جلوگیری کنید. بعد از 30 دقیقه \و حداکثر یک ساعت\ روی FEC در یک کووت با ضخامت لایه 1 سانتی متر در طول موج 540-560 نانومتر \ فیلتر نور سبز\ در مقابل کنترل اندازه گیری می شود.
کنترل: 0.1 میلی لیتر محلول کلرید سدیم 0.9٪ به 5 میلی لیتر محلول کار معرف بیورت اضافه می شود، سپس به عنوان آزمایش پردازش می شود.
محاسبه طبق برنامه کالیبراسیون انجام می شود.
مقادیر طبیعی پروتئین کل 65-85 گرم در لیتر است.
ساخت نمودار کالیبراسیون.
معرف:محلول استاندارد آلبومین 10% در محلول 0.9% کلرید سدیم که 1 میلی لیتر آن حاوی 0.1 گرم پروتئین است. برای تهیه معرف، می توانید از آلبومین لیوفیلیزه از کیت "Bilirubin-standard" Lachem استفاده کنید. دستورالعمل کیت محتوای آلبومین را بر حسب میلی گرم نشان می دهد. بر این اساس، ما محاسبه می کنیم که برای به دست آوردن 0.1 گرم پروتئین در 1 میلی لیتر محلول، چه مقدار کلرید سدیم 0.9٪ باید به آلبومین معین اضافه شود.
مثلا:دستورالعمل کیت نشان می دهد که آلبومین لیوفیلیزه حاوی 160 میلی گرم آلبومین است. محاسبه: محلول استاندارد 10% حاوی 10 گرم یا 10000 میلی گرم در 100 میلی لیتر است.
در استاندارد 160 میلی گرم در X
X = 1.6 میلی لیتر، یعنی. 1.6 میلی لیتر کلرید سدیم 0.9٪ را به بطری حاوی آلبومین اضافه کنید و متوجه شوید که 1 میلی لیتر از این محلول حاوی 0.1 گرم پروتئین است.
پس از تهیه محلول استاندارد، طبق جدول یک سری رقت کاری از آن تهیه می کنیم:
محاسبه غلظت پروتئین بر حسب گرم در لیتر.
1 میلی لیتر محلول استاندارد 10 درصد حاوی 0.1 گرم پروتئین است
0.04 گرم پروتئین در 1 میلی لیتر محلول موجود است
X در 1000 میلی لیتر
از هر رقت کاری غلظت مربوطه، 0.1 میلی لیتر را در 3-4 لوله آزمایش، یعنی. هر تعیین در 3-4 موازی انجام می شود و 5 میلی لیتر از معرف بیورت به هر لوله آزمایش اضافه می شود. بعد از 30-60 دقیقه روی FEC در مقابل شاهد رنگ سنجی کنید. برای هر غلظت 3-4 قرائت چگالی نوری دریافت می کنیم. ما میانگین حسابی را از آنها می یابیم، که قبلاً خوانش های انحرافی شدید را کنار گذاشته بودیم.
ما یک نمودار کالیبراسیون می سازیم: در امتداد محور آبسیسا غلظت پروتئین را بر حسب گرم در لیتر رسم می کنیم، یعنی. 40-60-80-100 گرم در لیتر؛ و در امتداد محور ارتین، قرائت های چگالی نوری به دست آمده در FEC \میانگین حسابی/ هستند.
منحنی کالیبراسیون باید مانند یک خط اولیه باشد که از 3 نقطه کشیده شده است. این منحنی بر روی سرم های اهدا کننده \ حداقل 3-4 تعیین\ آزمایش شده است. پس از دریافت قرائت های عادیپروتئین، یعنی در محدوده نرمال؛ منحنی کالیبراسیون ساخته شده در کار استفاده می شود.
توجه داشته باشید.
1. منحنی کالیبراسیون باید حداقل یک بار در سال و همچنین هر بار پس از تعمیر و بر روی یک رنگ سنج فوتوالکتریک تازه دریافت شده ساخته شود.
2. رابطه خطی بین چگالی نوری و غلظت تا D=0.5 حفظ می شود. اگر آب پنیر حاوی پروتئین بیشتری باشد، آب پنیر رقیق می شود سدیم کلریددو برابر شد.
تعیین اوره در خون و ادرار.
اوره محصول اصلی نیتروژن دار کاتابولیسم پروتئین است.
با تجزیه پروتئین ها، آمونیاک، یک ماده سمی، تجمع می یابد. راه اصلی خنثی سازی آمونیاک، سنتز اوره در کبد است. غلظت اوره در خون به سرعت تشکیل آن در کبد و خروج از بدن از طریق کلیه ها در ادرار بستگی دارد.
در اکثر بیماران، سرعت تشکیل اوره منعکس کننده سرعت استفاده و تجزیه پروتئین سلولی است.
در آسیب شناسی شدید کبد، توانایی هپاتوسیت ها برای سنتز اوره مختل می شود، آمونیاک تجمع می یابد و محتوای اوره در خون کاهش می یابد.
دفع اوره به دست آمده در ادرار اتفاق می افتد و بستگی دارد عملکرد دفعیکلیه
تعیین اوره با استفاده از روش های زیر انجام می شود:
1. روش شیمیایی برای واکنش رنگ با دی استیل مونوکسیم.
2. روش آنزیمی (اوره آز)
3. روش "شیمی خشک".
تعیین اوره با واکنش با دی استیل مونوکسیم.
معرف ها
1. دی استیل مونوکسیم و تیوسمی کاربازید یا معرف در قرص.
2. محلول مرجع یا استاندارد حاوی 100 میلی گرم اوره در 100 میلی لیتر یا 1 میلی گرم در 1 میلی لیتر.
تهیه محلول ها.
محلول معرف: 1 قرص را در حین حرارت دادن در یک فلاسک حجمی 50 میلی لیتری در 30 میلی لیتر آب مقطر حل کنید. پس از خنک شدن، ولوم را روی علامت قرار دهید. محلول برای چند هفته پایدار است.
محلول اسید سولفوریک: 150 میلی لیتر آب مقطر و 25 میلی لیتر اسید سولفوریک با گرید 96 درصد را در یک فلاسک حجمی 250 میلی لیتری اضافه کنید. بعد از خنک شدن حرارت دهید و حجم را به نقطه نشان دهید. راه حل پایدار است.
محلول کاری معرف و اسید سولفوریک قبل از واکنش با نسبت 1:1 تهیه می شود (نمودار تعریف را ببینید).
اصل روش.
اوره یک کمپلکس قرمز با دی استیل مونوکسیم در حضور تیوسمی کاربازید و نمک های آهن در یک محیط به شدت اسیدی تشکیل می دهد؛ شدت رنگ متناسب با غلظت اوره است.
پیشرفت عزم.
استاندارد کنترل تجربه معرف ها
1. سرم 0.02 - -
2. راه حل کاری
a\reagent solution 2.0 2.0 2.0
b\ محلول سولفوریک
اسیدها 2.0 2.0 2.0
3. اندازه استاندارد
اوره - - 0.02
به مدت 10 دقیقه در حمام آب جوش خیس کنید. به مدت 2-3 دقیقه در یک جریان سرد کنید آب سرد. رنگ سنج حداکثر بعد از 15 دقیقه: فیلتر سبز \ در طول موج 490-540\ ، کووت 1 سانتی متر ، کنترل مخالف.
محاسبه: قبل از
X= -------- * C st در mmol\l، که در آن
انجام - چگالی نوری آزمایش؛
Dst - چگالی نوری محلول استاندارد اوره یا استاندارد.
Cst غلظت اوره در محلول استاندارد است.
X غلظت اوره در نمونه سرم است.
برای تبدیل mg% به mmol\l از ضریب 0.1665 استفاده می شود.
مقادیر طبیعی اوره در سرم خون 2.5-8.3 mmol/l می باشد.
یادداشت
1. روش تعیین فوق را می توان با افزایش حجم تمام محلول های اندازه گیری شده 2-3 برابر، بسته به حجم کووت ها، اصلاح کرد.
3. تبدیل مقادیر اوره به نیتروژن اوره را می توان با ضرب در ضریب 0.466 انجام داد.
4. تیوسمی کاربازید یک معرف سمی است. هنگام کار با آن، باید قوانین کار با مواد سمی را رعایت کنید.
پروتئین اصلی ترین ماده آلی حاوی نیتروژن است. یک گرم نیتروژن در 6.25 گرم پروتئین (نسبت نیتروژن) موجود است، یعنی پروتئین تقریباً 16 درصد نیتروژن است. در نتیجه با بررسی متابولیسم نیتروژن در بدن می توان وضعیت متابولیسم پروتئین را ارزیابی کرد. شدت سنتز پروتئین را می توان با مقدار نیتروژن وارد شده به بدن ارزیابی کرد؛ تجزیه پروتئین را می توان با مقدار نیتروژن دفع شده در ادرار و عرق ارزیابی کرد (میزان نیتروژن از دست رفته از طریق عرق در شرایط عادی ناچیز است، بنابراین نیتروژن عرق معمولاً در نظر گرفته نمی شود). شما می توانید سنتز و تجزیه پروتئین ها را با تعیین تعادل نیتروژن مقایسه کنید.
تعادل نیتروژن نسبت مقدار نیتروژنی است که وارد بدن شده و از آن خارج می شود. انواع زیر از تعادل نیتروژن متمایز می شود: تعادل مثبت، منفی و نیتروژن. تعادل مثبت نیتروژن: دریافت نیتروژن به بدن بیش از حذف آن از بدن است (احتباس نیتروژن در بدن). این نشان می دهد که سنتز پروتئین بیش از تجزیه آن است. به طور معمول، این نوع تعادل نیتروژن در طول رشد بدن، در دوران بارداری، دوران نقاهت و افزایش وزن اتفاق می افتد. توده عضلانیهنگام ورزش تعادل منفی نیتروژن - دریافت نیتروژن کمتر از دفع آن از بدن است. این نشان می دهد که سنتز پروتئین کمتر از تجزیه آن است. این نوع تعادل نیتروژن در شرایط زیر رخ می دهد:
1) گرسنگی پروتئین (مقدار ناکافی پروتئین وارد بدن می شود یا پروتئین های ناقص با غذا تامین می شود. پروتئین ناقص حاوی یک یا چند اسید آمینه ضروری نیست).
2) اختلال در جذب اسیدهای آمینه؛
3) پیری؛
4) بیماری ها یا شرایط همراه با تجزیه شدید بافت (تومورها، کاشکسی).
5) کاهش سنتز پروتئین به دلیل تخمیر.
تعادل نیتروژن - دریافت و دفع نیتروژن یکسان است. نشان دهنده همان شدت سنتز و تجزیه پروتئین است (Raguzin A.V., Setko N.P., Shirshov O.V., Fateeva T.A. 2001)
نتیجه
سنجاب ها(پروتئین ها) ترکیبات پیچیده حاوی نیتروژن با مولکولی بالا هستند که از اسیدهای آمینه تشکیل شده اند. مجموعه و توالی اسیدهای آمینه در یک پروتئین هم ویژگی بیوشیمیایی و هم ارزش غذایی آن را مشخص می کند. از چندین ده آمینو اسید در حال حاضر شناخته شده در ترکیب محصولات غذاییشامل 20
اسیدهای آمینه ای که پروتئین ها را می سازند به دو دسته قابل تعویض و ضروری تقسیم می شوند. اسیدهای آمینه ضروریباید با مواد غذایی تامین شود مقادیر مورد نیازو به نسبت های معین. اسیدهای آمینه غیر ضروریمی تواند در بدن تحت تبدیل های متقابل قرار گیرد یا در نتیجه تبدیل های بیوشیمیایی مختلف (واکنش های ترانس آمیناسیون، سنتز ترکیبات غیر پروتئینی با استفاده از آمونیاک به عنوان منبع نیتروژن) از موارد ضروری تشکیل شود. اسیدهای آمینه ضروری عبارتند از آرژنین، والین، هیستیدین، ایزولوسین، لوسین، لیزین، متیونین، تریپتوفان، فنیل آلانین، ترئونین (و آرژنین و هیستیدین برای کودکان زیر 3 سال ضروری در نظر گرفته می شوند). اسیدهای آمینه ضروری: آلانین، آسپاراژین، اسید آسپارتیک، گلیسین، اسید گلوتامیک، گلوتامین، سرین، سیستین، تیروزین، پرولین.
پروتئین ها در بدن انسان وظایف حیاتی را انجام می دهند توابع مهم: پلاستیک، انرژی، کاتالیزوری، تنظیم کننده، محافظ، حمل و نقل، گیرنده.
مطابق با استانداردهای فیزیولوژیکیطبق سیستم تغذیه ای که در کشور ما وجود دارد، مقدار کل پروتئین در رژیم غذایی کودکان باید دو برابر مقداری باشد که تعادل نیتروژن یا تعادل نیتروژن را تضمین می کند و برای بزرگسالان - 1.5 مقدار. برای کودکان پیش دبستانی - 53-69 گرم، برای دانش آموزان - 77-98 گرم، برای بزرگسالان: برای زنان - 58-87 گرم و برای مردان - 65-117 گرم (بسته به فعالیت های حرفه ای آنها).
کتابشناسی - فهرست کتب
1. Raguzin A.V., Setko N.P., Shirshov O.V., Fateeva T.A. جنبه های فیزیولوژیکی و بهداشتی متابولیسم، تبادل انرژی و تغذیه منطقی: کتابچه راهنمای روش شناختی برای کار مستقل دانشجویان دانشکده پزشکی و پیشگیری - اورنبورگ: مرکز انتشارات OSAU، 2001. - 40 ص.
2. فیزیولوژی انسان / ویرایش شده توسط G.I. Kositsky - M.: "پزشکی"، 1985. - 560 ص.
3. بیوشیمی: کتاب درسی. برای دانشگاه ها / V.P. کوموف، وی.پی. شودووا. – M.: Bustard, 2004. – 640 p.
4. راهنمای به کلاس های عملیدر مورد بهداشت مواد غذایی: کتاب درسی. کتابچه راهنمای دانشگاه ها / Setko N.P.، Setko A.G.، Fateeva T.A.، Volodina E.A.، Trishina S.P.، Chistyakova E.S.؛ تحت عمومی اد. N.P. ستکو. – Orenburg: OrGMA, 2011. – 652 p.
روش های مطالعه متابولیسم پروتئین: الکتروفورتیک - بر اساس جداسازی پروتئین ها در یک ثابت میدان الکتریکیبسته به اندازه مولکول پروتئین. اولتراسانتریفیوژ بر اساس نرخ های مختلف ته نشینی پروتئین های منفرد بسته به وزن مولکولی آنها انجام می شود. کروماتوگرافی: - کروماتوگرافی تبادل یونی بر اساس توانایی متفاوت تک تک پروتئین ها برای تبادل با یون های رزین های تبادل یونی است، - کروماتوگرافی روی غربال های مولکولی (فیلتراسیون ژل) - روی سفادکس - پروتئین ها بسته به اندازه مولکول جدا می شوند، - میل ترکیبی کروماتوگرافی - پروتئین ها بسته به تمایل به میل ترکیبی (پرکننده ستون) به انواع جداگانه تقسیم می شوند.
نمک زدایی بر اساس حذف پوسته آب با غلظت های مختلف نمک های فلزات قلیایی و قلیایی خاکی و یون آمونیوم است. این روش قدیمیجداسازی پروتئین استفاده از واکنش های رنگی - به عنوان مثال، بیورت برای پروتئین کل، زانتوپروتئین برای اسیدهای آمینه حلقوی، شدت رنگ به صورت رنگ سنجی اندازه گیری می شود. روش های ایمونولوژیکی - برای تعیین کمی پروتئین های فردی استفاده می شود. هنگام تعامل با یک آنتی سرم خاص، یک محلول ابری تشکیل می شود، شدت کدورت به روش رنگ سنجی اندازه گیری می شود.
آماده سازی آزمودنی ها: خون گیری صبح ها از ساعت 8 تا 10 صبح انجام می شود. که در در مواقع اضطراریجمع آوری خون در هر زمانی از روز انجام می شود. خون با معده خالی، پس از 8 تا 12 ساعت ناشتا گرفته می شود. پرهیز از مصرف مشروبات الکلیحداقل 24 ساعت استرس جسمانی و برانگیختگی عاطفی مستثنی هستند، که برای آنها به آزمودنی اجازه داده می شود 15 دقیقه استراحت کند.
دریافت و نگهداری مواد بیولوژیکی: سرم ایکتریک، همولیز شده، شیلوس یا پلاسما برای تحقیق مناسب نیستند. برای بدست آوردن پلاسما خون وریدیدر یک لوله تمیز و خشک با ضد انعقاد جمع آوری شده است. نمک های EDTA، هپارین، لیتیوم هپارینات، اگزالات سدیم، سیترات ها نتایج را کاهش می دهند. سانتریفیوژ طبق معمول حداکثر 3 ساعت پس از جمع آوری مواد انجام می شود.
برای به دست آوردن سرم خون، خون وریدی در یک لوله تمیز و خشک جمع آوری می شود. سانتریفیوژ طبق معمول حداکثر 3 ساعت پس از جمع آوری مواد انجام می شود. برای آزمایش ادرار از وعده صبحگاهی استفاده کنید. مطالعه حداکثر 2 ساعت پس از نمونه گیری انجام می شود.
شرایط نگهداری مواد بیولوژیکی: مواد بیولوژیکیدر ظروف در بسته نگهداری شود. خون کامل حتی در صورت وجود مواد نگهدارنده برای نگهداری مناسب نیست. پلاسما و سرم را می توان به مدت 1 روز در دمای اتاق، 7 روز در دمای 8-4 درجه سانتیگراد، از 3 تا 6 ماه در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری کرد. در ظروف در بسته، پروتئین به مدت 2 روز در ادرار در دمای اتاق پایدار است. 17 روز در یخچال (4 تا 8 درجه سانتیگراد).
نکات: سطح پروتئین کل ممکن است به سن (در کودکان و افراد مسن کمتر)، جنسیت (در مردان بیشتر) و رژیم غذایی بستگی داشته باشد. افزایش پروتئین در خون ناشی از عوامل زیر است: ماندن طولانی مدت در وضعیت عمودی، استرس، مصرف الکل، برخی موارد داروها(سفوتاکسیم، فوروزماید، فنوباربیتال، پردنیزون، پروژسترون). کاهش سطح پروتئین در خون ناشی از موارد زیر است: آسیب، استعمال دخانیات، بارداری، روزه داری، ترک نوشیدن الکل، سوء تغذیه، چاقی، برخی داروها (دکستران، ایبوپروفن، داروهای ضد بارداری خوراکی).
مشق شبپوستووالوا L.M. مبانی بیوشیمی برای کالج های پزشکیصفحه
روش های مختلفی برای مطالعه متابولیسم در بدن و اندام های فردی وجود دارد. یکی از قدیمی ترین روش ها این است آزمایشات تعادل که شامل مطالعه تعداد متقاضیان می باشد مواد آلیو تعداد تشکیل شده است محصولات نهایی.
برای مطالعه متابولیسم در اندام های فردی از این روش استفاده می شود اندام های جدا شده . اندام هایی که می توانند فعالیت حیاتی خود را برای مدتی حفظ کنند و می توان از آنها برای فعالیت های خود استفاده کرد مواد مغذی، از خون عبور می کند.
برای مطالعه متابولیسم در اندام های فردی - روش آنژئوستومی توسعه یافته توسط لندن. بر رگ های خونیلوله های مخصوصی قرار داده شده است که اجازه می دهد خون به هر اندامی جریان یابد. با تغییر ترکیب شیمیاییخون فرآیند متابولیک را قضاوت می کند.
در حال حاضر به طور گسترده استفاده می شود روش اتم برچسب گذاری شده – بر اساس استفاده از ترکیباتی که مولکول های آن شامل اتم های سنگین و ایزوتوپ های رادیواکتیوعناصر زیستی هنگامی که ترکیباتی که با چنین ایزوتوپ‌هایی برچسب‌گذاری شده‌اند به بدن وارد می‌شوند، از روش‌های آنالیز رادیومتری برای ردیابی سرنوشت عناصر یا ترکیبات در بدن و مشارکت آن در فرآیندهای متابولیک استفاده می‌شود.
سوال 59 متابولیسم پروتئین. طبقه بندی آنها (دو نوع) و خصوصیات. اهمیت برای بدن. ارزش بیولوژیکی پروتئین ها تعادل نیتروژن نقش کبد در متابولیسم پروتئین ویژگی های متابولیسم پروتئین در نشخوارکنندگان تنظیم متابولیسم پروتئین
متابولیسم پروتئینعملکرد پروتئین ها
عملکرد پلاستیک پروتئین برای تضمین رشد و نمو بدن از طریق فرآیندهای بیوسنتز است.
فعالیت آنزیمی پروتئین ها سرعت واکنش های بیوشیمیایی را تنظیم می کنند.
عملکرد محافظتی پروتئین ها شامل تشکیل پروتئین های ایمنی - آنتی بادی ها است. پروتئین ها قادر به اتصال سموم و سموم هستند و همچنین لخته شدن خون (هموستاز) را تضمین می کنند.
عملکرد حمل و نقل شامل انتقال اکسیژن و دی اکسید کربن توسط پروتئین گلبول قرمز است هموگلوبینو همچنین در اتصال و انتقال یونهای خاص (آهن، مس، هیدروژن)، مواد دارویی، سموم
نقش انرژی پروتئین ها به دلیل توانایی آنها در آزادسازی انرژی در طول اکسیداسیون است.
متابولیسم پروتئینچهار مرحله اصلی را طی می کند:
تجزیه پروتئین در دستگاه گوارش و جذب به شکل اسیدهای آمینه؛
پیوند مرکزی متابولیسم، سنتز پروتئین های خود بدن از اسیدهای آمینه و تجزیه پروتئین در سلول ها است.
دگرگونی های میانی اسیدهای آمینه در سلول ها.
تشکیل و دفع محصولات نهایی متابولیسم پروتئین.
تعادل نیتروژن
یک شاخص غیر مستقیم از فعالیت متابولیسم پروتئین به اصطلاح است تعادل نیتروژن- تفاوت بین مقدار نیتروژن دریافتی از غذا و مقدار نیتروژن دفع شده از بدن به صورت متابولیت های نهایی.
تعادل نیتروژن- مقدار نیتروژن عرضه شده برابر استمقدار دفع شده (در یک حیوان سالم بالغ در شرایط عادیتغذیه و نگهداری)
تعادل مثبت نیتروژن فراتر می رودبرجسته شده است.
تعادل منفی نیتروژن- شرایطی که در آن مقدار نیتروژن عرضه شده کمتراختصاص داده شده است.
هنگام محاسبه تعادل نیتروژن، بر اساس این واقعیت است که پروتئین حاوی حدود 16٪ نیتروژن است، یعنی هر 16 گرم نیتروژن معادل 100 گرم پروتئین است (100:16 = 6.25).
حداقل پروتئین
کمترین مقدار پروتئین وارد شده با غذا، که به حفظ تعادل نیتروژن کمک می کند.
گاو کوچک، خوک - 1 گرم / کیلوگرم وزن زنده
اسب - 0.7-0.8 (1.2-1.42)
گاو - 0.6-0.7 (1)
انسان - 1.5-1.7 (پروتئین بهینه).
صرف نظر از ویژگی گونه، تمام ساختارهای پروتئینی متنوع فقط شامل 20 اسید آمینه . برای متابولیسم طبیعی، نه تنها مقدار پروتئین دریافتی مهم است، بلکه ترکیب کیفی آن، یعنی نسبت قابل تعویضو اسیدهای آمینه ضروری.
10 اسید آمینه ضروری برای حیوانات تک معده، پرندگان و انسان وجود دارد: دیزین، تریپتوفان، هیستیدین، فنیل آلانین، لوسین، ایزولوسین، متیونین، والین، ترئونین، آرژنین.
ارزش بیولوژیکی پروتئین ها
نشخوارکنندگان و برخی دیگر از گونه‌های جانوری ویژگی‌های خاص خود را در متابولیسم پروتئین دارند: میکرو فلور پروونتریکولوس قادر به سنتز تمام اسیدهای آمینه ضروری است و بنابراین می‌تواند در غذا بدون اسیدهای آمینه ضروری زنده بماند.
پروتئین هایی که حاوی حداقل یک اسید آمینه ضروری نیستند یا در مقادیر ناکافی وجود دارند، نامیده می شوند. معیوب (پروتئین های گیاهی).
متابولیسم اسید آمینه
محل اصلی متابولیسم اسیدهای آمینه کبد است:
دآمیناسیون - حذف گروه آمینه (به شکل آمونیاک) با تشکیل اسیدهای چربهیدروکسی اسیدها، کتو اسیدها;
ترانس آمیناسیون - انتقال گروه های آمینه از اسیدهای آمینه به اسیدهای کتو با تشکیل یک اسید آمینه دیگر و اسید کتو بدون تشکیل واسطه آمونیاک.
دکربوکسیلاسیون - حذف گروه کربوکسیل به شکل دی اکسید کربن با تشکیل آمین های بیوژنیک.
تنظیم متابولیسم پروتئین
گلوکوکورتیکوئیدها- تسریع تجزیه پروتئین ها و اسیدهای آمینه و در نتیجه افزایش ترشح نیتروژن از بدن.
مکانیسم عمل STGشامل تسریع در استفاده از اسیدهای آمینه توسط سلول ها است. بر این اساس، با آکرومگالی و غول پیکری هیپوفیز، تعادل نیتروژن مثبت و با هیپوفیزکتومی و کوتولگی هیپوفیز، تعادل منفی مشاهده می شود.
تیروکسین: با عملکرد بیش از حد غده تیروئیدمتابولیسم پروتئین افزایش می یابد
کم کاری با کاهش سرعت متابولیسم همراه است، رشد و تکامل بدن متوقف می شود.
در کبدنه تنها سنتز پروتئین رخ می دهد، بلکه محصولات پوسیده آنها نیز ضد عفونی می شوند. در کلیه هادآمیناسیون محصولات متابولیسم نیتروژن رخ می دهد.
