Diagnosi immunoistochimica dello stato del recettore del carcinoma mammario (PR, ER, ki67, Her2 neu). Valore prognostico dello stato del recettore tumorale nel carcinoma mammario in fase iniziale Stato del recettore nel carcinoma mammario

L'immunoistochimica (IHC) è un metodo per rilevare l'esatta localizzazione di un particolare componente cellulare o tissutale (antigene) legandolo ad anticorpi marcati. Per condurre uno studio immunoistochimico vengono utilizzati frammenti di tessuto tumorale rimossi chirurgicamente o ottenuti a seguito di una biopsia. Lo studio IHC consente di determinare il tipo di tumore scarsamente differenziato, la sua affiliazione istogenetica, la presenza di specifici recettori ormonali e altre molecole di segnalazione nel tessuto tumorale. L'immunoistochimica è richiesta nella diagnosi differenziale dei tumori, determinando la fonte di metastasi con un focus primario poco chiaro, valutando lo stato ormonale del tumore, l'immunofenotipizzazione dei tumori, determinando i fattori prognostici del processo tumorale e per scegliere adeguatamente un regime chemioterapico .

L'oncoproteina HER2/neu (recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano) è una glicoproteina transmembrana che fa parte della famiglia dei recettori del fattore di crescita epidermico (EGFR). Nell'uomo, il recettore HER2/neu viene rilevato nei tessuti normali, ma la sua sovraespressione è caratteristica solo delle cellule tumorali. Il principale meccanismo per aumentare la quantità di HER2/neu è l'amplificazione del gene HER2/neu che lo codifica. La determinazione dei recettori degli estrogeni (ER) e del progesterone (PR) nel tessuto tumorale nel carcinoma mammario viene utilizzata per valutare la sensibilità del tumore ai farmaci ormonali e selezionare un regime terapeutico.

Biomateriale: micropreparazioni (blocco + vetro).

Metodo di analisi: immunoistochimico.

Conclusione. L'intensità della colorazione delle membrane cellulari viene valutata su una scala: 0, 1+, 2+, 3+. A 0 e 1+, il cancro al seno è HER2-negativo; a 3+, è HER2-positivo. Nel caso di 2+, è consigliabile determinare l'amplificazione del gene HER2 mediante metodi di ibridazione in situ (CISH) (vedi 220018). La presenza di espressione ai recettori degli estrogeni e del progesterone è indicata in punti e, in base al risultato ottenuto, viene emessa una conclusione sulla gravità dell'espressione.

Il gruppo rivendicato di invenzioni si riferisce alla medicina, in particolare all'oncologia, e può essere utilizzato per trattare il cancro al seno che è negativo per tre recettori, nonché per produrre una combinazione per il suo trattamento. Per fare ciò, viene somministrata una preparazione liposomiale cationica contenente almeno un lipide cationico, un agente antimitotico e almeno un lipide neutro e/o anionico in uno o più cicli in una quantità totale efficace per trattare il soggetto. Quando si utilizzano queste invenzioni, si ottiene un trattamento del cancro più efficace grazie all'effetto sinergico quando il paclitaxel viene somministrato in forme liposomiali e non liposomiali. 2 n. e 16 z.p., 1 ill., 3 pr.

Arte preesistente

La presente invenzione si riferisce all'uso di una preparazione liposomiale per la produzione di una composizione farmaceutica e all'uso di tale composizione per il trattamento del carcinoma mammario negativo a triplo recettore.

Attualmente, il trattamento sistemico del cancro al seno offre tre principali metodi diversi di intervento terapeutico e la possibilità di utilizzarli varie opzioni il trattamento dipende essenzialmente dallo stato recettoriale del paziente (Bernard-Marty et al., 2004). Le terapie endocrine e biologiche richiedono la presenza di appropriati recettori sulle cellule tumorali, mentre la chemioterapia citotossica non dipende da questi specifici recettori.

Nelle pazienti con carcinoma mammario positivo ai recettori ormonali, la terapia endocrina o una combinazione di queste è solitamente il trattamento preferito (Bernard-Marty et al., 2004; Grandishar, 2004). In presenza di recettori per gli estrogeni (ER) e/o recettori per il progesterone (PgR), il tasso di risposta al trattamento è stato superiore all'80%. In generale, le pazienti in postmenopausa hanno una maggiore espressione di ER e PgR rispetto alle pazienti in premenopausa.

Il gold standard della terapia endocrina è modulatore selettivo ER tamoxifene. Inibisce il legame degli estrogeni al recettore degli estrogeni, interrompendo così una serie di meccanismi cellulari che regolano la replicazione cellulare. Nonostante la buona tolleranza nella maggior parte dei casi, il tamoxifene provoca una serie di reazioni avverse. Sebbene questo farmaco abbia un tasso di risposta complessivamente elevato, molti pazienti sviluppano una recidiva della malattia e si sviluppa una resistenza al farmaco. La resistenza può essere correlata a un cambiamento nell'interazione tra il tamoxifene e il recettore degli estrogeni.

Per combattere la resistenza ai farmaci, sono state sviluppate terapie endocrine alternative che mettono in discussione il ruolo del tamoxifene (Bernard-Marty et al., 2004; Grandishar, 2004). Gli inibitori dell'aromatasi interferiscono direttamente con la biosintesi degli estrogeni inibendo l'enzima aromatasi, che converte l'androstenedione in estradiolo. ultima generazione Questi inibitori includono farmaci non steroidei come letrozolo, anastrozolo e vostrozolo e farmaci steroidei come exemestane. La sicurezza superiore ei tassi di risposta di questa classe di farmaci hanno reso gli inibitori dell'aromatasi la terapia endocrina standard per il trattamento del carcinoma mammario metastatico nelle donne in postmenopausa.

Un fulvestrant con attività antiestrogenica evita i problemi di stabilità riscontrati con tamoxifene a causa di un diverso meccanismo d'azione. Lega ER inibendo il legame al DNA e riduce la concentrazione di ER promuovendone la distruzione.

Nelle donne in premenopausa ER- e PgR positive, le terapie endocrine diverse dal tamoxifene comprendono l'ablazione ovarica chirurgica o la radioterapia e la terapia con analoghi dell'ormone di rilascio dell'ormone luteinizzante (LHRH) (Bernard-Marty et al., 2004). In queste pazienti, le ovaie sono la principale fonte di sintesi di estrogeni e l'ovariectomia è stata la terapia iniziale per il cancro al seno. Per evitare reazioni avverse durante l'ablazione ovarica mediante intervento chirurgico o radioterapia, la funzione ovarica può essere soppressa con analoghi dell'LHRH. Gli analoghi dell'LHRH come goserelin, leuprolide e triptorelin sopprimono la produzione di estrogeni ovarici inibendo il rilascio ipofisario di gonadotropine attraverso i loro effetti antagonisti del recettore del GnRH (gonadotropina) (Prowell e Davidson, 2004).

Con la crescente comprensione e l'intensa ricerca nel campo della biologia del cancro al seno negli ultimi anni, sono emersi diversi nuovi obiettivi per la terapia antitumorale. Tra questi, HER-2/neu è stato identificato come bersaglio principale. Il recettore del fattore di crescita endoteliale di tipo 2 (HER-2) è amplificato e/o sovraespresso in circa il 30% dei tumori al seno (Slamon et al., 1987) ed è preso di mira dall'anticorpo inibitorio trastuzumab. Poiché il trastuzumab è uno dei numerosi agenti che hanno dimostrato di aumentare la sopravvivenza globale nel carcinoma mammario metastatico, la valutazione dello stato di HER-2 si è resa necessaria per ottimizzare trattamento efficace(Bernard-Marty et al., 2004).

Trastuzumab è riconosciuto come farmaco di seconda linea per il carcinoma mammario metastatico in pazienti con HER-2 che hanno ricevuto uno o più regimi chemioterapici o come farmaco di prima linea in combinazione con paclitaxel. Il trastuzumab viene solitamente utilizzato fino a quando non si verifica la progressione della malattia. È generalmente ben tollerato, ma l'effetto collaterale più significativo è l'insufficienza cardiaca congestizia. L'uso di trastuzumab viene costantemente valutato per vari tipi mono e trattamento combinato in varie popolazioni di pazienti e regimi di trattamento.

Lo stato del recettore di ER, PgR e HER-2 può essere determinato mediante test immunoistochimici standard (IHC) o enzimatici (Chebil et al., 2003; Yamashita et al., 2006; Schaller et al., 2001). Lo stato di HER-2 può anche essere valutato mediante amplificazione genica mediante ibridazione in situ fluorescente (FISH) (Kallioniemi et al., 1992).

In generale, i trattamenti dipendenti dallo stato recettoriale dei pazienti si sono dimostrati molto efficaci nel trattamento del cancro al seno.

Sfortunatamente, circa il 15% dei tumori al seno sono ER, PgR e HER-2 negativi. In questi casi la prognosi è estremamente sfavorevole con un tasso di recidiva dell'80% e una sopravvivenza mediana di soli 6 mesi.

Per i pazienti negativi per ER, PgR e HER-2, così come per i pazienti con malattia resistente alla terapia endocrina, la chemioterapia è l'unica opzione terapeutica. I farmaci chemioterapici comunemente usati nel carcinoma mammario sono la classe delle antracicline, la classe dei taxani e, in misura minore, gli antimetaboliti, ad esempio capecitabina, gemcitabina, agenti alchilanti e alcaloidi della vinca. Questi farmaci sono usati secondo due principali regimi di trattamento. Questi farmaci possono essere usati come mezzi indipendenti in sequenza o può essere utilizzato in terapia di combinazione. Naturalmente, queste due opzioni di trattamento possono essere combinate in una certa misura.

Le antracicline, e in particolare la doxorubicina e l'epirubicina, hanno dimostrato di essere agenti attivi nel trattamento del carcinoma mammario e i regimi di combinazione di antracicline sono trattamenti di prima linea nei pazienti che non hanno ricevuto antracicline in terapia adiuvante. Un semplice trattamento combinato consiste, ad esempio, in doxorubicina/epirubicina più ciclofosfamide, doxorubicina/epirubicina più ciclofosfamide e 5-fluorouracile, o una combinazione di antracicline e capecitabina o gemcitabina (O'Shaughnessy, 2005).

Tuttavia, con l'uso di routine delle antracicline nelle prime fasi del trattamento del cancro al seno, aumenta la probabilità di sviluppare resistenza alle antracicline nel cancro al seno (Bernard-Marty et al., 2004).

La somministrazione dei taxani paclitaxel e docetaxel durante il trattamento ha fornito un'ulteriore opportunità per controllare la malattia di prima e seconda linea. Paclitaxel ha un meccanismo d'azione unico e un ampio spettro di attività antiproliferativa in quanto si lega ai microtubuli, promuove la polimerizzazione della tubulina e stabilizza i microtubuli assemblati. Di conseguenza, il paclitaxel blocca il ciclo cellulare in profase, portando all'accumulo di cellule nella fase G2/M.

Sfortunatamente, il paclitaxel ha una solubilità in acqua estremamente bassa, rendendo difficile l'ottenimento di un prodotto adatto forma di dosaggio. Paclitaxel è attualmente formulato e somministrato in veicoli tra cui Cremophor EL (polietossilato Olio di ricino) ed etanolo in un rapporto di 50:50 (v/v). Questa soluzione viene diluita a 1:10 in soluzione fisiologica prima della somministrazione al paziente. Tuttavia, vari gravi reazioni avverse composizioni di Cremophor EL, quali, ad esempio, ipersensibilità e reazioni di ipersensibilità, nefrotossicità e neurotossicità.

I brevetti US 5.648.090, 5.424.073 e 6.146.659 (Rahman et al.) descrivono paclitaxel incapsulato in liposomi per un metodo di trattamento del cancro nei mammiferi. Questi brevetti descrivono un metodo per somministrare a un ospite una quantità terapeuticamente efficace di una composizione farmaceutica di liposomi, che include un materiale formante liposomi, cardiolipina, e un agente come paclitaxel o un derivato antineoplastico di paclitaxel, o una loro miscela, con un eccipiente farmaceuticamente accettabile.

È noto dal brevetto US 5.837.283 che i liposomi cationici sono indirizzati preferenzialmente alle cellule endoteliali angiogeniche nei tumori solidi. È noto da WO 2005/0309533 (Teifel et al.) che il trattamento con paclitaxel incapsulato in liposomi cationici può essere efficace in vari tipi di cancro. Questo documento descrive l'uso di composizioni di liposomi cationici di paclitaxel in pazienti affetti da melanoma, cancro prostata, pancreas, tratto gastrointestinale, colon e retto e ghiandole mammarie. Viene anche descritto l'uso di composizioni di liposomi cationici di paclitaxel in vari modelli sperimentali di cancro pancreatico, sarcoma uterino, carcinoma del colon e carcinoma a cellule squamose della testa e del collo.

Sono anche note composizioni liposomiali per preparazioni di antracicline. La doxorubicina è stata incapsulata in liposomi pegilati o non pegilati scarichi per il trattamento del cancro al seno. Queste composizioni sono state utilizzate in regimi di trattamento del cancro al seno di prima linea (Chan et al., 2004) e di seconda linea (Keller et al., 2004).

In sintesi, possiamo affermare che la maggior parte delle opzioni terapeutiche per il carcinoma mammario dipendono dallo stato recettoriale delle pazienti. In particolare, i tipi di trattamento endocrino per i pazienti con un sottogruppo negativo per tre recettori sono inefficaci. Le opzioni chemioterapiche sono limitate e si nota spesso resistenza ai regimi simili alle antracicline esistenti. Pertanto, vi è un bisogno insoddisfatto in campo medico di sviluppare nuovi trattamenti per questa indicazione.

Pertanto, l'obiettivo principale della presente invenzione è quello di migliorare il trattamento del carcinoma mammario, negativo per tre recettori, in particolare nei pazienti con resistenza al trattamento con antracicline.

Descrizione dell'invenzione

Questo problema è risolto da una nuova composizione farmaceutica per il trattamento del carcinoma mammario a triplo recettore negativo. La composizione può essere utilizzata in vari regimi o come terapia mono o combinata.

Il primo aspetto della presente invenzione riguarda l'uso di una preparazione liposomiale cationica contenente almeno un lipide cationico, un agente antimitotico ed eventualmente almeno un lipide neutro e/o anionico, per la preparazione di una composizione farmaceutica per il trattamento della tripla cancro al seno recettore negativo in persona o animale.

In una forma di realizzazione preferita, la preparazione liposomiale cationica contiene almeno un lipide cationico in una quantità da circa 30% in moli a circa 99,9% in moli, un agente antimitotico in una quantità di almeno circa 0,1% in moli e facoltativamente almeno un composto neutro e/o un lipide anionico in una quantità da circa 0% in moli a circa 70% in moli.

L'agente antimitotico è preferibilmente paclitaxel o un suo derivato come docetaxel. Altri agenti antimitotici adatti sono antracicline, preferibilmente doxorubicina o epirubicina, talidomide, alcaloidi della vinca come vinorelbina o vincristina, altri agenti che interagiscono con i microtubuli come discodermolide, laulimalide, isolaulimalide, eleterobina, sarcodictin A e B.

La formulazione liposomiale cationica può essere utilizzata come monoterapia o in terapia combinata, come in terapia combinata con una dose terapeuticamente efficace di almeno un altro agente attivo che può essere somministrato come una formulazione che non è una formulazione liposomiale cationica, come una formulazione liposomiale cationica -formulazione liposomiale. L'agente attivo aggiuntivo può essere un agente chemioterapico come un'antraciclina e/o in aggiunta un taxano come il paclitaxel.

Per il trattamento del carcinoma mammario a triplo recettore negativo, i richiedenti prevedono che l'uso di un agente antitumorale, come un taxano incorporato nel catione liposomiale, fornisca un migliore equilibrio tra risposta clinica e effetti collaterali rispetto all'uso di un agente antimitotico in una formulazione diversa da quella liposomiale. Questo effetto non può essere previsto sulla base della tecnica nota poiché i liposomi cationici indirizzano il farmaco verso le cellule endoteliali tumorali, che costituiscono solo una piccola parte del tumore.

Inoltre, i Richiedenti ritengono che la terapia di combinazione con un agente antimitotico in una formulazione liposomiale e un agente aggiuntivo, come un agente antimitotico in una formulazione diversa dalla sua formulazione liposomiale, abbia un rapporto migliorato risposta clinica ed effetti collaterali rispetto all'utilizzo della sola formulazione non liposomiale se utilizzata a dosi cumulative simili. Un tale effetto sinergico non poteva essere previsto sulla base della tecnica anteriore. Come notato sopra, diverse composizioni bersagliano i farmaci in differenti siti all'interno del tumore. Non si poteva prevedere che farmaci con lo stesso tipo di azione, come i farmaci antimitotici, mostrassero un effetto sinergico quando agivano su cellule diverse all'interno del tumore.

Esempi preferiti dell'uso di una composizione farmaceutica contenente paclitaxel in liposomi cationici per il trattamento di vari tumori nell'uomo sono descritti in WO 2005/0309533 (Teifel et al.).

Un particolare vantaggio della presente invenzione è un nuovo metodo per il trattamento di un sottotipo di cancro al seno per il quale vi erano solo opzioni terapeutiche limitate a causa delle sue proprietà biologiche. Tuttavia, è da notare che la suddetta terapia di associazione può essere utilizzata anche per altre indicazioni mediche, ad esempio per il trattamento di disturbi iperproliferativi, quali disturbi angiogenici e/o vascolari, o tumori in genere.

Un particolare vantaggio della terapia combinata è la riduzione degli effetti collaterali dei principi attivi. Pertanto, è un grande vantaggio aumentare la gamma di dosi di agenti chemioterapici utilizzati somministrando una combinazione di farmaci in forma liposomiale e non liposomiale senza aumentare gli effetti collaterali rispetto al metodo tradizionale di trattamento di pazienti con cancro a triplo recettore negativo o altri disturbi , il trattamento combinato aumenta l'efficacia del trattamento e riduce gli effetti collaterali.

a) una preparazione di liposomi cationici comprendente almeno un lipide cationico, un agente antimitotico e facoltativamente almeno un lipide neutro e/o anionico, e

b) una formulazione non liposomiale contenente un agente antimitotico per la somministrazione simultanea, separata e/o sequenziale a un essere umano o animale.

Un altro aspetto dell'invenzione riguarda la combinazione

a) una preparazione liposomiale cationica come descritta sopra, che contiene preferibilmente almeno un lipide cationico in una quantità da circa 30% in moli a circa 99,9% in moli, un agente antimitotico, come un taxano, in una quantità di almeno circa 0,1% % in moli e, facoltativamente, almeno un lipide neutro e/o anionico in una quantità da circa lo 0% in moli a circa il 70% in moli e

b) una formulazione non liposomiale contenente un agente antimitotico,

per la somministrazione simultanea, separata e/o sequenziale nel corpo umano o animale. Il trattamento del cancro è preferito.

Un altro aspetto dell'invenzione riguarda un metodo per il trattamento del carcinoma mammario triplo recettore negativo comprendente la somministrazione di una preparazione di liposomi cationici comprendente almeno un lipide cationico, un agente antimitotico e facoltativamente almeno un lipide neutro e/o anionico, e, preferibilmente contenente a almeno un lipide cationico in una quantità da circa 30% in moli a circa 99,9% in moli, un agente antimitotico, come un taxano, in una quantità di almeno circa 0,1% in moli e facoltativamente almeno un neutro e/o un anionico lipide in una quantità da circa lo 0% in moli a circa il 70% in moli a una dose terapeuticamente efficace per un individuo.

Ancora un altro aspetto dell'invenzione si riferisce a un metodo per il trattamento di un disturbo iperproliferativo comprendente la somministrazione della combinazione descritta sopra a una dose terapeuticamente efficace a un individuo.

Forme di realizzazione particolarmente preferite dell'invenzione relative a formulazioni liposomiali cationiche, combinazioni di una formulazione liposomiale cationica e una formulazione non liposomiale per il trattamento del carcinoma mammario negativo ai trirecettori sono descritte più specificamente nella seguente descrizione ed esempi.

"Circa" nel contesto dei valori quantitativi si riferisce a una deviazione media al massimo ±20%, preferibilmente ±10% del valore indicato. Ad esempio, una quantità di lipide cationico di circa il 30% in moli si riferisce al 30% in moli ± 3% in moli rispetto alla molarità totale del lipide/anfifilo.

"Agente attivo" si riferisce ad un agente che è terapeuticamente efficace.

"Veicolo" si riferisce a un diluente, adiuvante, eccipiente o eccipiente adatto per la somministrazione di un agente diagnostico o terapeutico. Il termine si riferisce anche a uno o più componenti farmaceuticamente accettabili che contengono, formano complessi con, o sono altrimenti associati con un agente per facilitare il trasporto di tale agente al suo sito bersaglio previsto. I veicoli includono quelli noti nell'arte come liposomi, polimeri, complessi lipidici, sieroalbumina, anticorpi, ciclodestrine e destrani o altri complessi supramolecolari.

"Combinazione" o "co-somministrazione" si riferisce a un regime sincrono, seriale, sovrapposto, alternato, concomitante o qualsiasi altro regime di trattamento in cui diversi farmaci o agenti terapeutici vengono somministrati come parte dello stesso regime di trattamento, corso o indicazione, o in cui i periodi di tempo durante i quali i vari farmaci o agenti terapeutici somministrati si sovrappongono in altro modo.

Il termine "derivato" si riferisce a un composto derivato da un altro composto pur conservando le sue caratteristiche strutturali generali. I derivati ​​possono essere ottenuti, ad esempio, mediante funzionalizzazione chimica o derivatizzazione.

I termini "liposoma" e "preparazione liposomiale" sono usati come sinonimi in questa specifica. "Liposoma" si riferisce a una microscopica vescicola sferica, legata alla membrana (circa 50-2000 nm di diametro). Il termine "liposoma" comprende qualsiasi compartimento racchiuso in un doppio strato lipidico. I liposomi sono anche chiamati vescicole lipidiche. Per formare un liposoma, le molecole lipidiche includono porzioni allungate non polari (idrofobe) e porzioni polari (idrofile). Le porzioni idrofobe e idrofile della molecola sono preferibilmente situate alle due estremità della struttura molecolare allungata. Quando tali lipidi sono dispersi in acqua, formano spontaneamente membrane a doppio strato chiamate lamelle. Le lamine sono costituite da due fogli monostrato di molecole lipidiche con le loro superfici non polari (idrofobe) rivolte l'una verso l'altra e le loro superfici polari (idrofile) rivolte verso l'ambiente acquatico. Le membrane formate dai lipidi contengono parte della fase acquosa in modo simile a membrana cellulare, contenente il contenuto della cella.

Pertanto, il doppio strato liposomiale ha somiglianze con una membrana cellulare senza i componenti proteici presenti nella membrana cellulare. Il termine "liposoma" come utilizzato nella presente invenzione comprende liposomi multilamellari, che generalmente hanno un diametro compreso tra circa 1 e 10 micron, e sono composti da circa 200 strutture concentriche a doppio strato lipidico intervallate da strati di fase acquosa, e anche comprende vescicole lamellari singole costituite da un unico strato lipidico e generalmente hanno un diametro che va da circa 20 a circa 400 nanometri (nm), da circa 50 a circa 300 nm, da circa 300 a circa 400 nm, da circa 100 a circa 200 nm, e le bolle possono essere ottenute esponendo i liposomi multilamellari agli ultrasuoni, estrusione sotto pressione attraverso membrane con pori di una certa dimensione o omogeneizzazione sotto alta pressione. I liposomi preferiti sarebbero vescicole lamellari singole che hanno un singolo strato lipidico e un diametro nell'intervallo di circa 25-400 nm.

Il termine "taxano" come qui utilizzato si riferisce a una classe di agenti antineoplastici aventi un meccanismo d'azione dei microtubuli e aventi una struttura che include un'insolita struttura ad anello del taxano e una catena laterale stereoscopica che è richiesta per l'attività citostatica. Il termine "taxano" comprende anche una varietà di derivati ​​noti, inclusi sia derivati ​​idrofili che derivati ​​idrofobi. I derivati ​​tassanici includono, senza limitazione, i derivati ​​del galattosio e del mannosio descritti nella domanda di brevetto internazionale n. WO 99/18113; piperazino e altri derivati ​​descritti in WO 99/14209; i derivati ​​tassanici descritti in WO 99/09021, WO 98/22451 e US Patent No. 5,869,680; 6-tio derivati ​​come descritto in WO 98/28288; derivati ​​solfenammidici descritti nel brevetto US n. 5821263; e i derivati ​​del tassolo descritti nel brevetto statunitense No. 5,415,869 Sia l'agente attivo paclitaxel che il docetaxel appartengono alla classe dei taxani.

"Paclitaxel" (che deve essere inteso qui include analoghi, formulazioni e derivati ​​come, per esempio, docetaxel, taxotere (formulazione docetaxel), analoghi 10-deacetilici di paclitaxel e 3"N-desbenzoil-3"N-terz- analoghi butossicarbonilici del paclitaxel) possono essere facilmente preparati utilizzando tecniche note agli esperti del ramo (si vedano anche WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076 ; brevetto statunitense n. Luigi, Mo. (T7402 da Taxus brevifolia; o T-1912 da Taxus yannanensis). Dovrebbe essere inteso che paclitaxel si riferisce non solo alla forma convenzionale chimicamente disponibile di paclitaxel, ma anche ad analoghi (ad esempio, taxotere come sopra) e coniugati di paclitaxel (ad esempio, paclitaxel-PEG, paclitaxeldextran o paclitaxel-xilosio).

"Dose terapeuticamente efficace" è la dose dell'agente attivo o della composizione farmaceutica che è sufficiente per ottenere il risultato terapeutico desiderato nell'individuo che riceve il trattamento.

Il termine "potenziale zeta" si riferisce al potenziale elettrico misurato di una particella, come un liposoma, come misurato da uno strumento come lo Zetasizer 3000 utilizzando la microelettroforesi laser Doppler in determinate condizioni. Il potenziale zeta descrive il potenziale al confine tra il volume della soluzione e l'area di taglio idrodinamico o strato diffuso. Questo termine è sinonimo di "potenziale elettrocinetico" perché è il potenziale delle particelle che agisce dall'esterno ed è responsabile del comportamento elettrocinetico della particella.

In tutti i casi, l'unità mg/m 2 b.t. o semplicemente mg/m 2 si riferisce a mg dell'agente attivo, ad esempio paclitaxel, per m 2 di superficie corporea umana (b.p.).

Lipidi cationici preferiti della formulazione liposomiale sono i sali N--N,N,N-trimetilammonio, ad esempio metil solfato (DOTAP). Altri lipidi utili per la presente invenzione possono includere: DDAB, bromuro di dimetildiottadecilammonio; propani di 1,2-diacilossi-3-trimetilammonio (inclusi senza limitazione: dioleoile, dimiristoile, dilauroile, dipalmitoile e distearoile; anche 2 diverse catene aciliche possono essere attaccate allo scheletro del glicerolo); N--N,N-trimetilammina (DODAP); 1,2-diacilossi-3-dimetilammonio propani (inclusi senza limitazione: dioleoile, dimiristoile, dilauroile, dipalmitoile e distearoile; anche 2 diverse catene aciliche possono essere attaccate allo scheletro del glicerolo); Cloruro di N-N,N,N-trimetilammonio (DOTMA); 1,2-dialchilossi-3-dimetilammonio propani (inclusi senza limitazione: dioleile, dimiristile, dilaurile, dipalmitile e distearile; anche 2 diverse catene alchiliche possono essere attaccate allo scheletro del glicerolo); dioctadecylamidoglycylspermine (DOGS); 3β-colesterolo (DC-Chol); 2,3-dioleoilossi-N-(2-(sperminacarbossammido)etil)-N,N-dimetil-1-propanaminio trifluoroacetato DOSPA); β-alanilcolesterolo; bromuro di cetiltrimetilammonio (CTAB); diC14-amidina; N-terz-butil-N"-tetradecil-3-tetradecilamminopropionamidina; 14Dea2; N-(alfa-trimetilammonioacetil)didodecil-D-glutammato cloruro (TMAG); O,O"-ditradecanoil-N-(trimetilammonioacetil)dietanolammina cloruro; 1,3-dioleoilossi-2-(6-carbossispermil)propilammide (DOSPER); N,N,N",N"-tetrametil-N,N"-bis(2-idrossiletil)-2,3-dioleoilossi-1,4-butandiammonio ioduro; 1-2-alchil(alchenil)-3-( 2 -idrossietil)imidazolinio cloruro come descritto da Solodin et al (Solodin et al., 1995), come 1--2-(8(Z)-eptadecenil-3-(2-idrossietil)imidazolinio cloruro (DOTIM), 1- -2-pentadecil-3-(2-idrossietil)imidazolinio cloruro (DPTIM), derivati ​​ammonici quaternari del 2,3-dialchilossipropile contenenti una frazione idrossialchilica su un'ammina quaternaria come descritto, ad esempio, da Felgner et al., 1994) , come: bromuro di 1,2-dioleoil-3-dimetilidrossietilammonio (DORI), bromuro di 1,2-dioleylossipropil-3-dimetilidrossietilammonio (DORIE), bromuro di 1,2-dioleylossipropil-3-dimetilidrossipropilammonio (DORIE-HP), 1, bromuro di 2-dioleylossipropil-3-dimetilidrossibutilammonio (DORIE-HB), bromuro di 1,2-dioleylossipropil-3-dimetilidrossifenilammonio (DORIE-Hpe), bromuro di 1,2-dimiristilossipropil-3-dimetilidrossietilammonio (DMRIE), bromuro di 1,2-dipalmitilossipropil- 3-dimetismo bromuro di lidrossietilammonio (DPRIE), bromuro di 1,2-disterilossipropil-3-dimetilidrossietilammonio (DSRIE), esteri cationici di acilcarnitina secondo Santaniello et al. [brevetto USA n. 5498633]; triesteri cationici della fosfatidilcolina, cioè 1,2-diacil-sn-glicerolo-3-etilfosfocoline, in cui le catene idrocarburiche possono essere sature o insature e ramificate o non ramificate, con una lunghezza di catena da C 12 a C 24 , le due catene aciliche essendo opzionalmente identiche.

In una forma di realizzazione preferita, la formulazione del liposoma include facoltativamente almeno un lipide neutro e/o anionico. I lipidi neutri sono lipidi che hanno una carica netta neutra. I lipidi anionici o anfifili sono molecole che hanno una carica netta negativa. Possono essere scelti tra steroli o lipidi come colesterolo, fosfolipidi, lisolipidi, lisofosfolipidi, sfingolipidi o lipidi pegilati con una carica netta neutra o negativa. Pertanto, utili lipidi neutri e anionici includono: fosfatidilserina, fosfatidilglicerolo, fosfatidilinositolo (non limitato a uno zucchero specifico), acidi grassi, steroli contenenti un gruppo acido carbossilico, come il colesterolo, 1,2-diacil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina , comprese senza restrizioni DOPE, 1,2-diacilglicero-3-fosfocoline e sfingomielina. Gli acidi grassi associati alla spina dorsale del glicerolo non sono limitati a una particolare lunghezza o numero di doppi legami. I fosfolipidi possono anche avere due diversi acidi grassi. Preferibilmente, questi altri lipidi sono in uno stato liquido cristallino a temperatura ambiente, e sono miscibili (cioè si può formare una fase omogenea e non si verifica alcuna separazione di fase o formazione di dominio) con il lipide cationico utilizzato, nel rapporto in cui sono usato. In una forma di realizzazione preferita, il lipide neutro è DOPC.

In ancora un'altra forma di realizzazione preferita, la formulazione di liposoma comprende facoltativamente lipidi neutri e/o anionici, preferibilmente DOPC, in una quantità da circa 30% in moli a circa 70% in moli, preferibilmente da circa 40% in moli a circa 60% in moli e più preferibilmente, da circa il 45% in moli a circa il 55% in moli.

È ancora un altro scopo della presente invenzione essere in grado di disidratare la preparazione liposomiale cationica della presente invenzione, nonché conservare per lunghi periodi di tempo in uno stato disidratato e quindi reidratare prima dell'uso, senza perdere una parte sostanziale del contenuto durante i processi di disidratazione, stoccaggio e reidratazione. Per raggiungere questo obiettivo possono essere presenti uno o più agenti protettivi, come i crioprotettori. Pertanto, la preparazione di liposomi cationici dell'invenzione include preferibilmente un crioprotettore che è scelto tra zuccheri o alcoli, o loro combinazioni. Preferibilmente, il crioprotettore è scelto tra trealosio, maltosio, saccarosio, glucosio, lattosio, destrano, mannitolo, sorbitolo o loro combinazioni. In una forma di realizzazione preferita, la preparazione liposomiale comprende trealosio nell'intervallo da circa il 5% (p/v) a circa il 15% (p/v) rispetto al volume totale della preparazione.

In una forma di realizzazione preferita della presente invenzione, il taxano è paclitaxel o un suo derivato. La preparazione liposomiale cationica può includere paclitaxel in una quantità da almeno circa 2% in moli a circa 8% in moli, preferibilmente almeno da circa 2,5% in moli a circa 3,5% in moli.

In una forma di realizzazione particolarmente preferita, la formulazione liposomiale cationica è DOTAP, DOPC e paclitaxel in un rapporto di circa 50:47:3. Questa formulazione è indicata anche come MBT-0206 o Endo TAG-1. Endo TAG-1 ha un contenuto lipidico di 10 mm in una soluzione al 10% in peso/massa. trealosio diidrato. La preparazione di tale formulazione è descritta in WO 2004/002468, qui integralmente incorporato per riferimento.

Preferibilmente, la preparazione del liposoma ha un potenziale zeta nell'intervallo da circa 0 mV a circa 100 mV, preferibilmente nell'intervallo da circa 20 mV a circa 100 mV, in una soluzione KCI di circa 0,05 mM a circa pH 7,5.

I liposomi divulgati vengono utilizzati per preparare una composizione farmaceutica per il trattamento del cancro al seno, la terapia endocrina e la terapia correlata a HER-2, che è inefficace. Preferibilmente, il trattamento è diretto al carcinoma mammario con triplo recettore negativo. L'indicazione carcinoma mammario con triplo recettore negativo include il carcinoma mammario con stato negativo del recettore degli estrogeni (ER), del recettore del progesterone (PgR) e del recettore HER-2 (Her-2). La determinazione dello stato del recettore è accettata procedura diagnostica cancro al seno, ben noto nell'arte. Lo stato di ER, PgR e HER-2 può essere determinato mediante analisi standard immunoistochimiche o basate su enzimi (IHC) (Chebil et al., 2003; Yamashita et al., 2006), (Schaller et al., 2001). Lo stato di HER-2 può anche essere valutato mediante amplificazione genica mediante ibridazione in situ fluorescente (FISH) (Kallioniemi et al., 1992).

La composizione farmaceutica può essere utilizzata come farmaco di prima, seconda e terza linea. I pazienti che ricevono la terapia possono essere stati precedentemente sottoposti a intervento chirurgico per resecare il tumore, radioterapia e/o chemioterapia. La chemioterapia utilizzata per il cancro al seno è un regime di combinazione a base di antracicline. Tipicamente, questi regimi di combinazione includono un farmaco antraciclinico come la doxorubicina o l'epirubicina. Il trattamento di prima linea può includere la terapia di combinazione con un'antraciclina e un taxano. Le pazienti possono essere in pre o postmenopausa. Il cancro mirato per il trattamento può essere diverso fasi cliniche per dimensione, distribuzione ed estensione della formazione di metastasi.

La composizione farmaceutica può essere somministrata a un paziente a una dose terapeuticamente efficace. Almeno una volta alla settimana, ma può essere somministrato anche più volte alla settimana. In una forma di realizzazione preferita, la composizione farmaceutica viene somministrata una o due volte alla settimana. La composizione può anche essere somministrata un numero variabile di volte alla settimana durante il periodo di trattamento.

Durante il corso del trattamento, l'applicazione della composizione può essere saltata per almeno una settimana. A seconda della durata del trattamento e degli effetti collaterali osservati, l'applicazione può anche essere saltata più volte durante il periodo di trattamento.

Preferibilmente, la preparazione di liposomi viene somministrata in dosi singole da circa 1 mg/m ² a circa 50 mg/m ² per somministrazione. In una forma di realizzazione preferita, il farmaco viene somministrato ad una dose da circa 20 mg/m2 a circa 50 mg/m2 per somministrazione. In una forma di realizzazione particolarmente preferita, il farmaco viene somministrato ad una dose da circa 22 mg/m2 a circa 44 mg/m2 per somministrazione. In un'altra forma di realizzazione particolarmente preferita, il farmaco viene somministrato due volte alla settimana alla dose di circa 44 mg/m 2 . Nella forma di realizzazione più preferita dell'invenzione, la preparazione liposomiale viene somministrata nei giorni 1, 5, 8, 11, 15, 18, 22, 25, 29, 32, 36 e 39 del ciclo di trattamento seguito da un trattamento di 14 giorni intervallo senza trattamento o a 1, 4, 6, 11, 15 e 18 giorni del ciclo di trattamento seguito da un intervallo di 10 giorni senza trattamento. Volendo, i cicli di trattamento possono essere ripetuti più volte, ad esempio almeno 2, 3 o 4 volte.

Altro aspetto importante della presente invenzione è la possibilità di utilizzare una formulazione liposomiale cationica in terapia di combinazione simultanea, separata o sequenziale. La terapia di combinazione comprende inoltre la somministrazione di una dose terapeuticamente efficace di almeno un altro agente attivo. In una forma di realizzazione, un altro agente attivo è una formulazione non liposomiale. La terapia di combinazione può includere la somministrazione simultanea, separata e/o sequenziale a un essere umano o animale. Nella terapia di associazione concomitante, la preparazione liposomiale e un altro principio attivo vengono somministrati nello stesso giorno.

La preparazione liposomiale e l'altro agente attivo possono essere somministrati in momenti diversi nello stesso giorno o in giorni diversi. In una forma di realizzazione preferita, la preparazione liposomiale viene somministrata prima di un altro agente attivo, preferibilmente più di un'ora, ma non più di 12 ore prima dell'applicazione di un altro agente attivo.

Un altro agente attivo può essere scelto tra agenti citotossici o citostatici, come un agente avente attività antitumorale o attività contro le cellule endoteliali, un composto che riduce o elimina le reazioni di ipersensibilità, o un chemiosensibilizzante, o loro combinazioni.

In una forma di realizzazione preferita, l'ulteriore agente attivo è selezionato tra un agente antineoplastico, in particolare un agente antimitotico come un taxano, antraciclina, preferibilmente doxorubicina o epirubicina, statina, depsipeptide, talidomide, altri agenti che interagiscono con i microtubuli come discodermolide, laulimalide, isolaulimalide, eleterobina , sarcodictina A e B, agenti alchilanti, in particolare composti comprendenti platino come cisplatino, carboplatino, agenti inibitori della DNA topoisomerasi come camptotecina, antimetaboliti RNA/DNA, in particolare 5-fluorouracile, gemcitabina o capecitabina. Nella forma di realizzazione più preferita, è scelto tra paclitaxel, docetaxel, campotecina o qualsiasi loro derivato.

Un composto che riduce o elimina le reazioni di ipersensibilità può essere selezionato dal gruppo costituito da steroidi, antistaminici, antagonisti del recettore H2 e loro combinazioni in una quantità sufficiente a prevenire reazioni anafilattiche fatali. Detto composto può anche essere scelto dal gruppo costituito da ranitidina, desametasone, difenidramina, famotidina, idrocortisone, clemastina, cimetidina, prednisolone, clorfeniramina, clorfenamina, dimetindene maleato e prometazina.

Il chemiosensibilizzante può essere scelto dal gruppo costituito da modulatori ciclo cellulare, sostanze che aboliscono la resistenza ai farmaci come il verapamil, sostanze vasoattive come i farmaci antipertensivi e sostanze che modificano le interazioni dei liposomi cationici con i componenti del sangue come la protamina.

Una forma di realizzazione preferita dell'invenzione è l'uso di una formulazione liposomiale in terapia di combinazione con un taxano non liposomiale come paclitaxel o un suo derivato. Preferibilmente, il paclitaxel è formulato in Cremophor EL o in un coniugato di albumina. In una forma di realizzazione massimamente preferita, una preparazione liposomiale contenente DOTAP, DOPC e paclitaxel viene utilizzata in terapia di combinazione con un taxano non liposomiale come paclitaxel o un suo derivato.

In ancora un altro aspetto, la presente invenzione riguarda la terapia di combinazione, il taxano non liposomiale può essere utilizzato a una dose settimanale inferiore rispetto alla monoterapia standard. In una forma di realizzazione preferita, la formulazione liposomiale viene somministrata a una dose settimanale da circa 20 mg/m2 a 50 mg/m2 e la formulazione di taxani non liposomiale viene somministrata a una dose settimanale da 25 mg/m2 a 100 mg/ m2.

In una forma di realizzazione preferita, la preparazione liposomiale e il taxano non liposomiale vengono somministrati una volta alla settimana.

Negli attuali regimi terapeutici, una volta alla settimana vengono somministrati da 80 a 150 mg/m2 di paclitaxel non liposomiale. Il docetaxel viene somministrato a una dose da 35 mg/m2 a 40 mg/m2 o circa 70 mg/m2 in una schedula una volta alla settimana (Eniu et al., 2005).

In una forma di realizzazione preferita, la preparazione liposomiale viene somministrata una volta alla settimana in combinazione con circa 60 mg/m 2 del paclitaxel non liposomiale. In un'altra forma di realizzazione preferita dell'invenzione, la preparazione liposomiale viene somministrata una volta alla settimana in combinazione con circa 25-35 mg/m 2 del docetaxel non liposomiale.

In una forma di realizzazione maggiormente preferita, la formulazione liposomiale viene somministrata una volta alla settimana ad una dose di circa 22 mg/m 2 e il paclitaxel o derivato non liposomiale viene somministrato una volta alla settimana ad una dose di circa 60 mg/m 2 o circa 70 mg/m 2 , preferibilmente nello stesso giorno.

Nella forma di realizzazione più preferita, la composizione viene utilizzata insieme a una formulazione non liposomiale nei giorni 1, 8, 15, 22, 29, 36 di un ciclo di trattamento seguito da un intervallo senza trattamento di 14 giorni, o nei giorni 1, 8, 15 di un ciclo di trattamento seguito da 13 intervalli giornalieri senza trattamento. Volendo, i cicli di trattamento possono essere ripetuti più volte, ad esempio almeno 2, 3 o 4 volte.

La preparazione liposomiale può essere somministrata per via sistemica, preferibilmente per via endovenosa. La preparazione liposomiale può essere somministrata insieme a veicoli fisiologicamente accettabili come un tampone.

Tipicamente, la composizione farmaceutica viene fornita in forma disidratata. Prima dell'uso, la composizione deve essere idratata in acqua di grado farmaceutico o soluzione salina o altro liquido adatto, preferibilmente includendo veicoli fisiologicamente accettabili come un tampone.

Descrizione del disegno

Fico. 1

Sperimentazione clinica EndoTAG® nel carcinoma mammario con triplo recettore negativo.

Diagramma schematico di un regime che confronta la somministrazione di Taxol® con la somministrazione di EndoTAG®-1 da solo o in combinazione con Taxol® in donne con carcinoma mammario negativo a tre recettori che hanno ricevuto un trattamento adiuvante fino ad almeno 6 mesi prima dell'antraciclina. Gruppo 1: Taxol® (70 mg/m 2 ) in combinazione con EndoTAG®-1 (22 mg/m 2 di paclitaxel liposomiale) viene somministrato nei giorni 1, 8, 15 di ogni ciclo. Gruppo 2: EndoTAG®-1 (44 mg/m2 di paclitaxel liposomiale) viene somministrato nei giorni 1, 4, 8, 11, 15, 18 di ogni ciclo. Gruppo 3: Taxol® (90 mg/m 2 ) somministrato nei giorni 1, 8, 15 di ogni ciclo (gruppo di controllo).

Esempi

Esempio 1 Protocollo generale per il trattamento degli esseri umani

Questo esempio si riferisce ai protocolli per il trattamento del carcinoma mammario trirecettore negativo negli esseri umani.

La preparazione di liposomi cationici può essere somministrata come monoterapia o in combinazione con un altro agente attivo. L'agente attivo della preparazione liposomiale e l'altro agente attivo possono essere uguali o differenti. I fondi vengono selezionati in base a diversi fattori. Questi fattori sono correlati all'esatto stato fisiologico pazienti, trattamento precedentemente ricevuto da pazienti, resistenza ai farmaci o effetti collaterali di qualsiasi principio attivo.

I vari elementi della conduzione di una sperimentazione clinica, inclusi il trattamento e il monitoraggio dei pazienti, saranno noti agli esperti del ramo alla luce della presente divulgazione.

I pazienti selezionati per il test hanno una malattia oggettivamente determinata dall'esame obiettivo, metodi di laboratorio o procedure radiografiche. Tali pazienti preferibilmente non hanno nemmeno una storia di malattie cardiache o cardiache clinicamente rilevanti nefropatia e qualsiasi chemioterapia deve essere interrotta almeno 2 settimane prima dell'arruolamento nello studio.

Le formulazioni descritte possono essere somministrate per un tempo di infusione da breve a medio. L'infusione somministrata a qualsiasi livello di dose dovrebbe dipendere dalla tossicità raggiunta dopo ciascuna infusione. Pertanto, se si raggiunge una tossicità di Grado II dopo una singola infusione o dopo un certo periodo di tempo per un'infusione a velocità costante, è necessario sospendere ulteriori dosi o interrompere l'infusione a velocità costante fino alla scomparsa della tossicità. Dosi crescenti devono essere somministrate a gruppi di pazienti fino a quando circa il 60% dei pazienti mostra una tossicità di grado III o IV inaccettabile in qualsiasi categoria. Dosi che sono 2/3 di questo valore dovrebbero essere definite come dose sicura.

Naturalmente, prima del trattamento e ad intervalli di circa 3-4 settimane devono essere eseguiti un esame fisico, misurazioni del tumore e test di laboratorio. Gli esami di laboratorio devono includere emocromo, creatinina sierica, creatina chinasi, elettroliti, urea, azoto, SGOT (siero glutamamato ossalacetato aminotransferasi), bilirubina, albumina e proteine ​​sieriche totali.

Le risposte cliniche possono essere determinate da una misura accettabile o dal cambiamento dei valori di laboratorio, come i marcatori tumorali. Ad esempio, una risposta completa può essere definita come la scomparsa di tutti i segni rilevabili della malattia per almeno un mese, mentre una risposta parziale può essere definita come una riduzione del 50% o più.

Certamente si verificheranno alcune variazioni nel dosaggio, a seconda delle condizioni dell'individuo in trattamento. La persona responsabile della somministrazione determinerà in ogni caso la dose appropriata per il singolo soggetto. Inoltre, per la somministrazione agli esseri umani, i preparati devono soddisfare gli standard di sterilità, apirogenicità, sicurezza generale e purezza, come richiesto dall'Office of Biological Standards della FDA. prodotti alimentari e droghe statunitensi).

Prima dell'uso, la formulazione può essere ricostituita sciogliendo in una soluzione acquosa nel caso in cui la formulazione sia stata liofilizzata. Come sottolineato sopra, la quantità richiesta di applicazione è calcolata dal peso corporeo del paziente e dal regime posologico. La via di somministrazione include preferibilmente la somministrazione intraperitoneale o parenterale. Di solito l'introduzione viene effettuata per via endovenosa.

Per l'uso nella presente invenzione, la "dose terapeuticamente efficace" della composizione o dell'agente attivo somministrato a un soggetto varierà, a seconda di un'ampia gamma di fattori. La quantità dipenderà dalle dimensioni, dall'età, dal sesso, dal peso e dalle condizioni del paziente, nonché dall'attività della sostanza somministrata. Avendo indicato che vi è una notevole variabilità in termini di dosaggio, i Richiedenti ritengono che gli esperti del ramo possano, utilizzando la presente divulgazione, determinare facilmente il dosaggio appropriato somministrando prima quantità estremamente piccole e aumentando gradualmente la dose fino ad ottenere il risultato desiderato .

Esempio 2 Studio di fase II che valuta l'efficacia di EndoTAG®-1 in pazienti con carcinoma mammario con tre recettori negativi

2.1. Descrizione dello studio

Attualmente ci sono poche opzioni di trattamento per le donne con tumori al seno "tre recettori negativi" per i recettori degli estrogeni (ER), i recettori del progesterone (PgR) e HER-2/neu (HER-2). Lo stato del tumore triplo negativo è associato a prognosi infausta nei pazienti con carcinoma mammario in stadio iniziale. Il termine "tumore triplo negativo" è attualmente utilizzato come surrogato clinico per il carcinoma mammario "basale": l'80% dei tumori trirecettori-negativi è "basale". I tumori "basali" sono un sottotipo specifico di tumori al seno definiti dal profilo di espressione genica (Brenton et al., 2005; Sotiriou et al., 2003; Sorlie et al., 2001).

2.2. Struttura dello studio

Un totale di 135 pazienti con carcinoma mammario triplo recettore negativo che soddisfacevano i criteri di ammissibilità sono state assegnate in modo casuale a uno dei seguenti gruppi di trattamento:

Gruppo 1: Taxol® (70 mg/m 2 ) in combinazione con Endo TAG®-1 (22 mg/m 2 di paclitaxel liposomiale) nei giorni 1, 8, 15 di ogni ciclo seguito da un intervallo di 13 giorni senza trattamento.

Gruppo 2: Endo TAG®-1 in monoterapia (44 mg/m2 di paclitaxel liposomiale) nei giorni 1, 4, 8, 11, 15, 18 di ogni ciclo seguito da un intervallo di non trattamento di 10 giorni.

Gruppo 3: Taxol® in monoterapia (70 mg/m 2 ) nei giorni 1, 8, 15 di ciascun ciclo seguito da un intervallo di non trattamento di 13 giorni (gruppo di controllo).

La randomizzazione viene eseguita per ottenere un rapporto 2:2:1 tra i gruppi di trattamento e stratificato per trattamento adiuvante con antraciclina da sola o antraciclina + Taxol®.

Ogni ciclo di trattamento comprende 3 settimane di trattamento seguite da 1 settimana di riposo, vale a dire solo 4 settimane.

I pazienti riceveranno inizialmente un trattamento per un minimo di 4 cicli. Una volta valutata la risposta, i tumori che rispondono in modo sicuro al trattamento (cioè, CR, PR e SD) hanno la possibilità di continuare il trattamento fino a quando non si verifica PD o tossicità inaccettabile.

Tutti i pazienti vengono trattati fino alla progressione della malattia o alla tossicità e monitorati per determinare la sopravvivenza.

2.3. Obiettivi

obbiettivo primario: valutare l'efficacia di Endo TAG®-1 + Taxol® (terapia di combinazione) ed Endo TAG®-1 (monoterapia) come terapia di emergenza in pazienti affette da carcinoma mammario resistente al trattamento con tre antracicline negative ± Taxol®.

bersaglio secondario: valutare la sicurezza e la tollerabilità di Endo TAG®-1 + Taxol® (terapia di combinazione) ed Endo TAG®-1 (monoterapia) in questa popolazione di pazienti.

2.4. risultati

Risultati primari di efficacia:

Il tasso di sopravvivenza libera da sopravvivenza (PFS) a 4 mesi calcolato dal tasso in pazienti randomizzati che non mostrano progressione della malattia e sono vivi 16 settimane dopo la prima infusione del farmaco oggetto dello studio.

Risultati secondari di efficacia:

Tempo mediano di PFS.

Risposta del tumore (CR/PR/SD/PD) a 8, 16 e 24 settimane

Numero di pazienti che hanno risposto al trattamento, ad es. risposta obiettiva (OR = risposta totale (CR) + risposta parziale (PR)).

Numero di pazienti con malattia stabile (DS).

Durata mediana della risposta obiettiva e malattia stabile.

Tasso di sopravvivenza a 4 mesi calcolato da pazienti randomizzati che vivono 16 settimane dopo la prima infusione del farmaco oggetto dello studio.

Tempo medio di sopravvivenza totale(SO)

Punteggio del dolore (VAS)

Percentuale di pazienti con miglioramento di almeno 10 mm rispetto al basale durante il trattamento con il farmaco oggetto dello studio.

Percentuale di pazienti che hanno subito un peggioramento di almeno 10 mm rispetto al basale durante il trattamento con il farmaco oggetto dello studio.

Valutazione del beneficio clinico su una scala della qualità della vita (QoL).(Questionario EORTC-QoL-C30)

Variazione media settimanale rispetto al basale alla fine del trattamento con il farmaco in studio.

Percentuale di pazienti con un miglioramento di almeno 10 punti rispetto al basale durante il trattamento con il farmaco oggetto dello studio.

Percentuale di pazienti che sono peggiorati di almeno 10 punti rispetto al basale durante il trattamento con il farmaco oggetto dello studio.

Risultati sulla sicurezza:

Effetti collaterali: frequenza e percentuale di pazienti con effetti collaterali derivanti dal trattamento.

Valori di laboratorio: il numero di valori di laboratorio clinicamente significativi.

Modifica della dose: percentuale di pazienti con alto declino dose, ritardo o interruzione della somministrazione del farmaco oggetto dello studio.

2.5. Numero di soggetti/pazienti

135 donne con recidiva locale e/o metastatico, precedentemente trattate con chemioterapia antraciclina ± Taxol® per carcinoma mammario triplo recettore negativo sono state randomizzate in un rapporto 2:2:1 (54 pazienti con terapia di combinazione Endo TAG®-1 + Taxol®, 54 pazienti con Endo TAG®-1 in monoterapia e 27 pazienti con Taxol® in monoterapia).

2.6. Criterio di inclusione

1. Cancro al seno istologicamente provato da biopsia tumorale, negativo per tre recettori.

2. Stato ormonale negativo per estrogeni (ER), progesterone (PR) e HER2.

3. Età ≥18 anni.

4. Lesioni tumorali, secondo i criteri RCIT.

5. Mancanza di allattamento o gravidanza nei pazienti.

6. Stato di esecuzione 0-2 ECOG.

7. Almeno 6 mesi dopo la precedente chemioterapia sistemica con antracicline in un regime adiuvante da solo o in combinazione con la chemioterapia.

8.Funzione cardiaca normale (punteggio LVEF MUGA mediante scansione o ecocardiografia al di sopra del limite inferiore normale dell'istituto).

9. Funzionalità organica adeguata (in base alla determinazione di neutrofili ≥1,5×10 9 /l, piastrine ≥100×10 9 /l, emoglobina ≥10 g/dl, bilirubina totale ≤1,5 ​​UNL, ASAT (SGOT) e ALT (SGPT) ) ≤2,5 UNL, fosfatasi alcalina ≤2,5 UNL, creatinina ≤150 µmol/L (1,5 mg/dL).

10. Nessun altro dopo malattia grave O condizioni mediche: a) insufficienza cardiaca edematosa o angina pectoris instabile, precedente storia di infarto del miocardio entro 1 anno dall'inclusione nello studio, ipertensione non controllata o alto rischio di aritmie non controllate; b) una storia di attivo o significativo disordine neurologico e/o un disturbo psichiatrico che interferirebbe con la comprensione e la fornitura del consenso informato, così come interferirebbe con il quadro clinico e valutazione radiografica sistema nervoso centrale durante il test; c) infezione attiva incontrollata; d) ulcera allo stomaco attiva, diabete instabile.

11. Assenza di anamnesi passata o attuale di altre neoplasie, eccetto curate: a) carcinoma basocellulare della pelle, b) carcinoma della cervice in situ.

12. Assenza trattamento simultaneo altri farmaci sperimentali. Partecipazione a un altro studio clinico con qualsiasi farmaco sperimentale off-label entro 30 giorni dall'arruolamento nello studio.

13. Consenso informato scritto.

2.7. L'introduzione del farmaco

Endo TAG®-1 + Taxol deve essere somministrato per via endovenosa.

Endo TAG®-1 deve essere somministrato inizialmente alla dose di 0,5 ml/min. Dopo 15 minuti la velocità di infusione deve aumentare a 1,0 ml/min e dopo altri 15 minuti la velocità di infusione deve essere impostata a 1,5 ml/min.

2.8. Risultato primario di efficacia

L'esito primario è il tasso di PFS a 16 settimane nel braccio di trattamento combinato Endo TAG®-1 + Taxol®.

Ipotesi H0: p ≤ 30% rispetto a H 1: p ≥ 50% testata nel braccio di trattamento combinato utilizzando un disegno a una fase a un livello di significatività di α=0,05.

Se la risposta effettiva del tumore è del 50% con il trattamento Taxol® + Endo TAG®-1, il test avrà un punteggio di 1-β=0,90.

La stessa ipotesi sarà testata per la monoterapia con Endo TAG®-1.

Esempio 3 Uso di Endo TAG-1 in combinazione con Taxotere®

3.1. Motivazione del trattamento

Le donne affette da carcinoma mammario tri-recettore negativo, localmente ricorrente e/o metastatico precedentemente trattate con chemioterapia antraciclina ± Taxotere® sono trattate con terapia di combinazione Endo TAG-1 settimanale in combinazione con Taxotere®. Taxotere® include il farmaco docetaxel come ingrediente farmaceutico attivo.

3.2. Criteri che definiscono i requisiti minimi per l'inclusione nello studio

Cancro al seno istologicamente provato dalla biopsia del tumore.

Stato ormonale negativo di estrogeni (ER), progesterone (PR) e HER2 come mostrato da IHC, analisi enzimatica o FISH.

Assenza di pazienti in allattamento o in gravidanza.

Almeno 6 mesi dopo la precedente chemioterapia sistemica adiuvante con antracicline.

Funzione cardiaca normale (punteggio LVEF MUGA mediante scansione o ecocardiografia al di sopra del limite inferiore normale dell'istituto).

Funzione organica adeguata (secondo la determinazione di neutrofili 1,5×10 9 /l, piastrine 100×10 9 /l, emoglobina 10 g/dl, bilirubina totale ≤1,5 ​​UNL, ASAT (SGOT) e ALT (SGPT) 2, 5 UNL , fosfatasi alcalina 2,5 UNL, creatinina 150 µmol/L (1,5 mg/dL).

3.3. Regime di trattamento

Endo TAG®-1 viene somministrato a una dose di 22 mg/m 2 di paclitaxel liposomiale nei giorni 1, 8, 15, 22, 29, 36 di ciascun ciclo, seguito da un intervallo di non trattamento di 14 giorni.

Taxotere® viene somministrato alla dose di 30 mg/m2 di docetaxel nei giorni 1, 8, 15, 22, 29, 36 di ciascun ciclo seguito da un intervallo di non trattamento di 14 giorni.

Entrambi i farmaci vengono somministrati per via endovenosa.

I pazienti vengono trattati fino allo sviluppo della progressione della malattia o della tossicità.

Tutte le composizioni e i metodi descritti e rivendicati nel presente documento possono essere prodotti ed eseguiti senza indebita sperimentazione alla luce della presente divulgazione. Sebbene le composizioni e i metodi della presente invenzione siano stati descritti in termini di forme di realizzazione preferite, risulterà evidente agli esperti del ramo che possono essere apportate modifiche alle composizioni, ai metodi e alle fasi o sequenza di fasi del metodo qui descritto senza allontanarsi dal concetto, dallo spirito e dall'ambito dell'invenzione. Più specificamente, risulterà evidente che certi agenti che sono correlati sia chimicamente che fisiologicamente possono essere sostituiti a quelli qui descritti, sebbene si possano ottenere risultati uguali o simili. Tutte queste sostituzioni e modifiche simili, ovvie per gli esperti del ramo, sono intese rientrare nello spirito, nell'ambito e nel concetto dell'invenzione come definita dalle rivendicazioni allegate.

Bernard-Marty, C., Cardoso, F., e Piccart, M.J. (2004). Fatti e controversie nel trattamento sistemico del carcinoma mammario metastatico. Oncologo 9, 617-632.

Brenton, JD, Carey, LA, Ahmed, AA e Caldas, C. (2005). Classificazione molecolare e previsione molecolare del carcinoma mammario: pronti per l'applicazione clinica? J Clin Oncol 23, 7350-7360.

Chan, S., Davidson, N., Juozaityte, E., Erdkamp, ​​​​F., Pluzanska, A., Azarnia, N. e Lee, L.W. (2004). Studio di fase III di doxorubicina liposomiale e ciclofosfamide rispetto a epirubicina e ciclofosfamide come terapia di prima linea per il carcinoma mammario metastatico. Anna Oncol 15, 1527-1534.

Chebil, G., Bendahl, PO, Idvall, I., e Ferno, M. (2003). Confronto del dosaggio immunoistochimico e biochimico dei recettori degli steroidi nelle associazioni cliniche primarie del cancro al seno e motivi delle discrepanze. Acta Oncol 42, 719-725.

Eniu, A., Palmieri. FM, e Perez, E.A. (2005). Somministrazione settimanale di docetaxel e paclitaxel nel carcinoma mammario metastatico o avanzato. Oncologo 10, 665-685.

Felgner, J.H., Kumar, R., Sridhar, CN, Wheeler, C.J., Tsai, Y.J., Border, R., Ramsey, P., Martin, M. e Felgner, P.L. (1994). Migliore consegna genica e studi sui meccanismi con una nuova serie di formulazioni di lipidi cationici. J Biol Chem 269, 2550-2561.

Gradishar, W.J. (2004). Tamoxifene: cosa c'è dopo? Oncologo 9, 378-384.

Kallioniemi, O.P., Kallioniemi, A., Kurisu, W., Thor, A., Chen, L.C., Smith, H.S., Waldman, F.M., Pinkel, D. e Gray, J.W. (1992). Amplificazione di ERBB2 nel carcinoma mammario analizzata mediante ibridazione in situ fluorescente. Proc Natl Acad Sci USA 89, 5321-5325.

Keller, A.M., Mennel, R.G., Georgoulias, VA, Nabholtz, J.M., Erazo, A., Lluch, A., Vogel, C.L., Kaufmann, M., von Minckwitz, G., Henderson, I.C., et al. (2004). Studio randomizzato di fase III di doxorubicina liposomiale pegilata rispetto a vinorelbina o mitomicina C più vinblastina in donne con carcinoma mammario avanzato refrattario ai taxani. J Clin Oncol 22, 3893-3901.

O "Shaughnessy, J. (2005). Estensione della sopravvivenza con la chemioterapia nel carcinoma mammario metastatico. Oncologo 10 Suppl 3, 20-29.

Prowell, TM, e Davidson, N.E. (2004). Qual è oggi il ruolo dell'ablazione ovarica nella gestione del carcinoma mammario primario e metastatico? Oncologo 9, 507-517.

Schaller, G., Evers, K., Papadopoulos, S., Ebert, A., e Buhler, H. (2001). Uso attuale dei test HER2. Ann Oncol 12 Suppl 1, S97-100.

Slamon, DJ, Clark, GM, Wong, SG, Levin, WJ, Ullrich, A., e McGuire, W.L. (1987). Carcinoma mammario umano: correlazione di recidiva e sopravvivenza con amplificazione dell'oncogene HER-2/neu. Scienza 235, 177-182.

Solodin, I., Brown, C.S., Bruno, M.S., Chow, CY, Jang, E.H., Debs, RJ e Heath, T.D. (1995). Una nuova serie di composti di imidazolinio anfifilici per la consegna genica in vitro e in vivo. Biochimica 34, 13537-13544.

Sorlie, T., Perou, CM, Tibshirani, R., Aas, T., Geisler, S., Johnsen, H., Hastie, T., Eisen, MB, van de Rijn, M., Jeffrey, SS, et al. (2001). I modelli di espressione genica dei carcinomi mammari distinguono le sottoclassi tumorali con implicazioni cliniche. Proc Natl Acad Sci USA 98, 10869-10874.

Sotiriou, C., Neo, S.Y., McShane, L.M., Korn, E.L., Long, P.M., Jazaeri, A., Martiat, P., Fox, S.B., Harris, A.L. e Liu, E.T. (2003). Classificazione e prognosi del cancro al seno basate sui profili di espressione genica di uno studio basato sulla popolazione. Proc Natl Acad Sci USA 100, 10393-10398.

Yamashita, H., Yando, Y., Nishio, M., Zhang, Z., Hamaguchi, M., Mita, K., Kobayashi, S., Fujii, Y. e Iwase, H. (2006). Valutazione immunoistochimica dello stato del recettore ormonale per prevedere la risposta alla terapia endocrina nel carcinoma mammario metastatico. Cancro al seno 73, 74-83.

1. L'uso di una preparazione liposomiale cationica contenente almeno un lipide cationico, un agente antimitotico e facoltativamente almeno un lipide neutro e/o anionico, per la preparazione di una composizione farmaceutica per il trattamento della mammella negativa per il recettore degli estrogeni (RE) cancro ), recettore del progesterone (PgR) e recettore del fattore di crescita endoteliale di tipo 2 (HER-2) nell'uomo o negli animali.

2. Uso secondo la rivendicazione 1, dove la preparazione liposomiale cationica specificata contiene almeno un lipide cationico in una quantità da circa 30% in moli a circa 99,9% in moli, un agente antimitotico in una quantità di almeno circa 0,1 moli. % e, facoltativamente, almeno un lipide neutro e/o anionico in una quantità da circa 0% in moli a circa 70% in moli.

3. Uso secondo la rivendicazione 1, in cui detto agente antimitotico è un taxano, preferibilmente paclitaxel o un suo derivato.

4. Uso secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui detta preparazione di liposomi cationici contiene DOTAP (N--N,N,N-sali di trimetilammonio, es. metil solfato), DOPC (1,2-dioleoil-fosfatidilcolina o 1,2-dioleoil - sp-glicero-3-fosfatidilcolina) e paclitaxel.

5. Uso secondo la rivendicazione 1 per somministrare una dose terapeuticamente efficace almeno una volta alla settimana.

6. Uso secondo la rivendicazione 1 per somministrare una dose terapeuticamente efficace una o due volte alla settimana.

7. Uso secondo la rivendicazione 1 per la somministrazione di una singola dose da 1 mg/m 2 a 50 mg/m 2 per somministrazione.

8. Uso secondo la rivendicazione 1 per la somministrazione di una singola dose da 20 mg/m 2 a 50 mg/m 2 per somministrazione, preferibilmente 22 mg/m 2 o 44 mg/m 2 .

9. Uso secondo la rivendicazione 1 per la somministrazione di una singola dose di 44 mg/m 2 due volte alla settimana.

10. Uso secondo la rivendicazione 1, dove la composizione è destinata alla terapia combinata simultanea, separata o sequenziale con una dose efficace di almeno un altro agente attivo e/o calore e/o radiazione.

11. Uso secondo la rivendicazione 10, in cui l'altro agente attivo è incluso nella composizione come formulazione non liposomiale.

12. Uso secondo la rivendicazione 11, in cui detto agente attivo aggiuntivo è un agente citotossico o citostatico, come un agente con attività antitumorale o contro le cellule endoteliali, un agente chemioterapico, un agente immunologicamente attivo, un composto che riduce o elimina le reazioni di ipersensibilità , o chemiosensibilizzante.

13. Uso secondo la rivendicazione 11, in cui detto agente attivo aggiuntivo è scelto tra agenti antineoplastici, in particolare agenti antimitotici taxano-simili come paclitaxel o suoi derivati, agenti alchilanti, in particolare composti contenenti platino come cisplatino o carboplatino, agenti DNA topoisomerasi inibitori come camptotecina, antracicline come doxorubicina, antimetaboliti RNA/DNA, in particolare 5-fluorouracile, gemcitabina o capecitabina.

14. Uso secondo la rivendicazione 10 per la somministrazione della composizione ad una dose settimanale da 20 mg/m2 a 50 mg/m2 e per la somministrazione di un taxano non liposomiale ad una dose settimanale da 20 mg/m2 a 100 mg/m2 2 .

15. Uso secondo la rivendicazione 10 per la somministrazione della composizione e di un altro agente aggiuntivo una volta alla settimana.

16. Uso secondo la rivendicazione 10 per somministrare la composizione una volta alla settimana alla dose di circa 22 mg/m 2 e per somministrare paclitaxel non liposomiale o un suo derivato una volta alla settimana alla dose di circa 70 mg/m 2 .

17. Combinazione
(a) una preparazione di liposomi cationici comprendente almeno un lipide cationico in una quantità da circa 30% in moli a circa 99,9% in moli, un taxano in una quantità di almeno circa 0,1% in moli e almeno un neutro e/o un lipide anionico in una quantità da circa 0% in moli a circa 70% in moli, e
(b) una formulazione non liposomiale contenente un agente antimitotico per la somministrazione simultanea, separata e/o sequenziale a un essere umano o animale per il trattamento del cancro.

L'invenzione riguarda composti rappresentati dalla formula generale (I): e loro sali farmaceuticamente accettabili, dove Ar è un gruppo fenile sostituito da piperazina o benzo[d]tiazolo, con una porzione fenile legata a B, inoltre, piperazina o benzo [d] il tiazolo può essere non sostituito o sostituito con sostituenti scelti tra alchile o acetile; B è -O-; R1 è idrogeno; R2 è S(O)2 R4 o C(O)(CH2)n-C(O)OR 5 ; R3 è alone; R4 è arile che può essere non sostituito o sostituito con sostituenti scelti dal gruppo costituito da alogeno, alchile, fluoroalchile, alcossi e trifluorometossi; R5 è idrogeno; n è un numero intero compreso tra 1 e 3.

L'invenzione si riferisce a medicinali e riguarda un'associazione progettata per inibire la crescita di cellule tumorali, comprendente un composto citotossico scelto tra i composti della camptotecina; antimetaboliti; alcaloidi della vinca; tassani; composti di platino; inibitori della topoisomerasi 2; e combinazioni di due o più di queste classi, o un inibitore di trasduzione del segnale selezionato da anticorpi che bersagliano il recettore EGPR; inibitori della tirosin-chinasi dell'EGFR; anticorpi che prendono di mira il sistema del recettore VEGF/VEGF; inibitori del PDGFR; Inibitori di Raf e inibitori della trasmissione di RKB, in quantità efficace, e un composto di formula (IV).

Trattamento del cancro al seno con triplo recettore negativo

Studio immunoistochimico standardizzato: stato del recettore nel carcinoma mammario (PR, ER, ki67, Her2 neu). Viene eseguito solo se è presente una micropreparazione già pronta su un vetrino e un campione di tessuto in un blocco di paraffina.

Sinonimi russi

Studio IHC (RE, RP, Her2/neu, Ki-67), analisi immunoistochimica dello stato del recettore del cancro al seno.

Sinonimi inglesi

Test IHC (ImmunoHistoChemistry) per lo stato dei recettori del cancro al seno (ER, PR, HER2, Ki67), sovraespressione di HER2 mediante IHC, recettori degli estrogeni, recettori del progesterone, stato ER e PR, stato dei recettori degli estrogeni e del progesterone.

Metodo di ricerca

Metodo immunoistochimico.

Quale biomateriale può essere utilizzato per la ricerca?

Blocco di paraffina con biopsia della formazione del seno. Tessile tumore primario può essere ottenuto mediante biopsia centrale, nonché incisionale ed escissionale interventi chirurgici. Il tessuto della parete toracica, dei linfonodi regionali o di organi distanti può essere prelevato per la biopsia per rilevare le metastasi.

Informazioni generali sullo studio

I principi e le strategie moderne per il trattamento del cancro al seno si basano, tra l'altro, sui risultati della valutazione dello stato del recettore e del potenziale proliferativo delle cellule tumorali. Le cellule tumorali hanno la capacità di produrre e posizionare sulla loro superficie speciali proteine ​​- recettori, la cui stimolazione porta al lancio della divisione cellulare e alla crescita del tumore. Tali recettori sono in grado di legarsi a sostanze normalmente presenti nell'organismo e inizialmente non associate allo sviluppo di una neoplasia maligna. Secondo le attuali linee guida cliniche, la presenza dei seguenti recettori sulle cellule tumorali è importante per il cancro al seno, varie combinazioni dei quali sono chiamate stato del recettore:

Recettori per gli ormoni estrogeni e progesterone ehm,PR). Una parte significativa dei tumori al seno è ormono-dipendente, cioè la loro crescita è supportata e stimolata da estrogeni e progesterone. I tumori con uno stato positivo del recettore ormonale rispondono bene alla terapia con analoghi ormonali (tamoxifen), che bloccano i recettori corrispondenti - si legano ad essi, ma non provocano l'attivazione dei processi intracellulari e impediscono al recettore di legarsi successivamente all'ormone. Pertanto, lo studio della produzione tumorale di ER e PR consente di determinare la sua sensibilità a questi farmaci.

Recettore di tipo 2 per il recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano HER2/neu). Nelle cellule di alcuni tumori al seno, c'è un aumento della produzione di questa proteina recettrice che, se combinata con un fattore di crescita naturale, avvia il processo di divisione nella cellula tumorale. Il numero totale di pazienti con carcinoma mammario HER2-positivo varia dal 15% al ​​20%. La determinazione di HER2/neu non ha solo valore prognostico (tali tumori di solito progrediscono più velocemente e hanno uno sviluppo clinico più aggressivo), ma consente anche di valutare la possibilità di utilizzare farmaci mirati - anticorpi monoclonali contro il recettore HER2 - trastuzumab (Herceptin ), lapatinib, pertuzumab. Inoltre, i tumori HER2-positivi sono resistenti al tamoxifene.

L'attività proliferativa è un indicatore della capacità delle cellule tumorali di dividersi indefinitamente, che è il fattore principale dell'aggressività biologica di un tumore. Il processo di divisione è accompagnato dall'apparizione nella cellula di alcune proteine, una delle quali è Ki-67. Non è prodotto nelle cellule a riposo, il che gli consente di essere utilizzato come marker dell'attività proliferativa del tumore. Determinare il livello di Ki-67 ha un importante valore prognostico, poiché i tumori delle cellule meno mature e differenziate hanno la più alta attività proliferativa.

Tutti i marcatori di cui sopra possono essere rilevati mediante esame immunoistochimico della biopsia o del materiale chirurgico del tumore. Per l'analisi, le sezioni più sottili vengono tagliate dal blocco di paraffina finito utilizzando uno speciale microcoltello, che vengono quindi attaccate a vetrini e colorate con coloranti di routine in modo che sia possibile distinguere le cellule l'una dall'altra e dalla sostanza intercellulare. Quindi le sezioni sui vetrini vengono colorate con soluzioni di anticorpi etichettati con etichette fluorescenti specifiche per uno dei recettori studiati. Se il recettore desiderato è presente nella cellula tumorale, gli anticorpi si legano ad esso e, osservando il vetro con uno speciale microscopio, si può vedere la fluorescenza, che indicherà un risultato positivo del test. Inoltre, durante la visualizzazione di una sezione, un morfologo sarà in grado di vedere che il marcatore colorato si trova nel nucleo, nella sostanza cellulare o sulla membrana delle cellule tumorali. Il numero di soluzioni anticorpali utilizzate corrisponde al numero di marcatori esaminati nel campione. Il grado di fluorescenza e la percentuale di cellule in cui è presente sono alla base dell'interpretazione dei risultati dell'analisi immunoistochimica e sono descritti più dettagliatamente nella sezione corrispondente.

A cosa serve la ricerca?

• Determinare lo stato del recettore ormonale e il grado di attività proliferativa del carcinoma mammario per valutare la prognosi e l'individualizzazione del trattamento, compresa la determinazione delle indicazioni per la nomina di una terapia mirata.
• Sulla base dei risultati del rilevamento dei recettori ormonali, viene determinata l'opportunità di utilizzare l'antiestrogeno e il recettore HER2 viene determinato da farmaci anti-HER2 mirati. L'assenza rivelata di questi marcatori permette di evitare di prescrivere una terapia evidentemente inefficace. Un alto indice di attività proliferativa, così come uno stato recettoriale negativo, per la maggior parte, è un'indicazione per l'aggiunta di farmaci citostatici al trattamento.

Quando è programmato lo studio?

• In presenza di carcinoma mammario istologicamente verificato - tumori di nuova diagnosi, ricorrenti e metastatici.

Cosa significano i risultati?

Quando si interpretano i risultati della determinazione immunoistochimica stato recettoriale degli ormoni steroidei(estrogeni e progesterone) nei tumori al seno, è necessario valutare non solo la percentuale di cellule colorate con anticorpi, ma anche l'intensità della colorazione. Entrambi questi parametri sono presi in considerazione nella scala Allred, dove la percentuale di cellule positive è stimata da 0 a 5 punti e l'intensità della colorazione da 0 a 3. La somma dei due indicatori è il punteggio finale, che determina la positività del tumore per stato recettoriale: 0-2 negativi, 3-8 positivi. Un punteggio complessivo di 3 su questa scala corrisponde all'1-10% delle cellule colorate ed è il minimo risultato positivo quando la terapia ormonale può essere efficace.

A volte lo stato del recettore è determinato esclusivamente dalla percentuale di cellule con nuclei colorati. In tali casi, NCCN raccomanda che tutti i tumori con più dell'1% di cellule positive siano considerati positivi.

Quando si interpreta il colore su recettoreLEI2/nuovo viene presa in considerazione solo la colorazione della membrana (colorazione della membrana cellulare), che viene valutata su una scala da 0 a +3:

un risultato di 0 e +1 è considerato HER2 negativo;

2 - risultato borderline, in cui, secondo lo studio immunoistochimico, è impossibile giudicare la presenza del recettore HER2-neu sulla superficie cellulare, è necessario uno studio FISH o CISH;

3 – risultato positivo– la terapia mirata con farmaci anti-HER2 sarà efficace.

Secondo la classificazione di S. Gallen Consensus (2009), si considera un basso indice di attività proliferativa livello Ki-67 meno del 15%, medio - 16-30% e alto - oltre il 30%.

Cosa può influenzare il risultato?

• La qualità dei blocchi di paraffina forniti, l'esperienza e le qualifiche del patologo, poiché il metodo immunoistochimico non è completamente standardizzato e la valutazione dei suoi risultati è alquanto soggettiva.
• L'interpretazione dei risultati dello studio deve essere effettuata esclusivamente da un medico della specialità pertinente, i dati sull'efficacia e l'opportunità di prescrivere determinati farmaci, a seconda dei risultati dello studio, sono di natura puramente consultiva e possono essere rivisti tenendo conto delle caratteristiche individuali del paziente.



Note importanti

• In caso di stato indeterminato del recettore HER2/neu (il risultato di uno studio immunoistochimico è 2+), si raccomanda di eseguire uno studio FISH o CISH, che rivelerà l'iperattivazione del gene che codifica questo recettore. Se questi studi non sono disponibili, è consentito un secondo studio immunoistochimico, ma su un diverso campione di tessuto tumorale.
• Esistono diverse scale per valutare lo stato recettoriale del carcinoma mammario, il referto di laboratorio dovrebbe indicare quale è stata utilizzata per valutare la positività del tumore in questo studio, nonché una caratteristica descrittiva del numero di cellule positive, caratteristiche di colorazione strutture cellulari E caratteristiche morfologiche cellule.

Esame istologico del materiale bioptico della formazione della ghiandola mammaria

Esame citologico delle punture mammarie

Determinazione dello stato del tumore HER2 mediante FISH

Determinazione dello stato del tumore HER2 mediante CISH

Chi ordina lo studio?

Oncologo, mammologo, oncoginecologo.

Letteratura

Dana Carmen Zaha. Significato dell'immunoistochimica nel carcinoma mammario. Giornale mondiale di oncologia clinica, 2014; 5(3): 382-392.

Linee guida di pratica clinica NCCN in oncologia: cancro al seno. Versione 3.2017 – 10 novembre 2017. Disponibile su www.nccn.org.

Diagnostica clinica di laboratorio: linee guida nazionali: in 2 volumi - T. I / Ed. V. V. Dolgova, V. V. Menshikov. - M.: GEOTAR-Media, 2012. S. 658-660.

V. F. Semiglazov, R. M. Paltuev, V. V. Semiglazov, G. A. Dashyan, T. Yu Semiglazova, P. V. Krivorotko, K. S. Nikolaev. Raccomandazioni generali per il trattamento del carcinoma mammario in fase iniziale Galle-2015, adattato dagli esperti della Russian Society of Mammary Oncologists. Tumori del sistema riproduttivo femminile, 2015; 3:43-60.

La diagnosi immunoistochimica dello stato del recettore del carcinoma mammario (PR, ER, ki67, Her2 neu) è uno studio della biopsia tissutale marcata con anticorpi al microscopio. Il test viene eseguito per determinare lo stato del recettore del cancro al seno.

Gli studi IHC vengono eseguiti dopo aver eseguito un esame istologico.

Studi immunoistochimici
Gli studi immunoistochimici sono un tipo di studio morfologico dei tessuti ottenuti durante una biopsia ed etichettati con anticorpi specifici. Il metodo si basa sul principio dell'interazione antigene-anticorpo. Il tessuto in cui processo patologico esprime antigeni. Quando gli anticorpi vengono applicati a un campione di tessuto, si forma un complesso antigene-anticorpo. Grazie alle etichette, diventa disponibile per la visualizzazione. Un patologo esamina il numero di cellule colorate con un marcatore. Determina la localizzazione di cellule, ormoni e loro recettori, enzimi, immunoglobuline, componenti cellulari e singoli geni nel tessuto in esame.

Lo studio immunoistochimico determina la natura dei disturbi immunologici. L'analisi identifica i pazienti con infiammazione autoimmune e una risposta autoimmune nell'endometrio, che determina la tattica della loro gestione.

Cancro al seno (BC) - tumore maligno tessuto mammario ghiandolare. RZhM occupa il primo posto tra tutte le malattie maligne nelle donne.

A seconda della presenza di marcatori biologici tumorali - espressione di recettori ormonali (estrogeni e/o progesterone), espressione di HER2 - vengono isolati i tumori della mammella positivi ai recettori ormonali, HER2 positivi e tripli negativi.

• I tipi di carcinoma mammario HER2/neu-positivo (HER2+) sono caratterizzati da un'elevata espressione della proteina HER2/neu;
• I tipi di carcinoma mammario HER2/neu-negativo (HER2-) sono caratterizzati da bassa espressione o assenza della proteina HER2/neu/

Si stima che una donna su cinque con carcinoma mammario sia HER2 positiva. La maggior parte dei tumori al seno sono ormono-dipendenti: gli estrogeni e il progesterone hanno su di essi un effetto stimolante (proliferativo e neoplastico). Nel carcinoma mammario HER2-positivo, c'è un eccesso di recettori HER2 sulla superficie delle cellule tumorali. Questo fenomeno è chiamato "stato HER2 positivo" ed è diagnosticato nel 15-20% delle donne affette da cancro al seno.

LEI2- recettore del fattore di crescita epidermico umano di tipo 2, che è presente nei tessuti e normalmente partecipa alla regolazione della divisione e differenziazione cellulare. Il suo eccesso sulla superficie delle cellule tumorali (iperespressione) determina la rapida crescita incontrollata della neoplasia, un alto rischio di metastasi e la scarsa efficacia di alcuni tipi di trattamento. Il carcinoma mammario HER2-positivo è una forma particolarmente aggressiva questa malattia, Ecco perché definizione precisa Lo stato di HER2 è di fondamentale importanza per la scelta delle tattiche terapeutiche.

Recettori per gli estrogeni (ER) e recettori per il progesterone (PR)
Estrogeni e progesterone sono i principali ormoni sessuali femminili. Sono prodotti dalle ovaie e sono i principali regolatori del sistema riproduttivo femminile.

I recettori sono presenti in vari tessuti, comprese le ghiandole mammarie e l'utero.

I recettori per gli estrogeni (ER) e i recettori per il progesterone (PR) sono sostanze di natura proteica localizzate sulla superficie di una cellula tumorale. Sotto l'influenza degli ormoni sessuali femminili, i recettori formano un complesso che stimola la comparsa di nuove cellule tumorali. La distruzione di questo meccanismo è alla base della terapia ormonale.

La determinazione immunoistochimica di ER e PR è in grado di condurre una diagnosi differenziale della natura del tumore, per rivelare la sensibilità del tumore agli ormoni. L'analisi consente di regolare e perfezionare il trattamento, nonché di valutarne l'efficacia.

I tumori con un alto contenuto di recettori per estrogeni e progesterone sono altamente differenziati. Hanno una bassa attività proliferativa e sono caratterizzati da un decorso non aggressivo. I tumori con tali parametri rispondono bene alla terapia ormonale e hanno una buona prognosi. L'efficacia della terapia ormonale è di circa il 50% per i tumori che esprimono i recettori degli estrogeni e del 75% per i tumori che esprimono i recettori per entrambi gli ormoni.

Se le cellule tumorali hanno un basso numero di recettori per gli estrogeni, terapia ormonale solitamente inefficace. L'eccezione è quando le cellule tumorali esprimono solo recettori per il progesterone. Con questa opzione, la terapia ormonale è efficace nel 10% di questi pazienti.

Ki-67
Ki -67 è un marcatore di attività proliferativa. L'antigene è espresso solo durante la divisione cellulare; durante il suo periodo dormiente, il marcatore è assente.

L'indicatore permette di capire se la malattia è in fase attiva o in remissione.

Indicazioni per uno studio IHC

• cancro mammario;

Preparazione
La preparazione è determinata dal medico curante.

Si consiglia di eseguire il curettage diagnostico della mucosa uterina nella fase media e tardiva della proliferazione - il 7-10 ° giorno del ciclo mestruale.

Il materiale per lo studio è un blocco di paraffina e vetrini. Se il materiale è un campione di tessuto in una soluzione di formalina, è necessario eseguire un ulteriore servizio di produzione del vetro.

Quando si esegue un esame istologico in un laboratorio di terze parti, è necessario fornire un protocollo per l'esame istologico.

Interpretazione dei risultati
La risposta è data sotto forma di descrizione della micropreparazione, dei coloranti utilizzati e della conclusione. La conclusione può essere interpretata solo dal medico che ha inviato lo studio.

Lo scopo dello studio era quello di studiare il valore prognostico dello stato recettoriale dei tumori in cancro precoce ghiandola mammaria (I stadio). Materiali e metodi. Un'analisi retrospettiva dei casi clinici di 1036 pazienti con carcinoma mammario in fase iniziale (stadio T1N0M0) che hanno ricevuto il trattamento presso il N.N. N.N. Blokhin dell'Accademia Russa delle Scienze Mediche e della Clinica della RMAPO dal 1985 al 2009. È stato studiato il valore prognostico dei recettori degli estrogeni (ER), del progesterone (PR) e di HER2, nonché il valore prognostico della sovraespressione di HER2 nel carcinoma mammario in fase iniziale, sia da solo che in combinazione con i recettori degli ormoni steroidei. Risultati. Sulla base della combinazione di recettori, sono stati identificati sottotipi immunoistochimici di carcinoma mammario: luminale A e B, carcinoma triplo negativo e carcinoma con sovraespressione di HER2. È stato stabilito che la presenza o l'assenza dei recettori degli ormoni steroidei ER e PR nel tumore nel carcinoma mammario in fase iniziale non ha valore prognostico indipendente. La sovraespressione di HER2 non è un segno prognostico nell'analisi della sopravvivenza globale, ma un fattore sfavorevole per la sopravvivenza libera da recidiva, sia da sola che in combinazione con i recettori degli ormoni steroidei.

Crollo

Cancro mammario, stato del recettore tumorale er pr her2, sottotipi immunoistochimici del carcinoma mammario

Indirizzo breve: https://website/14316692

ID: 14316692

Bibliografia Valore prognostico dello stato del recettore tumorale nel carcinoma mammario in fase iniziale

• Alan S. Coates, Marco Colleoni, Aron Goldhirsch. La chemioterapia adiuvante è utile per le donne con carcinoma mammario luminale? Giornale di oncologia clinica 2012; 30:1-4.
• Islam T., Matsuo K., Ito H., Hosono S., Watanabe M., Iwata H., Tajima K., Tanaka H. Fattori di rischio riproduttivi e ormonali per carcinoma mammario luminale, con sovraespressione di HER2 e triplo negativo in giapponese donne. Ann Oncol 2012 settembre; 23(9): 2435-2441.
• Kwon M.J., Park S., Choi J.Y., Oh E., Kim Y.J., Park Y.H., Cho EY, Kwon M.J., Nam S.J., Im Y.H., Shin Y.K., Choi Y.L. Significato clinico della sovraespressione di CD151 nei sottotipi di carcinoma mammario invasivo. Br J Cancro 2012 28 febbraio; 106(5): 923-930.
• Xie W., Yang J., Cao Y., Peng C., Ning H., Zhang F., You J. Espressione della proteina legante Y-Box 1 in pazienti cinesi con carcinoma mammario. Tumore Biol 2012 febbraio; 33(1): 63-71.
• Oliveira-Costa J.P., Zanetti J.S., Silveira G.G., Soave D.F., Oliveira L.R., Zorgetto VA, Soares FA, Zucoloto S., Ribeiro-Silva A. Differential expression of HIF-1a in CD44+CD24-/low breast ductal carcinomas. Diagn Pathol 2011 8 agosto; 6:73.
• Kim SR, Paik S. Genomica della terapia adiuvante per il cancro al seno. Cancro J 2011 novembre-dicembre; 17(6): 500-504.
• Lu M., Li B., Li Y., Mao X., Yao F., Jin F. Ruolo predittivo dei sottotipi molecolari in risposta alla chemioterapia neoadiuvante nei pazienti con carcinoma mammario nel nord-est della Cina. Asian Pac J Cancro Precedente 2011; 12(9): 2411-2417.
• Cheang M.C., Chia S.K., Voduc D., Gao D., Leung S., Snider J., Watson M., Davies S., Bernard P.S., Parker J.S., Perou C.M., Ellis M.J., Nielsen T.O. Indice Ki67, stato HER2 e prognosi di pazienti con carcinoma mammario luminale B. J Natl Cancer Inst 2009 20 maggio; 101(10): 736-750.
• Pazaiti A., Fentiman I.S. Carcinoma mammario fenotipo basale: implicazioni per il trattamento e la prognosi. Salute delle donne (Lond Engl) 2011 marzo; 7(2): 181-202.
• Tran B., Bedard P.L. Carcinoma mammario Luminal-B e nuovi bersagli terapeutici. Ricerca sul cancro al seno 2011 30 novembre; 13(6): 221.
• Arnes JB, Bgin LR, Stefansson I., Brunet JS, Nielsen TO, Foulkes WD, Akslen LA Espressione del recettore del fattore di crescita epidermico in relazione allo stato BRCA1, marcatori basali e prognosi nel carcinoma mammario. J Clin Pathol 2009 febbraio; 62(2): 139-144.
• Gucalp A., Traina T.A. Carcinoma mammario triplo negativo: opzioni terapeutiche adiuvanti. Chemother Res Pract 2011; R. 696208.
• Collins LC, Martyniak A., Kandel M.J., Stadler Z.K., Masciari S., Miron A., Richardson A.L., Schnitt S.J., Garber J.E. L'espressione del recettore della citocheratina basale e del fattore di crescita epidermico non è predittiva dello stato di mutazione BRCA1 nelle donne con carcinoma mammario triplo negativo. Am J Surg Pathol 2009 luglio; 33(7): 1093-1097.