Immunodiagnostica delle leucemie acute. Citochine, interleuchine e cluster di differenziazione (antigeni CD) dei leucociti Cosa sono i cluster di differenziazione CD

GOU VPO Tver State Medical Academy del Ministero della Salute della Russia

IMMUNITÀ CELLULARE. TIPI DI CITOTOSSICITÀ CELLULARE.

RECETTORI E MARKER, SOTTOPOPOLAZIONI LINFOCITICHE.

Sussidio didattico per l'immunologia generale. Tver 2008.

Manuale didattico e metodologico per esercitazioni di immunologia generale per studenti del 5° anno delle facoltà di medicina e pediatria, nonché per specializzandi e medici interessati all'immunologia.

Preparato dal Professore Associato del Dipartimento di Immunologia Clinica con Allergologia Yu.I. Budchanov.

ELENCO DELLE ABBREVIAZIONI

MHC - complesso maggiore di istocompatibilità; IL1 - IL18 - interleuchine 1-18;

TCR - recettore delle cellule T (vedi inglese TcR - recettore delle cellule T); CD, cluster di differenziazione;

CTL - linfociti T citotossici (sinonimo: linfociti T effettori); FcγR, recettore per il frammento Fc dell'immunoglobulina G;

HLA - (Eng. Human Leukocyte Antigens) umano antigene leucocitario; IgG - immunoglobulina G;

NK - assassini naturali

TcR - (recettore delle cellule T inglese) recettore delle cellule T; Th1 - T-helper del primo tipo;

Th2 - T-helper del secondo tipo;

IMMUNITÀ CELLULARE

Il sistema immunitario dei mammiferi fornisce protezione al corpo con due principali specifiche

modi. In primo luogo,

istruzione di specifico

anticorpi

In secondo luogo,

formazione scolastica

funzionamento del cellulare

fattori

acquisita

immunità, no

fornendo

AZIONE EFFICACE (distruzione delle cellule bersaglio: tumorali, mutate,

ecc.), ma anche

regolazione della risposta immunitaria. E così

la partecipazione a

formazione

memoria immunologica, riconoscimento dell'antigene e induzione di una risposta immunitaria. Cellule performanti

così diversi

le funzioni sono dentro

prima di tutto LINFOCITI T.

Inoltre, tra

Esistono sottopopolazioni di linfociti T, i principali sono i T-

helper e T-effettori

(citotossico

linfociti T). La loro acquisizione di funzioni specifiche avviene nell'organo centrale sistema immunitario- timo.

caratteristica

Linfociti T

capacità

riconoscere solo

antigeni

presentata(presentato) su

superfici

ausiliario

presentazione dell'antigene

(dendritici, macrofagi o linfociti B) in combinazione con i propri antigeni di istocompatibilità.

Il TIMO è un importante organo linfopoietico ed endocrino. La funzione principale del timo è regolare

influenza sull'immunogenesi delle cellule T. Emopoietico

cellule staminali (precursori -T

linfociti) da midollo osseo migrare attraverso il flusso sanguigno al timo. È stato stabilito che gli ormoni del timo e

fattori più specificamente solubili

timo, crea

umorale

microambiente timico

linfociti

(questi ultimi sono chiamati timociti). ruolo significativo in

sviluppo intratimico dei linfociti T

fornire cellule epiteliali timiche e dendritiche

thymus.cellsInterazioni intercellulari

i timociti con loro forniscono la maturazione e la selezione delle cellule T. Effetto degli ormoni del timo sull'immunogenesi

avviene non solo nel processo di differenziazione intratimica del linfocita, ma anche a distanza,

entrando nel sangue, influenzano i precursori

linfociti

midollo osseo

circolante

linfociti. nel timo

stanno accadendo

principale

iniziale

differenziazione

Linfociti T (timociti), s

ammissione

linfociti

sangueTra

i linfociti non dovrebbero essere autoreattivi - in grado di interagire con gli antigeni autologhi del corpo dell'individuo.

Va notato che il ruolo biologico delle sostanze ormonali del timo non è stato ancora definitivamente stabilito. I loro effetti non si limitano alla linfopoiesi, influenzano il metabolismo del calcio e del fosforo, il metabolismo e l'utilizzo del glucosio, il tono muscolare, la crescita e la pubertà, hanno un effetto analgesico, influenzano il metabolismo dei pigmenti.

Differenziazione dei linfociti T.

In fase di differenziazione Linfociti T ci sono due fasi principali(come ricorderete, le stesse due fasi si distinguono nel processo di differenziazione dei linfociti B):

1. L'antigene non lo è differenziazione dipendente- si verifica costantemente nel timo.

2. Differenziazione antigene-dipendente- si verifica negli organi periferici del sistema immunitario solo quando un linfocita T entra in contatto con un antigene.

DIFFERENZIAZIONE ANTIGENE-INDIPENDENTE DEI LINFOCITI T

La cellula madre dei linfociti T, come tutte le cellule del sangue, è una cellula staminale pluripotente.

cellula emopoietica. Il suo marcatore è CD 34. Per informazioni di base sul CD, vedere la fine della guida allo studio.

Primi predecessori

sito di legame dell'antigene

α β


I linfociti T migrano dall'osso				cervello dentro, timodove si verifica
antigene-indipendente		differenziazione			cellule T sotto			influenza
"cellule nutrice", cellule epiteliali del timo, nonché ormoni del timo
(α- e β-timosina, timulina/fattore sierico del timo/, timopoietina,
timico	umorale		fattore). al massimo				marcatori
timociti	sono CD7,						Linfociti T
differenziare in		immunocompetente						acquisire
importante capacità di riconoscere un antigene. SU							all'aperto
membrana	appare (esprime) uno speciale					recettore -
cellulare	recettore r (TKR, ing. -					recettore)
antigene.	Inoltre, per ogni antigene (epitopo)						corpo
un singolo linfocita o suoi						clonale			bambino
linfociti di progenie, che				specifica		Antigene TcR.
timociti	contemporaneamente			processi		differenziazione

acquisire CD3, che è strettamente legato al recettore delle cellule T. Il CD3 è necessario per la trasduzione del segnale dal TCR al citoplasma. Le molecole CD8 e CD4 compaiono anche sulla superficie dei timociti. Queste sono cellule doppie positive, ad es. il loro fenotipo (TCR+, CD3+, CD4+, CD8+ ) e loro

Sono giovani timociti.

Nella loro struttura, le molecole TcR (TCR) assomigliano a immunoglobuline (frammento Fab) e sono costituite da catene alfa e beta(TcR αβ sono la stragrande maggioranza) o catene gamma e delta (TcR γδ). Le forme αβ- e γδ di TcR sono molto simili nella struttura. Ogni catena TCR è composta da due regioni (domini): la variabile esterna (V), la seconda è costante (C). I singoli geni che codificano l'intera regione variabile (V) delle catene α e β di TcR sono assenti. Frammenti di domini variabili sono codificati da tre gruppi di geni designati V, D, J. Nel genoma cellulare, i geni che codificano i segmenti V, J e D della regione variabile sono presentati sotto forma di numerose varianti. Esattamente varie combinazioni I segmenti V, J e D della regione V, formati nel processo di riarrangiamento genico, chiamato riarrangiamento, forniscono una varietà di molecole TCR.

Così, numero limitato geni (circa 400) possono codificare recettori per quasi un numero infinito antigeni (molti milioni). Inoltre, varie combinazioni di geni dei segmenti V, D, J sono solo uno dei modi per ottenere la diversità dei recettori per l'antigene dei linfociti T.

Su un linfocita T c'è solo una variante del recettore e un solo antigene.

Il TcR è fortemente associato al CD3.

La funzione principale dei linfociti T maturi è il riconoscimento di peptidi antigenici estranei in combinazione con i propri antigeni del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) sulla superficie delle cellule presentanti l'antigene o sulla superficie di qualsiasi cellula bersaglio nel corpo. Per svolgere questa funzione, i linfociti T devono essere in grado di riconoscere i propri antigeni MHC. Allo stesso tempo, le cellule T non dovrebbero riconoscere gli antigeni propri del corpo associati agli antigeni propri dell'MHC.

A questo proposito, nel timo, vengono selezionati timociti giovani ("selezione"), TcR che soddisfa le condizioni di cui sopra.

L'essenza della selezione positiva e negativa è la seguente (vedi la figura sul frontespizio): selezione positiva. Linfociti T il cui TCR ha la capacità di riconoscere l'HLA

(molecole MHC) delle cellule stromali del timo sopravvivono e, in caso contrario, muoiono per apoptosi. Selezione positiva - supporto per la sopravvivenza selettiva. Quindi sopravvivono solo i linfociti in grado di riconoscere il proprio HLA! E questa capacità è successivamente importante nel funzionamento delle cellule T.

Inoltre, i linfociti autoreattivi (linfociti con TCR per determinanti antigenici dei propri tessuti) muoiono nel timo per apoptosi. È importante che al contatto con le cellule epitelioidi del timo, i linfociti T che rispondono al "sé" vengano distrutti innescando l'apoptosi ( morte cellulare programmata all'attivazione tramite il recettore CD95-Fas). Questo selezione negativa. Infine,

i cloni autoreattivi delle cellule scompaiono e sorge la tolleranza (mancata risposta) al "proprio". Nel timo, circa il 95-97% dei linfociti muore a causa del processo di selezione.

Successivamente, una delle molecole CD4 o CD8 viene persa e le cellule maturano. Le cellule che hanno trattenuto CD4 sono T-helper (Th) e il loro TCR riconosce HLA di classe II, mentre quelle che hanno trattenuto CD8 sono citotossico I linfociti T e il loro TCR hanno la capacità di riconoscere HLA di classe I. Dal timo

		Dipartimento di Immunologia Clinica con Allergologia

migrano verso gli organi linfoidi periferici, dove abitano prevalentemente nelle zone T-dipendenti. IN
in particolare nei linfonodi - paracorticali. I linfociti maturi vengono ricircolati.
Quindi, ANTIGENE DIPENDENTE				differenziazione	Linfociti T	include
proliferazione, acquisizione di marcatori specifici da parte dei linfociti T e formazione di cellule differenziate,
sottopopolazioni mature in grado di svolgere la caratteristica						sottopopolazioni
(induzione	immune	rispondi, il suo	regolamento,	citotossicità).	processi	antigene-indipendente

differenziazione, si formano linfociti geneticamente determinati a interagire con un antigene specifico e la risposta immunitaria a questo antigene.

DIFFERENZIAZIONE ANTIGENE-DIPENDENTE DEI LINFOCITI T La differenziazione antigene-dipendente si verifica negli organi periferici del sistema immunitario, se T-

in relazione all'antigene e ad altre cellule immunocompetenti che hanno interagito con l'antigene. Inoltre, helper e linfociti citotossici riconoscono l'antigene in modi diversi.

HELPER (cellule CD4) riconoscono l'ANTIGENE in combinazione con HLA CLASSE II, KILLERS (cellule CD8) riconoscono l'antigene in combinazione con HLA CLASSE 1. Riconoscimento dell'antigene T-aiutante

è un processo centrale, sia nella risposta immunitaria umorale che nel potenziamento della forma cellulare della risposta immunitaria.

MARKERS specifici per l'INTERA POPOLAZIONE DI LINFOCITI T sono quelli presenti su membrana esterna queste cellule antigeni CD 3. (In precedenza, veniva utilizzato il marcatore CD 2 - un recettore per gli eritrociti di pecora, il che non è del tutto corretto. Vedere l'appendice per i parametri degli antigeni CD.)

Marker dei linfociti T - una struttura caratteristica solo dei linfociti T (tutte le sottopopolazioni di linfociti T) - CD3.

	CD4+	Su T-helper
linfociti
linfociti
CD3+
CD3+	CD8+	Su T-citotossico

I recettori per IL-2, gli antigeni HLA-DR compaiono sui linfociti T attivati, recettore della transferrina (CD71).

A persone sane I linfociti T (CD3+) costituiscono il 60-80% di tutti i linfociti del sangue.

SOTTOPOPOLAZIONI DI LINFOCITI:

Linfociti Th. Circa la metà dei linfociti T circolanti porta l'antigene CD4 sulla loro superficie. Questi linfociti T funzionano come HELPERS, cioè aiutanti (dall'inglese a

aiuto - aiutare), "includere" la popolazione di linfociti B nel processo di produzione di anticorpi e effettori T - nell'implementazione dell'immunità cellulare. I T-helper mediano la loro funzione attraverso fattori umorali, le citochine, che vengono sintetizzate da questi linfociti in risposta a uno stimolo antigenico.

L'insufficienza della funzione helper dei linfociti T, osservata nella sindrome da immunodeficienza acquisita (AIDS, uno dei bersagli più importanti dell'HIV sono i linfociti T helper), porta alla "mancata risposta" dell'organismo alla stimolazione antigenica , che alla fine contribuisce alla persistenza di microrganismi nel corpo umano, allo sviluppo di neoplasie maligne ed è la causa della morte.

T-helper (Th) - stimolano la proliferazione e la differenziazione di entrambi i linfociti, Tta e B, rilasciando citochine. A seconda di quali citochine producono (a seconda del profilo delle citochine), si distinguono tra loro:

Th1 (T-helper del primo tipo), secernono IL-2 e γ-interferone e alla fine forniscono reazioni di immunità delle cellule T - stimolano la risposta immunitaria contro i batteri intracellulari, antivirale, antitumorale, immunità da trapianto.

Th2 (T-helper del secondo tipo), secernono IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13 e stimolano la sintesi di anticorpi, promuovono lo sviluppo di una risposta immunitaria umorale contro i batteri extracellulari, le loro tossine, così come la formazione di anticorpi IgE.

Tra Th1 e Th2 c'è antagonismo: con un aumento dell'attività di alcuni, la funzione di altri è inibita. Di conseguenza, i linfociti T (Th1Ø T killer) o i linfociti B (Th2 Ø B-linfociti Ø

anticorpi) immunità, che dipende in gran parte dal tipo di antigene. Pertanto, i T-helper svolgono una funzione di regolazione dell'helper nell'interazione delle cellule immunocompetenti, finalizzata allo sviluppo della fase effettrice della risposta immunitaria. Dipende da Th che prevarrà la risposta immunitaria umorale o cellulare.

La forma della risposta immunitaria dipende dal tipo di Th (sulle citochine prodotte dalle cellule Th)

Tk.

Tra le sottopopolazioni di linfociti T si distinguono le cellule effettrici. A causa del fatto che questi

effettore

capace

specificamente

distruggere

vengono chiamate le celle bersaglio

CYTOTOXIC T-LYMPHOCYTES, o T-KILLERS - assassini (dall'inglese uccidere - uccidere).

T-killer è una delle principali cellule effettrici dell'immunità cellulo-mediata, che, insieme a

altre cellule sono in grado di eseguire lisi delle cellule bersaglio th. Il ruolo dei T-killer è molto importante nell'implementazione

immunità al trapianto, sviluppo Malattie autoimmuni, nella protezione antitumorale. Tk-

linfociti (CD8+

cellule) costituiscono circa il 20 - 25% del numero di linfociti T circolanti (assoluto

quantità -

500 - 1200 in 1 mm3 (µl)), loro

portano l'antigene marcatore CD8. Serve la macromolecola CD8

co-recettore per gli antigeni di classe I del complesso maggiore di istocompatibilità (MCHC-1).

Cellule citotossiche attivate dall'antigene - T-

le cellule killer si legano agli antigeni

superficie cellulare,

rilasciando la proteina perforina,

distruggere

Allo stesso tempo, il T-killer

rimane vitale e può distruggere la cella successiva.

L'azione della perforina è simile alla MAC del sistema del complemento. Proteina

la perforina polimerizza nella membrana della cellula bersaglio per formarsi

i pori sono canali, provocando così la sua lisi osmotica. Tranne

citotossico

Linfociti T

tempo formato

perforina nella cellula bersaglio, getta granzimi (enzimi -

serina

proteasi),

lancio

programma

apoptosi.

Installato

anche questo

suo effetto citotossico

i linfociti possono realizzare esprimendo FasL e con il suo

aiutano a indurre l'apoptosi bersaglio mediata da Fas.

I linfociti T "naive" sono quei linfociti che non hanno incontrato l'antigene e si compongono

parte del pool totale di cellule T ricircolanti.

immunologico

memoria-

longevo

linfociti, progenie

incontrato con antigeni e conservando i recettori per loro. LINFOCITI T DELL'IMMUNOLOGICO

MEMORIA - dopo la stimolazione con un antigene, sono in grado di immagazzinare informazioni su di esso fino a 10-15 anni e trasmetterle

altre cellule. Queste cellule sono protette dall'apoptosi. A causa della presenza di cellule T di memoria nel corpo

una risposta immunitaria accelerata di tipo secondario viene fornita quando questo antigene viene ripetutamente esposto

nel corpo.

Questo spiega la dinamica forzata della risposta immunitaria secondaria.

linfociti di memoria è l'antigene di membrana CD45RO.

erroneamente isolato una sottopopolazione di T-soppressori ritenuti responsabili

soppressione immunitaria

sottopopolazione indipendente

tempo presente

mostrato, che

soppressori

oppressione, soppressione

immune

decisivo

Senso

linfociti stimolati, così come una citochina - fattore di crescita trasformante β.

Circa il 10% dei linfociti non ha né marcatori T né B, non appartengono né ai linfociti T né ai linfociti B e sono stati precedentemente chiamati LINFOCITI NULLI. Questa popolazione eterogenea di linfociti, a seconda delle loro caratteristiche morfofunzionali, è suddivisa in:

CELLULE KILLER NATURALI(abbreviato come cellule EKK=EK=NK) e

CELLULE KILLER(cellule K).

caratteristica

capacità

lisi

cellule bersaglio

sensibilizzazione preliminare, necessaria per i linfociti T-killer. Morfologicamente sono linfociti

grande con citoplasma granulare.

Sono differenziati

predecessore

linfociti (LSC).

assassini naturali non dipendono nel loro sviluppo dalla ghiandola del timo. esprimere sul loro

superfici

recettori per

interferone-γ

e interleuchina-2 (IL

funzionale

sono

cellule killer citotossiche, ma non ci sono recettori che riconoscono l'antigene su NK, che lo sono necessariamente

presente sui T-killer. Le cellule natural killer sono prese di mira dagli anticorpi IgG specifici per

antigeni di membrana della cellula bersaglio. Inizialmente, gli anticorpi si legano all'antigene sulla cellula e poi a

Fc del recettore IgG

NK si unisce a questo complesso AT - AG-cellule bersaglio.

Le cellule NK nel corpo lo sono

protezione da

sviluppo

tumori, virus

Il loro principale

Dipartimento di Immunologia Clinica con Allergologia

i marcatori sono CD16 e CD56. (FcγRIII secondo la nomenclatura CD

CD16). Distruzione della cellula bersaglio

svolge con

utilizzando la perforina. Il contenuto di EC (cellule CD16+) in soggetti sani

persone - 8 - 22%.

Le cellule K sono un gruppo eterogeneo di cellule che portano avanti il loro

superfici

recettori per il frammento Fc

Ig G e capace di

anticorpo-dipendente

cellulare

citotossicità. A

relazionare

monociti,

neutrofili,

macrofagi,

eosinofili,

Alcuni

linfociti. Anticorpo dipendente

cellulo-mediata

citotossicità (ADCC)

una sorta di riflesso del rapporto tra umorale e cellulare

link

immune

sistemi. Anticorpi

atto

"Instigatori" di cellule effettrici

cellule bersaglio che trasportano

antigeni estranei.

linfociti (T-,

cellule K) hanno

capacità di

migrazione

riciclaggio (cfr

metodico

raccomandazione per la prima lezione), che fornisce un controllo diffuso sulla riproduzione delle cellule del proprio corpo, e quando penetra un antigene estraneo, una risposta immunitaria generalizzata e la conservazione della memoria immunologica sull'antigene.

MARCATORI LINFOCITARI

Perforina

Granzimi

Determinazione del numero relativo e assoluto di linfociti T nel test

formazione spontanea di rosette con eritrociti di ariete.

Principio del metodo: I linfociti T timo-dipendenti possiedono recettori per gli eritrociti di pecora (antigene CD2), che fungono quindi da marcatore per il loro riconoscimento.

PROCEDURA DI LAVORO: Il sangue prelevato da una vena viene introdotto in una provetta con eparina. Metto in scena. Il sangue eparinizzato viene diluito con tampone fosfato pH7.4 in un rapporto di 1:2. Questa miscela viene accuratamente distribuita sulla soluzioneficoll-verografinacon una densità di 1,077 g/ml. La provetta viene centrifugata per 30 minuti. Dopo la centrifugazione, lo strato di linfociti viene accuratamente rimosso dall'interfase con una pipetta e lavato due volte con una soluzione tampone. Dopo l'ultimo lavaggio a sedimentare aggiungere 0,3-0,5 ml di terreno 199. Nello sviluppo metodologico n. 1 sono indicati metodi per isolare i linfociti e, in particolare, un metodo per separare le cellule in un gradiente di densità. Lui è il primo passo.

II stadio. Per avviare la reazione a rosetta si prelevano 0,1 ml di una sospensione di linfociti e si aggiungono 0,1 ml di una sospensione di eritrociti di ariete. (Vedi la tavola sul pulpito). Volumi uguali della sospensione vengono miscelati e centrifugati per 5 minuti. e mettere in frigorifero per 30 minuti. Successivamente, 50 μl di glutaraldeide al 3% vengono aggiunti alla provetta e lasciati sul tavolo per 20 minuti. Quindi aggiungere 2 ml di dist. e 2 ml di soluzione salina.

Risospendere. Centrifugare per 5 minuti, quindi drenare quanto più possibile la sospensione e risospendere delicatamente. Successivamente, viene eseguita una macchia (fissazione, colorazione secondo Romanovsky-Giemsa) e viene contato il numero di rosette. Nel calcolo dei globuli rossi vengono presi in considerazione i linfociti che hanno aderito a 3 o più eritrociti. Normalmente, dovrebbe essere formato il 40-90% delle prese. (cellule formanti rosette ROCK).

Schizzo E-ROK

SIGNIFICATO CLINICO. Lo studio dei linfociti T è assolutamente indicato negli stati di immunodeficienza primaria e secondaria. Il valore diagnostico è effettuato da studi di linfociti in

processi linfoproliferativi,		reumatoide	artrite, alcuni	malattie renali,
amiloidosi e una serie di altre malattie.
Tuttavia, va tenuto presente che possono formarsi anche numerose cellule, in particolare killer naturali
rosette con eritrociti di pecora (E-ROC) a causa della loro presenza dell'antigene CD2 (vedere informazioni generali in
applicazione). Definisce valore limitato metodo di formazione della rosetta E, grazie all'identificazione di
	Linfociti T.		formazione di rosette	ceduto al locale

citofluorometria, che è attualmente riconosciuto in tutto il mondo, e il marcatore di tutti i linfociti T è l'antigene CD3 presente sui linfociti che si sono differenziati nel timo.

LA CITOFLUOROMETRIA A FLUSSO permette di determinare, utilizzando anticorpi monoclonali,

Principio della citometria a flusso. Marcata con anticorpi monoclonali fluorescenti, la cellula del test passa nel flusso del fluido nel capillare. Il flusso del liquido è attraversato dal raggio laser e

il dispositivo capta il segnale riflesso dalla superficie cellulare secondo il principio sì/no (c'è una cellula o) No La presenza sulla cellula di anticorpi monoclonali marcati con fluorocromo associati ai suoi antigeni di differenziazione indica che la cellula appartiene ad un certo sottopopolazione.

La determinazione delle cellule CD3 (linfociti T), CD19 (linfociti B) nel sangue ha valore diagnostico nelle immunodeficienze primarie e secondarie. Ruolo importante

Digitazione CD
malattie linfoproliferative (linfo-leucemia),
rigetto del trapianto e GVHD (reazioni
rigetto del trapianto e GVHD (reazioni
trapianto contro ospite), virali e batteriche
infezioni.
infezioni.
La definizione di CD4-
linfociti			immunodeficienze come
umorale		cellulo-mediata
immunità. Necessario	enfatizzare,		che quantità

Le cellule CD4 sono un indicatore decisivo per la prognosi dello sviluppo dell'AIDS nelle persone con infezione da HIV. La determinazione dell'indice CD4/CD8 (il rapporto tra numero di helper ed effettori), il cosiddetto indice di regolazione, è importante nell'infezione da HIV. Pertanto, una diminuzione di CD4 a 500/µl e

inferiore è considerato lo standard clinico per l'inizio della terapia antiretrovirale e la riduzione del loro numero a 200/μl e inferiore è considerato l'inizio della terapia profilattica per le infezioni opportunistiche.

8 Dipartimento di Immunologia Clinica con Allergologia Raccomandazione didattica e metodologica sull'immunologia generale. Argomento 4.

Applicazione.

CLUSTER DI DIFFERENZIAZIONE (CD-antigeni) di LEUKOCITES

se ne conoscono più di 200.

Con l'aiuto di marcatori antigenici di superficie (antigeni di differenziazione, CD), è possibile determinare la direzione dello sviluppo, il grado di maturità cellulare, la popolazione e la sottopopolazione delle cellule, lo stadio della loro differenziazione e attivazione. Gli antigeni di differenziazione fungono quindi da marcatori specifici. Tali antigeni differenziano, in particolare, subpopolazioni di linfociti e altre gabbie immunocompetenti.

(Diamo i parametri degli antigeni CD. Questa è un'informazione di riferimento che ti aiuterà nella lettura della letteratura su immunologia, immunopatologia, ematologia. Gli antigeni CD significativi sono contrassegnati con v. Li hai incontrati nelle lezioni precedenti, saranno trattati in quelle attuali e future.)

CD1 - a, b, c; è trasportato dai timociti corticali, sottopopolazioni di cellule B, cellule di Langerhans, è un antigene comune dei timociti, una proteina simile agli antigeni di classe 1 di istocompatibilità, MM 49 KD.

v CD2 - un marcatore di tutte le cellule T, ha anche la maggioranza (~ 75%) di EC, sono noti tre epitopi della molecola,

uno dei quali lega i globuli rossi ariete a (recettore E); è una molecola adesiva che si lega a CD58 (LFA III), LFA IV, trasmette segnali transmembrana durante l'attivazione delle cellule T; MM 50 KD. Questo antigene può essere rilevato dalla reazione rosetta. Reazione E-formazione di rosettaè un indicatore della quantità cellule (T-l, EC, LAK) che trasportano il cluster CD2. Pertanto, l'antigene CD2 non è un marcatore assoluto dei linfociti T, poiché è presente anche su altre cellule.

vCD3- sopportare tutto maturo I linfociti T, forniscono la trasmissione del segnale dal recettore specifico dell'antigene delle cellule T (TCR) al citoplasma, costituito da cinque catene polipeptidiche (γ, δ, ε, ι, ξ).

MM - 25 KND; gli anticorpi contro di esso migliorano o inibiscono la funzione delle cellule T. Indicatore importante T-

linfociti.

v CD4 - Marcatore T-helper, recettore per il virus dell'immunodeficienza umana (HIV), disponibile su a

alcuni monociti, cellule gliali; glicoproteina transmembrana coinvolta nel riconoscimento di antigeni associati a molecole di classe di istocompatibilità II (HLA-DR), MM 59 KD. (Recettore per AG MHC classe II).

v CD5 - hanno cellule T mature e immature, una glicoproteina transmembrana, un membro della famiglia dei recettori

– “spazzini”, come CD6, è un ligando per CD72 sulle cellule B, è coinvolto nella proliferazione delle cellule T. CD5 ha anche linfociti B-1 - una sottopopolazione di cellule B, con localizzazione predominante nelle cavità addominale e pleurica. MM 67 KD.

· CD6 - trasportano le cellule T mature e parzialmente le cellule B hanno tutte le cellule T ei timociti, parte delle cellule B; incluso

v famiglia di "spazzini", MM 120 KD.

CD7 - hanno cellule T, EC (recettore Fc μ IgM); MM 40 KD.

vCD8- marcatore citotossico I linfociti T, hanno una struttura di adesione EC, sono coinvolti

v riconoscimento di antigeni con la partecipazione di molecole di istocompatibilità di classe 1, consiste di due Catene S-S, MM 32 KD. (Co-recettore per il complesso AG + MHC classe l).

CD9 - trasportano monociti, piastrine, granulociti, cellule B dei centri follicolari, eosinofili, basofili, endotelio, MM 24 KD.

CD10- hanno cellule B immature (GALLA - antigene delle cellule leucemiche), parte di timociti, granulociti; endopeptidasi, MM 100 KD.

CD11a - tutti i leucociti portano la molecola di citoadesione, catena αL dell'integrina LFA-1, associata a CD18;

recettore per ligandi: molecole CD15 (ICAM-1), CD102 (ICAM-2) e CD50 (ICAM-3); assente nei pazienti con sindrome LAD-1 (sindrome da deficit di molecole di adesione), MM 180 KD.

v CD11b - (CR3 - o recettore c3bi) - trasportano monociti, granulociti, EC, catena integrinica αM, associati alla molecola CD18; recettore per ligandi: CD54 (ICAM-1), componente del complemento C3bi (recettore CR3) e fibrinogeno; assente nella sindrome LAD-1: MM 165 KD.

v CD11c (recettore CR4) - hanno monociti, granulociti, NK, linfociti T e B attivati, αX

catena integrinica (associata a CD18, è il quarto tipo di recettore (CR4) per i componenti del complemento C3bi, C3dg; i suoi ligandi sono CD54 (ICAM-1), fibrinogeno; MM 95/150 kD.

· CD13 – hanno tutte le cellule mieloidi, dendritiche ed endoteliali, aminopeptidasi N, recettore per il coronavirus, MM 150 KD.

v CD14 - hanno monociti / macrofagi, granulociti, un recettore per complessi LPS con LPS-

proteina legante e per molecole PI piastriniche; assente nei pazienti con parossistica notturna th emoglobinuria(PNH), gli anticorpi contro di esso possono causare un'esplosione ossidativa nei monociti, MM 55 KD.

CD15 - (Lewis) - ha granulociti, esprime debolmente monociti, alcuni anticorpi contro di esso sopprimono la fagocitosi.

CD15 - (sialyl-Lewis) - hanno cellule mieloidi, il ligando per CD62P (P-selectina), CD62E (E-selectina), CD62L (L-selectina), è assente nei pazienti con LAD-2.

v CD16 - porta NK, neutrofili, alcuni monociti, (recettore Fc a bassa affinità per IgG), proteina di membrana integrale (Fcγ RIIIA) su NK e macrofagi, forma legante PI (Fcγ RIIIB) su neutrofili, assente nei pazienti con EPN - parossistica emoglobinuria notturna.

· CD18 – la maggior parte delle cellule linfoidi e mieloidi ha, molecola di adesione, catena β2 dell'integrina LFA, associata con αCD11 a, b, c, assente nella sindrome LAD-1, MM 95 KD.

v CD19 - (B4) - hanno cellule pre-B e B, parte del loro complesso recettoriale è coinvolto nella loro attivazione (segnale di trasduzione associato a CD21 (CR2); MM 95 KD. Un importante marcatore delle cellule B.

· v CD20 - (B1) - porta tutte le cellule B e le cellule dendritiche nei follicoli, partecipa all'attivazione attraverso i canali del calcio delle cellule, MM 35 kDa.

v CD21 - (recettore CR2, B2) - ha sottopopolazioni di cellule B, alcuni timociti, cellule T, un recettore per il componente del complemento C3d e per il virus di Epstein-Barr, è coinvolto nella regolazione dell'attivazione del complemento (RCA) insieme a CD35, CD46 CD55 e nell'attivazione delle cellule B.

Informazioni più complete sui gruppi di differenziazione possono essere trovate nei libri di testo 1 e 2 dell'elenco di autoapprendimento a p.16.

Indicatori del contenuto di linfociti nelle persone sane

Popolazioni	T-immunità-	T-aiutanti	T-cytotok- B-linfa-	Naturale-
linfociti e			sic	assassini


Percentuale


Assoluto
quantità in 1 µl

Indice di regolazione CD4/CD8 - 1.2-2.5. * µl = 1 mm3.

MATERIALE DIDATTICO E METODOLOGICO DELLA LEZIONE

Motivazione

La conoscenza dell'immunità cellulare è importante, ad es. in che modo esattamente fornisce protezione contro le infezioni virali, da una serie di infezioni batteriche intracellulari, svolge un ruolo di primo piano nel rigetto

Scopo della lezione

1. Lo studente deve conoscere:

A. Sviluppo dei linfociti, caratterizzazione dei principali cluster di differenziamento. B. Percorso di sviluppo dipendente dal timo dei linfociti, recettori delle cellule T.

B. Sottopopolazioni di linfociti T, loro principali caratteristiche, marcatori e recettori.

D. Apoptosi delle cellule del sistema immunitario e suo significato nel funzionamento delle cellule del sistema immunitario. D. Tipi di citotossicità cellulare. Metodi per la valutazione dell'immunità cellulare.

10 Dipartimento di Immunologia Clinica con Allergologia Raccomandazione didattica e metodologica sull'immunologia generale. Argomento 4.

2. Lo studente deve essere in grado di:

Applicare le conoscenze acquisite nella pratica clinica; valutare lo stato di immunità cellulare.

Per padroneggiare l'argomento, devi ricordare, ripetere:

1. Secondo l'istologia - lo sviluppo dei linfociti.

2. In microbiologia, il ruolo dei linfociti nell'immunità antinfettiva.

Domande per l'auto-preparazione sull'argomento della lezione:

1. Il linfocita è la figura centrale del sistema immunitario. Idee moderne sullo sviluppo dei linfociti. Ontogenesi e filogenesi del sistema immunitario.

2. Caratterizzazione dei principali cluster di differenziamento (CD), significato per l'analisi dello stadio di sviluppo delle cellule del sistema immunitario, valutazione dei singoli stadi di funzionamento.

3. Il concetto di radice pluripotente (ancestrale) cellula emopoietica. L'origine della cellula staminale, le sue caratteristiche, i marcatori. Fattori che regolano lo sviluppo delle cellule staminali (microambiente, citochine). circolazione delle cellule staminali

		osso			immune	Concetto di sistema	ancestrale
precursori dei linfociti T e B, loro caratteristiche, identificazione. Via di sviluppo timo-dipendente
linfociti (cellule T). Il timo è un organo centrale nello sviluppo dei linfociti T. Ontogenesi e filogenesi del timo.
Le fasi principali dello sviluppo delle cellule T nel timo, l'importanza degli elementi stromali, delle cellule "tata", epiteliali
cellule, corpi di Hassall. Timectomia, animali atimici.
	Cellula T	recettori	struttura,	Ruolo nello sviluppo delle cellule T. positivo e negativo
selezione	nel timo. Differenziazione extratimica					Linfociti T. funzione endocrina

Fattori umorali del timo. Migrazione e insediamento dei linfociti T nel corpo. Zone timo-dipendenti delle parti periferiche del sistema immunitario (milza, linfonodi, ecc.).

6. Il concetto di sottopopolazioni di T- e Linfociti B. Principali caratteristiche, marcatori e recettori, ruolo nei processi immunitari. Sottopopolazioni CD3+ e CD4+ di cellule T, caratteristiche, sviluppo, ruolo nei processi immunitari. Natura e proprietà dei T-helper di tipo 1 (Th1) e 2 (Th2). Sottopopolazioni di cellule T CD8+.

7. Morte programmata (apoptosi) delle cellule del sistema immunitario, meccanismi, fattori che la stimolano e la sopprimono. differenza dalla necrosi. Attivazione cellulare e apoptosi. Il significato dell'apoptosi nello sviluppo e nel funzionamento delle cellule del sistema immunitario.

8. Cellule natural killer (cellule NK) - grandi linfociti granulari, caratteristiche, origine, vie di differenziazione, ruolo delle citochine, marcatori e recettori.

9. Recettori e marcatori di cellule del sistema immunitario. Recettori antigene specifici e non antigene specifici dei linfociti T e B, struttura fisico-chimica, metodi di identificazione. Immunoglobulina e altri recettori delle cellule B, struttura. Recettore delle cellule T per l'antigene. Catene alfa/beta e gamma/delta del complesso del recettore delle cellule T. Il concetto di corecettori. Recettori del frammento Fc delle immunoglobuline, complemento, rilevazione, ruolo nelle risposte immunitarie. Recettori per ormoni, citochine. L'uso di anticorpi monoclonali per l'identificazione di linfociti umani e animali. Metodi per la rilevazione di marcatori e recettori. Immunofenotipizzazione, principio. Il fenomeno della formazione di rosette in immunologia.

LETTERATURA PER L'AUTOEDUCAZIONE E

1. Khaitov RM Immunologia: un libro di testo per studenti di medicina. - M.: GEOTAR-Media, 2006. - 320p.

- [Con. 84-94].

2. Khaitov R.M., Ignatieva G.A., Sidorovich I.G. Immunologia. Norma e patologia. Manuale. - 3a ed., M.,

Medicina, 2010. - 752 p. - [Con. 215-240].

3. J. Fiera dei giochi. Immunologia visiva. M., 1999.

4. SVILUPPO METODOLOGICO. 5. LEZIONI.

LETTERATURA AGGIUNTIVA

1. Roit A, Brostoff J, Meil D. IMMUNOLOGIA. M., Mir. 2000.

2. Yarilin A.A. Fondamenti di immunologia. M., 1999, pag. 31-54, 75-88.

3. Immunology Link Home Page - http://www.ImmunologyLink.com

4. http://immunology.ru

PUOI RISPONDERE?

(Entra a casa. L'autocontrollo identificherà le domande difficili per la discussione. In classe, verificherai la correttezza delle risposte, integrandole. Prova a trovare le risposte da solo e

mostra che puoi farcela.)

Nel processo di differenziazione, le macromolecole compaiono sulle membrane delle cellule del sistema immunitario - marcatori corrispondenti a un certo stadio di sviluppo, differenziazione morfologica della cellula. Hanno il nome Antigeni CD(dall'inglese - cluster di differenziazione - cluster di differenziazione). Attualmente se ne conoscono più di 200. Con l'aiuto di marcatori antigenici di superficie (antigeni di differenziazione, CD), è possibile determinare la direzione dello sviluppo, il grado di maturità cellulare, la popolazione e la sottopopolazione delle cellule, lo stadio di loro differenziazione e attivazione. Gli antigeni di differenziazione fungono quindi da marcatori specifici. Tali antigeni differenziano, in particolare, subpopolazioni di linfociti e altre gabbie immunocompetenti.

· CD1 - a, b, c;è trasportato dai timociti corticali, sottopopolazioni di cellule B, cellule di Langerhans, è un antigene comune dei timociti, una proteina simile agli antigeni di classe 1 di istocompatibilità, MM 49 KD.

v CD2- marcatore di tutte le cellule T, hanno anche la maggioranza (~ 75%) CE, sono noti tre epitopi della molecola, uno dei quali lega gli eritrociti di pecora(E-recettore); è una molecola adesiva che si lega a CD58 (LFA III), LFA IV, trasmette segnali transmembrana durante l'attivazione delle cellule T; MM 50 KD. Questo antigene può essere rilevato dalla reazione rosetta. La reazione E-rosetta è un indicatore della somma delle cellule (T-l, EC, LAK) che trasportano il cluster CD2. Pertanto, l'antigene CD2 non è un marcatore assoluto dei linfociti T, poiché è presente anche su altre cellule.

v CD3 - trasportato da tutti i linfociti T maturi, fornisce la trasmissione del segnale dal recettore specifico dell'antigene delle cellule T (TCR) al citoplasma, costituito da cinque catene polipeptidiche (γ, δ, ε, ι, ξ). MM - 25 KND; gli anticorpi contro di esso migliorano o inibiscono la funzione delle cellule T. Un marcatore importante dei linfociti T.

v CD4 - Marcatore T-helper, recettore del virus dell'immunodeficienza umana (HIV).), disponibile su

alcuni monociti, cellule gliali; glicoproteina transmembrana coinvolta nel riconoscimento

antigeni associati a molecole di classe di istocompatibilità II (HLA-DR), MM 59 KD. (Recettore per AG MHC classe II).

v CD5- hanno cellule T mature e immature, la glicoproteina transmembrana, un membro della famiglia dei recettori scavenger, come CD6, è un ligando per CD72 sulle cellule B ed è coinvolta nella proliferazione delle cellule T. CD5 ha anche linfociti B-1 - una sottopopolazione di cellule B, con localizzazione predominante nelle cavità addominale e pleurica. MM 67 KD.

· CD6- sopportare cellule T mature e parzialmente cellule B hanno tutte le cellule T e i timociti, parte delle cellule B; appartiene alla famiglia degli "spazzini", MM 120 KD.

· CD7- hanno cellule T, CE ( Fc recettore μ IgM); MM 40 KD.

v CD8 è un marcatore di linfociti T citotossici, hanno alcune EC, struttura di adesione, coinvolta nel riconoscimento dell'antigene con la partecipazione di molecole di istocompatibilità di classe 1, consiste di due catene S-S, MM 32 KD. (Co-recettore per il complesso AG + MHC classe l).

· CD9- trasportare monociti, piastrine, granulociti, cellule B dei centri follicolari, eosinofili, basofili, endotelio, MM 24 KD.

· CD10- avere cellule B immature (GALLA - antigene delle cellule leucemiche), parte di timociti, granulociti; endopeptidasi, MM 100 KD.

· CD11a- trasportare tutti i leucociti, la molecola di citoadesione, la catena αL dell'integrina LFA-1, associata a CD18; recettore per ligandi: molecole CD15 (ICAM-1), CD102 (ICAM-2) e CD50 (ICAM-3); assente nei pazienti con sindrome LAD-1 (sindrome da deficit di molecole di adesione), MM 180 KD.

v CD11b-(CR3- o recettore c3bi) - portano monociti, granulociti, EC, catena integrinica αM, associati alla molecola CD18; recettore per ligandi: CD54 (ICAM-1), componente del complemento C3bi (recettore CR3) e fibrinogeno; assente nella sindrome LAD-1: MM 165 KD.

v CD11c(CR4-recettore) - hanno monociti, granulociti, NK, linfociti T e B attivati, catena di integrina αX (associata a CD18, è il quarto tipo di recettore (CR4) per i componenti del complemento C3bi, C3dg; i suoi ligandi sono CD54 (ICAM- 1), fibrinogeno, MM 95/150 kD.

· CD13- hanno tutte le cellule mieloidi, dendritiche ed endoteliali, aminopeptidasi N, recettore per il coronavirus, MM 150 KD.

v CD14 - hanno monociti / macrofagi, granulociti, un recettore per complessi LPS con LPS-

proteina legante e per molecole PI piastriniche; assente nei pazienti con emoglobinuria parossistica notturna (PNH), gli anticorpi contro di esso possono causare un burst ossidativo nei monociti, MM 55 KD.

· CD15-(Lewis) - hanno granulociti, monociti debolmente espressi, alcuni anticorpi contro di esso

inibire la fagocitosi.

· CD15-(sialyl-Lewis) - hanno cellule mieloidi, il ligando per CD62P (P-selectina), CD62E (E-selectina), CD62L (L-selectina), è assente nei pazienti con LAD-2.

v CD16 - porta EC, neutrofili, alcuni monociti, (recettore Fc a bassa affinità per IgG),

la proteina di membrana integrale (Fcγ RIIIA) su NK e macrofagi, la forma legante PI (Fcγ RIIIB) sui neutrofili, è assente nei pazienti con EPN - emoglobinuria parossistica notturna.

· CD18- hanno la maggior parte delle cellule linfoidi e mieloidi, molecola di adesione, catena β2 dell'integrina LFA, associata a αCD11 a, b, c, assente nella sindrome LAD-1, MM 95 KD.

v CD19- (ALLE 4) - hanno cellule pre-B e B, parte del loro complesso recettoriale è coinvolto nella loro attivazione (segnale di trasduzione associato a CD21 (CR2); MM 95 KD. Un importante marcatore di cellule B.

v CD20- (IN 1) - trasportare tutte le cellule B e cellule dendritiche nei follicoli, partecipa all'attivazione attraverso i canali del calcio delle cellule, MM 35 kDa.

v CD21- (recettore CR2, B2) - hanno sottopopolazioni di cellule B, alcuni timociti, cellule T, recettore per il componente del complemento C3d e per il virus di Epstein-Barr, è coinvolto nella regolazione dell'attivazione del complemento (RCA) insieme a CD35, CD46 CD55 e nell'attivazione delle cellule B.

La leucemia acuta è spesso sospettata nella pratica clinica. La presenza di un'alta percentuale di blasti nel midollo osseo ci permette di verificare questa diagnosi. Lo studio morfocitochimico, di norma, viene eseguito sullo stesso materiale e contemporaneamente all'immunofenotipizzazione. In altre parole, al momento dell'immunofenotipizzazione, la variante della leucemia acuta (linfoide o mieloide), e ancor più l'affiliazione lineare delle cellule blastiche nella leucemia linfoblastica, è sconosciuta. Pertanto, nella prima fase dell'immunodiagnostica, il compito è determinare l'affiliazione lineare della leucemia acuta al fine di chiarire ulteriormente lo stadio di maturità e la sottovariante della malattia.

L'algoritmo di screening della leucemia acuta include un solo campione con 8 anticorpi di diversa specificità. Ciò consente nel 98,3% dei casi di diagnosticare correttamente la leucemia acuta, la sua variante e il lignaggio delle cellule della leucemia linfoblastica acuta.

Gli anticorpi CD45 vengono utilizzati per identificare i blasti (cellule progenitrici), i tre marcatori citoplasmatici più affidabili di linearità: CD3 (per le cellule T), CD79a (per le cellule B), MPO (per le cellule mieloidi), marcatori di membrana delle cellule T (CD3 , CD7) e linfociti B (CD19), così come l'antigene delle cellule staminali CD34. Il marcatore citoplasmatico più specifico delle cellule B è il CD79a piuttosto che il CD22 usato tradizionalmente. Ciò è dovuto al fatto che cyCD22 non è specifico del lignaggio per le cellule B, poiché è altamente espresso su basofili normali, mastociti e cellule dendritiche plasmacitoidi. Quando si scelgono marcatori di cellule progenitrici, CD34 è preferito rispetto a TdT. Ciò è dovuto al fatto che il CD34 è espresso sulle cellule immature di tutte le linee. A seconda dei dati ottenuti, i kit di anticorpi vengono utilizzati per l'immunodiagnosi del B-lineare leucemia acuta, leucemia acuta T-lineare e leucemia mieloide acuta.

L'obiettivo dell'immunodiagnosi B-ALL è riconoscere e classificare tutti i tumori immaturi a cellule B.

Dal punto di vista immunofenotipico, B-ALL assomiglia ai normali progenitori B-lineari che vengono arrestati nel loro sviluppo a vari stadi di maturazione. Allo stesso tempo, l'espressione di un certo numero di antigeni sulle cellule B-ALL differisce significativamente dalla norma, essendo asincrona, ectopica o aberrante. Le informazioni sull'aberrazione delle cellule B-ALL alla diagnosi sono importanti per il successivo monitoraggio della malattia minima residua. È necessario identificare i normali precursori B-lineari, determinare le loro differenze immunofenotipiche rispetto alle cellule normali e in rigenerazione e stabilire il livello di blocco della maturazione. Componenti importanti del processo immunodiagnostico sono l'identificazione degli immunofenotipi leucemici per la successiva valutazione del livello di malattia residua minima, nonché la determinazione dei profili immunofenotipici associati alle anomalie oncogeniche ricorrenti. Questa informazione è importante per valutare la prognosi nei pazienti.

Per un'identificazione accurata dei blasti B, vengono utilizzati marcatori ripetuti nei campioni ("quadro"): l'antigene leucocitario generale CD45, l'antigene delle cellule staminali CD34 e l'antigene B-lineare CD19.

Il CD45 è stato utilizzato per misurare i blasti ed escludere le cellule B mature dall'analisi. CD19 consente l'identificazione di tutte le cellule B nel campione di sangue o midollo osseo studiato, poiché è espresso sui precursori B-lineari e in quasi tutti i casi di B-ALL. CD34 è un marker di immaturità che non è associato linearmente ed è spesso (ma non sempre) espresso in B-ALL. L'espressione di CD34 non è correlata con la differenziazione delle cellule B come CD10. CD34 riflette al meglio l'eterogeneità intraclonale dei progenitori maligni del lignaggio B.

Oltre agli anticorpi scaffold, il pannello B-ALL include marcatori per diagnosi differenziale di questo sottogruppo di leucemie, consentendo di confermare l'appartenenza dei blasti ai precursori della linea B, di escludere la leucemia lineare mista, di fornire evidenza di malignità, cioè la natura tumorale delle cellule analizzate. Prove simili nell'analisi delle cellule linfoidi B immature sono l'espressione asincrona di antigeni (p. es., co-espressione di CD20hi e CD34hi), l'espressione aberrante o ectopica di antigeni (p. es., CD33hi), la scomparsa della normale cinetica della maturazione immunofenotipica di B progenitori lineari.

Per questi motivi, a algoritmo diagnostico B-ALL include marcatori associati alla linea B (CD22, CD24, CD10, CD20, cyIg, SmIg), marcatori per la diagnosi differenziale con altre leucemie acute (CD13, CD33, CD117, CD15, CD65 - per escludere la leucemia mieloide acuta) , così come altri antigeni utili per distinguere dai normali pattern di differenziazione B-lineare (nuTdT, CD10, CD38, CD20, CD123).

L'antigene CD22 è uno degli antigeni associati B-lineari più informativi. Tuttavia, non è specifico per le cellule B, poiché è espresso su basofili, mastociti e cellule dendritiche plasmacitoidi. All'interno del lignaggio linfoide, l'espressione di questo antigene è indicativa di una natura di cellula B, con l'antigene che appare nelle prime fasi di differenziazione dei progenitori del lignaggio B. Allo stesso modo, anche il CD24 è espresso fin dalle prime fasi della differenziazione delle cellule B, ma è presente sui granulociti oltre che sulle cellule B.

Gli antigeni mieloidi (CD13, CD33, CD117, CD15, CD65) sono inclusi nel pannello per rilevare le leucemie mieloidi acute CD19-positive che potrebbero essere perse durante lo screening per la leucemia acuta. Quando si esegue l'immunodiagnostica di B-ALL, è importante tenere conto della natura mutuamente esclusiva o complementare dell'espressione di un numero di marcatori. Pertanto, ad esempio, SmIgμ non può essere espresso su progenitori B-lineari indipendentemente da CyIgμ. Al contrario, il recettore CD117 non si trova quasi mai in B-ALL. Pertanto, gli anticorpi contro questi due marcatori possono essere combinati in un campione e ottenere la risposta: SmIgμ+ CD117)+. In assenza di CyIgμ, tali osservazioni dovrebbero essere interpretate come positive per CD117. I marcatori CD15 e CD65 sono combinati in un campione per un motivo diverso: le informazioni che forniscono in B-ALL sono simili e si sovrappongono.

Nei casi in cui le normali cellule linfoidi immature e rigeneranti (ematogonia) vengono rilevate negli strisci di midollo osseo a livello morfologico, si pone la questione della loro differenziazione dalle cellule B-ALL maligne. Le cellule in rigenerazione sono caratterizzate da schemi di colorazione eterogenei dovuti alla presenza di diversi stadi di differenziazione con espressione sequenziale e coordinata di più antigeni, mentre le popolazioni leucemiche sono molto più omogenee. Poiché la normale maturazione dei progenitori del lignaggio B è caratterizzata da una diminuzione dell'espressione di CD10 e CD38 e da un aumento dell'espressione di CD20, questi tre marcatori vengono valutati simultaneamente. La TdT nucleare (NuTdT) è un marker di immaturità che si esprime principalmente nei progenitori linfoidi Ti B, ma è presente anche nel 25% dei casi di leucemia mieloide acuta. Questo marcatore è privo di specificità lineare, permette l'identificazione di progenitori immaturi e, nei casi di espressione asincrona, può servire come conferma della natura maligna delle cellule.

Gli stadi di maturazione delle cellule B-ALL sono generalmente determinati sulla base di CD10, CyIgμ, SmIgM, CyIgK e CyIgλ. Nella classificazione dell'OMS, ci sono immunosottovarianti pro-B, comuni (comuni) e pre-B di B-ALL. Nella letteratura russa, invece del termine "comune", viene utilizzato l'equivalente del nome del corrispondente stadio di differenziazione: prepre-B-ALL.

L'espressione aberrante di un certo numero di antigeni in B-ALL è associata a specifiche anomalie genetiche molecolari ricorrenti. Pertanto, le B-ALL BCR-ABL positive sono solitamente caratterizzate dall'espressione dei marcatori mieloidi CD13 e CD33 in combinazione con CD34hi e CD38lo in assenza dell'antigene CD117 sulla membrana cellulare. Inoltre, quando il gene di fusione BCR-ABL viene rilevato in B-ALL, si osserva spesso l'espressione di CD66c. Le leucemie riarrangiate MLL hanno tipicamente un immunofenotipo CD19+CD34+NuTdT+CD10-CD15±CD65±CD9+CD24-/parzialmente+ con espressione caratteristica (ma non specifica) di NG2. B-ALL con la presenza di TEL-AML1, insieme al tipico immunofenotipo dei progenitori del lignaggio B, sono caratterizzati dall'assenza di CD9 e CD66c. Al contrario, in B-ALL con riarrangiamento del gene E2A-PBX1, il fenotipo delle cellule pre-B è combinato con una pronunciata espressione di CD9.La valutazione della malattia residua minima mediante citometria a flusso ha assunto un ruolo importante nel monitoraggio dell'efficacia di Trattamento B-ALL. I marcatori che distinguono le cellule B-ALL maligne dai progenitori rigeneranti del lignaggio B possono essere utilizzati con successo nella definizione di malattia residua minima. Ulteriori informazioni sono fornite da CD123, CD21, CD81 e CD58.

Nonostante CD123 sia il marcatore principale di LI, la sua espressione sulle esplosioni non è stabile. Il ruolo del CD21 nella definizione dell'aberrazione è che può essere espresso sulle cellule B maligne CD19+CD34+, ma non sui normali progenitori della linea B. La molecola tetraspanina CD81 è altamente espressa sui normali progenitori B-lineari, ma è estremamente scarsamente rappresentata nella maggior parte dei casi (> 80%) di B-ALL. Un ruolo speciale nel determinare gli immunofenotipi della leucemia è svolto dalla molecola CD58, che è molto spesso sovraespressa sui blasti B-ALL rispetto ai normali progenitori delle cellule B rigeneranti (ad esempio, ematogoni).

Immunodiagnosi della leucemia linfoblastica acuta da progenitori di cellule T
T-ALL è un gruppo eterogeneo di tumori maligni definiti dalla proliferazione di progenitori di cellule T immature bloccati in determinati stadi di maturazione, solitamente diversi dai normali schemi di differenziazione delle cellule T.

Uno dei compiti principali nell'immunodiagnosi di T-ALL è il rilevamento di cellule T immature nel sangue o nel midollo osseo dei pazienti. Normalmente, lo sviluppo delle cellule T si verifica principalmente nel timo e la rilevazione di cellule T immature nel sangue periferico, nel midollo osseo o in tessuti diversi dal timo è di per sé anormale e spesso sufficiente per la diagnosi. L'eccezione sono i tumori mediastinici, nella cui diagnosi è necessario distinguere i timociti normali da quelli maligni. Inoltre, T-ALL deve essere sottoclassificato in base agli stadi di differenziazione. cellule T-l linee e principali sottogruppi genetici. Un gran numero di marcatori genetici somatici contribuiscono all'oncogenesi T-ALL. Alcuni di essi coesistono (ad es. NUP214-ABL1 e sovraespressione di TLX1/TLX3) e possono verificarsi nei sottocloni T-ALL.

Rispetto a B-ALL e AML, T-ALL ha un numero relativamente piccolo di profili immunofenotipici associati ad anomalie molecolari ricorrenti. Questi includono il riarrangiamento frequente, sebbene non permanente e non specifico, di CALM-AF10 nelle varianti T-ALL CD2-negative, che possono essere TCRγδ+. Al contrario, un numero significativo di anomalie molecolari in T-ALL è associato a un tipico blocco nella maturazione delle cellule T e nei profili di espressione genica. Un esempio è la combinazione della sovraespressione di TLX1 con l'immunofenotipo dei timociti corticali. Nonostante la somiglianza fenotipica tra T-ALL e la normale maturazione timica, l'immunofenotipizzazione multiparametrica dettagliata consente l'identificazione di modelli di espressione proteica che distinguono T-ALL dalle normali controparti timiche.

I CD45, così come i CD3 citoplasmatici e di membrana, sono usati come marcatori di scaffold nel pannello T-ALL. La combinazione di questi marcatori rende facile identificare i blasti e differenziare i progenitori dei linfociti T dai linfociti T maturi. Marcatori T-ALL molto comuni come CD99, CD5 e CD7 non sono adatti a questo scopo. L'espressione di CD99 non è osservata in tutte le varianti di T-ALL, può essere assente in T-ALL più maturo, inoltre, la colorazione con questi anticorpi è molto debole per distinguere i blasti dai linfociti T normali residui. L'antigene CD5 è solitamente espresso nella T-ALL ma può essere debole e negativo, specialmente nella sottoclasse T-ALL immatura. CD7 è espresso in quasi tutti i casi, ma non è specifico del lignaggio.

I marcatori CD2, CD4, CD5, CD7, CD8, CD10, CD99, TCRαβ, TCRγδ vengono utilizzati per stabilire lo stadio di differenziazione e un'ulteriore conferma della natura delle cellule T. L'origine di T-ALL dai precursori è confermata dalla presenza di TdT, CD1a, CD34 e CD99.

I marcatori del lignaggio mieloide (CD13, CD33, CD117) sono espressi principalmente in T-ALL dai primi progenitori delle cellule T. La diagnosi differenziale di T-ALL con le cosiddette leucemie/linfomi linfoblastici da progenitori delle cellule NK presenta grandi difficoltà. L'uso di CD56 può aiutare nella diagnosi in questi rari casi. Tuttavia, la distinzione tra NK-ALL e T-ALL immatura può essere difficile perché per definizione, T-ALL e soprattutto i casi immaturi possono esprimere CD56. Non è chiaro se queste leucemie siano entità distinte. È importante sottolineare che gli antigeni delle cellule T come CD2, CD7 e persino CD5 e cyCD3 possono essere espressi in NK-ALL. La rilevazione degli antigeni mieloidi può essere utile nella diagnosi di T-ALL immatura in queste situazioni. Le leucemie da cellule dendritiche plasmacitoidi possono anche esprimere antigeni delle cellule T (p. es., CD2, CD7). cyCD3, CD4, CD123 e CD56, in misura minore, HLA-DR e CD45RA possono aiutare nella diagnosi differenziale Le sottovarianti di T-ALL sono diagnosticate in accordo con le fasi del blocco della differenziazione delle cellule T, tenendo conto del diversa espressione di un certo numero di marcatori. Il gruppo EGIL identifica 4 diversi stadi basati su CD2, CD3, CD5, CD7, CD8, CD1a e TCR.

CyTCR| F1. Su questa base, è possibile determinare tre stadi di differenziazione delle cellule T-ALL: immaturo (CyCD3+ CyTCR|F1 - smTCR -), pre-αβ (CyCD3+ CyTCR|F1+ SmTCR-), maturo (CyCD3+ SmTCR+). La divisione di T-ALL nelle varianti TCRγδ+ e TCRαβ+ ha valore predittivo. Il pannello include anche marcatori aggiuntivi (CD44, CD45RA, HLA-DR, CD13, CD33 e CD123).

Prognosticamente sfavorevole, la sottovariante T-ALL meno matura è caratterizzata come CyCD3+ CD5lo CD1a-CD8 - con espressione di cellule staminali o marcatori mieloidi CD34, CD117, HLA-DR, CD13 e CD33.

Come con B-ALL, la valutazione degli immunofenotipi leucemici per la successiva determinazione della malattia residua minima è necessaria già al momento della diagnosi di T-ALL. Fondamentalmente, la definizione di MRD in T-ALL si basa sulla determinazione dei marcatori dei precursori delle cellule T: CD34, NuTdT, CD1a, CD10.

Immunodiagnostica della leucemia mieloide acuta e della sindrome mielodisplastica
La leucemia mieloide acuta e la sindrome mielodisplastica sono malattie eterogenee in cui, contrariamente a T-ALL e B-ALL, diverse linee cellulari a diversi stadi di maturazione possono essere coinvolte nel processo tumorale. Per questi motivi, è necessario uno studio immunofenotipico dettagliato delle linee neutrofile, monocitiche, eritroidi, nonché delle cellule dendritiche plasmacitoidi, dei basofili, dei mastociti e dei megacariociti. Oltre all'affiliazione lineare e allo stadio, viene stabilita anche l'espressione aberrante dei marcatori associati ai linfoidi. La totalità dei dati consente non solo di classificare la leucemia mieloide acuta, ma anche di determinare, in alcuni casi, le relative anomalie genetiche. Pertanto, la leucemia promielocitica acuta con una traslocazione 15:17 ha tipicamente un immunofenotipo promielocitario (CyMPO+ HLA-DR-, CD13+ eterogeneo, CD33 omogeneo e CD117) con espressione anormalmente bassa o completamente assente di CD15.

I blasti della leucemia mieloide acuta con traslocazione 8:21 spesso co-esprimono CD19 e la leucemia mieloide acuta con inv(16) è spesso CD2+ Nei pazienti con sindrome mielodisplastica, il ruolo dell'immunofenotipizzazione citometrica a flusso non è completamente chiaro. Negli ultimi anni, l'immunofenotipizzazione è stata presa in considerazione come uno dei criteri aggiuntivi per la diagnosi della sindrome mielodisplastica. Molti lavori indicano la presenza di caratteristiche immunofenotipiche (anomalie) nella stragrande maggioranza dei pazienti con sindrome mielodisplastica, compresi i casi con morfologia cellulare normale.

Nei pazienti con indicazioni di leucemia mieloide acuta sulla base dello screening della leucemia acuta (leucemie mieloidi acute, leucemie acute di lignaggio ambiguo, tumori delle cellule dendritiche plasmacitoidi), deve essere utilizzato il pannello leucemia mieloide acuta/sindrome mielodisplastica. In presenza di sospetto clinico o citomorfologico di sindrome mielodisplastica, o in presenza di citopenie inspiegabili, può essere utilizzato immediatamente un pannello anticorpale per diagnosticare la leucemia mieloide acuta/sindrome mielodisplastica.

Nell'immunodiagnosi della leucemia mieloide acuta/sindrome mielodisplastica vengono utilizzati 4 marcatori quadro (HLA-DR, CD45, CD34, CD117), che consentono di rilevare efficacemente i blasti (con elevata sensibilità e specificità) nell'88% dei casi. Gli antigeni CD11b e CD33 per questi scopi erano meno adatti. L'espressione combinata di HLA-DR e CD117 ha associazioni caratteristiche con distinti profili di maturazione di vari lignaggi mieloidi. C'è una consistente perdita di CD34 e CD117 nei progenitori di cellule monocitiche e dendritiche HLA-DR-positivi, così come CD34 e HLA-DR nei progenitori in maturazione CD117-positivi di neutrofili ed eritrociti.

L'immunodiagnostica della leucemia mieloide acuta e della sindrome mielodisplastica è la più complessa; 7 campioni vengono utilizzati per uno studio più dettagliato delle cellule mieloidi. Ciascuno di essi ha, oltre a scopi diagnostici e di classificazione, uno scopo specifico. Il campione 1 caratterizza la maturazione dei neutrofili. All'interno del lignaggio dei neutrofili, i marcatori CD10, CD11b, CD13 e CD16 sono espressi come specifici per stadio. In combinazione con marcatori di scaffold, consentono una caratterizzazione dettagliata della maturazione dei neutrofili dalle cellule blastiche mieloidi più immature ai granulociti neutrofili polinucleari maturi. Anomalie nell'espressione di questi marcatori sono spesso osservate in pazienti con leucemia mieloide acuta e sindrome mielodisplastica.

Il campione 2 caratterizza la differenziazione monocitica. Il marcatore CD14 è tipico dei monociti, tuttavia è espresso solo nelle fasi intermedie e finali della maturazione dei monociti. Al contrario, il recettore CD64 (in misura minore CD36) è presente nelle prime fasi della differenziazione monocitica. L'uso di questi marcatori è necessario per identificare le cellule nelle prime fasi della differenziazione monocitica. L'espressione di CD33 aumenta dalle prime fasi dello sviluppo monocitico a livelli superiori rispetto alle cellule granulocitiche, il che rende possibile distinguere tra linee cellulari granulocitiche e monocitiche. CD11b è assente sulle cellule monocitiche immature ma è espresso negli stadi successivi. Nel campione 2 s scopo diagnostico Viene utilizzato IREM-2 (CD300e). Questo è un nuovo marcatore di natura glicoproteica. È presente sulle cellule della linea monocitica e sulla linea cellulare dendritica mieloide. Nella serie monocitica, il CD300e è espresso nelle ultime fasi della maturazione, dopo la comparsa dell'espressione pronunciata del CD14.

Nella leucemia mieloblastica acuta, CD300e si trova praticamente solo nelle leucemie monocitiche e l'espressione aumenta dalla leucemia mieloide acuta monoblastica alla leucemia mieloide acuta monocitica e le leucemie mielomonocitiche croniche. In un sottogruppo di queste leucemie, CD300e appare prima di CD14. CD36 è informativo per la caratterizzazione delle cellule di differenziazione eritroide e, inoltre, è presente sui progenitori monocitici CD64hi. Per questi motivi, il CD64 viene utilizzato nel test che caratterizza la differenziazione dei monociti, mentre il CD36 viene utilizzato nella differenziazione eritroide. Il recettore CD35 (CR1) è espresso su eritrociti, granulociti, monociti e cellule dendritiche, nonché in alcuni casi di leucemia mieloide acuta.

In combinazione con CyMPO, consente di distinguere tra le prime fasi di maturazione dei neutrofili e dei monociti Il campione 3 caratterizza la differenziazione delle cellule eritroidi. Informazioni per queste cellule sono CD235a (glicoforina A), CD71 e CD36. La glicoforina A è espressa sia sui precursori eritroidi immaturi sia sugli eritrociti maturi. Per questo motivo è meno adatto per l'esame del midollo osseo intero o del sangue. I marcatori delle cellule eritroidi sono CD233 (proteina banda-3), CD238 (Kell) e CD105 (endoglin). CD233 e CD238 non sono adatti per scopi immunodiagnostici. CD36 e CD105 compaiono durante la differenziazione eritroide prima di CD235a.

L'espressione di CD105 si nota più tardi di CD71, aumenta e poi scompare poco dopo la perdita del recettore di membrana CD117. Le cellule eritroidi più mature non esprimono CD105. Al contrario, l'espressione di CD36 viene conservata per un tempo piuttosto lungo. livelli alti durante la differenziazione delle cellule eritroidi. Ci sono pochi dati sull'espressione di CD105 nella leucemia mieloide acuta, ma è stata descritta un'espressione aberrante del marcatore nella sindrome mielodisplastica.

Il campione 4 caratterizza l'espressione dei marcatori linfoidi sulle cellule mieloidi e la maturazione anormale delle cellule B. I marcatori più comuni di linee insolite sono CD19 nella leucemia mieloide acuta con t(8;21), così come CD7 e CD56. La determinazione del marcatore nucleare TdT fornisce informazioni sui progenitori delle cellule B, che è particolarmente importante nei casi di sindrome mielodisplastica. Il rilevamento dell'espressione di CD7 sui progenitori mieloidi viene utilizzato come criterio aggiuntivo displasia.

Il campione 5 nel pannello leucemia mieloide acuta/sindrome mielodisplastica è progettato per la caratterizzazione approfondita delle cellule staminali e include marcatori di aberrazione. L'antigene NG2 è normalmente assente sulle cellule ematopoietiche, ma viene rilevato nella leucemia mieloide acuta con riarrangiamento del gene MLL (circa il 10%) e nelle rare leucemie da cellule dendritiche plasmacitoidi (
Il campione 6 caratterizza megacariociti/megacarioblasti, basofili, mastociti e cellule dendritiche plasmacitoidi. Si consiglia di combinare CD42 e CD61 marcati con lo stesso fluorocromo in un campione per la massima precisione nel rilevare le prime fasi della differenziazione megacariocitica. Se le cellule leucemiche esprimono CD42a o CD61, è necessaria un'ulteriore conferma della natura megacariocitica utilizzando CD41 e CD42b. CD203c è un marcatore unico per l'identificazione dei mastociti CD117hi. CD203c è presente anche sui basofili debolmente positivi per CD117. La valutazione del recettore CD123 in combinazione con il marker quadro HLA-DR consente l'identificazione di cellule dendritiche plasmacitoidi (CD123+HLA-DR+) e basofili (CD123+HLADR-). Il CD4 è espresso sulle cellule dendritiche plasmacitoidi e sui monociti.

Il campione 7 nel pannello di immunodiagnosi della leucemia mieloide acuta/sindrome mielodisplastica è destinato alla caratterizzazione approfondita delle leucemie megacarioblastiche e della mastocitosi sistemica. Vengono utilizzati marcatori specifici della linea megacariocitica CD41 e CD42b. Ulteriori informazioni sono fornite dal marcatore CD9, che, sebbene caratterizzato da un'ampia gamma espressione, ma all'interno del lignaggio megacariocitico appare sui primi progenitori. Il recettore CD25 è anche espresso nelle prime fasi della maturazione dei megacariociti. Inoltre, gli anticorpi CD25 consentono l'identificazione di mastociti immunofenotipicamente aberranti mastocitosi sistemica e sospetto di leucemia eosinofila cronica (possibilmente in combinazione con leucemia mieloide acuta o sindrome mielodisplastica).

Immunodiagnostica dei linfomi a cellule mature (periferiche) e dei tumori plasmacellulari
Linfomi da linfociti B e T periferici, malattie linfoproliferative delle cellule NK, tumori da plasmacellule: tutti questi processi tumorali richiedono la verifica immunologica e la diagnosi di varianti specifiche. Nella prima fase viene eseguito lo screening, determinando a quale linea di differenziazione appartengono i linfociti clonali. 12 anticorpi vengono utilizzati per identificare i linfomi a cellule T e B, le malattie linfoproliferative a cellule NK e i tumori delle plasmacellule.I linfomi a cellule B mature (periferiche) corrispondono alle controparti maligne delle normali cellule B mature - cellule naive e loro discendenti. La classificazione dell'OMS delle leucemie e dei linfomi a cellule B mature segue il concetto di ricerca di un analogo normale delle cellule maligne in base alla loro corrispondenza con le cellule del centro germinale o con gli stadi successivi di attivazione e maturazione delle cellule B.

La selezione di marcatori di scaffold per l'immunodiagnosi dei linfomi a cellule B periferici è un compito difficile. Ciò è dovuto alle ben note varianti di espressione aberrantemente bassa di un numero di antigeni CD20 nella leucemia linfatica cronica B, CD19 nel linfoma follicolare, linfoma diffuso a grandi cellule B e linfoma mantellare. Le aberrazioni in CD22 e CD37 sono note in alcuni linfomi a cellule B. La coppia di anticorpi quadro più accettabile era CD19 e CD20 (89-98% dei casi), l'aggiunta di CD22 a questo pannello ha permesso di identificare le cellule B in tutti i casi. Pertanto, CD19, CD20 e CD45 sono stati selezionati come anticorpi quadro. CD45 permette di distinguere dai precursori eritroidi, cellule non ematopoietiche, per identificare la popolazione dominante tra i leucociti.

I marcatori per la diagnosi differenziale dei linfomi a cellule B includono, insieme ai ben noti nuovi antigeni CD200, CD305 (LAIR), CD185 (CXCR5). L'approccio proposto consente di stabilire modelli immunofenotipici tipici per la maggior parte dei casi di otto principali nosologie di linfomi a cellule B periferiche: leucemia linfatica cronica, linfoma di Burkitt, linfoma diffuso a grandi cellule B, linfoma follicolare, leucemia a cellule capellute, linfoma linfoplasmocitico, linfoma del mantello linfoma cellulare e linfoma cellulare della zona marginale. Le maggiori difficoltà rimangono nella diagnosi differenziale del linfoma diffuso a grandi cellule B dal linfoma follicolare, nonché dal linfoma della zona marginale e dal linfoma linfoplasmocitico, anch'essi non chiaramente distinguibili.

Immunodiagnostica delle leucemie e dei linfomi a cellule T mature. Questi linfomi periferici piuttosto rari (~ 10%), che derivano da cellule T mature posttimiche, rappresentano un gruppo altamente eterogeneo di malattie. Il linfoma periferico dei linfociti T, non specificato (~ 30%) rimane il più comune nella classificazione dell'OMS (2008), indicando che non vi sono conoscenze sufficienti per determinare l'equivalente cellulare normale per i linfomi a cellule T. Negli ultimi anni sono stati stabiliti numerosi analoghi normali dei linfomi a cellule T. Ad esempio, il linfoma a cellule T angioimmunoblastico è un sottotipo distinto di linfomi a cellule T derivato dalle cellule T helper dei centri follicolari e le cellule T regolatorie CD4+CD25+cyFOXP3+ sono la controparte normale più vicina alla leucemia a cellule T dell'adulto. /linfoma. Il linfoma anaplastico a grandi cellule, a seconda dell'espressione del gene ALK, può essere rappresentato da due sottotipi con prognosi differente. Le cellule di leucemia prolinfocitica T in una percentuale significativa di casi sovraesprimono il coattivatore della chinasi Tcl1 a causa del riarrangiamento cromosomico del gene TCL1.

I linfomi periferici a cellule T sono tra i tumori più aggressivi, con le uniche eccezioni rappresentate dalla micosi fungoide, dal linfoma cutaneo anaplastico primario e dalla leucemia a cellule T a grandi linfociti granulari. La maggior parte dei pazienti presenta chiari sintomi di malattia linfoproliferativa, che spesso coinvolgono il sangue periferico, oltre a linfonodi, pelle e altri tessuti.

Quattro antigeni sono stati selezionati come scaffold per la diagnosi dei linfomi a cellule T: CD45, SmCD3, CD4, CD8. La creazione di un immunodiagnostico per i tumori a cellule T ha lo scopo di rilevare le cellule T fenotipicamente aberranti e di isolare accuratamente le varianti di linfoma dai linfociti T periferici in accordo con la classificazione dell'OMS. Quando si selezionano marcatori aggiuntivi, abbiamo studiato un ampio pannello di anticorpi contro: antigeni delle cellule T comuni espressi in modo aberrante in T-CLPD, come CD2, CD5, CD7; marcatori di differenziazione delle cellule T (CD27, CD197 /CCR7/, CD45RA, CD45RO); molecole costimolatrici (CD26, CD28); marcatori di attivazione (CD25, CD38, CD69, HLA-DR); recettore IL-2-CD122; molecole associate alla citotossicità dei linfociti granulari effettori T-large (CD11c, CD16, CD56, CD57), recettori delle cellule killer Ig-like (CD158a/b/e/j/k, NKB1), recettori di tipo lectina (CD94, CD161 ), proteine citoplasmatiche (perforina, granzima, TIA-1). Sono state studiate anche molecole associate a sottotipi specifici di linfomi a cellule T, come CD30, cyTcl1 e marcatori di cellule T CD4+ follicolari (CD10, CD279). È noto che le cellule T monoclonali hanno spesso livelli ridotti di marcatori di cellule T comuni come CD2, CD5, CD7, insieme a SmCD3 e CD4.

Gli anticorpi contro questi antigeni sono obbligatori per l'uso nell'immunodiagnosi dei linfomi a cellule T. Questi sono marcatori diagnostici di livello 1. Altrettanto importanti sono i marcatori di classificazione che consentono di classificare i linfomi a cellule T secondo le categorie dell'OMS.

CD26 e CD28 sono utili per identificare le cellule di Cesari:
CD2lo CD4lo smCD3lo CD26 - CD28+. Il CD30 è caratteristico del linfoma anaplastico sistemico a grandi cellule (ALK- e ALK+), così come della malattia linfoproliferativa T CD30+ cutanea primaria. L'espressione di CyTcl è limitata principalmente (70-80%) dalla leucemia T-prolinfocitica. Questo marcatore è assente nel linfoma anaplastico a grandi cellule CD30+/-, nel linfoma T-linfoblastico, nel linfoma a cellule T periferiche nodali, nella micosi fungoide e in altri linfomi a cellule T periferiche. I marcatori di livello 1 includono anche CD11c, CD16, CD57. Allo stesso tempo, le molecole associate alla citotossicità sono assegnate al 2° livello immunodiagnostico. Sono inclusi anche i marcatori di differenziazione CD27, CD197 (CCR7), CD45RA, CD45RO, HLA-DR e antigeni di attivazione CD25. Ciò è dovuto al fatto che il fenotipo delle cellule patologiche in molte periferiche Linfomi a cellule T correla con le fasi di differenziazione delle cellule T. Pertanto, le cellule di Cesari hanno il fenotipo dei linfociti T della memoria CD4 + e le cellule della leucemia T-prolinfocitica corrispondono alle cellule T naive o alle cellule T della memoria centrale. Il fenotipo della leucemia a cellule T dei grandi linfociti granulari si sovrappone a quello delle cellule T effettrici attivate.

L'approccio proposto ha permesso di distinguere chiaramente cellule patologiche linfomi a cellule T periferiche (sindrome di Sesari, leucemia T-prolinfocitica, leucemia/linfoma a cellule T dell'adulto, leucemia a cellule T CD4+ da grandi linfociti granulari, linfoma a cellule T angioimmunoblastico) da linfociti T CD4+ normali. I marcatori per la diagnosi differenziale della sindrome di Cesari erano CD2, CD26, CD7; nella leucemia T-prolinfocitica si osserva l'espressione di CyTcl1. La leucemia/linfoma a cellule T dell'adulto è caratterizzata come positiva per HLA-DR e CD25; La leucemia a cellule T CD4-positiva da grandi linfociti granulari ha i marcatori CD28, Cy-granzyme B, CD7. Il linfoma angioimmunoblastico a cellule T è caratterizzato dall'immunofenotipo CD279, HLA-DR, SmCD3.

La linfoproliferazione dai linfociti T con una brillante espressione di CD8 (CD8hi) nella maggior parte dei casi può essere distinta dall'immunofenotipo dai normali linfociti T (CD8hi), con i marcatori più informativi che sono CD45RO, CD27, granzima citoplasmatico B, CD28, CD57, CD45RA . Nel distinguere le cellule T patologiche CD4-/CD8-/10 dalle controparti normali, CD28, granzima B citoplasmatico, CD45RA, CD45RO, CD16, CD11c e CD27 sono tra i marcatori più importanti.

Non sono state stabilite differenze immunofenotipiche tra la leucemia a cellule T CD8hi TCRαβ da grandi linfociti granulari e il linfoma a cellule T CD8hi-non specificato. Non è stata inoltre rilevata alcuna differenza tra la leucemia a cellule T a grandi linfociti granulari CD4-/CD8-/lo TCRγδ e il linfoma a cellule T epatosplenico CD4-/CD8-/lo.

Immunodiagnostica della malattia linfoproliferativa cronica a cellule NK
Le malattie delle cellule NK sono rare, meno dell'1% di tutti i linfomi e le malattie linfoproliferative. In accordo con la classificazione dell'OMS, si distinguono 3 nosologie: leucemia a cellule NK aggressiva, linfoma a cellule NK / T extranodale (tipo nasale) e malattia linfoproliferativa cronica a cellule NK. Le prime 2 nosologie hanno una chiara connessione con il virus Epstein-Barr, sono caratterizzate da un decorso aggressivo e bassa sopravvivenza. Al contrario, la malattia linfoproliferativa a cellule NK è una nuova entità nosologica che include casi precedentemente considerati linfocitosi a cellule NK, leucemia cronica a grandi linfociti granulari con un fenotipo a cellule NK e linfocitosi a cellule NK a grandi linfociti granulari. I livelli di linfocitosi tendono a rimanere stabili per molti anni, talvolta si osserva una regressione spontanea e in rari casi è stata segnalata la possibilità di trasformazione in leucemia a cellule NK aggressiva. Di norma, nei casi più frequenti di malattia linfoproliferativa a cellule NK, il motivo dell'esame immunologico è la linfocitosi a cellule NK. Se, in base allo screening dei linfociti maturi, esiste una linfocitosi CD56+ o CD56-/lo/CD45hi assoluta o relativa in assenza di espressione di SmCD3, CD4, TCRγδ e CD19, allora dovrebbe essere approfondita l'immunodiagnosi delle malattie linfoproliferative delle cellule NK eseguito.

CD45, SmCD3, CD56, CD19 sono stati utilizzati come anticorpi scaffold nella diagnosi delle malattie linfoproliferative delle cellule NK. Il set di potenziali marcatori per i tumori delle cellule NK è piuttosto ampio. Questi sono antigeni classici associati alle cellule NK, come molecole di segnalazione (CD2, CD5, CD7, CD8), recettore FcγRIII a bassa affinità CD16, marcatori di attivazione (CD26, CD38, CD45RO, CD69, HLA-DR), recettori IL-2 (CD25, CD122), molecole citotossiche (CD11c, CD57), enzimi citoplasmatici (perforina, granzimi e TIA-1), nonché recettori delle cellule killer simili a Ig - KIR (CD158a/b/d/e/l e NKB1) , recettori leucocitari Ig-like LIR (CD85j - LIR1 / ILT2), recettori lectina-like tipo C (NKG2A / D, CD94, CD161), recettori di citotossicità naturale NCR (CD335 / NKp46 /, CD336 / NKp44 /, CD337 / NKp30 /). I criteri per la necessità di utilizzare gli anticorpi erano la loro capacità di differenziare le cellule NK normali/reattive dalle cellule NK immunofenotipicamente aberranti, la valutazione del fenotipo dell'effettore citotossico e gli stadi di maturazione delle cellule NK quantitativamente aumentate.

Le cellule NK aberranti o clonali hanno modelli di espressione CD2, CD7, HLA-DR, CD94 alterati in modo univoco rispetto alle cellule NK normali e reattive, sebbene vi sia una certa sovrapposizione. Questi marcatori sono inclusi nel primo livello del pannello diagnostico, che comprende anche CD16. Questo marcatore conferma la natura delle cellule NK CD56lo ed è utile nell'identificazione di rari tumori a cellule NK CD16-/10. Per valutare il fenotipo dell'effettore citotossico e lo stadio di maturazione delle cellule NK analizzate, vengono utilizzati marcatori espressi su cellule citotossiche terminalmente differenziate - CD11c, CD57, perforina, granzima B. Sono marcatori di secondo livello, poiché non consentono di distinguere i normali Cellule NK da quelle aberranti. Ulteriori anticorpi di secondo livello sono CD5, CD25, CD26.

Il numero di cellule NK stimato con questo metodo nel sangue dei donatori era in media del 2,1% (1,5-4,5) tra i leucociti, che in valori assoluti corrispondeva a 130 (60-290) x103 cellule/µl. La conduzione dell'immunodiagnosi delle malattie linfoproliferative delle cellule NK secondo l'algoritmo proposto consente di identificare i profili immunofenotipici che consentono di distinguere le cellule NK clonali dalle cellule normali o reattive (policlonali). Valore più alto hanno marcatori CD56, CD57, HLA-DR, CD94, e nei casi di CD56-/10 - CD7, granzima B citoplasmatico, perforina citoplasmatica e CD2.

Immunodiagnostica dei tumori plasmacellulari
Le malattie delle plasmacellule più comuni sono il mieloma multiplo e la gammopatia monoclonale di significato sconosciuto, mentre i tumori delle plasmacellule extramidollari sono meno comuni. L'immunofenotipizzazione multiparametrica mediante citometria a flusso, insieme a dati clinici, radiologici, biochimici ed ematologici, fornisce informazioni affidabili per la diagnosi e la classificazione dei tumori plasmacellulari. Oltretutto, questo metodo promuove la stratificazione prognostica e consente il monitoraggio della malattia residua minima nei pazienti con mieloma multiplo dopo il trattamento.

L'informazione clinica più affidabile dell'immunofenotipizzazione multiparametrica risiede nella capacità di identificare e quantificazione plasmacellule aberranti del midollo osseo rispetto alle normali plasmacellule. Maggiore è la proporzione di cellule aberranti tra le plasmacellule, maggiore è il rischio di un processo maligno (p. es., mieloma multiplo quando diagnosticato in modo differenziale con gammopatia monoclonale di significato sconosciuto). Allo stesso modo, la presenza
Suggerito grande numero marcatori plasmacellulari. In genere, le raccomandazioni includono CD38, CD138 e CD45 (insieme alle caratteristiche di diffusione della luce) come marcatori di scaffold per l'identificazione e la quantificazione delle plasmacellule. Marcatori aggiuntivi in questo caso possono essere CD19, CD56, CD117, CD20, CD28, CD27 e CD81. È necessario valutare la clonalità delle catene polipeptidiche leggere citoplasmatiche delle immunoglobuline. Tra i marcatori attraenti c'è la β2-microglobulina di membrana.

Il consorzio EuroFlow ha sviluppato un pannello di 12 anticorpi monoclonali β2 in citometria a flusso a 8 colori (2 campioni). Sono stati selezionati quattro marcatori quadro (CD38, CD138, CD45, CD19) per rilevare efficacemente le plasmacellule (CD38, CD138) e differenziare le plasmacellule normali/reattive dalle plasmacellule clonali (CD19, CD38, CD45). I restanti 8 marcatori sono stati usati per caratterizzare le plasmacellule. Nell'approccio immunodiagnostico proposto, gli anticorpi aggiuntivi sono equamente divisi in 2 campioni: 1 - CD56, β2-microglobulina, CyIgK e CyIgλ; 2-CD27, CD28, CD81, CD117. Il campione 1 è sufficiente per l'identificazione specifica, la quantificazione delle plasmacellule e la loro separazione in normali/reattive e patologiche (con un immunofenotipo aberrante). Il campione 2 può essere utilizzato quando indicato per ulteriori informazioni caratteristiche dettagliate plasmacellule.

Sulla membrana si trovano antigeni di gruppo che uniscono cellule simili nelle morfofunzioni - antigeni di cluster di differenziazione cellulare (CD-AG).

CD 4 - Tx
CD 11a - monociti, granulociti;
CD 19-22 - Vl

recettori per il riconoscimento dell'antigene

L'essenza della differenziazione di ciascun linfocita – espressione del recettore che riconosce l'AG e delle necessarie molecole di servizio addizionali affinché il fatto del riconoscimento dell'AG abbia effettive conseguenze volte a sanificare l'organismo dagli AG interferenti.

Queste molecole di servizio assicurano l'interazione delle cellule immunitarie.

Recettori di riconoscimento dell'antigene:

Questi sono analoghi di ¼ di molecola Ig, un frammento Fab. Ci sono due catene nel recettore: α e β - Tαβ; γ e δ – Тγδ.

TCR - non riconosce gli antigeni solubili . Cosa riconosce allora T-l?

Per natura, sono progettati per riconoscere le strutture superficiali delle "cellule proprie". Se qualcosa sulla superficie delle loro cellule "irriterà" T-l, allora cercheranno di organizzare la distruzione.

Popolazioni cellulari del sistema immunitariosistemi

La specifica funzione di difesa immunitaria è svolta direttamente da un numeroso pool di cellule di germi sanguigni mieloidi e linfoidi: linfociti, fagocitiEcellule dendritiche. Questo cellule basichesistema immunitario. Oltre a queste, molte altre popolazioni cellulari (epitelio, endotelio, fibroblasti, ecc.) possono essere coinvolte nella risposta immunitaria.

Elencato celluledifferire non solo morfologicamente, ma anche nel suo orientamento funzionale, in termini di marcatori (etichette molecolari specifiche), in termini di apparato recettoriale e di prodotti biosintetici. Tuttavia, la maggior parte delle cellule del sistema immunitario unisce vicinoqualche relazione genetica- condividono un comune precursore, una cellula staminale pluripotente del midollo osseo.

Sulla superficie della membrana citoplasmatica delle cellule del sistema immunitario ci sono molecole speciali che fungono da marcatori. Con l'aiuto di anticorpi specifici contro queste molecole, è stato possibile dividere le cellule in sottopopolazioni separate. Negli anni '80 adottato una nomenclatura internazionale marcatori di membrana dei leucociti umani . Hanno il nome CD - antigeni (abbr. dall'inglese. Grappolo Di differenziazione, O Definizione). Attualmente, le sottopopolazioni cellulari più importanti del sistema immunitario vengono identificate sierologicamente mediante anticorpi monoclonali o mediante analisi genetica.

Secondo l'attività funzionale le cellule coinvolte nella risposta immunitaria si dividono in:

regolamentare (induttore),

effettore

Normativacellule controllare il funzionamento dei componenti del sistema immunitario producendo mediatori: immunocitochine e ligandi. Queste cellule determinano la direzione di sviluppo della risposta immunitaria, la sua intensità e durata.

Effettori sono diretti esecutori della protezione immunitaria. Agiscono sull'oggetto direttamente o attraverso la biosintesi di sostanze biologicamente attive con un effetto specifico (anticorpi, sostanze tossiche, mediatori, ecc.).

APK svolgere un compito semplice, ma molto responsabile. Catturano, elaborano (riciclano mediante proteolisi limitata) e presentano l'antigene alle cellule immunocompetenti (T-helper) come parte di un complesso con MNSIIclasse. Gli APC mancano di specificità per l'antigene stesso. A causa di spontaneo molecola di assorbimento MHCIIclasse può includere qualsiasi oligopeptide endocitato, sia self che non self. È stato stabilito che la maggior parte dei complessi MHC di classe II contengono molecole autogene e solo una piccola parte - materiale estraneo.

La presenza sulla membrana di MHC classe 11 javè obbligatorio, ma non l'unicoSegno dell'APC. Per l'attuazione diè necessaria l'attività professionaleespressione di fattori costimolatori(CD40, 80, 86) e anchemolte molecoleadesione.

Questi ultimi forniscono un contatto stretto, spazialmente stabile ea lungo termine dell'APC con il T-helper. Oltre a MHC classe II APC esprimere molecoleCD1. Con il loro aiuto, le cellule possono presentare antigeni contenenti lipidi o polisaccaridi.

Il più tipico relativo all'APC alla categoria dei "professionisti" sono (per attività) cellule dendritiche di origine midollare, Linfociti B e macrofagi. Le cellule dendritiche sono quasi 100 volte più efficienti dei macrofagi. La funzione di APC "non professionale" può essere svolta anche da altre cellule in stato di attivazione: si tratta, prima di tutto, di epiteliali ed endoteliociti.

L'attuazione di una funzione mirata della difesa immunitaria del macroorganismo è possibile grazie alla presenza di specifici recettori per l'antigene sulle cellule del sistema immunitario. (immunorecettori).

Di pellicciabanco accettazione si dividono in:

indiretto.

Immunorecettori diretti si legano direttamente alla molecola dell'antigene. È così che funzionano i recettori antigene-specifici della maggior parte delle sottopopolazioni di linfociti.

immunoricezione indirettatori interagire indirettamente con la molecola dell'antigene - attraverso il frammento Fc della molecola dell'immunoglobulina. Questo cosiddetto Fc-recettore(FCR).

Ci sono caratteristiche nel meccanismo di ricezione, a seconda affinitàFcR. Un recettore ad alta affinità può legarsi a molecole IgE o IgG4 intatte e formare un complesso recettoriale in cui una molecola di immunoglobulina svolge una funzione di co-recettore antigene-specifica. Basofili e mastociti hanno un tale recettore. bassa affinitàFcR"riconosce" le molecole di immunoglobuline che hanno già formato immunocomplessi. È il tipo più comune di FcR trovato su macrofagi, cellule natural killer, cellule epiteliali, cellule dendritiche e una varietà di altre cellule.

risposta immunitaria basato su tesinterazione nom varie popolazioni cellulari. Ciò si ottiene attraverso la biosintesi da parte delle cellule del sistema immunitario di un ampio spettro delle immunocitochine. La stragrande maggioranza delle cellule del sistema immunitario si muove costantemente negli ambienti interni del corpo, facendo ampio uso delle capacità del sistema linfatico e sistemi circolatori così come la sua funzionalità.

Le risorse biologiche invecchiate, esaurite, le cellule falsamente attivate, infette e geneticamente trasformate vengono distrutte. La carenza cellulare viene reintegrata dividendo le cellule staminali.

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La differenziazione e l'interazione delle cellule del sistema immunitario tra loro, così come con le cellule di altri sistemi corporei, viene effettuata con l'aiuto di molecole regolatrici: le citochine. Le citochine, secrete principalmente dalle cellule del sistema immunitario, sono chiamate interleuchine (IL) - fattori di interazione interleucocitaria. Sono tutte glicoproteine con peso molecolare (MW) da 15 a 60 KDa. Sono secreti dai leucociti quando stimolati da prodotti microbici e altri antigeni.

IL-1 è secreto dai macrofagi, è un pirogeno (provoca un aumento della temperatura), stimola e attiva le cellule staminali, i linfociti T e B, i neutrofili ed è coinvolto nello sviluppo dell'infiammazione. Esiste in due forme: IL-1a e IL-1b.

IL-2 è secreto dai T-helper e stimola la proliferazione e la differenziazione dei linfociti T e B, NK, monociti. Si lega al recettore IL-2, che consiste di 2 subunità: a-55 kDa a bassa affinità, che appare all'attivazione cellulare e, scaricata da essa, passa in forma solubile recettore IL-2; è costantemente presente la subunità b con peso molecolare di 70 kDa, catena stabile del recettore. Il recettore completo per IL-2 appare all'attivazione dei linfociti T e B.

IL-3 è il principale fattore ematopoietico, stimola la proliferazione e la differenziazione dei primi precursori dell'emopoiesi, dei macrofagi, della fagocitosi.

IL-4 - fattore di crescita dei linfociti B, stimola la loro proliferazione in una fase iniziale di differenziazione, la sintesi di anticorpi IgE, lgG4; secreta dai linfociti T di tipo 2 e dai basofili, induce la trasformazione delle cellule T CD4 "ingenue" in Tx di tipo 2.

IL-5 stimola la maturazione di eosinofili, basofili e la sintesi di immunoglobuline da parte dei linfociti B; è prodotto dai linfociti T sotto l'influenza di antigeni.

IL-6 è secreto dai linfociti T e dai macrofagi, stimola la maturazione dei linfociti B in plasmacellule, cellule T ed emopoiesi, inibisce la proliferazione dei monociti.

IL-7 - linfopoietina-1, attiva la proliferazione dei precursori dei linfociti e la differenziazione delle cellule T in T-helper e T-soppressori, stimolando linfociti T e monociti maturi, è formata da cellule stromali, cheratociti, epatociti, cellule renali.

IL-8 - regolatore della chemiotassi dei neutrofili e delle cellule T; secreto da cellule T, monociti, endotelio. Attiva i neutrofili, provoca la loro migrazione diretta, adesione, rilascio di enzimi e specie reattive dell'ossigeno, stimola la chemiotassi dei linfociti T, lo sgrassaggio dei basofili, l'adesione dei macrofagi, l'angiogenesi.

IL-9 è un fattore di crescita per linfociti T e basofili, si forma quando le cellule T vengono stimolate da antigeni e mitogeni.

IL-10 - secreto da cellule T e B, macrofagi, cheratociti stimola monociti e NK, mastociti, inibisce la formazione di IL-1 IL-2, IL-6, TNF, migliora la sintesi di IgA, inibisce l'attivazione di tipo 1 Tx.

IL-11 - prodotto dalle cellule stromali del midollo osseo dai fibroblasti, simile negli effetti all'IL-6, ma i recettori sulle cellule per loro sono diversi, stimola l'ematopoiesi, i precursori dei macrofagi e la formazione di colonie da parte dei megacariociti.

IL-12, fonte - cellule B e monociti-macrofagi, provoca la proliferazione di linfociti T attivati e natural killer, potenzia l'azione di IL-2, stimola i T-helper di tipo 1 e la produzione di beta-interferone, inibisce la sintesi di IgE.

IL-13 - secreto dai linfociti T, induce la differenziazione delle cellule B, l'espressione di CD23, la secrezione di IgM, IgE, lgG4, inibisce il rilascio di IL-1, TNF da parte dei macrofagi.

IL-15 - secreto dai macrofagi, attiva la proliferazione dei linfociti T, aiutanti T di tipo 1, la loro differenziazione in killer, attiva NK.

IL-16 è un omotetramero cationico, è costituito da 130 aminoacidi, MM 14 KDa, è un fattore ligando, chemiotattico e attivante per linfociti T CD4+, eosinofili CD4+ e monociti CD4+, ne stimola la migrazione e l'espressione dei recettori IL2 ( CD25) sui linfociti. Viene secreto sotto l'influenza dell'antigene CD8+ e delle cellule T CD4+, nonché dell'epitelio bronchiale e degli eosinofili sotto l'azione dell'istamina. Si trova nel liquido broncoalveolare nell'asma bronchiale atopico e nelle malattie accompagnate da infiltrazione tissutale da linfociti T CD4+.

GM-CSF è un fattore stimolante le colonie di granulociti-monociti, prodotto da linfociti di tipo T e B, macrofagi e altri leucociti, migliora la proliferazione dei precursori dei granulociti, dei macrofagi e delle loro funzioni.

TNF? - cachessia, fattore di necrosi tumorale, secreto da macrofagi, linfociti T e B, neutrofili, stimola l'infiammazione, attiva e danneggia le cellule, provoca febbre (pirogeno).

TNF? (linfotossina) - secreta dai linfociti T e B, un mediatore dell'infiammazione, danneggia le cellule.

Interferone?/? - secerne linfociti, macrofagi, fibroblasti, alcune cellule epiteliali, ha attività antivirale e antitumorale, stimola macrofagi e NK, modula l'espressione degli antigeni MHC di classe I.

Interferone? - secerne cellule T e NK, partecipa alla regolazione della risposta immunitaria, potenzia gli effetti antivirali e antitumorali degli interferoni cx/r.

Interferone? - secernono leucociti dopo la stimolazione, costituiscono il 10-15% di tutti gli interferoni, hanno attività antivirale e antitumorale, modificano l'espressione degli antigeni HLA di classe I; si lega alle membrane cellulari, ma in combinazione con l'interferone? 2 con recettori di tipo I.

Per tutti gli IL, le cellule hanno recettori che li legano.

Nel processo di differenziazione, le macromolecole compaiono sulle membrane delle cellule del sistema immunitario - marcatori corrispondenti a un certo stadio di sviluppo. Sono chiamati antigeni CD (dall'inglese - cluster di differenziazione - cluster di differenziazione). Attualmente ne sono noti oltre 200.

CD2 è un marcatore di tutte le cellule T, la maggior parte delle NK ha anche tre epitopi della molecola, uno dei quali lega gli eritrociti ram; è una molecola adesiva, si lega a CD58 (LFA3), LFA4, trasmette segnali transmembrana durante l'attivazione delle cellule T; MM 50 kDa.

CD3 - trasporta tutti i linfociti T maturi, immaturi nel citoplasma, fornisce la trasmissione del segnale dal recettore specifico dell'antigene delle cellule T (TCR) al citoplasma, è costituito da cinque catene polipeptidiche. MM - 25 kDa; gli anticorpi contro di esso migliorano o inibiscono la funzione delle cellule T.

CD4 è un marcatore di T-helper, un recettore per il virus dell'immunodeficienza umana (HIV), presente su alcuni monociti, spermatozoi, cellule gliali, una glicoproteina transmembrana, coinvolta nel riconoscimento di antigeni associati a molecole di classe di istocompatibilità II, MM 59 kDa.

CD5 - ha cellule T mature e immature, cellule B autoreattive, glicoproteina transmembrana, un membro della famiglia dei recettori "scavenger", come CD6, è un ligando per CD72 sulle cellule B, è coinvolto nella proliferazione delle cellule T, MM 67 kDa.

CD6 - trasportano cellule T mature e parzialmente le cellule B hanno tutte le cellule T e i timociti, parte delle cellule B; appartiene alla famiglia "spazzino", MM 120 kDa.

CD7 - hanno cellule T, EK (recettore Fc? IgM); MM 40 kDa.

CD8 è un marcatore di soppressori T e linfociti citotossici, ha alcune EC, una struttura di adesione, è coinvolto nel riconoscimento di antigeni con la partecipazione di molecole di istocompatibilità di classe I, è costituito da due catene S-S, MM 32 kDa.

CD9 - trasportano monociti, piastrine, granulociti, cellule B dei centri follicolari, eosinofili, basofili, endotelio, MM 24 kDa.

CD10 - hanno cellule B immature (GALLA - antigene delle cellule leucemiche), parte di timociti, granulociti; endopeptidasi, MM 100 KDa.

CD11a - trasportato da tutti i leucociti, molecola di citoadesione, catena ?L dell'integrina LFA-1, associata a CD18; recettore per ligandi: molecole CD15 (ICAM-1), CD102 (ICAM-2) e CD50 (ICAM-3); assente nei pazienti con sindrome LAD-1 (sindrome da deficit di molecole di adesione), MM 180 kDa.

CD11b (recettore CR3 o c3bi) - trasportato da monociti, granulociti, EC; catena integrinica ?M associata alla molecola CD18; recettore del ligando.

CD54 (ICAM-1), componente del complemento C3bi (recettore SRH) e fibrinogeno; assente nella sindrome LAD-1; MM 165 kDa.

CD11c (recettore CR4) - hanno monociti, granulociti, NK, linfociti T e B attivati e la catena X dell'integrina (associata a CD18, è il quarto tipo di recettore (CR4) per i componenti del complemento C3bi, C3dg; i suoi ligandi sono CD54 (ICAM-1), fibrinogeno, MM 95/150 kDa.

CD13 - hanno tutte le cellule mieloidi, dendritiche ed endoteliali, aminopeptidasi N, recettore per coronavirus, MM 150 kDa.

CD14 - hanno monociti macrofagici, granulociti, un recettore per complessi LPS con proteina legante LPS e per molecole PI piastriniche; assente nei pazienti con emoglobinuria parossistica notturna (PNH), gli anticorpi contro di esso possono causare un burst ossidativo nei monociti, MM 55 kDa.

CD15 (Lewisx) - ha granulociti, esprime debolmente monociti, alcuni anticorpi sopprimono la fagocitosi.

CD 15 (sialyl-Lewisx) - hanno cellule mieloidi, ligando per CD62P (P-selectina), CD62E (E-selectina), CD62L (L-selectina), assenti nei pazienti con LAD-2.

CD16 - trasportato da neutrofili, NK, (monociti deboli, recettore Fc a bassa affinità per IgG, proteina di membrana integrale (Fc? RIIIA) su EC e macrofagi, forma legante PI (Fc? RIIIB) su neutrofili, assente nei pazienti con EPN.

CD18 - hanno la maggior parte delle cellule linfoidi e mieloidi, molecola di adesione, catena ?2 dell'integrina LFA, associata alla catena a CD 11 a, b, c, assente nella sindrome LAD-1, MM 95 kDa.

CD19 (B4) - hanno cellule pre-B e B, parte del loro complesso recettoriale, è coinvolto nella loro attivazione (segnale di trasduzione associato a CD21 (CR2); MM 95 kDa.

CD20 (B1) - trasporta tutte le cellule B e le cellule dendritiche nei follicoli, partecipa all'attivazione dei canali del calcio attraverso le cellule, MM 35 kDa.

CD21 (recettore CR2, B2) - hanno sottopopolazioni di cellule B, alcuni timociti, cellule T, recettore per il componente C3d del complemento e per il virus di Epstein-Barr, è coinvolto nella regolazione dell'attivazione del complemento (RCA) insieme a CD35, CD46, CD55 e nell'attivazione delle cellule B.

CD22 - presente nel citoplasma dei precursori dei linfociti B e sulla membrana di alcune delle loro sottopopolazioni, una molecola di adesione, un membro della famiglia sialoadhesin, potenzia l'attivazione indotta da anti-lg delle cellule B, MM 135 kDa.

CD23 (recettore Fc? RII) - glicoproteina di membrana, recettore a bassa affinità per IgE; Fc?IIA si trova su una sottopopolazione di cellule B e cellule di leucemia linfocitica cronica, e Fc? Monociti su RIIB, eosinofili e altre cellule B, contro-recettore per CD21, MM 45-50 kDa.

CD25 - presente sui linfociti T e B attivati e sui macrofagi, catena a del recettore IL2 a bassa affinità, coinvolto nella formazione di un recettore ad alta affinità dopo l'associazione con la catena ? (CD 122) e/o la catena ? ; scaricato da linfociti attivati, MM 55 kDa.

CD26 - dipetidil peptidasi IV di linfociti T e B attivati, macrofagi, glicoproteina transmembrana, tipo serina di esopeptidasi MM 120 kDa.

CD27 - trasporta cellule T mature e attivate, è presente nel citoplasma di una sottopopolazione di cellule B, appartiene alla famiglia del fattore di crescita nervoso (NGF) / fattore di necrosi tumorale (TNF), un recettore per CD70.

CD28 - Sottopopolazioni espresse di cellule T (cellule T soppressori citotossiche), la molecola è un membro della superfamiglia delle immunoglobuline, un contro-recettore per CD80, CD86 e B7-3, migliora la proliferazione delle cellule T, MM 90 kDa.

La subunità CD29 - α1-integrina sui leucociti a riposo e attivati, sulle cellule CD45RO+T, è associata a CD49 (VLA - catene β).

CD30 (Ki-1) - presente su sottopopolazioni di linfociti attivati, cellule di Reed-Sternberg, antigene di attivazione di tipo TX1 e Th2, membro della famiglia NGF/TNF.

CD32 (Fc? RII) - hanno monociti, granulociti, eosinofili, cellule B; recettore Fc a media affinità per IgG, MM 40 kDa.

CD34 - hanno tutti i precursori dell'emopoiesi e dell'endotelio, marcatore di cellule staminali, adesina.

CD35 (recettore CR1) - presente su cellule B, monociti, granulociti, eritrociti, alcune cellule T, NK; è un recettore per i componenti del complemento C3b, C3c, C41 e iC3b, un membro della sua famiglia di regolatori, MM 160-250.

CD36 - hanno piastrine, monociti, precursori delle cellule eritrocitarie, cellule B, recettore della trombospondina, affinità per il collagene di tipo I e IV, partecipano all'interazione delle cellule con le piastrine; MM 90 kDa.

CD38 - ha attivato i linfociti T e B, alcuni linfociti B, glipoproteina transmembrana, esoenzima pleiotropico, migliora la proliferazione delle cellule B.

CD40 - hanno cellule B mature, sono debolmente espresse sui monociti, partecipano all'interazione con le cellule T, legando CD40L (ligando) su di esse, appartengono alla famiglia NGF/TNF, assenti nella sindrome iper-lgM, MM 50 kDa.

CD41 - presente sulle piastrine, recettore attivazione-dipendente per il fibrinogeno, fattore di von Willibrand, assente nella tromboastenia di Glanzman, MM 140.

CD42 a, b, c - subunità dei recettori di adesione piastrinica all'endotelio e subendoteliale tessuto connettivo sono assenti nella sindrome di Bernard-Soler.

CD43 - tutti i leucociti, ad eccezione delle cellule B a riposo, hanno una proteina glicosilata - la mucina, è coinvolta nel fenomeno di "homing" dei linfociti, è difettosa nella sindrome di Wiskott-Aldrich, MM 95-115 kDa.

CD44R - trasportato da cellule T attivate, isoforma di CD44-adesina, coinvolta nel fenomeno "homing".

CD45 - presente su tutti i leucociti, tirosina fosfatasi, coinvolta nell'attivazione dei linfociti, esiste in 5 isoforme, MM 18-220 kDa.

CD45RO - presente sui linfociti T attivati, principalmente cellule di memoria, timociti, poco su monociti e granulociti, coinvolti nell'attivazione cellulare, MM 180.

CD45RA - hanno cellule T "ingenue", cellule B, monociti, granulociti, isoforma CD45, MM 220 KDa.

CD45RB, CD45RC - isoforma CD45 su sottopopolazioni T e B, monociti.

CD49 a, b, c, d, e, f - VLA-1, VLA-2 ... 3, 4, 5, 6 - varianti della ?-catena di integrine, molecole di adesione associate a CD29, si trovano su tutti leucociti.

CD50 (ICAM-3) - molecola adesione intercellulare leucociti 3, ligando per LFA-1 (CD11a/CD18).

CD54 (ICAM-1) - ligando adesivo di monociti, linfociti (per CD11a/CD18), il numero aumenta all'attivazione, recettore per rhinovirus, MM 90 kDa.

CD58 (LFA-3) - ligando CD2 (LFA-2) su leucociti, eritrociti.

CD62 - С062Р-piastrina, CD62E (ELAM-1) - endoteliale, CD62L (LECAM) - molecole adesive linfocitarie e leucocitarie-selectine, coinvolte nell'adesione di leucociti, piastrine ed endotelio, MM 75-150 kDa.

CD64 (Fc? R1) è un recettore ad alta affinità per IgG su monociti, granulociti attivati, MM 75 kDa.

CD66 a, b, c, d, e - molecole di adesione sui granulociti, legano i batteri, in particolare, CD66c lega le fimbrie di E. coli, assenti nell'emoglobinuria parossistica notturna;

CD69 - glicoproteina di attivazione precoce delle cellule T e B, MM 28-34 kDa.

CD71 - recettore della transferrina, media l'incorporazione del ferro nella cellula, regola la crescita cellulare, è presente su cellule in proliferazione, cellule T e B attivate, macrofagi, MM 95/190 kDa.

CD72 - hanno precursori e cellule B mature, un membro della superfamiglia delle lectine Ca++-dipendente (tipo C), un ligando per CD5.

CD74, una catena invariante associata agli antigeni di istocompatibilità di classe II, è coinvolta nell'espressione di questi ultimi sui monociti dei macrofagi.

CD89 (Fc? R) Fc - recettore per IgA su neutrofili, monociti, eosinofili, sottopopolazioni di cellule T e B, trigger di fagocitosi e scoppio respiratorio, MM 55-70 kDa.

CD91 è il recettore delle lipoproteine a bassa densità sui monociti, a2-macroglobulina, composto da? E? catene, MM 85/515 kDa.

CD95 (Fas) - presente su sottopopolazioni di timociti, cellule T, B attivate, membro della famiglia NGF, proteine integrali di membrana di tipo 1 (vedi CD27, 30, 40, 120a), recettore del TNF; Gli anticorpi Fas18 inducono l'apoptosi, gli anticorpi Fas19 la inibiscono, MM 42 kDa

CD96 - hanno cellule T attivate, fase tardiva, EC, MM 160 kDa.

CD102 - glicoproteina, adesione, controrecettore per LFA-1 (CD11a/CD18) su monociti, linfociti, endotelio.

CD106 - glicoproteina sui monociti, endotelio attivato, si lega alle integrine (CD49, ecc.).

Un gruppo di recettori delle citochine.

CD115 - il 1o recettore del fattore stimolante le colonie di macrofagi (M-CSF), è coinvolto nella proliferazione dei monociti dei macrofagi, MM 150 kDa.

CD116 - recettore della famiglia delle citochine emopoietiche, catena β del recettore del fattore stimolante le colonie di granulociti-macrofagi (recettore GM-CSF), alta affinità se associato alla catena β; espresso su monociti, neutrofili, eosinofili, endotelio, cellule progenitrici, MM 75-85 kDa.

CD117 - recettore del fattore delle cellule staminali, ha attività tirosin-chinasica, è espresso su precursori degli osteoclasti, mastociti, precursori emopoietici CD34+.

CDw119 - recettore dell'interferone y, proteina di membrana integrale di tipo 1 su macrofagi, granulociti, cellule T e B, epitelio, endotelio, MM 90 kDa.

CD120a - recettore di tipo 1 per il TNF? e FNO? su molti tessuti, compresi i leucociti, proteina integrale di membrana di tipo 1, membro della famiglia dei recettori NGF/TNF (vedi CD27, CD30, CD40, CD95), MM 55 kDa.

CD120b - Recettore del TNF di tipo 2? e FNO? su tutti i leucociti e molti tessuti.

CDw121a - recettore di tipo 1 per l'interleuchina - 1?/1? su cellule T, fibroblasti, endotelio, MM 80 (R) kDa.

CDw121b è un recettore di tipo 2 ad alta affinità per IL-1? e IL-1? su cellule T, monociti, alcune cellule B, MM 68 kDa.

CDw122 è la catena α del recettore per IL-2, quando associato alla catena β (CD25) forma un recettore IL2 ad alta affinità, un membro della famiglia dei recettori delle citochine, è presente su cellule T attivate, monociti, NK, MM 75 kDa.

CDw123 - catena a del recettore per IL-3 (c'è una catena ?) su cellule ematopoietiche, neutrofili, monociti, basofili, eosinofili, MM 70 kDa.

CDw124 - recettore per IL-4 su cellule T e B mature, progenitori ematopoietici, endotelio e fibroblasti, MM 140 kDa.

CD125 è la catena a del recettore per IL-5 su eosinofili e basofili, il recettore completo include anche una catena p, la stessa del recettore GM-CSF (CD116) e del recettore ILZ (CD123).

CD126 - recettore per IL-6 su cellule B attivate, plasma, debolmente espresso su leucociti, epitelio e fibroblasti, MM 80 kDa.

CDw127 - Recettore IL-7 sulle cellule linfoidi progenitrici

Immunodiagnostica delle leucemie acute. Citochine, interleuchine e cluster di differenziazione (antigeni CD) dei leucociti Cosa sono i cluster di differenziazione CD

ELENCO DELLE ABBREVIAZIONI

IMMUNITÀ CELLULARE

Indicatori del contenuto di linfociti nelle persone sane

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