Il trattamento deve essere avviato da un medico. Inoltre, con il permesso del medico, il paziente può somministrare a se stesso la dose di mantenimento (se il farmaco è prescritto s / c).
Epatite cronica B: adulti - 5 milioni di UI al giorno o 10 milioni di UI 3 volte a settimana a giorni alterni per 4-6 mesi (16-24 settimane).
Bambini - s / c alla dose iniziale di 3 milioni UI / mq 3 volte a settimana (a giorni alterni) per 1 settimana di trattamento, seguita da un aumento della dose a 6 milioni UI / mq (massimo fino a 10 milioni UI/mq) 3 volte a settimana (a giorni alterni).
Durata del trattamento - 4-6 mesi (16-24 settimane).
Se non vi è alcun miglioramento nel contenuto del DNA del virus dell'epatite B sierico dopo il trattamento per 3-4 mesi alla dose massima tollerata, il farmaco deve essere interrotto.
Raccomandazioni per l'aggiustamento della dose in caso di diminuzione del numero di leucociti, granulociti o piastrine: con una diminuzione del numero di leucociti inferiore a 1,5 mila / μl, piastrine inferiore a 100 mila / μl, granulociti inferiore a 1 mila / μl - la dose è ridotta del 50%, in caso di diminuzione il numero di leucociti è inferiore a 1200 / μl, le piastrine sono inferiori a 70 mila / μl, i granulociti sono inferiori a 750 / μl - il trattamento viene interrotto e prescritto nuovamente allo stesso dose dopo la normalizzazione di questi indicatori.
Epatite cronica C - 3 milioni UI a giorni alterni (in monoterapia o in combinazione con ribavirina). Nei pazienti con decorso recidivante della malattia, viene utilizzato in combinazione con ribavirina. La durata raccomandata del trattamento è attualmente limitata a 6 mesi.
Nei pazienti che non hanno ricevuto in precedenza un trattamento con interferone alfa2b, l'efficacia del trattamento aumenta con l'uso di terapia combinata con ribavirina. La durata della terapia di combinazione è di almeno 6 mesi. La terapia deve essere effettuata per 12 mesi nei pazienti con virus di genotipo I e alto carica virale, in cui, entro la fine dei primi 6 mesi di trattamento, l'RNA del virus dell'epatite C nel siero del sangue non viene rilevato. Nel decidere se prolungare la terapia di associazione fino a 12 mesi, devono essere presi in considerazione anche altri fattori prognostici negativi (età superiore a 40 anni, sesso maschile, presenza di fibrosi).
In monoterapia, Intron A viene utilizzato principalmente nei casi di intolleranza alla ribavirina o in presenza di controindicazioni al suo utilizzo. La durata ottimale della monoterapia con Intron A non è ancora stata stabilita; trattamento attualmente raccomandato per 12-18 mesi. Durante i primi 3-4 mesi di trattamento, viene solitamente determinata la presenza dell'RNA del virus dell'epatite C, dopodiché il trattamento viene continuato solo per quei pazienti in cui l'RNA del virus dell'epatite C non viene rilevato.
Epatite cronica D: s/c alla dose iniziale di 5 milioni UI/m2 3 volte a settimana per almeno 3-4 mesi, sebbene possa essere indicata una terapia più lunga. La dose viene selezionata tenendo conto della tollerabilità del farmaco.
Papillomatosi della laringe: 3 milioni di UI / mq s / c 3 volte a settimana (a giorni alterni). Il trattamento inizia dopo la rimozione chirurgica (laser) del tessuto tumorale. La dose viene selezionata tenendo conto della tollerabilità del farmaco. Il raggiungimento di una risposta positiva può richiedere un trattamento per più di 6 mesi.
Leucemia a cellule capellute: 2 milioni UI/mq/c 3 volte a settimana (a giorni alterni). La dose viene selezionata tenendo conto della tollerabilità del farmaco.
I pazienti splenectomia e non splenectomia hanno risposto allo stesso modo al trattamento e hanno riportato una simile riduzione del fabbisogno trasfusionale. La normalizzazione di uno o più parametri del sangue di solito inizia entro 1-2 mesi dall'inizio del trattamento. Potrebbero essere necessari 6 mesi o più per migliorare tutti e 3 i parametri ematici (conta dei granulociti, conta piastrinica e livello di Hb). Prima di iniziare il trattamento, è necessario determinare il livello di Hb e il numero di piastrine, granulociti e cellule capellute nel sangue periferico e il numero di cellule capellute nel midollo osseo. Questi parametri devono essere monitorati periodicamente durante il trattamento per valutarne la risposta. Se il paziente risponde alla terapia, dovrebbe essere continuata fino a quando l'ulteriore miglioramento non si interrompe e i valori di laboratorio sono stabili per circa 3 mesi. Se entro 6 mesi il paziente non risponde alla terapia, il trattamento deve essere interrotto. La terapia non deve essere continuata in caso di rapida progressione della malattia e gravi eventi avversi.
In caso di interruzione del trattamento con Intron A, il suo uso ripetuto è risultato efficace in oltre il 90% dei pazienti.
Leucemia mieloide cronica. La dose raccomandata come monoterapia è di 4-5 milioni di UI/mq al giorno al giorno, s/c. Per mantenere il numero di leucociti, potrebbe essere necessario utilizzare una dose di 0,5-10 milioni di UI/mq. Se il trattamento può ottenere il controllo del numero di leucociti, per mantenere la remissione ematologica, il farmaco deve essere utilizzato alla dose massima tollerata (4-10 milioni di UI / m2 al giorno). Il farmaco deve essere interrotto dopo 8-12 settimane se la terapia non ha determinato una remissione ematologica almeno parziale o una diminuzione clinicamente significativa del numero dei leucociti.
Terapia di combinazione con citarabina: Intron A - 5 milioni UI / mq al giorno s / c, e dopo 2 settimane la citarabina viene aggiunta alla dose di 20 mg / mq al giorno s / c, per 10 giorni consecutivi al mese (dose massima - fino a 40 mg/giorno). Intron A deve essere interrotto dopo 8-12 settimane a meno che la terapia non abbia determinato una remissione ematologica almeno parziale o una diminuzione clinicamente significativa del numero di leucociti.
Gli studi hanno mostrato una maggiore probabilità di ottenere una risposta alla terapia con Intron A nei pazienti con fase cronica malattia. Il trattamento deve iniziare il prima possibile dopo la diagnosi e continuare fino alla completa remissione ematologica o per almeno 18 mesi. Nei pazienti che rispondono al trattamento, il miglioramento dei parametri ematologici si osserva solitamente entro 2-3 mesi. In tali pazienti, il trattamento deve essere continuato fino alla completa remissione ematologica, il cui criterio è il numero di leucociti nel sangue di 3-4 mila / μl. In tutti i pazienti con effetto ematologico completo, il trattamento deve essere continuato per ottenere un effetto citogenetico, che in alcuni casi non si sviluppa fino a 2 anni dopo l'inizio della terapia.
Nei pazienti con una conta leucocitaria superiore a 50.000/μL al momento della diagnosi, il medico può iniziare il trattamento con idrossiurea alla dose standard e poi, quando la conta leucocitaria scende al di sotto di 50.000/μL, passare a Intron A. pazienti con leucemia mieloide cronica Ph-positiva in fase cronica di nuova diagnosi è stata effettuata anche terapia combinata con Intron A e idrossiurea. Il trattamento con Intron A è stato iniziato con dosi di 6-10 milioni UI/die s/c, quindi è stata aggiunta idrossiurea alla dose di 1-1,5 g 2 volte al giorno, se il numero iniziale di leucociti superava i 10 mila/µl, e ha continuato il suo uso fino a quando il numero di leucociti non è diminuito meno di 10 mila/µl. Quindi l'idrossiurea è stata annullata e la dose di Intron A è stata selezionata in modo tale che il numero di neutrofili (leucociti pugnalati e segmentati) fosse 1-5 mila/μl e il numero di piastrine fosse superiore a 75 mila/μl.
Trombocitosi associata a leucemia mieloide cronica: 4-5 milioni UI/mq al giorno, giornalmente, s/c. Per mantenere il numero di piastrine, potrebbe essere necessario utilizzare il farmaco in dosi di 0,5-10 milioni di UI / mq.
Linfoma non Hodgkin: s / c - 5 milioni di UI 3 volte a settimana (a giorni alterni) in combinazione con la chemioterapia.
Il sarcoma di Kaposi sullo sfondo dell'AIDS: la dose ottimale non è stata stabilita. Esistono prove dell'efficacia di Intron A alla dose di 30 milioni di UI / mq 3-5 volte a settimana. Il farmaco è stato utilizzato anche a dosi minori (10-12 milioni UI/mq/giorno) senza una netta diminuzione dell'efficacia.
Se la malattia si stabilizza o risponde al trattamento, la terapia viene continuata fino a quando si verifica la regressione del tumore o è necessaria la sospensione del farmaco (sviluppo di una grave infezione opportunistica o indesiderata effetto collaterale). IN ricerca clinica i pazienti con AIDS e sarcoma di Kaposi hanno ricevuto Intron A in combinazione con zidovudina secondo il seguente schema: Intron A - alla dose di 5-10 milioni UI/mq, zidovudina - 100 mg ogni 4 ore Il principale effetto tossico è stata la neutropenia limitare la dose. Si può iniziare il trattamento con Intron A
Forma di rilascio, composizione e confezione
Iniezione trasparente, incolore.
Eccipienti:
0,5 ml - fiale (5) - blister (1) - astucci di cartone.
0,5 ml - fiale (5) - blister (2) - astucci di cartone.
0,5 ml - flaconi (1) - confezioni di cartone.
0,5 ml - flaconi (5) - blister (1) - astucci in cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (1) - blister (1) - confezioni di cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (1) - blister (3) - confezioni di cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (3) - blister (1) - confezioni di cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (3) - blister (3) - confezioni di cartone.
Iniezione trasparente, incolore.
Eccipienti: acetato di sodio, cloruro di sodio, sale disodico dell'acido etilendiammina tetraacetico, tween-80, destrano 40, acqua per preparazioni iniettabili.
1 ml - fiale (5) - blister (1) - astucci di cartone.
1 ml - fiale (5) - blister (2) - astucci di cartone.
1 ml - flaconi (1) - confezioni di cartone.
1 ml - flaconcini (5) - blister (1) - astucci di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (1) - blister (1) - confezioni di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (1) - blister (3) - confezioni di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (3) - blister (1) - confezioni di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (3) - blister (3) - confezioni di cartone.
Gruppo clinico e farmacologico
Interferone. Farmaco antitumorale, antivirale e immunomodulatoreeffetto farmacologico
Interferone. Altevir ® ha effetti antivirali, immunomodulatori, antiproliferativi e antitumorali.
L'interferone alfa-2b, interagendo con specifici recettori sulla superficie cellulare, avvia una complessa catena di cambiamenti all'interno della cellula, inclusa l'induzione della sintesi di un numero di citochine ed enzimi specifici, interrompe la sintesi dell'RNA virale e delle proteine virali nel cellula. Il risultato di questi cambiamenti è un'attività antivirale e antiproliferativa aspecifica associata alla prevenzione della replicazione virale nella cellula, all'inibizione della proliferazione cellulare e all'effetto immunomodulatore dell'interferone. L'interferone alfa-2b stimola il processo di presentazione dell'antigene alle cellule immunocompetenti, ha la capacità di stimolare l'attività fagocitica dei macrofagi, nonché l'attività citotossica delle cellule T e dei "killer naturali" coinvolti nell'immunità antivirale.
Previene la proliferazione cellulare, in particolare le cellule tumorali. Ha un effetto deprimente sulla sintesi di alcuni oncogeni, portando all'inibizione della crescita tumorale.
Farmacocinetica
Aspirazione
Con la somministrazione s / c o / m dell'interferone alfa-2b, la sua biodisponibilità varia dall'80% al 100%. Dopo l'introduzione dell'interferone alfa-2b T max nel plasma è di 4-12 ore, T 1/2 - 2-6 ore 16-24 ore dopo la somministrazione, l'interferone ricombinante nel siero del sangue non viene rilevato.
Metabolismo
Il metabolismo viene effettuato nel fegato.
Gli interferoni alfa sono in grado di interrompere i processi metabolici ossidativi, riducendo l'attività degli enzimi epatici microsomiali del sistema del citocromo P450.
allevamento
Escreto principalmente dai reni filtrazione glomerulare.
Indicazioni per l'uso del farmaco
Come parte della terapia complessa negli adulti:
- nell'epatite virale cronica B senza segni di cirrosi epatica;
- nell'epatite virale cronica C in assenza di sintomi di insufficienza epatica (monoterapia o terapia combinata con ribavirina);
- con papillomatosi della laringe;
- con verruche genitali;
- con leucemia a cellule capellute, leucemia mieloide cronica, linfoma non Hodgkin, melanoma, mieloma multiplo, sarcoma di Kaposi sullo sfondo dell'AIDS, carcinoma renale progressivo.
Regime di dosaggio
Applicare s / c, / m e / in. Il trattamento deve essere avviato da un medico. Inoltre, con il permesso del medico, il paziente può somministrarsi una dose di mantenimento (nei casi in cui il farmaco è prescritto s / c o / m).
Epatite cronica B: Altevir ® viene somministrato s / c o / m alla dose di 5-10 milioni di UI 3 volte a settimana per 16-24 settimane. Il trattamento viene interrotto dopo 3-4 mesi di utilizzo in assenza di dinamiche positive (secondo lo studio del DNA del virus dell'epatite B).
Epatite cronica C: Altevir ® viene somministrato s/c o/m alla dose di 3 milioni di UI 3 volte a settimana per 24-48 settimane. Nei pazienti con decorso recidivante della malattia e nei pazienti che non hanno ricevuto in precedenza un trattamento con interferone alfa-2b, l'efficacia del trattamento aumenta con la terapia di associazione con ribavirina. La durata della terapia di combinazione è di almeno 24 settimane. La terapia con Altevir deve essere effettuata per 48 settimane in pazienti con epatite C cronica e 1° genotipo del virus con un'elevata carica virale, in cui, entro la fine delle prime 24 settimane di trattamento, l'RNA del virus dell'epatite C non viene rilevato in il siero sanguigno.
Papillomatosi della laringe: Altevir ® viene iniettato s / c alla dose di 3 milioni UI / m 2 3 volte a settimana. Il trattamento inizia dopo la rimozione chirurgica (o laser) del tessuto tumorale. La dose viene selezionata tenendo conto della tollerabilità del farmaco. Il raggiungimento di una risposta positiva può richiedere un trattamento per 6 mesi.
Leucemia a cellule capellute: La dose raccomandata di Altevir per la somministrazione sottocutanea nei pazienti con o senza splenectomia è di 2 milioni UI/m2 3 volte a settimana. Nella maggior parte dei casi, la normalizzazione di uno o più parametri ematologici avviene dopo 1-2 mesi di trattamento, è possibile aumentare la durata del trattamento fino a 6 mesi. Questo regime di dosaggio deve essere seguito continuamente a meno che non vi sia una rapida progressione della malattia o sintomi di grave intolleranza al farmaco.
Leucemia mieloide cronica: la dose raccomandata di Altevir in monoterapia è di 4-5 milioni UI/m2 al giorno s/c al giorno. Per mantenere il numero di leucociti, potrebbe essere necessario utilizzare una dose di 0,5-10 milioni di UI / m2. Se il trattamento può ottenere il controllo del numero di leucociti, quindi per mantenere la remissione ematologica, il farmaco deve essere utilizzato alla dose massima tollerata (4-10 milioni di UI / m 2 al giorno). Il farmaco deve essere interrotto dopo 8-12 settimane se la terapia non ha determinato una parziale remissione ematologica o una diminuzione clinicamente significativa del numero dei leucociti.
Linfoma non-Hodgkin: Altevir ® è usato come terapia adiuvante in combinazione con regimi chemioterapici standard. Il farmaco viene somministrato s / c alla dose di 5 milioni di UI / m 2 3 volte a settimana per 2-3 mesi. La dose deve essere aggiustata in base alla tollerabilità del farmaco.
Melanoma: Altevir ® è usato come terapia adiuvante negli adulti ad alto rischio di recidiva dopo la rimozione del tumore. Altevir ® viene somministrato per via endovenosa alla dose di 15 milioni UI/m 2 5 volte alla settimana per 4 settimane, poi s/c alla dose di 10 milioni UI/m 2 3 volte alla settimana per 48 settimane. La dose deve essere aggiustata in base alla tollerabilità del farmaco.
mieloma multiplo: Altevir ® è prescritto durante il periodo di raggiungimento di una remissione stabile alla dose di 3 milioni UI / m 2 3 volte a settimana s / c.
Il sarcoma di Kaposi sullo sfondo dell'AIDS: la dose ottimale non è stata stabilita. Il farmaco può essere utilizzato in dosi di 10-12 milioni di UI / m 2 / giorno s / c o / m. In caso di stabilizzazione della malattia o di risposta al trattamento, la terapia viene continuata fino alla regressione del tumore o fino alla sospensione del farmaco.
Cancro del rene: la dose e il regime ottimali non sono stati stabiliti. Si consiglia di utilizzare il farmaco s / c in dosi da 3 a 10 milioni di UI / m 2 3 volte a settimana.
Preparazione di una soluzione per somministrazione endovenosa
Il volume di soluzione di Altevira necessario per preparare la dose richiesta viene raccolto, aggiunto a 100 ml di soluzione sterile di cloruro di sodio allo 0,9% e somministrato in 20 minuti.
Effetto collaterale
Reazioni generali: molto spesso - febbre, debolezza (sono reazioni dose-dipendenti e reversibili, scompaiono entro 72 ore dall'interruzione del trattamento o dalla sua conclusione), brividi; meno spesso - malessere.
Dal lato del sistema nervoso centrale: Spesso - mal di testa; meno spesso - astenia, sonnolenza, vertigini, irritabilità, insonnia, depressione, pensieri e tentativi di suicidio; raramente - nervosismo, ansia.
Dal lato sistema muscoloscheletrico: molto spesso - mialgia; meno spesso - artralgia.
Dal sistema digestivo: molto spesso - perdita di appetito, nausea; meno spesso - vomito, diarrea, secchezza delle fauci, alterazione del gusto; raramente - dolore addominale, dispepsia; forse un aumento reversibile degli enzimi epatici.
Dal lato del sistema cardiovascolare: spesso - una diminuzione della pressione sanguigna; raramente - tachicardia.
Reazioni dermatologiche: meno spesso - alopecia, aumento della sudorazione; raramente - eruzione cutanea, prurito della pelle.
Dal sistema ematopoietico: possibile leucopenia reversibile, granulocitopenia, riduzione dei livelli di emoglobina, trombocitopenia.
Altri: raramente - perdita di peso, tiroidite autoimmune.
Controindicazioni all'uso del farmaco
- pesante malattia cardiovascolare anamnesi (insufficienza cardiaca cronica incontrollata, infarto miocardico recente, disturbi gravi frequenza cardiaca);
- grave insufficienza renale e/o epatica (comprese quelle causate dalla presenza di metastasi);
- epilessia, nonché gravi disturbi del sistema nervoso centrale, particolarmente espressi da depressione, pensieri suicidi e tentativi (inclusa la storia);
- epatite cronica con cirrosi epatica scompensata e in pazienti che ricevono o sono stati recentemente trattati con immunosoppressori (ad eccezione di un ciclo di trattamento a breve termine completato con corticosteroidi);
- epatite autoimmune o altra malattia autoimmune;
- trattamento con immunosoppressori dopo il trapianto;
- malattie della tiroide che non possono essere controllate con metodi terapeutici convenzionali;
- malattie polmonari scompensate (compresa la BPCO);
- scompensato diabete;
- ipercoagulabilità (tra cui tromboflebite, tromboembolia arteria polmonare);
- grave mielodepressione;
- gravidanza;
- periodo di allattamento (allattamento al seno);
— ipersensibilità ai componenti del farmaco.
L'uso del farmaco durante la gravidanza e l'allattamento
Il farmaco è controindicato durante la gravidanza e l'allattamento (allattamento al seno).
Applicazione per violazioni della funzionalità epatica
Applicazione per violazioni della funzione renale
Il farmaco è controindicato in caso di grave insufficienza renale e/o epatica (comprese quelle causate dalla presenza di metastasi).
istruzioni speciali
Prima del trattamento con Altevir per l'epatite virale cronica B e C, si raccomanda una biopsia epatica per valutare il grado di danno epatico (segni di processo infiammatorio e/o fibrosi). L'efficacia del trattamento dell'epatite cronica C è aumentata con la terapia di associazione con Altavir e ribavirina. L'uso di Altevira non è efficace nello sviluppo della cirrosi epatica scompensata o del coma epatico.
In caso di occorrenza effetti collaterali durante il trattamento con Altevir, la dose del farmaco deve essere ridotta del 50% o il farmaco deve essere temporaneamente sospeso fino alla loro scomparsa. Se gli effetti indesiderati persistono o ricompaiono dopo una riduzione della dose o si osserva una progressione della malattia, il trattamento con Altevir deve essere interrotto.
Se il livello delle piastrine è inferiore a 50x10 9 /l o il livello dei granulociti è inferiore a 0,75x10 9 /l, si raccomanda di ridurre la dose di Altevir di 2 volte con un esame del sangue di controllo dopo 1 settimana. Se questi cambiamenti persistono, il farmaco deve essere interrotto.
Se il livello delle piastrine è inferiore a 25x10 9 /l o il livello dei granulociti è inferiore a 0,5 x10 9 /l, si consiglia di cancellare il farmaco Altevir ® con un controllo del sangue dopo 1 settimana.
Nei pazienti che ricevono preparazioni di interferone alfa-2b, nel siero del sangue possono essere rilevati anticorpi che neutralizzano la sua attività antivirale. In quasi tutti i casi, i titoli anticorpali sono bassi, il loro aspetto non porta a una diminuzione dell'efficacia del trattamento o all'insorgenza di altre malattie autoimmuni.
Overdose
I dati su un'overdose della medicina Altevir ® non sono provvisti.
interazione farmacologica
Interazioni farmacologiche tra Altevir e altri medicinali non completamente esplorato. Altevir ® deve essere usato con cautela contemporaneamente a ipnotici e sedativi, analgesici narcotici e farmaci che hanno un potenziale effetto mielodepressivo.
Con la nomina simultanea di Altevir e teofillina, è necessario monitorare la concentrazione di quest'ultima nel siero del sangue e, se necessario, modificare il regime posologico.
Quando si utilizza Altevir in combinazione con farmaci chemioterapici (citarabina, ciclofosfamide, doxorubicina, teniposide), aumenta il rischio di sviluppare effetti tossici.
Termini di dispensazione dalle farmacie
Il farmaco viene dispensato su prescrizione medica.
Termini e condizioni di conservazione
Il farmaco deve essere conservato fuori dalla portata dei bambini, secondo SP 3.3.2-1248-03 ad una temperatura compresa tra 2° e 8°C; non congelare. Data di scadenza - 18 mesi.
Trasporto a temperature da 2° a 8°C; non congelare.
"L'invenzione riguarda l'ingegneria genetica, la biotecnologia, la medicina, la farmacologia. Un nuovo DNA plasmidico multicopia ricombinante pSX50 che codifica la sintesi dell'interferone leucocitario umano alfa-2b, la cui espressione è sotto il controllo dei promotori del lattosio e del triptofano e di un terminatore di trascrizione. Come risultato della trasformazione delle cellule del ceppo ricevente E. coli BL21 con DNA plasmidico ricombinante pSX50, è stato ottenuto il ceppo E. coli SX50, un produttore di interferone leucocitario umano ricombinante alfa-2b con una produttività fino a 0,9-1,0 g di interferone alfa-2b per 1 litro di terreno di coltura. Il metodo per ottenere l'interferone alfa-2b ricombinante si basa sull'uso del ceppo ricombinante creato E. coli SX50 e prevede la sua coltivazione profonda su un mezzo nutritivo con un ridotto contenuto di triptofano con l'aggiunta continua di substrati nutritivi durante la biosintesi, la distruzione meccanica di cellule di microrganismi ad alta pressione, dissoluzione della proteina aggregata in soluzione concentrata di cloridrato di guanidina seguita da rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici e sua purificazione mediante purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine come il sefarosio chelante Fast Flow immobilizzato con ioni Cu +2, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come SM Sephsrose Fast Flow e cromatografia a gel filtrazione su resine tipo Superdex 75. yah quando si colorano gel con argento e oltre il 98% secondo RF HPLC e apirogeni (test LAL) in quantità di almeno 400-800 mg per 1 litro di terreno di coltura. 3 n. e 3 z.p f-ly, 6 ill.
Disegni al brevetto RF 2242516
L'invenzione si riferisce a farmaci geneticamente modificati ottenuti per via biotecnologica, ed in particolare a metodi per la produzione industriale di interferone alfa-2b leucocitario umano ricombinante scopo medico(di seguito denominato interferone), nonché a ceppi ricombinanti che producono Escherichia coli (E. coli) e DNA plasmidico che codifica per la sintesi di interferone.
Gli interferoni sono molecole proteiche con un peso molecolare compreso tra 15.000 e 21.000 dalton prodotte e secrete dalle cellule in risposta a un'infezione virale o ad altri agenti patogeni. Esistono tre gruppi principali di interferoni: alfa, beta e gamma. Di per sé, questi gruppi non sono omogenei e possono contenere diverse varietà molecolari di interferone. Quindi, sono state identificate più di 14 varietà genetiche di interferone alfa, che sono interessanti e trovate ampia applicazione in medicina come agenti antivirali, antiproliferativi e immunomodulanti.
Metodi noti per produrre interferone di leucociti umani da leucociti umani indotti da virus e altri induttori (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873).
Il principale svantaggio di questi metodi per ottenere interferoni è la probabilità di contaminazione prodotto finale virus umani, come virus dell'epatite B e C, virus dell'immunodeficienza, ecc.
Allo stato attuale, il metodo per ottenere l'interferone mediante sintesi microbiologica è riconosciuto come più promettente, il che consente di ottenere il prodotto target con una resa molto più elevata da una materia prima relativamente poco costosa. Gli approcci utilizzati in questo caso consentono di creare varianti del gene strutturale ottimali per l'espressione batterica, nonché elementi regolatori che ne controllano l'espressione.
Vari design di ceppi di Pichia pastoris, Pseudomonas putida e Escherichia coli sono usati come microrganismi iniziali.
Lo svantaggio dell'utilizzo di P. pastoris come produttore di interferone (J.N. Garcia, J.A. Aguiar et. al. //Espressione di alto livello dell'IFN-2b umano in Pichia pastoris.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), è condizioni estremamente difficili per la fermentazione di questo tipo di lievito, la necessità di mantenere rigorosamente la concentrazione dell'induttore, in particolare il metanolo, nel processo di biosintesi. Lo svantaggio di utilizzare ceppi di Ps. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) è la complessità del processo di fermentazione a basso livello di espressione (10 mg di interferone per 1 litro di terreno di coltura). Più produttivo è l'uso di ceppi di Escherichia coli (Semin. Oncol., 1997, giugno; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51).
Conosciuto un gran numero di plasmidi e ceppi di E. coli che esprimono interferone: ceppi di E. coli ATCC 31633 e 31644 con plasmidi Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 o Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN 35-AHL6 (SU 1764515), ceppo E. coli pINF-AP2 (SU 1312961), ceppo E. coli pINF-F-Pa (AU 1312962), ceppo E. coli SG 20050 con plasmide p280/21FN (Kravchenko V.V. et al. Bioorganic chemistry, 1987, v. 13, No. 9, p.1186-1193), ceppo E.Coli SG 20050 con plasmide pINF14 (SU 1703691), ceppo E.coli SG 20050 con plasmide pINF16 (RU 2054041), ecc. tecnologie basate sull'uso di queste ceppi è la loro instabilità, così come un livello insufficiente di espressione di interferone.
Insieme alle caratteristiche dei ceppi utilizzati, l'efficienza del processo dipende in gran parte dalla tecnologia utilizzata per l'isolamento e la purificazione dell'interferone.
Un metodo noto per la produzione di interferone, che include la coltivazione di cellule Ps. putida, distruzione della biomassa, trattamento con polietileneimmina, frazionamento del solfato di ammonio, cromatografia idrofobica su fenilsilocromo C-80, frazionamento del pH del lisato, sua concentrazione e diafiltrazione, cromatografia a scambio ionico su cellulosa DE-52, eluizione in gradiente di pH, cromatografia a scambio ionico del eluente risultante su cellulosa CM -52, concentrazione mediante passaggio attraverso una cassetta filtro e filtrazione su gel su Sephadex G-100 (SU 1640996). Lo svantaggio di questo metodo, oltre alla complessa fermentazione a più stadi, è il processo a più stadi per ottenere il prodotto finale.
È anche noto un metodo per la produzione di interferone, che include la coltivazione del ceppo E. coli SG 20050/pIF16 in brodo LB in beute in un agitatore termostatato, la centrifugazione della biomassa, il lavaggio con una soluzione tampone e la sonicazione per distruggere le cellule. Il lisato risultante viene centrifugato, lavato con urea 3 M in tampone, sciolto in cloruro di guanidina in tampone, sonicato, centrifugato, solfitolisi ossidativa, dialisi contro urea 8 M, rinaturazione e cromatografia finale a due stadi su cellulosa CM-52 e Sephadex G -50 (RU 2054041). Gli svantaggi di questo metodo sono la sua produttività relativamente bassa delle fasi principali del processo di isolamento e purificazione. In particolare, ciò vale per l'elaborazione ad ultrasuoni del prodotto, la dialisi e la solfitolisi ossidativa, che porta all'instabilità nel rilascio di interferone, nonché all'impossibilità di utilizzare questo metodo per produzione industriale interferone.
Come analogo più vicino (prototipo), può essere indicato un metodo per ottenere l'interferone leucocitario umano, che consiste nel coltivare un ceppo ricombinante di E. coli, congelare la biomassa risultante a una temperatura non superiore a -70 ° C, scongelare, distruggere le cellule del microrganismo con lisozima, rimozione di DNA e RNA introducendo nel lisato di DNasi e purificazione della forma insolubile isolata di interferone mediante lavaggio con una soluzione tampone con detergenti, dissolvendo il precipitato di interferone in una soluzione di cloridrato di guanidina, rinaturazione e purificazione a uno stadio mediante ione -cromatografia di scambio. Come produttore, viene utilizzato un ceppo di E. coli SS5 ottenuto utilizzando un plasmide pSS5 ricombinante contenente tre promotori: P lac , P t7 e P trp , e un gene dell'interferone alfa con sostituzioni nucleotidiche introdotte.
L'espressione dell'interferone da parte del ceppo E. coli SS5 contenente questo plasmide è controllata da tre promotori: P lac , P t7 e P trp . Il livello di espressione dell'interferone è di circa 800 mg per 1 litro di sospensione cellulare (RU 2165455).
Lo svantaggio di questo metodo è la bassa producibilità dell'uso della distruzione enzimatica di cellule, DNA e RNA del microrganismo e la purificazione cromatografica a uno stadio dell'interferone. Ciò provoca instabilità del processo di isolamento dell'interferone, porta a una diminuzione della sua qualità e limita la possibilità di utilizzare lo schema di cui sopra per la produzione industriale di interferone. Gli svantaggi di questo plasmide e del ceppo basato su di esso sono l'uso nel plasmide di un forte promotore fagico T7 non regolato nel ceppo E. coli BL21 (DE3), in cui il gene T7 RNA polimerasi è sotto il promotore lac operon e che sempre "scorre". Di conseguenza, la sintesi dell'interferone avviene continuamente nella cellula, il che porta alla dissociazione del plasmide e a una diminuzione della vitalità delle cellule del ceppo e, di conseguenza, a una diminuzione della resa dell'interferone.
L'obiettivo della presente invenzione è costruire un ceppo industriale ricombinante del produttore di E. coli utilizzando un nuovo DNA plasmidico ricombinante con un alto livello di biosintesi dell'interferone e sviluppare una tecnologia industriale efficace per ottenere una sostanza interferonica per scopi medici, corrispondente in qualità alla "Farmacopea europea" per la sostanza dell'interferone alfa-2b.
Questo problema è stato risolto creando DNA plasmidico ricombinante pSX50 e ceppo Escherichia coli SX50, depositato nella collezione tutta russa di ceppi industriali della Federal State Unitary Enterprise GosNII Genetics, numero VKPM V-8550,
nonché un metodo per ottenere l'interferone alfa-2b ricombinante basato sull'uso di un ceppo ricombinante di E. coli SX50 e che comporta la sua coltivazione profonda su un mezzo nutritivo con un contenuto di triptofano ridotto con l'aggiunta continua di substrati nutritivi durante la biosintesi, la distruzione meccanica di cellule di microrganismi ad alta pressione, dissoluzione della proteina aggregata in una soluzione concentrata di guanidina cloridrato seguita da rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici e purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine come Chelating Sepharose Fast Flow, immobilizzato con ioni Cu +2, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come CM Sepharose Fast Flow e cromatografia per filtrazione su gel su resine come Superdex 75.
Secondo l'invenzione, viene proposto un nuovo DNA plasmidico multicopia ricombinante pSX50, che codifica la sintesi dell'interferone leucocitario umano alfa-2b, la cui espressione è sotto il controllo dei promotori del lattosio e del triptofano e di un terminatore di trascrizione. Il plasmide pSX50 ha 3218 paia di basi (bp) ed è caratterizzato dalla presenza dei seguenti frammenti:
La sequenza da 1 nucleotide a 176 nucleotide (n) include un frammento di DNA di 176 bp contenente il promotore del triptofano (P trp);
Sequenza dal 177 d.C al 194 d.C include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente la sequenza Shine Delgarno responsabile dell'inizio della traduzione;
Sequenza dal 195 d.C entro il 695 d.C comprende un frammento di DNA di 501 bp contenente la sequenza del gene dell'interferone con le seguenti sostituzioni nucleotidiche: in posizione 37, A è sostituito da C; in posizione 39, G è sostituito da T; in posizione 40, A è sostituito da C; e in posizione 42, G è sostituito da T , in posizione 67 cambia A in C, in posizione 69 cambia G in T, in posizione 70 cambia A in C, in posizione 72 cambia A in T, in posizione 96 cambia G in A, in posizione 100 cambia A in C, in alla posizione 102 cambia A in T, alla posizione 114 cambia A in C, alla posizione 120 cambia C in G, alla posizione 126 cambia G in A, alla posizione 129 cambia G in A, alla posizione 330 cambia C in SOL, alla posizione 339 cambia G in LA, nella posizione 342 cambia G in LA, nella posizione 487 cambia A in DO, nella posizione 489 cambia A in T, nella posizione 495 cambia G in LA;
Sequenza dal 696 d.C entro il 713 d.C include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente un polylinker sintetico;
Sequenza dal 714 d.C al 1138 d.C include un frammento di DNA del plasmide pKK223-3 con 4129 b.p. al 4553 d.C 425 bp di dimensione, contenente la sequenza del terminatore di trascrizione stretta rrnBT 1 T 2 ;
Sequenza dal 1139 d.C al 1229 d.C comprende un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 2487 b.p. al 2577 d.C dimensione 91 p.O., contenente il promotore del gene β-lattomasi (gene di resistenza all'ampicillina - Amp R);
Sequenza dal 1230 d.C al 2045 d.C. include un frammento di DNA del plasmide pUC4K con 720 b.p. al 1535 d.C 816 bp di dimensione, contenente la regione strutturale del gene kan;
Sequenza dal 2046 d.C al 3218 d.C comprende un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 1625 a 453 b.p. dimensione 1173 BP, contenente la sequenza responsabile della replicazione del plasmide (ori) e del promotore lac (P lac).
Le figure 1-5 mostrano gli schemi costruttivi e la mappa fisica del plasmide pSX50.
La Figura 6 mostra la sequenza nucleotidica completa stabilita per il plasmide pSX50.
Il ceppo di Escherichia coli SX50 è stato ottenuto trasformando cellule di Escherichia coli BL21 con il plasmide pSX50 utilizzando il tradizionale tecnologia dell'ingegneria genetica. Il ceppo E.Coli SX50 è caratterizzato dalle seguenti caratteristiche.
Caratteristiche culturali e morfologiche
Le cellule sono piccole, diritte, ispessite a forma di bastoncino, gram-negative, non portatrici di spore. Le cellule crescono bene su semplici terreni nutritivi. Quando crescono su Difko agar, si formano colonie rotonde, lisce, convesse, torbide, lucide, grigie, con bordi lisci. Quando crescono in terreni liquidi (in un mezzo minimo con glucosio o in brodo LB), formano un'intensa foschia uniforme.
Caratteristiche fisico-biologiche
Aerobo. L'intervallo di temperatura di crescita è di 4-42°C con un pH ottimale di 6,5-7,5.
Utilizzato come fonte di azoto sali minerali in forme di ammonio e nitrato, e composti organici come aminoacidi, peptone, triptone, estratto di lievito, ecc.
Aminoacidi, glicerolo, carboidrati sono usati come fonte di carbonio. Resistenza agli antibiotici. Le cellule mostrano resistenza alla kanamicina (fino a 100 µg/ml).
Il ceppo Escherichia coli 8X50 è un produttore di interferone.
Metodo, condizioni e composizione del terreno di conservazione del ceppo
In L-arape con l'aggiunta di kanamicina ad una concentrazione di 20 μg / ml sott'olio, in L-brodo contenente il 15% di glicerolo e antibiotici appropriati in fiale a una temperatura di meno 70 ° C, allo stato liofilizzato in fiale a un temperatura di più 4°C.
Il ceppo Escherichia coli SX50 è stato identificato da Bergi's Key (1974) come un ceppo della specie Escherichia coli.
Il metodo di produzione industriale dell'interferone alfa-2b
Una caratteristica del metodo proposto è lo sviluppo di una tecnologia che consente di isolare l'interferone da una forma insolubile che si accumula durante la fermentazione, che può semplificare notevolmente lo schema tecnologico del processo di isolamento e aumentare la resa del prodotto target.
Il metodo consiste nel coltivare il ceppo Escherichia coli SX50 in un mezzo nutritivo, con l'aggiunta costante di substrati nutritivi, preferibilmente glucosio ed estratto di lievito, durante la biosintesi, preferibilmente con un ridotto contenuto di triptofano, distruzione meccanica delle cellule del microrganismo ad alta pressione di 700 -900 bar, dissoluzione dell'interferone in una soluzione tampone di guanidina cloridrato, rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici, seguita da una purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine come Chelating Sepharose Fast Flow immobilizzata con Cu +2 ioni, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come CM Sepharose Fast Flow e cromatografia per filtrazione su gel su resine come Superdex 75.
Le condizioni ottimali per lo svolgimento delle singole fasi di ottenimento dell'interferone sono le seguenti:
La fermentazione viene effettuata con l'aggiunta continua di substrati durante tutto il processo, che porta ad un alto livello di espressione dell'interferone;
La distruzione delle celle viene effettuata in un disintegratore tipo Gaulin alla pressione di 900 bar;
La rimozione dei componenti cellulari solubili (DNA, RNA, proteine, lipopolisaccaridi, ecc.) viene effettuata lavando la forma insolubile di interferone con soluzioni tampone contenenti detergenti (Triton XI00, urea, ecc.);
Il risultante precipitato contenente interferone viene disciolto in una soluzione tampone di guanidina cloridrato 6 M;
La rinaturazione dell'interferone viene effettuata in una soluzione tampone fisiologica contenente agenti caotropici;
La purificazione cromatografica in tre fasi dell'interferone viene eseguita su Chelating Sepharose Fast Flow immobilizzato con ioni Cu +2, su resina a scambio cationico CM Sepharose Fast Flow e cromatografia per gel filtrazione su resina tipo Superdex 75;
Dopo ogni purificazione cromatografica, la filtrazione sterilizzante viene effettuata attraverso filtri apirogeni con una dimensione dei pori di 0,22 μm.
La produzione di interferone come risultato dell'applicazione del metodo descritto è di circa 400-800 mg di interferone con 1 litro di terreno di coltura. La qualità del prodotto risultante è conforme agli standard e ai requisiti della "Farmacopea europea" per la sostanza interferone alfa-2b.
Differenze significative tra il metodo proposto e il prototipo sono:
L'uso di un ceppo design con una maggiore produttività, che consente di ottenere una maggiore quantità di interferone da 1 litro di terreno di coltura durante la biosintesi;
L'uso di un'efficace distruzione meccanica della biomassa cellulare, che consente di ottenere un estratto più puro della forma insolubile dell'interferone per più poco tempo, con meno perdite;
L'utilizzo di soluzioni tampone fisiologiche durante la rinaturazione in presenza di agenti caotropici consente di aumentare la resa della forma di interferone correttamente rinaturata;
La purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone consente di ottenere una sostanza di interferone di purezza superiore al 99% secondo l'elettroforesi in condizioni riducenti e non riducenti quando i gel sono colorati con argento e superiore al 98% secondo RF HPLC e praticamente privi di pirogeni (test LAL).
L'essenza e i vantaggi del gruppo rivendicato di invenzioni sono illustrati dai seguenti esempi.
Esempio 1 Costruzione del plasmide ricombinante pSX50
Il metodo per la costruzione del plasmide pSX50 include i seguenti passaggi:
Costruzione del plasmide vettoriale pSX10;
1. costruzione del plasmide pSX3 (2641 bp)
2. costruzione del vettore plasmide pSX10 (2553 bp)
Costruzione del plasmide ricombinante pSX41 (3218 bp);
Costruzione del plasmide ricombinante pSX43 (3218 bp);
Costruzione del plasmide ricombinante pSX45 (3218 bp);
Costruzione del plasmide ricombinante pSX50 (3218 bp).
Costruzione del plasmide vettoriale pSX10
Il plasmide del vettore pSX10 è un vettore pUC19 in cui la sequenza codificante il gene della beta-lattamasi di resistenza all'ampicillina è sostituita dalla sequenza codificante del gene kan e contiene il terminatore di trascrizione dal plasmide pKK223-3.
La costruzione del plasmide vettoriale pSS10 avviene in due fasi:
Ottenimento del plasmide pSX3 (2641 p.O.), rappresentante il plasmide pUC19, in cui la regione codificante del gene amp è sostituita dalla regione codificante del gene kan;
Ottenimento di un plasmide vettore pSX10 (2553 bp), che è un plasmide pSX3, in cui dietro al sito BamHI è inserito un frammento di DNA codificante per il terminatore di trascrizione ggBT 1 T 2 .
Per ottenere il plasmide pSX3, vengono eseguiti cinque cicli di amplificazione del DNA mediante PCR (polimerasi reazione a catena). Durante il primo round, utilizzando il DNA plasmidico pUC19 come stampo, viene eseguita un'amplificazione di un frammento di DNA di 1828 bp. (frammento PU1-PU2) utilizzando primer:
Questa e le successive reazioni PCR vengono eseguite nelle seguenti condizioni: 20 mM Tis-HCl, pH 8,8, 10 mM (NH 4) 2 SO 4, 10 mM KCl, 2 tM MgCl 2 , 0,1% Triton X100, 0,1 mg/ml BSA, 0,2 mM di ciascun dNTP, 1,25 u Pfu DNA polimerasi, 100 ng di DNA. Il processo di amplificazione consiste nelle seguenti fasi: riscaldamento a 95°C per 5 min, 35 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 2 min 72°C) e incubazione per 10 min a 72°C. Dopo l'amplificazione (e dopo le successive amplificazioni), il frammento di DNA viene purificato elettroforeticamente su gel di agarosio all'1%. Durante il secondo e il terzo round, utilizzando il DNA plasmidico pUC4K come modello, viene eseguita un'amplificazione di un frammento di DNA di 555 bp. (frammento KM1-KM2) utilizzando primer:
e amplificazione di un frammento di DNA di 258 bp. (KMZ-KM4) con primer
Nel quinto ciclo di PCR, i frammenti (PU1-PU2) e (KM1-KM4) vengono combinati nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 min, 5 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56° C, 10 min 72° C) e incubazione per 10 min a 72°C. Il DNA ottenuto dopo l'ultima PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato e viene eseguita l'analisi di restrizione. Come risultato, si ottiene un plasmide pSX3 di 2641 bp.
Per ottenere il plasmide vettore pSX10, sono stati eseguiti tre cicli di amplificazione del DNA mediante PCR. Durante il primo round, utilizzando il DNA plasmidico pSX3 come modello, viene eseguita l'amplificazione di un frammento di DNA di 2025 bp. (frammento 10.1-10.2) utilizzando primer:
Durante il secondo ciclo, utilizzando il DNA del plasmide pKK223-3 come modello, viene eseguita l'amplificazione di un frammento di DNA di 528 bp. (frammento KK1-KK2) utilizzando primer:
Nel terzo ciclo di PCR, i frammenti (10.1-10.2) e (KK1-KK2) vengono combinati nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 min, 5 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C , 10 min 72° C) e incubazione per 10 min a 72°C. Il DNA ottenuto dopo l'ultima PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato e viene eseguita l'analisi di restrizione. Il risultato è un plasmide pSX10 da 2553 bp.
Costruzione del plasmide ricombinante pSX41
Il plasmide ricombinante pSX41 è un frammento di DNA Hind III - BamHI del plasmide vettore pSX3 (2529 bp), frammento di DNA Hind III - EcoRI di 168 bp codificante per il promotore dell'operone del triptofano di E. coli (P trp), EcoRI-XbaI a 20 bp frammento di DNA sintetico che codifica la sequenza SD (Shine-Delgarno) e un frammento di DNA XbaI-BamHI di 501 bp che codifica il gene dell'interferone umano alfa 2b.
Per ottenere il frammento di DNA Hind III - VamHI del plasmide vettore pSX3 (2529 bp) il DNA del plasmide pSX3 viene trattato con enzimi di restrizione HindIII e BamHI seguiti da purificazione elettroforetica in gel di agarosio all'1%. Il frammento di DNA Hind III EcoRI di 168 bp che codifica il promotore dell'operone del triptofano (P trp) è stato ottenuto mediante PCR utilizzando il DNA totale di E. coli come modello e primer TRP1 e PRP2, seguito dall'elaborazione del frammento amplificato con restrizione Hindlll ed EcoRI enzimi:
Per ottenere EcoRI-Xbal, un frammento di DNA sintetico di 20 bp che codifica la sequenza SD (Shine-Delgarno), vengono sintetizzati i seguenti oligonucleotidi complementari:
Un frammento di DNA XbaI-BamIII di 501 bp che codifica il gene dell'interferone umano alfa 2b viene ottenuto mediante PCR utilizzando DNA umano totale come modello e primer IFN1 e IFN2, seguito dall'elaborazione del frammento amplificato con enzimi di restrizione Xbal e BamIII:
Successivamente, i frammenti purificati elettroforeticamente vengono combinati, ligati con l'enzima ligasi fagica T4, il DNA viene trasformato in cellule DH5 di E. coli e placcato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Il risultato è un plasmide pSX41 da 3218 bp. Successivamente, viene eseguita la mutagenesi graduale del gene dell'interferone per aumentare il livello di espressione del prodotto bersaglio. La mutagenesi del gene dell'interferone consiste nella sostituzione di triplette raramente presenti in E. coli, codificanti i corrispondenti amminoacidi, con triplette frequentemente riscontrate in E. coli, codificanti gli stessi amminoacidi. La mutagenesi del DNA del gene dell'interferone viene eseguita mediante PCR.
Costruzione del plasmide ricombinante pSX43
Per ottenere il plasmide ricombinante pSX43, viene eseguito un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR, utilizzando il DNA del plasmide pSX41 come stampo e i primer IFN3 e IFN4:
La PCR viene eseguita nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 min, 20 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 10 min 72°C) e incubazione per 20 min a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene un plasmide pSX43 di 3218 bp.
Costruzione del plasmide ricombinante pSX45
Per ottenere il plasmide ricombinante pSX45, viene eseguito un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX43 come stampo e i primer IFN5 e IFN6:
La PCR viene eseguita nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 min, 20 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 10 min 72°C) e incubazione per 20 min a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Il risultato è un plasmide pSX45 da 3218 bp.
Costruzione del plasmide ricombinante pSX50.
Per ottenere il plasmide ricombinante pSX50, viene eseguito un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX45 come stampo e i primer IFN7 e IFN8:
La PCR viene eseguita nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 min, 20 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 10 min 72°C) e incubazione per 20 min a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Il risultato è un plasmide pSX50 da 3218 bp.
Esempio 2. Ottenere un ceppo di E. coli SX50 - un produttore di interferone
Il ceppo produttore di interferone E. coli SX50 è ottenuto mediante trasformazione di cellule di ceppo E. coli BL21 con plasmide ricombinante pSX50. Il ceppo produttore di interferone viene coltivato in un fermentatore da 30 L fino a una densità ottica di 25,0-30,0 u.u. in terreno M9 contenente 1% idrolizzato acido di caseina (Difco), 1% glucosio, 40 µg/ml kanamicina, alla temperatura di 38-39°C. Durante il processo di fermentazione, viene effettuata un'aggiunta continua di substrato nutritivo utilizzando un controller gravimetrico.
Esempio 3 Metodo per isolare l'interferone dal ceppo E. coli SX50
L'interferone è stato ottenuto in 4 fasi:
Fase 1. Coltivazione del ceppo E. coli SX50.
Fase 2. Isolamento e purificazione della forma insolubile dell'interferone.
Fase 3. Dissoluzione e rinaturazione dell'interferone.
Fase 4. Purificazione cromatografica dell'interferone.
Fase 1. Coltivazione del ceppo E. coli SX50
L'inoculo cresciuto del ceppo E. coli SX50 in un volume di 3 litri di terreno LB ricco per 12 ore a 26°C viene introdotto asetticamente in un fermentatore contenente 27 litri di terreno sterile contenente M9, 1% di caseina idrolizzata, 1 % glucosio, 1 mm MgCl 2 , 0,1 mM CaCl 2 , 40 mg/mL kanamicina. La coltivazione in fermentino viene effettuata ad una temperatura di 38-39°C, mantenendo un pH di 7±0,15 mediante titolazione automatica con una soluzione di idrossido di sodio al 40%. La concentrazione di ossigeno disciolto nell'intervallo (50±10)% della saturazione viene mantenuta variando la velocità dell'agitatore da 100 a 800 rpm e l'alimentazione dell'aria da 1 a 15 l/min. La concentrazione dei substrati, in particolare il glucosio e l'estratto di lievito, viene misurata durante la fermentazione e la loro concentrazione viene mantenuta modificando la velocità di alimentazione delle soluzioni concentrate attraverso pompe peristaltiche utilizzando un controller gravimetrico.
L'accumulo di interferone sotto forma di una forma insolubile viene monitorato mediante microscopia a contrasto di fase, elettroforesi in gel di poliacrilammide al 15% (SDS-PAAG) e cromatografia ad alte prestazioni in fase inversa (RF HPLC). La fermentazione viene interrotta al raggiungimento della massima densità ottica (~ 25-30 p.u.) e all'arresto della sintesi dell'interferone. Al termine della fermentazione, il liquido di coltura viene separato mediante centrifugazione in un rotore a flusso ad una velocità di rotazione di 5000-10000 rpm. La biomassa viene confezionata in sacchetti di plastica e congelata a meno 70°C.
Fase 2. Isolamento e purificazione della forma insolubile dell'interferone
300-400 g di biomassa congelata di E. coli SX50 sono sospesi in 3000 ml di tampone 1 (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 10 mM EDTA, 0,1% Triton X100). La sospensione viene fatta passare attraverso un omogeneizzatore a flusso tipo Gaulin, mantenuto a 900 bar e centrifugato in un rotore a flusso a 15.000 giri/min. Il precipitato ottenuto viene lavato successivamente in condizioni simili con i tamponi 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA, 3 M urea) e tampone 3 (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 1 mM EDTA) e infine l'interferone il precipitato viene sospeso in 200 ml di tampone 3. Il tempo di isolamento e purificazione della forma insolubile di interferone non supera le 5 ore.
Fase 3. Dissoluzione e rinaturazione dell'interferone
Alla sospensione della forma insolubile di interferone ottenuta allo stadio precedente si aggiunge il cloridrato di guanidina secca a una concentrazione di 6 M, si aggiunge ditiotreitolo a una concentrazione di 50 mM, Tris-HCl pH 8,0 a una concentrazione di 50 mM, NaCl a una concentrazione di 150 mM e Triton X100 ad una concentrazione di 0,1%, incubato a temperatura ambiente per 2 ore.Il materiale non disciolto viene separato mediante filtrazione sterilizzante attraverso membrane con diametro dei pori di 0,22 micron.
La rinaturazione dell'interferone viene effettuata diluendo lentamente la soluzione risultante 100-200 volte con tampone 4 (20 mM Tris-HCl pH 8,0, 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA). Successivamente, la miscela di rinaturazione viene incubata sotto costante agitazione per 12-15 ore ad una temperatura di 4-8°C. Successivamente, viene aggiunto solfato di magnesio ad una concentrazione di 1 mm e il materiale aggregato viene rimosso mediante filtrazione sterilizzante attraverso un filtro a membrana con un diametro dei pori di 0,22 micron.
Fase 4. Purificazione cromatografica dell'interferone
La purificazione cromatografica dell'interferone viene effettuata in tre fasi.
1. L'interferone rinaturato risultante viene prima purificato mediante cromatografia di affinità su resina Chelating Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) immobilizzata con ioni Cu+2. Per fare ciò, la soluzione di interferone viene applicata a una colonna con Cu +2 Chelating Sepharose Fast Flow e l'interferone viene eluito con un tampone di acido citrico 0,1 M pH 2,2.
2. Nella seconda fase della purificazione cromatografica, la soluzione di interferone viene applicata a una resina a scambio cationico CM Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) e l'interferone viene eluito con un gradiente di soluzioni (0,0-0,5 M NaCl) in un 50 mM NaCl Tampone (CH 3 COO), pH 5,5.
3. La purificazione della forma monomerica dell'interferone dai resti delle forme polimeriche dell'interferone viene effettuata nella terza fase della purificazione dell'interferone mediante gel filtrazione su resina di tipo Superdex 75 (Amersham Biosciences). La cromatografia viene eseguita in tampone Na(CH 3 COO) 50 mM, pH 5,0, contenente 0,15 M NaCl.
Il metodo descritto per isolare e purificare l'interferone consente di ottenere 4-8 g di interferone altamente purificato in un ciclo di isolamento per 7-10 giorni da biomassa ottenuta da 10 1 di terreno di coltura. La qualità dell'interferone risultante è pienamente conforme ai requisiti della "Farmacopea europea" per la sostanza dell'interferone alfa-2b, vale a dire:
La concentrazione di interferone non è inferiore a 2×10 8 IU/ml;
L'attività specifica dell'interferone non è inferiore a 2,0×10 8 UI/mg;
La purezza elettroforetica del farmaco non è inferiore al 99% in condizioni riducenti e non riducenti quando i gel sono colorati con argento;
Il punto isoelettrico dell'interferone isolato è nella regione del pH 5,8-6,3;
La mappa peptidica dell'interferone isolato non differisce sostanzialmente dalla mappa peptidica per lo standard europeo per l'interferone alfa 2b CRS;
Come risulta dagli esempi di cui sopra, il gruppo di invenzioni rivendicato consente di ottenere interferone alfa-2b con una resa elevata con una tecnologia relativamente semplice e affidabile.
RECLAMO
1. DNA plasmidico ricombinante pSX50 codificante la sintesi dell'interferone alfa-2b umano ricombinante, caratterizzato dal fatto di avere una dimensione di 3218 paia di basi (bp) ed è costituito dai seguenti frammenti: la sequenza da 1 a 176 nucleotidi (n) comprende un frammento 176 bp DNA contenente un promotore del triptofano (P trp), sequenza da 177 a 194 bp. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp, contenente la sequenza Shine Delgarno responsabile dell'inizio della traduzione, la sequenza da 195 a 695 bp. include un frammento di DNA di 501 bp contenente il gene dell'interferone alfa-2b con sostituzioni nucleotidiche: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 (A>C ), 69 (SOL>TI), 70 (LA>DO), 72 (LA>TI), 96 (SOL>LA), 100 (LA>DO), 102 (LA>TI), 114 (LA>DO) , 120 (Do>Sol), 126 (Sol>La), 129 (Sol>La), 330 (Do>Sol), 339 (Sol>La), 342 (Sol>La), 487 (La>Do), 489 (LA>T), 495 (SOL>LA), sequenza da 696 a 713 b.p. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente un polylinker sintetico, sequenza da 714 a 1138 bp. include un frammento di DNA del plasmide pKK223-3 da 4129 a 4553 b.p. 425 bp di dimensione, contenente la sequenza del terminatore di trascrizione stretta rrnBT 1 T 2 , la sequenza da 1139 a 1229 b.p. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 2487 a 2577 b.p. 91 bp di dimensione, contenente il promotore del gene della β-lattomasi (gene di resistenza all'ampicillina -Amp R), sequenza da 1230 a 2045 b.p. include un frammento di DNA del plasmide pUC4K con 720 b.p. al 1535 d.C 816 bp di dimensione, contenente la regione strutturale del gene kan, sequenza da 2046 b.p. al 3218 d.C comprende un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 1625 a 453 b.p. dimensione 1173 BP, contenente la sequenza responsabile della replicazione del plasmide (ori) e del promotore lac (P lac).
2. Il ceppo batterico Eschcerichia coli SX50 trasformato con il plasmide ricombinante secondo la rivendicazione 1 è un produttore di interferone leucocitario umano alfa-2b ricombinante.
3. Un metodo per la produzione di interferone umano alfa-2b, che include la coltivazione del ceppo Escherichia coli SX5 secondo la rivendicazione 2 in un mezzo nutritivo con aggiunta costante di substrati nutritivi durante la biosintesi, distruzione meccanica delle cellule del microrganismo ad una pressione di 700-900 bar , dissoluzione dell'interferone in una soluzione tampone di guanidina cloridrato , rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici , purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine quali Chelating Sepharose Fast Flow immobilizzate con ioni Cu +2 , cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come CM Sepharose Fast Flow e cromatografia ad esclusione dimensionale su resine come Superdex 75 .
4. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui la coltura viene effettuata su un mezzo nutritivo a ridotto contenuto di triptofano con aggiunta continua di substrati nutritivi, preferibilmente glucosio ed estratto di lievito.
5. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui, prima di sciogliere l'interferone, esso viene purificato mediante rimozione di componenti cellulari solubili, tra cui DNA, RNA, proteine, lipopolisaccaridi, lavaggi con soluzioni tampone contenenti detergenti quali Triton XI 00, uree.
6. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui dopo ogni purificazione cromatografica si effettua una filtrazione sterilizzante attraverso filtri con dimensione dei pori di 0,22 um.
Questa sezione presenta istruzioni per l'uso degli interferoni alfa 2b e alfa 2a la prima generazione, che sono anche chiamati lineari, semplici o di breve durata. L'unico vantaggio di questi preparati è il prezzo relativamente basso.
Già nel 1943, W. e J. Hale scoprirono il cosiddetto fenomeno dell'interferenza. Il concetto iniziale di interferone era il seguente: un fattore che impedisce la riproduzione dei virus. Nel 1957, lo scienziato inglese Alik Isaacs e il ricercatore svizzero Gene Lindenman individuarono questo fattore, lo descrissero chiaramente e lo chiamarono interferone.
L'interferone (IFN) è una molecola proteica che viene prodotta nel corpo umano. La "ricetta" per la sua sintesi (gene dell'interferone) è codificata nell'apparato genetico umano. L'interferone è una delle citochine, molecole di segnalazione che giocano ruolo importante nel funzionamento del sistema immunitario.
Nell'ultimo mezzo secolo dalla scoperta dell'IFN, sono state studiate dozzine di proprietà di questa proteina. Dal punto di vista medico le principali sono le funzioni antivirali e antitumorali.
Il corpo umano produce circa 20 specie - un'intera famiglia - di interferoni. IFN è diviso in due tipi: I e II.
IFN di tipo I - alfa, beta, omega, theta - sono prodotti e secreti dalla maggior parte delle cellule del corpo in risposta all'azione dei virus e di alcuni altri agenti. L'IFN di tipo II include l'interferone gamma, prodotto dalle cellule del sistema immunitario in risposta all'azione di agenti estranei.
Inizialmente, i preparati di interferone venivano ottenuti solo da cellule del sangue di donatori; si chiamavano così: interferoni leucocitari. Nel 1980 iniziò l'era degli interferoni ricombinanti, o geneticamente modificati. La produzione di farmaci ricombinanti è diventata molto più economica rispetto all'ottenimento di farmaci simili da sangue umano donato o da altre materie prime biologiche; la loro produzione non utilizza il sangue donato, che può fungere da fonte di infezione. I farmaci ricombinanti non contengono impurità estranee e quindi hanno meno effetti collaterali. Il loro potenziale terapeutico è superiore a quello di simili preparati naturali.
Per il trattamento delle malattie virali, in particolare dell'epatite C, viene utilizzato prevalentemente l'interferone alfa (IFN-α). Distinguere tra interferoni alfa 2b e alfa 2a "semplici" ("di breve durata") e pegilati (peginterferone alfa-2a e peginterferone alfa-2b). Gli interferoni "semplici" non vengono praticamente utilizzati nell'UE e negli Stati Uniti, ma nel nostro paese, a causa della loro economicità comparativa, vengono utilizzati abbastanza spesso. Nel trattamento dell'epatite C vengono utilizzate entrambe le forme di IFN-α "corto": interferone alfa-2a e interferone alfa-2b (che differiscono in un amminoacido). Le iniezioni con interferoni semplici vengono solitamente eseguite a giorni alterni (con peginterferoni - una volta alla settimana). L'efficacia del trattamento con IFN di breve durata quando somministrati a giorni alterni è inferiore rispetto ai peginterferoni. Alcuni esperti raccomandano iniezioni giornaliere di IFN "semplice", poiché l'efficacia dell'AVT è leggermente superiore.
La gamma di IFN "corti" è piuttosto ampia. Sono prodotti da diversi produttori con nomi diversi: Roferon-A, Intron A, Laferon, Reaferon-EC, Realdiron, Eberon, Interal, Altevir, Alfarona e altri.
I più studiati (rispettivamente costosi) sono Roferon-A e Intron-A. L'efficacia del trattamento con questi IFN in combinazione con ribavirina, a seconda del genotipo del virus e di altri fattori, varia dal 30% al 60%. Nella tabella sono riportati un elenco delle principali marche di produttori di interferoni semplici e la loro descrizione.
Tutti gli interferoni devono essere conservati in frigorifero (da +2 a +8 gradi Celsius). Non devono essere riscaldati o congelati. Non agitare o esporre il farmaco alla luce solare diretta. È necessario trasportare farmaci in contenitori speciali.
L'interferone alfa-2b è stato ottenuto da un clone di Escherichia coli mediante ibridazione di plasmidi batterici con il gene dei leucociti umani, che codificano per la sintesi dell'interferone. Reagendo sulla superficie cellulare con recettori specifici, il farmaco avvia una complessa catena di cambiamenti all'interno della cellula, che include l'induzione della formazione di determinati enzimi e citochine specifici, interrompe la formazione di RNA e proteine all'interno delle cellule del virus. Come risultato di questi cambiamenti, appare un'attività antivirale antiproliferativa e non specifica, che è associata a un rallentamento della proliferazione cellulare, alla prevenzione della replicazione del virus all'interno della cellula e all'effetto immunomodulatore dell'interferone.
L'interferone alfa-2b stimola l'attività fagocitaria dei macrofagi, il processo di presentazione dell'antigene alle cellule immunocompetenti, nonché l'attività citotossica delle cellule natural killer e delle cellule T coinvolte nella risposta antivirale. Il farmaco previene la proliferazione cellulare, in particolare le cellule tumorali. Ha un effetto inibitorio sulla formazione di alcuni oncogeni che portano all'inibizione della crescita tumorale. Quando somministrato per via sottocutanea o intramuscolare, la biodisponibilità del farmaco è dell'80-100%. La concentrazione massima nel sangue viene raggiunta dopo 4-12 ore, l'emivita è di 2-6 ore. Viene escreto principalmente per filtrazione glomerulare da parte dei reni. Dopo 16-24 ore dalla somministrazione, il farmaco nel plasma sanguigno non è determinato. Metabolizzato nel fegato.
Indicazioni
Per via endovenosa, intramuscolare, sottocutanea: come parte di un trattamento complesso negli adulti: epatite virale cronica C senza segni di insufficienza epatica; epatite virale cronica B senza segni di cirrosi epatica; verruche genitali, papillomatosi della laringe; leucemia mieloide cronica; leucemia a cellule capellute; linfoma non-Hodgkin; mieloma multiplo; carcinoma renale progressivo; melanoma; Sarcoma di Kaposi correlato all'AIDS.
Locale: lesioni virali delle mucose e della pelle localizzazione diversa; terapia della SARS e dell'influenza; prevenzione e trattamento complesso della laringotracheobronchite ricorrente stenosante; trattamento complesso delle esacerbazioni dell'infezione erpetica cronica ricorrente e acuta delle mucose e della pelle, comprese le forme urogenitali; trattamento complesso della cervicite erpetica.
Supposte, come parte di un trattamento complesso: polmonite (virale, batterica, clamidia); SARS, inclusa l'influenza, comprese quelle complicate da un'infezione batterica; patologia infettiva e infiammatoria dei neonati, compresi i neonati prematuri: sepsi, meningite (virale, batterica), infezione intrauterina(herpes, clamidia, infezione da citomegalovirus, candidosi, anche viscerale, infezione da enterovirus, micoplasmosi); patologia infettiva e infiammatoria del tratto urogenitale (infezione da citomegalovirus, clamidia, ureaplasmosi, gardnerellosi, tricomoniasi, infezione da papillomavirus, candidosi vaginale ricorrente, vaginosi batterica, micoplasmosi); epatite virale cronica B, C, D, anche in combinazione con l'uso di emosorbimento e plasmaferesi in cronico Epatite virale attività pronunciata, che è complicata dalla cirrosi epatica; infezione erpetica ricorrente o primaria delle mucose e della pelle, decorso da lieve a moderato, forma localizzata, inclusa la forma urogenitale.
Metodo di applicazione dell'interferone alfa-2b e dose
L'interferone alfa-2b viene somministrato per via intramuscolare, endovenosa, sottocutanea; usato sotto forma di candele; applicato localmente sotto forma di gel, unguento, gocce, spray. Il metodo di somministrazione, la dose e il regime di terapia sono impostati in base alle indicazioni, individualmente.
Nei pazienti con patologia del sistema cardiovascolare, l'aritmia può svilupparsi quando si utilizza l'interferone alfa-2b. Se l'aritmia non diminuisce o aumenta, la dose deve essere ridotta di 2 volte o la terapia deve essere interrotta. Quando si utilizza l'interferone alfa-2b, è necessario monitorare lo stato mentale e neurologico. Con una forte inibizione dell'emopoiesi del midollo osseo, è necessario condurre uno studio regolare sulla composizione del sangue periferico. L'interferone alfa-2b stimola sistema immunitario pertanto, deve essere usato con cautela nei pazienti soggetti a malattie autoimmuni, a causa dell'aumentato rischio di reazioni autoimmuni. Nei pazienti trattati con preparazioni di interferone alfa-2b, nel plasma sanguigno possono essere rilevati anticorpi che neutralizzano l'attività antivirale dell'interferone alfa-2b. Quasi sempre i titoli anticorpali sono bassi, il loro aspetto non porta a una diminuzione dell'efficacia della terapia o allo sviluppo di altre malattie autoimmuni.
Controindicazioni per l'uso
Ipersensibilità, anamnesi di grave patologia del sistema cardiovascolare (recente infarto miocardico, insufficienza cardiaca cronica incontrollata, marcate aritmie cardiache), grave epatopatia e/o insufficienza renale, epilessia e / e altri gravi disturbi della centrale sistema nervoso, particolarmente manifestato da pensieri e tentativi suicidari, depressione (inclusa una storia), epatite autoimmune e altre patologie autoimmuni, nonché l'uso di farmaci immunosoppressori dopo trapianto, epatite cronica con cirrosi epatica scompensata e in pazienti durante o dopo un precedente trattamento con immunosoppressori (tranne le condizioni dopo il completamento del trattamento a breve termine con glucocorticosteroidi), patologia tiroidea che non può essere controllata con metodi medici convenzionali, diabete mellito soggetto a chetoacidosi, patologia polmonare scompensata (incluso cronico malattia ostruttiva polmoni), ipercoagulabilità (incluse embolia polmonare, tromboflebite), grave mielosoppressione, periodo di allattamento al seno, gravidanza.
Restrizioni dell'applicazione
Violazioni dell'ematopoiesi del midollo osseo, funzionalità renale, fegato.
Utilizzare durante la gravidanza e l'allattamento
L'uso sistemico dell'interferone alfa-2b è controindicato durante la gravidanza e l'allattamento; l'uso topico è possibile solo secondo indicazioni e solo dopo aver consultato un medico.
Effetti collaterali dell'interferone alfa-2b
Sintomi influenzali: brividi, febbre, dolore alle articolazioni, alle ossa, agli occhi, mal di testa, mialgia, vertigini, aumento della sudorazione;
apparato digerente: perdita di appetito, nausea, diarrea, vomito, costipazione, secchezza delle fauci, disturbi del gusto, lieve dolore addominale, perdita di peso, alterazioni dello stato funzionale del fegato;
sistema nervoso: vertigini, disturbi del sonno, deterioramento mentale, compromissione della memoria, nervosismo, ansia, aggressività, depressione, euforia, parestesia, tremore, neuropatia, sonnolenza, tendenze suicide;
il sistema cardiovascolare: tachicardia, ipertensione arteriosa o ipotensione, aritmia, malattia coronarica, disturbi del sistema cardiovascolare, infarto del miocardio;
sistema respiratorio: tosse, dolore toracico, lieve mancanza di respiro, edema polmonare, polmonite;
sistema ematopoietico: leucopenia, granulocitopenia, trombocitopenia;
reazioni cutanee: alopecia, eruzione cutanea, prurito; altro: rigidità muscolare, reazioni allergiche, la formazione di anticorpi contro interferoni ricombinanti o naturali.
Per uso locale: reazioni allergiche.
Interferone alfa-2b con altre sostanze
L'interferone alfa-2b riduce la clearance della teofillina inibendone il metabolismo, quindi è necessario controllare il livello di teofillina nel plasma sanguigno e modificarne il regime di dosaggio, se necessario. Utilizzare l'interferone alfa-2b con cautela in combinazione con analgesici narcotici, sedativi, ipnotici, farmaci che possono avere un effetto mielosoppressivo. Quando si utilizza l'interferone alfa-2b insieme ad agenti antitumorali chemioterapici (ciclofosfamide, citarabina, teniposide, doxorubicina), aumenta il rischio di sviluppare effetti tossici.
Overdose
Nessun dato.
Nomi commerciali di farmaci con il principio attivo interferone alfa-2b
Farmaci combinati:
Interferone alfa-2b + Taurina + Benzocaina: Genferon®;
Interferone alfa-2b + Taurina: Genferon® Light;
Interferone alfa-2b + ialuronato di sodio: Gyaferon;
Interferone alfa-2b + Loratadina: Allergoferon®;
Interferone alfa-2b + Metronidazolo + Fluconazolo: Vagiferon®;
Betametasone + Interferone alfa-2b: Allergoferon® beta;
Interferone alfa-2b + aciclovir + lidocaina: Gerpferon®;