Dove fare un esame del sangue per gradienti m. Gammopatia monoclonale di origine sconosciuta (MGG) - cause, opzioni, diagnosi. Chi nomina lo studio

Determinazione dei cambiamenti quantitativi e qualitativi nelle principali frazioni proteiche del sangue, utilizzate per diagnosticare e controllare il trattamento delle infiammazioni acute e croniche di genesi infettiva e non infettiva, nonché oncologica (gammopatia monoclonale) e alcune altre malattie.

Con la proliferazione di un clone di plasmacellule, aumenta la sintesi di immunoglobulina, rappresentata da una classe, sottoclasse e isotipo, che comprende catene proteiche pesanti e leggere dello stesso tipo. Durante la separazione elettroforetica delle proteine del siero del sangue, questa immunoglobulina migra sotto forma di una banda compatta, che viene determinata sullo sfondo di altre frazioni proteiche. Tale immunoglobulina è chiamata immunoglobulina monoclonale o paraproteina. Nell'elettroforesi delle proteine sieriche, è chiamato gradiente M. La paraproteina è un marcatore tumorale in numerose malattie emato-oncologiche.

Il mieloma multiplo è una classica malattia ematologica causata dalla proliferazione di plasmacellule che secernono immunoglobuline monoclonali (paraproteine) o suoi frammenti. Nella maggior parte dei casi, al momento della diagnosi, la concentrazione di paraproteine supera i 25 g/l.

Con il mieloma, la paraproteina nel siero del sangue è più spesso rappresentata da IgG (60%), meno spesso da IgA (20%). Il restante 20% circa dei casi è costituito da mieloma di Bence-Jones associato alla produzione di catene leggere kappa o lambda libere (20%). Nel 2-4% dei casi di mieloma si può osservare una paraproteina biclonale, rappresentata da immunoglobuline di classi diverse o della stessa classe, ma contenenti catene leggere di classi diverse. I cambiamenti nella concentrazione di paraproteine servono come indicatore dell'efficacia del trattamento del mieloma. Il monitoraggio della concentrazione di PP nel mieloma durante la terapia deve essere effettuato ogni 3 mesi. Se il contenuto di PP è sceso al di sotto del livello rilevabile, si consiglia di rimisurare dopo 6 o 12 mesi.

Macroglobulinemia Waldenström è un linfoma con sovrapproduzione di IgM monoclonali. Le cellule tumorali linfoplasmocitarie con un immunofenotipo caratteristico sono diffusamente distribuite linfonodi, milza e midollo osseo. Un'elevata concentrazione di IgM monoclonali spesso supera i 30 g/l e comporta un aumento della viscosità del sangue e un numero di manifestazioni cliniche tra cui confusione, cecità, tendenza al sanguinamento, insufficienza cardiaca e ipertensione. Con la macroglobulinemia, si notano spesso polineuropatia paraproteinemica, anemia emolitica fredda e crioglobuline. Per altri tipi di linfomi e leucemia linfatica cronica le paraproteine della classe IgM sono rilevate nel 20% dei pazienti, tuttavia la concentrazione di paraproteine è generalmente inferiore a 30 g / l.

La malattia delle catene pesanti (malattia di Franklin) è accompagnata dalla sintesi della sola catena pesante IgG-gamma, senza una catena leggera di accompagnamento. Questo è estremamente malattia rara manifestato da edema del palato molle e infiltrazione linfoide. Rara è anche la malattia delle catene pesanti alfa, che provoca diarrea cronica, malassorbimento dovuto a infiltrazione linfoide della parete intestinale.

Negli esami di screening, l'incidenza della paraproteinemia aumenta notevolmente nella popolazione dopo aver raggiunto i 50 anni e raggiunge il 4-10% nelle persone di età superiore ai 65 anni. Tuttavia, la maggior parte delle paraproteinemie di nuova diagnosi nella popolazione generale sono gammopatia monoclonale asintomatica di significato sconosciuto (MGUS). La concentrazione di paraproteina in MGNS è significativamente inferiore a 30 g/l e di solito non supera i 10-15 g/l. Inoltre, con MGNS, la paraproteina viene rilevata sullo sfondo delle immunoglobuline policlonali, ovvero non vi è alcuna inibizione della normale sintesi di altre immunoglobuline. Il termine "MGNZ" si riferisce a casi di paraproteinemia senza altri segni di malattia oncoematologica, che richiedono un monitoraggio annuale per non perdere il momento di malignità del processo. Se le paraproteine vengono rilevate in soggetti esaminati di età inferiore ai 50 anni, sono necessari riesami ancora più frequenti, poiché presentano un rischio elevato di sviluppare il mieloma multiplo. Se la concentrazione della proteina M è superiore a 15 g/l, indipendentemente dall'età, si raccomanda di condurre un esame approfondito, compresa l'elettroforesi di un campione di urina delle 24 ore e l'immunofissazione ogni 3-6 mesi, poiché il rischio di trasformazione maligna è molto alto. Assegnare la paraproteinemia benigna, che è caratterizzata dalla conservazione della paraproteina senza progressione verso il mieloma multiplo o altra malattia entro 5 anni dal follow-up. Nella paraproteinemia transitoria, la concentrazione di paraproteine è generalmente inferiore a 3 g/l.

Indicazioni per l'appuntamento dello studio:

1. Tipizzazione delle paraproteine.

2. Diagnosi differenziale della gammopatia monoclonale.

3. Valutazione dell'efficacia della terapia in corso per il mieloma e altre gammopatie.

Interpretazione dei risultati:

Positivamente:

Gammopatia monoclonale di significato sconosciuto, paraproteinemia benigna;
mieloma multiplo;
Macroglobulinemia Waldenström;
Linfoma e leucemia linfatica cronica;
malattia delle catene pesanti;
polineuropatia paraproteinemica;
amiloidosi AL o malattia da deposito di catene leggere;

Negativo:

Normalmente, il gradiente M non si trova nel siero.

Gammapatia monoclonale(immunoglobulinopatia, paraproteinemia) sono un gruppo eterogeneo di malattie caratterizzate dalla proliferazione monoclonale di cellule linfoidi B che secernono immunoglobuline.

Di base caratteristica distintiva questi malattieè la produzione di immunoglobulina monoclonale (componente M, gradiente M, proteina M, paraproteina), che viene determinata nel siero del sangue e/o nelle urine.

Il grosso (quasi l'80%) di tutti immunoglobuline costituiscono le IgG, che forniscono tutta la varietà di anticorpi contro i batteri, le loro tossine, i virus e altri antigeni. Le IgG normali sono una miscela di 4 sottoclassi: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Tutti i tipi di IgG attraversano la placenta e forniscono l'immunizzazione passiva del feto. Il rapporto di IgG di diverse sottoclassi nella paraproteina nel mieloma multiplo e nella gammopatia monoclonale di origine sconosciuta non differisce dal rapporto nel siero normale.

Immunoglobuline di classe A(circa il 20% di tutte le immunoglobuline) si trovano nel siero del sangue, ce ne sono molte nei segreti (tratto intestinale e respiratorio, saliva, liquido lacrimale, latte). Hanno antivirali e attività antimicrobica, impedire la penetrazione di microrganismi attraverso le mucose. Le immunoglobuline di classe M sono determinate principalmente sulla superficie dei linfociti B e svolgono un ruolo importante nella prima fase della risposta immunitaria in batteriemia e viremia su fasi iniziali infezioni. Le immunoglobuline di classe D si trovano nel siero in quantità molto piccole (meno dell'1%), la loro funzione non è ancora chiara.

Piccole quantità nel siero sangue contiene IgE, il loro contenuto aumenta con malattie allergiche e infestazioni da elminti.

All'elettroforesi, normale immunoglobuline, eterogenei nelle loro proprietà, si trovano nella zona y, formando un plateau leggermente ascendente sull'elettroforegramma o un'ampia banda durante l'immunofissazione. Le immunoglobuline monoclonali, omogenee in tutti i parametri fisico-chimici e biologici, migrano principalmente verso la zona y, raramente verso la zona b e anche a, dove formano un picco elevato o una banda nettamente delimitata. Fino ad ora, in molti paesi, viene utilizzato il metodo dell'elettroforesi dell'acetato di cellulosa, che consente di rilevare la presenza di una paraproteina se il suo contenuto nel siero supera i 7 g / l.

Gammapatia monoclinale

Categoria di gammopatia monoclonale	La natura della patologia	Concentrazione di immunoglobuline monoclonali nel siero del sangue
1. Tumori maligni delle cellule B	UN. Mieloma multiplo, macroglobulinemia di Waldenström B. Plasmocitoma (solitario: osseo ed extramidollare), linfoma, leucemia linfatica cronica, malattia delle catene pesanti	Più di 25 g/l Significativamente inferiore a 25 g/l
2. Cellule B benigne	UN. Gammopatia monoclonale di origine sconosciuta B. AL-amiloidosi (amiloidosi primaria)	Meno di 25 g/l Meno di 25 g/l
3. Stati di immunodeficienza con uno squilibrio dei collegamenti T e B sistema immunitario	UN. Primaria (Wiskott-Oldrich, DiGeor-ga, sindromi di Nezelof, immunodeficienza combinata grave) B. Secondario (legato all'età, causato dall'uso di immunosoppressori, malattie oncologiche concomitanti di natura non linfoide, come cancro al colon, cancro al seno, cancro alla prostata, ecc.) v. Ristrutturazione del sistema immunitario dopo trapianto di midollo osseo d. Stimolazione antigenica nell'ontogenesi precoce (infezione intrauterina)	Meno di 2,5 g/l Meno di 2,5 g/l Meno di 2,5 g/l Meno di 2,5 g/l
4. Risposta immunitaria omogenea	UN. Infezioni batteriche B. Malattie autoimmuni come la crioglobulinemia, il lupus eritematoso sistemico, l'artrite reumatoide, ecc.	Meno di 2,5 g/l Meno di 2,5 g/l

All'inizio anni '70. Il metodo più comune è diventato l'elettroforesi su agarosio, che consente la determinazione dell'immunoglobulina monoclonale a una concentrazione di almeno 0,5 g/l nel plasma sanguigno e 0,002 g/l nelle urine. Per determinare la classe e il tipo di immunoglobulina, viene utilizzato il metodo di immunofissazione utilizzando antisieri monospecifici per catene pesanti e leggere di immunoglobuline. La quantità di paraproteina è determinata mediante densitometria elettroforegrafica.

cellule tumorali emoblastosi paraproteinemiche preservare la differenziazione delle normali cellule linfoidi e plasmatiche e la capacità di alto livello sintesi e secrezione di immunoglobuline. In entrambe le risposte immunitarie normali e patologiche, ogni plasmacellula può sintetizzare e secernere fino a 100.000 molecole di immunoglobuline antigene-specifiche ogni minuto. Sulla base della sintesi e della secrezione di immunoglobuline elettroforeticamente e immunochimicamente omogenee e della corrispondenza della sua quantità con la massa del tumore, è stato dimostrato che le plasmacellule maligne sono monoclonali, cioè originano da un linfocita trasformato o plasmacellula.

Bene sintesi intracellulare delle catene H e L nelle cellule la produzione di anticorpi è ben bilanciata. In un certo numero di casi, nei cloni maligni, l'equilibrio tra la sintesi delle catene H e L è disturbato nella direzione di una maggiore produzione di quest'ultima. Dimeri monoclonali e monomeri di catene L, a basso peso molecolare, vengono filtrati dai glomeruli renali, quindi parzialmente riassorbiti e catabolizzati nei tubuli renali, e parzialmente escreti nelle urine (proteina di Bence-Jones).

La struttura delle catene H, apparentemente, rimane normale nel mieloma multiplo e nella macroglobulinemia di Waldenström.

Proliferazione plasmacellulare maligna, come il mieloma multiplo, la macroglobulinemia di Waldenstrom, sono caratterizzati dalla produzione di immunoglobuline monoclonali e da un certo sintomi clinici. La proteina M in un certo numero di casi si trova in persone praticamente sane. In tali casi si parla di gammapatie monoclonali di significato indeterminato (MGUS, MGUS - gammapatie monoclonali di significato indeterminato).

Negli anni 60-70 del XX secolo, quando tecnica dell'elettroforesi su acetato di cellulosa, la gammopatia monoclonale è stata diagnosticata nello 0,7-1,2% della popolazione sana. Dall'inizio degli anni '80, dopo l'introduzione di una tecnica più sensibile - l'elettroforesi su agar, in pratica, la M-paraproteina ha iniziato a essere rilevata nel 5% della popolazione sana di età compresa tra 22 e 55 anni (quando l'elettroforesi su acetato di cellulosa è stata utilizzata in nello stesso gruppo, la gammopatia monoclonale è stata registrata solo nello 0,33%. La frequenza della gammopatia monoclonale aumenta al 7-8% nel gruppo di età superiore ai 55 anni e raggiunge il 10% nel gruppo di età superiore agli 80 anni, mentre nell'80% degli individui con un gradiente M identificato, la sua concentrazione sierica è molto bassa - inferiore a 5 g/l.

Secondo la Mayo Clinic, tra tutti gammopatia monoclonale nella metà dei casi viene rilevata la gammopatia monoclonale di origine sconosciuta (MGNG) (52%), nel 12% dei pazienti - amiloidosi e nel 33% - paraproteinemie maligne: mieloma multiplo (19%), mieloma indolente (5%), plasmocitoma solitario (3%), macroglobulinemia di Waldenström (3%), altri tipi di linfomi con secrezione di paraproteine (3%). Nel 3% dei casi, la gammopatia monoclonale accompagna altri tumori maligni.

Un indicatore chiave per la diagnosi di un tumore maligno produttore di proteine è un'elevata concentrazione di M-paraproteina nel siero del sangue.

La ricerca ha dimostrato J. Moller-Petersen E E. Schmidt, l'assunzione di mieloma multiplo si è rivelata corretta nel 90% dei casi con una concentrazione di M-paraproteina nel siero superiore a 30 g / l, e l'assunzione di MGNG - nel 90% dei casi con concentrazioni inferiori di M-paraproteina .

Criteri diagnostici differenziali di base per distinguere la gammopatia mioclonale di origine sconosciuta dal mieloma fumante e dal mieloma multiplo

Parametro	Gammopatia monoclonale di origine sconosciuta	Mieloma fumante	mieloma multiplo
Componente M: IgG IgA	< 30 г/л < 10 г/л	> 30 g/l, stabile > 10 g/l, ma< 20 г/л, стабильно	> 30 g/l > 20 g/l
Catene L nelle urine	< 1 г/сут	> 1 grammo/giorno	> 1 grammo/giorno
Plasmacellule in un midollo osseo trepanato	< 10%	> 10% ma< 20 %	> 10%
Focolai di danni alle ossa dello scheletro ai raggi X	NO	Nessuna lesione litica	Lesioni litiche o osteoporosi
Imaging a risonanza magnetica della colonna vertebrale	Nessuna lesione focale	Solitario, taglia piccola lesioni	Lesioni litiche multiple o osteoporosi
Livello di b2-microglobulina	Normale	Normale	alta o normale
Indice proliferativo delle plasmacellule	< 1 %	< 1 %	Può essere > 1%
Insufficienza renale, ipercalcemia, anemia, dolore osseo, lesioni extramidollari	Mancante	Mancante	Disponibile

Quindi più alto livello sierico della proteina M, maggiore è la probabilità che il paziente abbia sviluppato un tumore maligno con secrezione di paraproteine.

Probabilità sviluppo tumore maligno associato alla durata dell'esistenza del monoclonale. R.Kyle et al. (Mayo Clinic) ha osservato un ampio gruppo di pazienti con gammopatia monoclonale. Con una durata del follow-up di 10 anni, la trasformazione maligna si è verificata nel 16% dei pazienti con MGUS, 20 anni - nel 33% e con un follow-up di 25 anni - nel 40% dei pazienti. Il rischio di trasformazione è dell'1-2% all'anno. La gammopatia monoclonale di origine sconosciuta il più delle volte si trasforma in mieloma (68%), molto meno spesso nei pazienti con gammopatia monoclonale di origine sconosciuta (MGNG) si ha una trasformazione in macroglobulinemia di Waldenström (11%) e linfoma (8%), ancora più raramente - nella malattia delle catene pesanti.

Nella maggior parte dei casi gammopatia monoclonale di origine sconosciuta non avranno il tempo di subire una trasformazione maligna, poiché nell'80% dei pazienti con gammopatia monoclonale, la concentrazione di M-paraproteina nel siero del sangue è significativamente inferiore a 30 g/l e l'età della maggioranza assoluta delle persone con identificato la paraproteinemia supera i 40 anni.

Classe di immunoglobuline, rilevata a gammopatia monoclonale di origine sconosciuta(MGNG), determina in gran parte il tipo di possibile trasformazione. Il rischio di trasformazione in linfoma o macroglobulinemia di Waldenström è maggiore nei pazienti con gammopatia monoclonale inspiegabile (MGUS) e produzione di IgM, mentre i pazienti con gammopatia monoclonale inspiegabile (MGUS) con produzione di IgA o IgG hanno maggiori probabilità di trasformarsi in mieloma multiplo, amiloidosi AL , o altre malattie accompagnate dalla proliferazione delle plasmacellule.

La principale tattica medica è osservare il paziente: "guarda e aspetta". Molto spesso, la gammopatia monoclonale di origine sconosciuta si trasforma in mieloma, quindi è diventato necessario sistematizzare i criteri che determinano il rischio di tale trasformazione e l'algoritmo di monitoraggio. La tabella presenta i criteri per differenziare la gammopatia monoclonale di origine sconosciuta dal mieloma fumante, che utilizza anche la tattica "guarda e aspetta", e dal mieloma multiplo, che richiede la chemioterapia.

Oltre il compito primario diagnosi differenziale , c'è il compito di determinare le tattiche di gestione del paziente e prevedere la possibile trasformazione della gammopatia monoclonale di origine sconosciuta.

IN l'anno scorso numerosi autori hanno proposto vari criteri prognostici per aiutare a determinare l'algoritmo di follow-up e la necessità di iniziare il trattamento.
Ricercatori di MD Anderson Cancer Center(USA) in un'analisi statistica multivariata ha mostrato che i fattori prognostici più significativi sono il livello di paraproteina nel siero del sangue e la presenza di lesioni spinali secondo la risonanza magnetica (MRI). Un basso rischio di trasformazione era nei pazienti senza alterazioni della colonna vertebrale secondo la risonanza magnetica e un livello di paraproteine di 30 g/lo meno; il follow-up mediano alla progressione è stato di 79 mesi. Il gruppo a rischio intermedio includeva pazienti che presentavano alterazioni della risonanza magnetica o livelli di paraproteine superiori a 30 g/L. Il tempo mediano alla progressione è stato di 30 mesi. Un alto rischio di trasformazione era nel gruppo di pazienti che presentavano sia alterazioni della risonanza magnetica che livelli di paraproteine > 30 g/l; mediana alla progressione 17 mesi.

Per i pazienti nel gruppo prognostico intermedio, un ulteriore fattore prognostico era il tipo paraproteina-IgA. Quando la risonanza magnetica normale è stata combinata con l'assenza di altri fattori di rischio o la presenza di uno solo di essi, la mediana alla progressione era di 57 mesi e la presenza di alterazioni della risonanza magnetica in combinazione con uno o due fattori prognostici ha ridotto la mediana alla progressione a 20 mesi. Non tutti i ricercatori confermano avverso valore predittivo tipo paraproteina IgA.

Negli ultimi anni ci sono stati ricerca mirato a identificare i cambiamenti citogenetici che potrebbero prevedere una stretta trasformazione della gammopatia monoclonale di origine sconosciuta. Il metodo di ibridazione fluorescente in situ (FISH) ha rivelato il riarrangiamento di 14q32 in quasi la metà dei pazienti con gammopatia monoclonale di origine sconosciuta, una delezione del cromosoma 13 è stata rilevata 2 volte meno spesso rispetto al mieloma multiplo e t (4; 14) quasi non si è mai verificato nella gammopatia monoclonale di origine sconosciuta (2%). Correlazioni di questi cambiamenti citogenetici con decorso clinico con gammopatia monoclonale di origine sconosciuta, non è stato possibile identificare.

Al rilevamento gammopatia monoclonale di origine sconosciuta e dopo aver confermato questa diagnosi secondo i requisiti moderni, si raccomanda di aderire al seguente algoritmo di osservazione. In assenza di disturbi nel paziente durante il primo anno, viene effettuato uno studio del livello di paraproteina ogni 3 mesi e risonanza magnetica - dopo sei mesi. Se entro 1 anno non vengono rilevati l'aumento del livello di paraproteina e le variazioni della risonanza magnetica, in futuro lo studio della paraproteina viene eseguito 1 volta in 6-12 mesi e la risonanza magnetica - 1 volta all'anno.

Alla vigilia dello studio consumabile(contenitore con adattatore e provetta) deve essere preventivamente ottenuto presso qualsiasi reparto di laboratorio.
Si prega di notare che in il reparto di laboratorio viene fornito con biomateriale solo in un tubo di urina con tappo a oliva (secondo le istruzioni per il prelievo).

Proteina di Bence Jones- un marcatore tumorale utilizzato per diagnosticare il mieloma multiplo (tumori plasmacellulari). La proteina di Bence-Jones è costituita da catene leggere libere di immunoglobuline. Le persone sane no un gran numero di catene leggere libere vengono prodotte continuamente, insieme a molecole di immunoglobuline complete. A causa del loro piccolo peso molecolare e della carica neutra, vengono filtrati nell'urina primaria attraverso la membrana basale glomerulare, quindi riassorbiti e metabolizzati nel tubulo prossimale senza entrare nell'urina finale. Nella gammopatia monoclonale, vi è la produzione di immunoglobuline anomale da parte di un clone maligno di plasmacellule. Ciò si traduce in un eccesso di catene leggere libere nell'urina primaria e di proteine di Bence-Jones nell'urina finale.

La sintesi di immunoglobuline monoclonali è accompagnata dalla formazione di una quantità variabile di catene leggere. Circa il 20% dei casi di mieloma è caratterizzato dalla produzione di catene leggere esclusivamente monoclonali (malattia delle catene leggere).

La determinazione della proteina di Bence-Jones nelle urine riflette il danno renale - atrofia tubulare, sclerosi pronunciata dell'interstizio del rene. Il danno è aggravato da fattori predisponenti (disidratazione, ipercalcemia, uso di agenti radiopachi, alcuni medicinali), che può portare a insufficienza renale.

Composto:

Percentuale di albumina nelle urine
Screening per paraproteina nelle urine (proteina di Bence-Jones) con antisiero polivalente
Gradiente M nelle urine (proteina di Bence-Jones), concentrazione
Definizione di contenuto proteine totali nelle urine

Il principio di base del metodo di ricerca elettroforetica è che le molecole in soluzione, che hanno una carica elettrica, vengono spostate verso un elettrodo di carica opposta sotto l'influenza delle forze del campo elettrico. La velocità di migrazione di una sostanza in un mezzo con la stessa intensità di campo elettrico dipende dalla dimensione delle particelle e dalla loro carica elettrica. Nel caso delle molecole proteiche, a causa delle loro proprietà anfotere, la direzione e la velocità di spostamento dipendono in gran parte dal pH del mezzo in cui avviene la migrazione. La carica di varie proteine in soluzioni con lo stesso pH dipende dalla composizione aminoacidica, poiché la dissociazione delle catene proteiche porta alla formazione di gruppi con carica positiva o negativa. Sotto l'influenza delle forze del campo elettrico, i componenti del sistema accelerato si distribuiscono secondo la loro carica, acquisendo la corrispondente velocità di movimento, ad es. avviene la separazione elettroforetica.
L'introduzione dei "portatori" elettroforetici ha portato al miglioramento della tecnologia e allo stesso tempo alla semplificazione del frazionamento. Carta da filtro, acetato di cellulosa, gel vari (poliacrilammide), agarosio, ecc., vengono utilizzati come "carrier" Contemporaneamente, durante l'elettroforesi, insieme alla separazione delle particelle in base alle loro cariche, si verifica il cosiddetto "effetto setaccio molecolare "entra in vigore, quando la struttura del gel si comporta come un filtro nei confronti degli ioni. Gli ioni che superano la sua porosità non passano o passano molto lentamente, mentre gli ioni più piccoli penetrano più velocemente attraverso i pori del portatore. Pertanto, la velocità di movimento dipende non solo dalla carica dello ione, ma anche dalla dimensione dei pori del gel, dalla forma dei pori, dalla dimensione degli ioni in movimento, dall'interazione tra la matrice del gel e gli ioni in movimento ( adsorbimento, ecc.).
La storia della creazione dell'elettroforesi iniziò nel 1807, quando era professore a Mosca Università Statale F. Reis ha scoperto fenomeni come l'elettroosmosi e l'elettroforesi. Tuttavia, l'uso pratico di questo processo in biologia e medicina iniziò molto più tardi ed è associato al nome del premio Nobel per la chimica Arne Tiselius, che negli anni '30 del secolo scorso sviluppò il metodo dell'elettroforesi in un liquido libero e progettò un dispositivo per la separazione elettroforetica e l'analisi di una miscela di proteine mediante il metodo dei bordi liberi o mobili. Il principale svantaggio di questo metodo era la generazione di calore durante il passaggio attraverso un liquido. corrente elettrica, ciò ha impedito una netta separazione delle frazioni e ha portato all'offuscamento dei confini tra le singole zone. Nel 1940, D. Philpot propose l'uso di colonne con un gradiente di densità di soluzioni tampone, e negli anni '50 il metodo fu migliorato e fu creato un dispositivo per l'elettroforesi in un gradiente di densità.
Tuttavia, il metodo non era perfetto, perché dopo che la corrente elettrica è stata interrotta, le zone formate durante l'elettroforesi sono "sfocate". I successivi progressi nell'elettroforesi sono associati alla stabilizzazione delle zone in un mezzo di supporto solido. Così, nel 1950, la carta da filtro iniziò ad essere utilizzata come supporto solido, nel 1955 fu proposto di utilizzare l'amido e già nel 1957 Cohn suggerì di utilizzare come supporto solido i film di acetato di cellulosa, che fino ad oggi rimangono uno dei vettori più comunemente usati per la ricerca clinica.
In questo periodo fu sviluppato un metodo che utilizzava l'agarosio come base. Nel 1960 fu sviluppato il metodo dell'elettroforesi capillare e solo nel 1989 fu creato e messo in pratica il primo analizzatore basato sul metodo dell'elettroforesi capillare.
Il significato principale dell'elettroforesi è la rilevazione delle anomalie del profilo proteico e, dagli anni '60, l'elettroforesi delle proteine sieriche è diventata un metodo di screening di laboratorio popolare. Ad oggi, sono già note più di 150 singole proteine del siero e una parte significativa di esse può essere quantificata utilizzando vari moderni metodi immunoenzimatici, immunochemiluminescenti, nefelometrici e immunoturbidimetrici. Ma con tutta l'informatività e l'evidenza di queste analisi, sono ancora in gran parte inaccessibili a causa del costo elevato comparativo e richiedono anche attrezzature costose (nefelometro) in laboratorio.
Tuttavia, turni tipici composizione proteica il siero del sangue può essere determinato con un metodo elettroforetico molto più accessibile, che consente anche di valutare "a colpo d'occhio" il quadro generale dello spettro proteico e ottenere informazioni diagnostiche significative. Ecco perché l'analisi elettroforetica delle proteine sieriche rimane ancora oggi, insieme a un esame del sangue biochimico, un popolare metodo di ricerca di screening. Ad esempio, negli Stati Uniti, in Giappone e in alcuni paesi dell'Europa occidentale, sono state preservate le tradizioni di determinare le frazioni proteiche del siero del sangue prima di eseguire un esame del sangue biochimico. Tuttavia, il più delle volte l'elettroforesi proteica viene prescritta dopo esami del sangue clinici biochimici e generali.
L'elettroforesi proteica aiuta a identificare malattie del fegato e dei reni, del sistema immunitario, alcune neoplasie maligne (mieloma multiplo), infezioni acute e croniche, guasti genetici, ecc. condizioni patologiche. Tra questi ci sono:
1. La gammopatia monoclonale è un nome collettivo per un'intera classe di malattie in cui vi è una secrezione patologica di struttura chimica anormale, modificata, peso molecolare o proprietà immunologiche delle immunoglobuline da parte di un clone di plasmacellule o linfociti B. Queste immunoglobuline quindi interrompono le funzioni di alcuni organi e sistemi, come i reni, il che porta allo sviluppo dei sintomi della malattia.
2. Infiammazione acuta con attivazione del sistema del complemento e aumento della sintesi delle proteine della fase acuta
(a1-antitripsina, aptoglobina, fibrinogeno, ecc.). Si manifesta con un aumento della proporzione di a1- e a2-globuline e può essere confermato misurando la VES, studiando la concentrazione proteina C-reattiva, fibrinogeno (in dinamica) e altre proteine della fase acuta.
3. infiammazione cronica con una maggiore sintesi di un numero di proteine \u200b\u200bdella fase acuta, nonché immunoglobuline; manifestato da un moderato aumento delle globuline a2 e beta, un aumento delle globuline g e una leggera diminuzione dell'albumina. Deviazioni simili possono essere osservate quando infezioni croniche, collagenosi, allergie, processi autoimmuni e malignità.
4. Malattie gravi fegato sono accompagnati da una diminuzione della sintesi di albumina e a-globuline, che si riflette negli elettroforegrammi. A epatite cronica e cirrosi epatica, aumentano sia la quantità relativa che assoluta di g-globuline (le frazioni b e g possono fondersi a causa dell'accumulo di IgA) e l'eccesso di g-globuline rispetto alle albumine è un segno prognostico molto sfavorevole.
5. La sindrome nefrosica è accompagnata da un aumento della filtrazione proteica nei reni e proteinuria selettiva -
perdita con l'urina di una grande quantità di albumina e parte di globuline a basso peso molecolare (a1-antitripsina, transferrina). Allo stesso tempo, nel fegato aumenta la sintesi di proteine \u200b\u200bpiù grandi della famiglia a2-globulina (macroglobulina, apo-B), che si accumulano nel sangue e formano un quadro con una significativa diminuzione dell'albumina e un aumento di
a2-globuline.
6. Il malassorbimento o una significativa perdita di proteine \u200b\u200bè possibile sia con sindrome nefrosica che con ustioni massicce, sindrome di Laella, patologia tratto gastrointestinale eccetera. In quest'ultimo caso, il contenuto assoluto di proteine totali e soprattutto di albumina diminuisce e il proteinogramma mostra una diminuzione della proporzione di albumina con un aumento relativamente uniforme di tutte le globuline. L'introduzione di preparati proteici (immunoglobuline, albumina o plasma sanguigno) durante il trattamento dei pazienti si riflette immediatamente nel quadro elettroforetico, che consente di monitorare la dinamica della perdita o dell'escrezione delle proteine in entrata.
7. immunodeficienza grave la genesi congenita o acquisita è solitamente accompagnata da una pronunciata diminuzione della frazione g-globulina. In questo caso, è auspicabile effettuare quantitativi aggiuntivi definizione di IgG, IgA e IgM.
Dato che l'elettroforesi clinica è il "gold standard" per il rilevamento della gammopatia monoclonale, vorrei soffermarmi più in dettaglio sulla diagnosi di questa malattia.
La gammopatia monoclonale è un gruppo di neoplasie maligne da cellule della serie dei linfociti B, il cui substrato morfologico sono cellule che producono immunoglobulina monoclonale (paraproteina). Il numero di nuovi casi diagnosticati di mieloma multiplo negli Stati Uniti nel 2010, secondo l'American Cancer Society, era di 20.180. questa malattia era 10 650. L'età media degli uomini al momento della diagnosi era di 62 anni (il 75% aveva più di 70 anni), le donne - 61 anni (il 79% aveva più di 70 anni). Morbilità - 7,8 per 100mila abitanti.
Nel Regno Unito nel 2007, ci sono stati 4040 casi di mieloma multiplo di nuova diagnosi. L'incidenza è del 6,5 per 100mila abitanti. Nella Repubblica di Bielorussia (secondo il registro bielorusso dei tumori (BCR) nel 2007 sono stati registrati 39.003 casi di malattie con una prima diagnosi, che corrisponde alla registrazione di una media di 106,9 casi di malattie al giorno.
Allo stesso tempo, in Russia nel 2007, secondo il Bollettino del Russian Cancer Research Center dell'Accademia russa delle scienze mediche, sono stati registrati solo 2372 casi primari di mieloma multiplo, l'incidenza era dell'1,7 per 100mila della popolazione.
Una differenza così significativa nell'incidenza del mieloma multiplo negli Stati Uniti, nei paesi europei e in Russia è dovuta alla mancanza di un unico algoritmo per la diagnosi di questa malattia e dei programmi di screening nel nostro paese. Volume studi diagnostici per il sospetto mieloma multiplo, raccomandato dal National Cancer Institute negli Stati Uniti (National Comprehensive Cancer) - l'organizzazione oncologica più influente in America -
include le seguenti misure diagnostiche:
Emocromo completo (con calcolo obbligatorio dell'emocromo).
schierato analisi biochimica sangue (separazione delle proteine del siero del sangue in frazioni, creatinina, urea, elettroliti, enzimi epatici, livello di beta-2-microglobulina).
Elettroforesi di immunofissazione (per determinare il tipo di paraproteinemia).
Elettroforesi delle proteine urinarie e immunofissazione delle proteine urinarie (urina giornaliera) per la diagnosi della malattia delle catene leggere.

Va notato che il significato principale in queste raccomandazioni è dato al metodo di elettroforesi e immunofissazione delle proteine nel siero del sangue e nelle urine per la rilevazione di un componente monoclonale (paraproteina). La presenza di paraproteina nel siero o nelle urine è la manifestazione di laboratorio più comune e precoce del mieloma multiplo. Per rilevarlo, viene eseguita l'elettroforesi proteica e quindi -
elettroforesi di immunofissazione di siero e urina. Con la gammopatia monoclonale, il contenuto di gammaglobuline nel siero di solito aumenta e un acuto
un picco chiamato gradiente M
(dalla parola "monoclonale"). Il valore del gradiente M riflette la massa del tumore. Il gradiente M è affidabile e sufficientemente specifico per i sondaggi di massa marcatore tumorale. L'elettroforesi di immunofissazione è indicata anche nei pazienti che hanno un'elevata probabilità di avere mieloma multiplo, ma l'elettroforesi convenzionale non ha rivelato bande aggiuntive. Le catene leggere (kappa o lambda) nel siero del sangue vengono rilevate solo mediante immunofissazione, a condizione che la loro concentrazione superi le 10 norme. Pertanto, l'elettroforesi delle proteine urinarie deve sempre essere eseguita contemporaneamente all'elettroforesi sierica.
Tenendo conto del fatto che il mieloma multiplo è una malattia che nella maggior parte dei casi viene diagnosticata in persone di età superiore ai 50 anni, nonché dell'importanza di diagnosticare questa malattia in una fase precoce subclinica (la durata media della malattia a
Fase I - 62 mesi, fase III - 29 mesi), negli Stati Uniti e in alcuni paesi europei esistono programmi di screening per persone di età superiore ai 50 anni. L'essenza di tali programmi risiede nell'attuazione annuale lista obbligatoria screening degli studi di laboratorio, in cui l'elettroforesi del siero del sangue e delle proteine delle urine è inclusa in una riga con un esame del sangue generale, urine e studi biochimici.
In alcuni casi, il gradiente M può essere osservato in persone praticamente sane. In questi casi si parla di gammopatia monoclonale di origine sconosciuta. Questa condizione è molto più comune: nell'1% delle persone di età superiore ai 50 anni e in quasi il 10% di età superiore ai 75 anni. Questa condizione non richiede trattamento, ma richiede un monitoraggio costante, poiché è probabile che tali pazienti sviluppino mieloma multiplo. Il monitoraggio dovrebbe includere esami regolari con la misurazione del livello di gradiente M (paraproteina) nel siero mediante elettroforesi; a basso rischio di progressione, gli intervalli tra gli esami dovrebbero essere da 6 a 12 mesi.
Negli ultimi anni sono stati compiuti progressi significativi nel trattamento di questa malattia. La sopravvivenza libera da recidiva a cinque anni è aumentata dal 24% nel 1975 al 35% nel 2003. Questi successi possono essere spiegati, da un lato, dallo sviluppo di nuovi e moderni regimi di polichemioterapia, in alcuni casi con polichemioterapia ad alte dosi con allotrapianto di midollo osseo e, dall'altro, da una diagnostica adeguata e dallo sviluppo di criteri uniformi per valutare la risposta alla terapia, nonché monitorare il livello di concentrazione paraproteina nel siero del sangue e / o nelle urine mediante elettroforesi al fine di determinare la malattia residua.
Pertanto, al momento, nessuno dei gruppi di ricerca coinvolti nella diagnosi e nel trattamento del mieloma multiplo ha dubbi sull'estrema importanza di analizzare la separazione delle frazioni proteiche del siero del sangue e condurre l'elettroforesi di immunofissazione come l'unico metodo più accurato ed economico per diagnosi e monitoraggio del mieloma multiplo mieloma.

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Codice servizio: 31.4.3.4051
2895₽
Gradiente M, digitazione. Elettroforesi sierica, immunofissazione con un pannello di antisieri (separatamente per IgG, IgA, IgM, kappa, lambda), quantificazione M-scoiattolo

Diagnostica di laboratorio
: proteine e amminoacidi.

Indicazioni

Tipizzazione delle paraproteine.
Diagnosi differenziale della gammopatia monoclonale.
Valutazione dell'efficacia della terapia in corso per il mieloma e altre gammopatie

Preparazione
È preferibile resistere 4 ore dopo l'ultimo pasto, non ci sono requisiti obbligatori.

Descrizione
Rilevazione e tipizzazione delle immunoglobuline monoclonali.
Le immunoglobuline sono proteine che hanno attività anticorpale (la capacità di legare in modo specifico determinati antigeni). A differenza della maggior parte delle proteine del siero, che sono prodotte nel fegato, le immunoglobuline sono prodotte dalle plasmacellule, discendenti delle cellule staminali progenitrici dei linfociti B nel midollo osseo. In base alle differenze strutturali e funzionali, si distinguono 5 classi di immunoglobuline: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE e un numero di sottoclassi. Un aumento policlonale delle immunoglobuline è una normale risposta alle infezioni.

Le gammapatie monoclonali sono condizioni in cui un clone di plasmacellule o linfociti B (una popolazione di cellule originate da un singolo linfocita B progenitore) produce una quantità anomala di immunoglobuline. Tali condizioni possono essere benigne o essere una manifestazione della malattia. La gammopatia monoclonale è identificata dalla comparsa di una banda proteica anomala all'elettroforesi sierica o urinaria.

Le molecole di immunoglobuline sono costituite da una o più unità strutturali costruite secondo un unico principio - da due catene pesanti identiche e due catene peptidiche leggere identiche - kappa o lambda. Le varietà di catene pesanti sono la base per dividere le immunoglobuline in classi. Le catene di immunoglobuline hanno regioni costanti e variabili, quest'ultime associate alla specificità antigenica.

L'immunoglobulina prodotta da un clone di cellule ha una struttura identica: rappresenta una classe, sottoclasse, è caratterizzata da una composizione identica di catene pesanti e leggere. Pertanto, se nel siero è presente una quantità anormalmente elevata di immunoglobulina monoclonale, migra sotto forma di una banda compatta durante la separazione elettroforetica delle proteine del siero del sangue, che si distingue sullo sfondo del modello di distribuzione standard delle frazioni proteiche del siero. Quando si descrivono i risultati dell'elettroforesi delle proteine sieriche, viene anche chiamata paraproteina, picco M, componente M, proteina M o gradiente M. Secondo la struttura, tale immunoglobulina monoclonale può essere un polimero, un monomero o un frammento di una molecola di immunoglobulina (nel caso di frammenti, si tratta più spesso di catene leggere, meno spesso pesanti). Le catene leggere sono in grado di passare attraverso il filtro renale e possono essere rilevate dall'elettroforesi delle urine.

La rilevazione delle paraproteine monoclonali si basa sull'uso dell'elettroforesi proteica. A volte il fibrinogeno e la PCR, che migrano nelle frazioni gamma, possono essere erroneamente considerati paraproteine. La natura immunoglobulinica del componente monoclonale identificato è confermata dall'immunofissazione delle proteine separate con uno specifico antisiero precipitante polivalente diretto contro le immunoglobuline (test n. 4050). Quando si conferma la presenza di immunoglobulina monoclonale, viene eseguita la densitometria e ne viene determinato il contenuto quantitativo. La completa identificazione (tipizzazione) del componente monoclonale richiede uno studio dettagliato mediante elettroforesi e immunofissazione con un pannello dettagliato di antisieri contro le catene IgG, IgA, IgM, kappa e lambda (test n. 4051). Nella diagnosi e nella prognosi vengono presi in considerazione la classe della paraproteina identificata, la sua concentrazione al momento della diagnosi e il tasso di aumento della sua concentrazione nel tempo. La presenza di paraproteina è un marker di numerose malattie emato-oncologiche.

Il mieloma multiplo è una classica malattia ematologica causata dalla proliferazione maligna delle plasmacellule che secernono immunoglobuline monoclonali (paraproteine) o suoi frammenti. Le plasmacellule spesso proliferano diffusamente nel midollo osseo, la malattia porta a lesioni ossee osteolitiche, riduzione di altre cellule del midollo osseo, che porta ad anemia, trombocitopenia, leucopenia, inibisce lo sviluppo di normali cloni di plasmacellule. I pazienti possono presentare sintomi locali di malattia ossea (dolore, fratture) o sintomi aspecifici (perdita di peso, anemia, sanguinamento, infezioni ricorrenti o insufficienza renale). Nella maggior parte dei pazienti al momento della diagnosi, la concentrazione di paraproteine supera i 25 g/l. Nel mieloma, la paraproteina nel siero del sangue è più spesso rappresentata da IgG (60%), meno spesso da IgA (20%) e circa il 20% è dovuta al mieloma di Bence-Jones, associato alla produzione di kappa o lambda libera catene leggere (20%), che si possono trovare nelle urine. A volte nel mieloma si può osservare una paraproteina biclonale, rappresentata da immunoglobuline di classi diverse o della stessa classe, ma contenenti catene leggere di classi diverse. Mieloma IgD e IgE raramente marcato. La determinazione della concentrazione di paraproteina viene utilizzata per monitorare l'efficacia del trattamento del mieloma, tale monitoraggio nel mieloma durante la terapia deve essere effettuato ogni 3 mesi. Se il contenuto di paraproteine è sceso al di sotto del livello rilevabile, si consiglia di ripetere la misurazione dopo 6 o 12 mesi.

Macroglobulinemia Waldenström è un linfoma con sovrapproduzione di IgM monoclonali. Le cellule tumorali linfoplasmocitarie con un immunofenotipo caratteristico sono diffusamente distribuite nei linfonodi, nella milza e nel midollo osseo. Un'elevata concentrazione di IgM monoclonali spesso supera i 30 g/l e comporta un aumento della viscosità del sangue e una serie di manifestazioni cliniche, tra cui confusione, cecità, tendenza al sanguinamento, insufficienza cardiaca e ipertensione. Con la macroglobulinemia, si notano spesso polineuropatia paraproteinemica, anemia emolitica fredda e crioglobuline. In altri tipi di linfomi e nella leucemia linfocitica cronica, le paraproteine della classe IgM si osservano nel 20% dei pazienti, ma la concentrazione di paraproteine è generalmente inferiore a 30 g / l.

La malattia delle catene pesanti (malattia di Franklin) è accompagnata dalla sintesi della sola catena pesante IgG-gamma, senza una catena leggera di accompagnamento. Questa malattia estremamente rara si manifesta con edema del palato molle e infiltrazione linfoide. Rara è anche la malattia delle catene pesanti alfa, che provoca diarrea cronica, malassorbimento dovuto a infiltrazione linfoide della parete intestinale.

Una paraproteina monoclonale può essere rilevata in un certo numero di malattie non tumorali, in particolare, con crioglobulinemia essenziale (solitamente IgM), polineuropatia cronica paraproteinemica, raffreddore anemia emolitica, amiloidosi renale AL (catene lambda libere) e organi interni, malattie da deposito di catene leggere. La paraproteina nel siero del sangue si nota anche nella malattia di Castleman (IgM / lambda), nella sindrome POEMS (polineuropatia con megalia d'organo) e nel lichene mixedematoso (IgG / kappa).

Negli esami di screening, l'incidenza della paraproteinemia aumenta notevolmente nella popolazione dopo aver raggiunto i 50 anni e raggiunge il 4-10% nelle persone di età superiore ai 65 anni. Tuttavia, la maggior parte delle paraproteinemie di nuova diagnosi nella popolazione generale sono gammopatia monoclonale asintomatica di significato sconosciuto (MGUS). La concentrazione di paraproteina in MGNS è significativamente inferiore a 30 g/l e di solito non supera i 10-15 g/l. Inoltre, con MGNS, la paraproteina viene rilevata sullo sfondo delle immunoglobuline policlonali, ovvero non vi è alcuna inibizione della normale sintesi di altre immunoglobuline. Il termine "MGNS" si riferisce a casi di paraproteinemia senza altri segni di malignità ematologica, che richiedono un monitoraggio annuale per non perdere il momento della malignità del processo. Se le paraproteine vengono rilevate in soggetti esaminati di età inferiore ai 50 anni, sono necessari riesami ancora più frequenti, poiché presentano un rischio elevato di sviluppare il mieloma multiplo. Se la concentrazione della proteina M è superiore a 15 g/l, indipendentemente dall'età, si raccomanda di condurre un esame approfondito, compresa l'elettroforesi di un campione di urina delle 24 ore e l'immunofissazione ogni 3-6 mesi, poiché il rischio di trasformazione maligna è molto alto. Assegnare la paraproteinemia benigna, che è caratterizzata dalla conservazione della paraproteina senza progressione verso il mieloma multiplo o altra malattia entro 5 anni dal follow-up. Nella paraproteinemia transitoria, la concentrazione di paraproteine è generalmente inferiore a 3 g/l.