濃度が低下する培地を含む培地で細菌が増殖および増殖する能力の分析 医薬品、in vitro で細菌の役割を阻害する抗生物質 (MIC) の最小阻害濃度を決定することが可能になります (表 3(vet7))。 この用量の値は、in vivo で同様の濃度を達成できる原薬の選択を決定し、他の薬物との関係で生物の相対的な感受性を比較するための基礎となります。 曝露の有効性を確保するために、感染の焦点における薬物の濃度は、抗生物質の最小阻害濃度の値と少なくとも等しくなければならないと考えられています。 一方、適切な組織濃度を確保するには、通常、血漿薬物濃度を高くする必要があります。 しかし、用量の不当な増加 抗菌剤インビトロで特定のタイプの細菌の増殖を阻害する抗生物質の最小用量を達成するために、受容者の体内に有毒な用量で薬物が蓄積する可能性があります。
特定の原薬の「臨界 MIC」は、臨床的に許容される用量と薬物の投与経路で達成できる合理的に安全な最高の薬物濃度です (表 3(vet7))。 MIC は、細菌培養の特定の種類と薬物の特定の種類に依存します。 同時に、重要な MIC は、特定のレシピエントと特定の原薬に固有のものです。 したがって、重要な MIC はどの生物でも同じになります (表 3(vet7))。 特定の生物の臨界濃度値は、動物の種によって異なる場合があります (感度または分布の性質の違いによる)。 医薬品）および特定の研究所。 培養方法と抗生物質感受性データを提供する検査室に連絡して、研究で使用する重要な値を確認する必要があります。
in vitro 希釈データに基づいて、MIC がこの指標の臨界値を大幅に下回っている場合、細菌は特定の原薬に対して感受性 (S) として分類されます。 平均 (MS) または中間 (IS) の感度値を持つ病原性微生物の増殖は、臨界 MIC 値に近づく薬物濃度で阻害されます。 そのようなバクテリアは、患者の体に否定的な反応を引き起こしたり、影響を与えなかったりする可能性があります。 耐性 (R) 細菌の MIC は、最小用量の臨界値を超えています。 特定の微生物に影響を与えるような薬物の患者の体内濃度の有効値が達成される可能性は低いです。 そのような場合、有毒な用量での薬物蓄積のリスクも、治療の潜在的な利益を上回る可能性があります. 細菌の増殖を阻害する新世代の抗生物質の最小用量の臨界値は、用量範囲の専門的な柔軟なラベル付けへの移行により、決定がより困難な場合があります。
原薬は、毒性用量での物質の蓄積を防ぐレジメンに従って使用した場合に、MIC を大幅に超える原薬の最大血漿濃度を達成できるように選択する必要があります。 多くのバクテリアは、臨界最小用量よりも十分に低い濃度で、特定の薬物の影響を受けやすくなります. 臨界値と固有の MIC 値の差を使用して、さまざまな抗菌剤の相対的な有効性を比較できます。 たとえば、アミカシンの場合、臨界値は 32 μg/mL であるため、MIC 値が 2 μg/mL の大腸菌は、MIC 値が 16 μg/mL の大腸菌よりもアミカシンに対する感受性が比較的高くなります。 どちらの種も感受性が高いと見なされるべきですが (2 番目の種は平均的な感受性を持つと見なすことができますが)、1 番目の種のバクテリアの増殖はかなり抑制されているようです。 アモキシシリンと比較して 2 μg/mL の MIC 値を持つ同じ種の大腸菌の MIC 値が 16 μg/mL (臨界値は 32 μg/mL) である場合、この微生物の増殖はアミカシンの MIC 値は、アモキシシリンの MIC 値よりもその臨界 MIC 値からさらに離れているため、アモキシシリンよりもアミカシンを適用することによって、より容易に阻害されます。
特定の細菌種と特定の薬剤 (16 または 32) の MIC 値の差は非常に大きく見えるかもしれませんが (特に血漿薬剤カットオフのコンテキストでは)、この差はチューブ内の 1 つの溶液のみに対応します。 . これは、機密データを過大評価する危険性の例です。 特定の生物の MIC 値が臨界値に十分近い場合、解釈の違いの可能性があるため、この微生物には、ある実験室では「S」または「MS」の感受性度が割り当てられ、別の実験室では「R」の感受性度が割り当てられる場合があります。 . このような評価の不一致の可能性は、特定の生物が「MS」感受性を有する (または MIC 値が臨界に近い) 薬物の使用を避けるべき理由の 1 つです。感染は、in vitro 分析で決定された MIC 値をはるかに超える可能性があります。 良い例は、尿路感染症を治療するために腎臓から排泄される薬の使用、または感染症を治療するために胆汁中に排泄される薬の使用です. 胆道. 白血球による特定の薬物の蓄積 (フルオロキノロン、マクロライド) は、血漿濃度が低いにもかかわらず、組織内の薬物濃度が MIC (または臨界 MIC) をはるかに超えることもあります。
細菌のMICは、同じ細菌種によるその後の感染中に変化する可能性があり、感染プロセス自体中にも変化する可能性があります. MIC 値の増加は、分析結果を評価するための異なるアプローチを単に反映している可能性があります (特に、in vitro で希釈した場合にのみ違いが検出される場合) が、特定の原薬に対する耐性の発生の結果と見なすこともできます。 そのような場合、コースは 抗菌療法追加の薬を使用するか、新しい薬に切り替えることで変更できます。 有効な薬. 多菌感染症では、特定の薬剤の MIC 値は、感染している細菌ごとに異なる可能性があります。 細菌の増殖を抑制しやすいと考えられています。 低い価値特定の原薬のMICは、同じ原薬のMIC値が高い微生物の増殖よりも優れています。
トピックの目次「感受性を決定する方法 抗菌剤. 副作用抗生物質療法。」抗菌剤に対する感受性を決定する方法。 最小発育阻止濃度 (MIC)。 液体培地での段階希釈法。
特定の薬物の活性の基準は次のとおりです。 最小発育阻止濃度 (マイク） - 薬物の最低濃度、試験培養の増殖を阻害し、 最小殺菌濃度 (MBC） - 殺菌効果を引き起こす薬物の最低濃度。
液体培地での段階希釈の方法
液体培地での段階希釈の方法インストールできます 最小発育阻止濃度 (マイク） と 最小殺菌濃度 (MBC) 分離された病原体の準備の。 研究は、さまざまな量の栄養培地 (1 ～ 10 ml) で実行できます。 病原体の栄養ニーズを満たす液体栄養培地を使用してください。 試験管 (通常は 8 本) で、一連の薬物の 2 倍希釈液を栄養培地で調製します。 濃度はそれに応じて128から0.06μg/ mlに減少します（塩基濃度は薬物の活性に応じて異なる場合があります）。 各チューブの培地の最終容量は 1 ml です。 純粋な栄養培地を含む試験管は、コントロールとして機能します。 106/mlの微生物細胞を含む0.05mlの生理溶液を各試験管に加える。 チューブを37℃で10～18時間（またはコントロールチューブで細菌の増殖が見られるまで）インキュベートする。 指定された期間の後、視覚的または比濁法による媒体の光学濃度の変化によって結果が考慮されます。 申請することもできます 修正された方法グルコースと指示薬を添加した培地を使用。 微生物の増殖は培地の pH の変化を伴い、したがって指示薬の色も変化します。
原則として、この手順は、液体「培地」での MIC の決定に似ています。所定の培地に溶解した抗生物質を段階的に希釈して、いくつかのペトリ皿を用意します。融解した寒天を加え、皿を冷却して寒天を凝固させます。 1 つまたは複数の細菌の培養物を培地の表面に線状に描き、サーモスタットで必要な時間培養した後、細菌の増殖が阻害される抗生物質の最小濃度を決定します。液体中で滴定する方法に対するこの方法の利点の 1 つは、培地は、同じプレートの異なる領域に接種できることです 他の種類または細菌株。 その結果、1回の実験で複数の細菌のMIC値を決定できます（図2.2）。
- 抗生物質活性の測定
この方法は、溶液中の抗生物質の濃度を決定するために使用されます。 以下で構成されています。 試験した抗生物質溶液で湿らせたろ紙ディスクを、細菌の希釈懸濁液を含む寒天培地の表面に置きます。 適切なインキュベーションの後、最初は半透明だった寒天の表面は、成長した細菌による光散乱により曇ってしまいます。 抗生物質が寒天に拡散し、細菌の増殖を阻害するため、半透明のゾーンはろ紙ディスクの周囲にのみ残ります。 これらのゾーンの直径が厳密に標準的な条件下で決定される場合、それは抗生物質濃度の対数の関数になります。 既知の抗生物質濃度を使用して、未知の溶液中の抗生物質濃度を決定できる標準曲線が作成されます (図 2.3)。 濾紙ディスクの代わりに、寒天培地の表面に配置され、抗生物質溶液を含む小さな中空シリンダーが使用されることもあります。
- 定義に影響を与える要因
in vitro での抗生物質の活性は、測定条件に依存します (表 2.1)。 活性の決定は、培地の組成、接種物の密度、接種物中の細菌細胞の数（接種物のサイズ）などの要因によって影響を受ける。
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表 2.1. 抗生物質活性の決定に影響を与える要因
試験生物
培地組成 (pH、イオン、血清、アンタゴニスト)
接種材料のサイズと密度 (集団の不均一性、不活化メカニズム、アンタゴニスト物質の侵入)
培養条件（時間、温度、通気）
A. 環境の構成
例として、アミノ酸の 1 つの生合成を阻害する抗生物質を考えてみましょう。 このアミノ酸を含まない培地で抗生物質を試験すると、非常に高い活性、つまり低い MIC を持つように見えます。 合成を阻害し、細菌が培地から取得できるアミノ酸を含む培地でテストすると、抗生物質は不活性であるように見えます。
これらの特定の影響に加えて、作用機序または 化学構造抗生物質。 特に興味深いケースの 1 つは、培地中の血清の存在です。 これは、血液中の条件に似た生理学的条件を作成するために、MIC の測定中に培地に導入されます。 多くの抗生物質は血清タンパク質 (特にアルブミン) に結合し、その結果、細菌細胞に侵入できる遊離抗生物質分子の数が減少します。 抗生物質の血清タンパク質への結合は、通常、その分子内の特定の置換基の親油性と相関しています。
明らかに、寒天が高密度培地に存在するという理由だけで、液体培地のMICを決定するための条件は、高密度培地の条件とは異なります。 S03-rpyn-py を含む寒天は、抗生物質を吸着して拡散能力を変化させたり、溶存酸素や栄養培地の一部の成分を吸着したりできます。 したがって、寒天の有無を除いて 2 つの培地の組成が同一であっても、特定の細菌に対する抗生物質の MIC 値は、液体培地で測定するか固体培地で測定するかに依存します。 細胞が液体中で単独で増殖するか、固体培地の表面でコロニーとして増殖するかによって、細胞の生理機能が異なる可能性があることも覚えておく必要があります。
培地の pH は、抗生物質の活性に非常に強い影響を与えます。 微生物の増殖速度に対する pH の影響などの二次的な影響に加えて、その結果として、
ただし、感受性に対する間接的な影響である pH 値は、薬剤が細菌細胞に浸透する能力に非常に強く直接的な影響を及ぼします。 たとえば、非イオン化された形の物質は、イオン化された形の物質よりも細胞茎と原形質膜を介してよりよく拡散します。 したがって、塩基性または酸性の抗生物質のイオン化の程度を決定する培地のpHは、細菌への浸透速度に直接影響し、その結果、その有効性に影響を与える可能性があります。
B. 接種菌の密度とサイズ
接種密度は、それらが成長する体積に対する接種された細菌の数です。 通常、培養液 1 ml 中の細胞数として表されます。 接種サイズ - 総数接種した細菌。 多くの抗生物質の MIC は、一般的に使用される接種材料 (103-106 バクテリア/mL) の密度の変動の影響を受けません。 実際、非常に低い抗生物質濃度、例えば 0.01 µg/ml の場合でも、細菌細胞数に対する抗生物質分子数の比率は非常に大きく、約 1012 分子を含んでいます)。 ただし、いくつかの例外があります。 たとえば、多くの場合、多くの抗生物質分子が吸着されます。 外面細菌細胞。 細菌の密度が高いと、細胞に侵入できる遊離抗生物質分子の数が大幅に減少します。 また、単一の細胞の増殖を抑えるために、しばしば必要です。 たくさんの抗生物質分子。 細菌が増殖するにつれて、抗生物質を破壊できる酵素を合成して培地に放出します (たとえば、p-ラクタム系抗生物質に作用する p-ラクタマーゼ; 第 4 章を参照)。 破壊された抗生物質の量は、栄養培地中の酵素の濃度の関数であり、したがって接種物のサイズに依存します。
一見したところ、細菌の培養密度が同じであれば、抗生物質の活性を少量で研究するかどうかは問題ではないように思われます。従来のシステムで 10 ml の。 実験用試験管. 集団内のすべての細菌が同一である場合、結果に違いはありません。
接種材料中の細菌の総数が非常に多い場合、抗生物質の影響を受けにくい細胞が培地に存在する可能性が高くなります。 すべての感受性細胞の増殖は抑制されますが、感受性の低い細胞 (原理的には単一の細胞でさえあります) は増殖し、18 時間培養すると、
表 2.2. 一部の抗生物質の活性に影響を与える要因
高密度のバクテリア集団。 接種細胞数の変化に伴う MIC 値の有意な変動は、通常、抗生物質耐性変異体の頻度が高いことを示しています (第 4 章)。 耐性変異体の発生頻度は、異なる抗生物質で同じではありません。 クリニックで使用される抗生物質の場合、10-7 から 10-10 の範囲です。
このセクションは、特定の細菌に対する抗生物質の活性に影響を与える可能性のあるすべての要因を説明しているわけではありません (表 2.2)。 したがって、細菌の増殖抑制を使用して抗生物質活性を定量化し、さまざまな研究室で複製できるデータを取得するには、すべての条件を正確に定義し、可能であれば標準化する必要があります。
1 ロシア保健省の「サンクトペテルブルク州立小児医科大学」
関連性
眼科診療では、抗菌薬の選択は、他の抗菌療法の場合と同様に、主に病原体とその抗生物質に対する感受性に依存します。 使用する抗菌薬は 殺菌作用最小発育阻止濃度 (MIC) が低い。 これは特に重要です 現代の状況抗生物質に対する微生物の耐性がますます高まっています。 微生物に有害な影響を与えることができない用量で薬を処方することは、 さらなる発展微生物叢耐性。
MIC は、肉眼で見える微生物叢の増殖を抑制する抗菌薬の最低濃度です。 抗生物質に対する微生物の感受性の程度を最も正確に特徴付けることができるのは IPC です。 薬剤の MIC が低いほど、それに対する微生物叢の感受性が高くなります。 MIC の知識だけで、抗生物質が到達するかどうかを判断できます。 局所適用この微生物を抑制するのに十分な濃度の病原体の局在ゾーン? また、眼科診療で最も広く使用されている抗菌薬（フルオロキノロンおよびアミノグリコシド）は用量依存薬であることにも注意する必要があります。 微生物の死滅率は、その濃度に正比例して増加します。 科学文献では、レボフロキサシンと比較して、眼の前房の水分中のオフロキサシンの MIC の達成が遅いという証拠があります。 また、レボフロキサシンを 1 回点眼した後、その濃度は、原因となるすべての微生物の MIC よりも何倍も高いことが証明されています。 感染症目 。 ただし、新しい抗菌薬が常に臨床に導入されており、入手可能な文献にはIPCに関する情報はほとんどありません。 眼科で使用されている最新の抗生物質の全範囲の抗菌効果について、それが私たちの研究の理由でした。
目標
最も一般的な微生物叢に対する最新の抗生物質の MIC を決定します。
材料と方法
抗生物質の MIC を決定するために、Hi Comb MIC Test ( 登録証明書ロシア連邦保健省 2003/1664、2003 年 12 月 23 日）。 この試験は、1 つではなく一連の減少する濃度の同じ抗生物質を含浸させたディスクが取り付けられたストリップで構成されます。 研究を行う際、まず単純寒天に接種するために結膜腔の内容物を採取しました。 次に、微生物の純粋な培養物を分離し、芝生の形をしたペトリ皿の適切な固体栄養培地に播種しました。 次に、ペトリ皿をサーモスタットで 37º の温度で 24 時間インキュベートしました。 同時に、楕円形の微生物フローラ保持ゾーンがテストストリップの周囲に形成され、抗菌薬のMICを決定することが可能になりました. ＭＩＣは、マイクロフローラの成長阻害の楕円ゾーンの最小直径の領域で、テストストリップ上のデジタルスケールで決定された。 最も一般的なIPCを決定しました 臨床実践 抗菌薬- シプロフロキサシン（Cipromed、Sentiss）、オフロキサシン（Floxal、Baush & Lomb）、レボフロキサシン（Signicef、Sentiss）、モキシフロキサシン（Vigamox、Alcon）、ガチフロキサシン（Zimar、Allergan）およびトブラマイシン（Tobrex、Alcon）。
結果
生後2か月以上の合計105人の患者が検査されました。 前眼部のさまざまな炎症性疾患を伴う最大7年：急性および慢性結膜炎、眼瞼結膜炎、慢性涙嚢炎を伴う鼻涙管狭窄、および細菌性角膜炎。 表皮 (43.9%) と黄色ブドウ球菌 (22.9%)、連鎖球菌 (15.1%)、およびグラム陰性微生物叢 (18.1%) が、子供の結膜腔から排出された作物で見つかりました。
試験したすべての抗菌薬で、表皮ブドウ球菌のMICが最も高かった。 表皮ブドウ球菌の最小 MIC は、薬のレボフロキサシンとモキシフロキサシンで、それぞれ 0.544 と 0.551 µg でした。 最大MICは、トブラマイシン（8.623μg）で記録されました。 この薬は、表皮ブドウ球菌に対して最も効果がありませんでした。 ガチフロキサシンが臨床現場で比較的最近使用されたという事実にもかかわらず、その MIC は非常に高く、1.555 mcg でした。 シプロフロキサシンとオフロキサシンの MIC は小さく、それぞれ 1.023 と 1.191 µg でした。
黄色ブドウ球菌に対するすべての抗菌薬の MIC は、表皮の MIC よりも低かった。 同時に、レボフロキサシン (0.020 μg) の MIC が最も低いことが判明しました。 ～によって引き起こされる感染症の治療のために 黄色ブドウ球菌、この薬が最も効果的であることが証明されました。 モキシフロキサシン (0.202 µg) とオフロキサシン (0.240 µg) の MIC も低かったが、レボフロキサシンの MIC よりも 10 倍高かった。 最高の MIC は、薬剤トブラマイシン (5.115 μg) で記録されました。
次のレンサ球菌が子供の結膜腔から分離されました：ストレプトコッカス・ニューモニエ、ストレプトコッカス・ビリダンス、ストレプトコッカス・ヘモリティカス。 子供から分離されたすべてのレンサ球菌の最低 MIC は、モキシフロキサシンで見つかった - わずか 0.006 μg。 レボフロキサシンの MIC も小さかったが、モキシフロキサシンの MIC - 0.135 μg を大幅に上回った。 最高の MIC はシプロフロキサシン (1.246 µg) で記録され、最高はトブラマイシン (6.460 µg) で記録されました。
子供から分離されたグラム陰性微生物のグループには、緑膿菌、エンテロバクター・ブレビス、肺炎桿菌、およびセラチア・マルセンセンスが含まれていました。 グラム陰性微生物叢の最低 MIC は、シプロフロキサシン - 0.034 μg で見つかりました。 低MICスコア、すなわち レボフロキサシン（0.051 mcg）でも高い効果が認められました。 オフロキサシンとガチフロキサシンの MIC は有意に高く、0.096 および 0.102 µg とほぼ同じでした。 最高の MIC は、トブラマイシン (7.050 µg) で再び記録されました (図を参照)。
結論
したがって、レボフロキサシンは、小児で最も頻繁に分離される微生物叢に関連して、最も効果的な抗菌薬であることが判明しました。 レンサ球菌およびグラム陰性微生物に対するこの薬のMICも小さいことが判明したため、すべての治療に0.5％レボフロキサシンシグニセフに基づく薬を推奨できます 炎症性疾患細菌の目。
連鎖球菌による炎症性眼疾患の治療には、連鎖球菌に対するＭＩＣが最小であるため、モキシフロキサシンが好ましい。 すべてのグラム陰性微生物フローラに対するシプロフロキサシンの MIC が最も低いことが判明しました。 すべての分離された微生物の最高の MIC は、トブラマイシンで見つかりました。
ソースページ: 26
最小阻害濃度- 最小阻害濃度。
細菌培養に対する抗生物質の作用の指標であり、細菌の増殖が完全に阻害される最小濃度に等しい。
(出典: 「遺伝用語の英露解説辞書」。Arefiev V.A.、Lisovenko L.A.、モスクワ: VNIRO Publishing House、1995)
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微生物学事典
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微生物学事典
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