PrednáškaN19. Spirochety (treponémy, borélie, leptospiry).
Spirochety sú tenké, špirálovito stočené baktérie s dĺžkou od niekoľkých do niekoľkých stoviek mikrometrov, pohyblivé, gramnegatívne, chemoorganotrofy. Existujú tri hlavné typy pohybov - rýchla rotácia okolo pozdĺžnej osi, flexia, vývrtka (helikálna). Medicínsky význam majú zástupcovia rodov Treponema, Borrelia, Leptospira a Spirillum.
Rod Treponéma .
Rod je reprezentovaný pevne stočenými špirálovitými baktériami s dĺžkou 5–20 µm. Najznámejším druhom patogénnym pre človeka je T. pallidum (bledý treponém), pôvodcom je poddruh T. pallidum pallidum syfilis.
Patogénne treponémy sa rozlišujú podľa patogenity pre rôzne druhy laboratórnych zvierat, schopnosť fermentovať manitol, využívať laktát a vytvárať špecifické metabolity.
"Lues Venerae" - "mor lásky" - jedno z mien syfilisu (lues).
Morfológia.
Pôvodca syfilisu má špirálovitý tvar s kučeravkami rovnakej výšky (viac ako 10). Povahou pohyblivosti sú hladké špirálové a ohybové pohyby (Treponema - z latinčiny - ohybová niť). Podľa Romanovského - Giemsa sú maľované v bledoružovej farbe (pallidum - z lat. - bledé). Ľahko identifikovateľný mikroskopiou v tmavom poli a po impregnácii striebrom.
Bledý treponém je mimoriadne náročný na kultivačné podmienky a nie je schopný rásť dlho na živných pôdach. Má veľmi pomalú rýchlosť reprodukcie. V laboratórnych podmienkach sa môže kultivovať na králikoch, pričom ich infikuje intratestikulárne (orchitída s nahromadením treponému). Biochemické vlastnosti sú nedostatočne študované kvôli problémom s kultiváciou a prakticky sa nepoužívajú na charakterizáciu T.pallidum.
antigénne vlastnosti.
Treponémy majú skrížene reaktívne antigény s inými spirochétami (borélie, leptospiry). V dôsledku prítomnosti fosfolipidov (kardiolipín atď.) v bunkových stenách bledých treponém, podobne ako u cicavčích buniek, telo ako odpoveď na tieto antigény produkuje nielen špecifické pre pôvodcu syfilisu, ale aj skrížene reagujúce na kardiolipín a iné fosfolipidy ľudských tkanív a tzv Wasserman protilátky. Zisťujú sa v CSC kardiolipínovým antigénom (zo zvieracích sŕdc). Špecifické protilátky proti pôvodcovi syfilisu sa detegujú v RNIF a imunoblote.
Wassermanov antigén je fosfolipid, ktorý je súčasťou mitochondriálnych membrán (kardiolipín). Získava sa z bovinného myokardu, tkaniva bohatého na mitochondrie. Vzhľadom na antigénnu zhodu s tkanivovými fosfolipidmi reagujú protilátky proti treponemovému kardiolipínu s tkanivovým (mitochondriálnym) kardiolipínom. Pravé autoprotilátky proti tkanivovému kardiolipínu sa tvoria pri „antimitochondriálnom (antifosfolipidovom) syndróme, čo spôsobuje pozitívne Wassermanove reakcie (falošne pozitívne - vo vzťahu k pôvodcovi syfilisu) pri kolagenózach (systémový lupus erythematosus, reumatoidná artritída), malomocenstvo a iné ťažké infekcie spojené s poškodením tkaniva, s hemolytickou anémiou, s drogovou závislosťou.
patogénne vlastnosti.
Vývoj syfilisu je určený dvoma hlavnými mechanizmami - tendenciou k generalizácii (vysoká invazívnosť) a periodickou aktiváciou patogénu, ktorý dlhodobo pretrváva v tele ("vymanenie sa zo zálohy").
V dôsledku nestability patogénu vo vonkajšom prostredí dochádza k infekcii priamym kontaktom (v drvivej väčšine prípadov sexuálne). Pri penetrácii cez sliznice a drobné kožné lézie patogén rýchlo preniká do tkanív, šíri sa lymfogénne a potom hematogénne (generalizácia).
Prvé príznaky ochorenia ( primárny syfilis) dochádza po inkubačnej dobe (v priemere 3 až 4 týždne). V mieste zavlečenia (primárna invázia) sa patogén množí a vyskytuje chancre- hustý, nebolestivý, červenkastý uzlík, ktorý sa mení na vred. Súčasne sa v dôsledku prenikania treponému do lymfatických uzlín vyvíja regionálna lymfadenitída a ďalej - polyadenitída. Generalizácia infekcie nastáva ešte pred objavením sa chancre a lymfadenitídy, t.j. syfilis je systémové ochorenie od samého začiatku.
Po odznení kliniky primárneho syfilisu po určitom čase (niekoľko týždňov až niekoľko mesiacov) dochádza k recidíve infekcie spojenej s mnohopočetnou orgánovou replikáciou treponém ( sekundárny syfilis). Existujú lézie kože a slizníc (sekundárne syfilidy, ktoré obsahujú veľké množstvo treponémov), lézie vnútorných orgánov, lymfatických uzlín, kostí, kĺbov a mnoho ďalších. Vzhľadom na rôznorodosť lézií sa sekundárny syfilis nazýva „veľký podvodník“.
Po sekundárnom syfilise sa u niektorých pacientov opäť rozvinie latentný syfilis (patogén sa roky dostáva do podzemia), ktorý sa u polovice prenášačov môže zmeniť na terciárny syfilis. Je charakterizovaná tvorbou ložísk granulomatózneho zápalu - guma obsahujúce málo treponému (prakticky nie nákazlivé). Rozpad ďasien vedie k deštrukcii kostí a mäkkých tkanív a poškodeniu životných funkcií dôležité orgány. Na rozdiel od primárneho a sekundárneho syfilisu je terciárny syfilis chronický proces, ktorý nikdy nekončí sám od seba.
O faktoroch patogenity T. pallidum a mechanizmoch, ktoré mu umožňujú dlho uniknúť imunologickému dohľadu, je málo známe. Je povzbudzujúce, že tento patogén si zachováva vysokú citlivosť na antibiotiká. Moderný syfilis stále dobre reaguje na liečbu, ak proces nedosiahne nezvratné organické lézie.
Laboratórna diagnostika.
Pri primárnom a sekundárnom syfilise možno patogén detegovať v léziách mikroskopicky. Optimálnejšie na detekciu bledého treponému mikroskopia v tmavom poli a imunoluminiscenčná mikroskopia. Pri prvej metóde je potrebné vylúčiť možné artefakty (napríklad fibrínové vlákna), prítomnosť saprofytických treponém. T. refringens kolonizuje vonkajšie pohlavné orgány, vyznačuje sa vysokou pohyblivosťou a absenciou ohybových pohybov. T. denticola kolonizuje ústnu dutinu, jeho kučery sú kratšie a smerujú pod ostrejším uhlom. AT ústna dutina nájde sa aj človek T. vincentii, ktoré v spojení s inými mikroorganizmami môžu spôsobiť ulcerózna nekrotická angína.
Okrem pôvodcu syfilisu existujú treponémy iných poddruhov T. pallidum, ktoré sú veľmi podobné geneticky a antigénne, čo spôsobuje ľudské lézie v krajinách s horúcim podnebím ( yaws, bergel, pint).
Pri farbení podľa Romanovského - Giemsa sa T.pallidum farbí na ružovo, nepatogénne treponémy sú modré alebo fialové, T.refringens je farbené na červeno fuchsínom. Fluorescenčná diagnostika je široko používaná na detekciu treponému v rôznych klinických materiáloch. Spomedzi metód na detekciu patogénu má PCR najvyššiu citlivosť a dostatočnú špecifickosť.
Základné diagnostické metódy - sérologické, t.j. detekcia sérových protilátok. Aplikujte RSK s kardiolipínovým a treponémovým antigénom, flokulačné testy (mikroaglutinačný test na kardiolipínové protilátky), RNGA. Špecifickejšie a citlivejšie testy sú testy založené na nepriamej imunofluorescencii (RIF), imobilizačná reakcia bledého treponému, ELISA na báze rekombinantných treponémových proteínov.
Pri sérodiagnostike syfilisu je potrebné brať do úvahy séronegativitu primárneho syfilisu v prvých týždňoch ochorenia. Potrebná je kombinácia metód založených na detekcii protilátok proti kardiolipínovým aj treponemovým antigénom. Kardiolipínové testy sa po eliminácii patogénu rýchlo stanú séronegatívne (po niekoľkých mesiacoch), antitreponemálne protilátky pretrvávajú oveľa dlhšie. Podstatná pre určenie aktivity procesu je definícia antitreponémIgM- protilátky(keď sa zistí vrodený syfilis, najmä preto, že protilátky IgM neprechádzajú placentou z matky na plod; pri štúdiu cerebrospinálnej tekutiny - na diagnostiku neurosyfilisu atď.).
Liečba.
Častejšie sa používajú deponované penicilíny s predĺženým účinkom, s intoleranciou - makrolidy, tetracyklíny, cefalosporíny.
Špecifická prevencia neexistuje.
Morfológia a klasifikácia.
Špirála s až 10 nie správna forma veľké kučery, gramnegatívne baktérie s rotačno-translačným charakterom pohybov. Anaeróby, často vyžadujúce komplexné kultivačné médiá.
Borélie patogénne pre ľudí sú patogény recidivujúce horúčky (recidivujúce horúčky) alebo borelióza. B. recidív prenášané na človeka všami, spôsobuje epidémiu alebo mizernú recidivujúcu horúčku. Zvyšné ľudské boreliózy sú rozdelené do dvoch nezávislých skupín - argas kliešťová borelióza (AKB), spôsobená viac ako 12 druhmi borelióz, a kliešťová borelióza (IBD) ixodidová, spôsobená B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii , B.afzelii a niektorí ďalší.
AKB sú spojené s roztočmi argas rodu Ornithodorus, ktoré žijú v tropických a subtropických oblastiach Afriky, Ázie a Ameriky a sú charakterizované opakujúcimi sa záchvatmi horúčky (ako pri malárii). ITB spôsobujú kliešte rodu Ixodes (skupina I.ricinus / I.persulcatus), rozšírené najmä v pásme lesov v Eurázii a Amerike.
kultúrne vlastnosti.
Zástupcovia tohto rodu sú nároční na podmienky pestovania, najmä borélie skupiny IKB. Vyžadujú fakultatívne anaeróbne podmienky, teplotu plus 33 stupňov Celzia, špeciálne médiá (BSK-2) obsahujúce médium 199, glukózu, albumín, cysteín, králičie sérum, želatínu a ďalšie zložky.
antigénne vlastnosti.
Majú skrížene reaktívne antigény s inými spirochétami, rodovo a druhovo špecifické antigény. Prideľte H- (bičíkové) bičíkové antigény (majú nízku špecificitu) a povrchové proteínové antigény (OspA, OspC, špecifickejšie, používané na medzidruhovú a intrašpecifickú identifikáciu).
Patogenéza lézií.
Po prisatí kliešťa sa borélie so slinami dostávajú do makroorganizmu, množia sa pri vstupnej bráne infekcie, pričom postihujú kožu (erytém) a najbližšie lymfatické uzliny (fáza primárna adaptácia). Po prekonaní kožných a lymfatických bariér sa borélie dostávajú do krvného obehu a spôsobujú spirochémiu prejavujúcu sa celkovým toxickým syndrómom (štádium primárne šírenie). Ako proces postupuje, borélie prenikajú cez hematologické bariéry (aj cez hematoencefalickú bariéru) a spôsobujú poškodenie rôznych orgánov a systémov. V niektorých prípadoch sa infekcia stáva chronickou, spôsobuje poškodenie nervového a kardiovaskulárneho systému, muskuloskeletálneho systému, sekundárne kožné lézie atď., napríklad neurologické prejavy).
Epidemiológia.
ITB - obligátne-prenosné prirodzené fokálne infekcie, distribuované hlavne v miernom pásme klimatická zóna severná pologuľa, pásmo lesnej krajiny a súvisí s nasávaním kliešťov rodu Ixodes. Ložiská ITB sú často spojené s ložiskami kliešťovej encefalitídy, keďže v Eurázii majú rovnaké prenášače – kliešte I. reticulatus (kliešte tajgy) a I. ricinus (európsky lesný kliešť).
Laboratórna diagnostika.
Borélie je možné izolovať pomocou média BSK2 u pacientov z ložísk kožných lézií, z krvi a mozgovomiechového moku (v meningeálnych formách), pri štúdiu nosičov (vrátane tých, ktoré boli odobraté od ľudí) a teplokrvných hostiteľov (najvyššia miera očkovania je z močového mechúra) v prirodzených ohniskách.
Borélie možno nájsť v ixodidové kliešte pomocou svetelnej mikroskopie (farba Romanovského-Giemsa), mikroskopie v tmavom poli a luminiscenčnej mikroskopie, PCR.
Hlavnou metódou sérologickej diagnostiky je reakcia nepriamej imunofluorescencie (RNIF) s korpuskulárnym antigénom B.afzelii, ktorá umožňuje detekovať protilátky proti boréliám skupiny IKB.
Liečba.
Aplikujte preventívnu terapiu (s pozitívnymi výsledkami štúdie prisatého kliešťa) a liečbu pacientov s ITB tetracyklínmi, penicilínmi a cefalosporínmi. Neboli vyvinuté žiadne špecifické preventívne opatrenia.
Rod Leptospira
Morfológia.
Kultúrne a biochemické vlastnosti.
Chemoorganotrofy, aeróby. Leptospiry sú typické hydrofily, dlho pretrvávajú vo vlhkých substrátoch, vode a vlhkej pôde. Optimálna teplota je od plus 28 do 30 stupňov Celzia, pH 7,2 - 7,4. Kultivované prevažne na tekutých pôdach s prídavkom králičieho krvného séra (Tersky médium).
antigénne vlastnosti.
Patogénne leptospiry sa na základe antigénnych vlastností delia na séroskupiny a sérovary.
Ekologicko - epidemiologické črty.
Hlavnými rezervoármi infekcie sú divoké zvieratá, hlavne hlodavce a hmyzožravce (prirodzené ohniská, často spojené s biotopmi v blízkosti vôd), ako aj hospodárske a domáce zvieratá(ošípané, hovädzí dobytok, psy). U zvierat leptospiry dlhodobo pretrvávajú v obličkách a sú dlhodobo vylučované močom do vonkajšieho prostredia. Človek sa nakazí v prírodných ohniskách (častejšie pri poľnohospodárskych prácach) a v ohniskách v domácnostiach (častejšie ohniská pri kúpaní alebo odborne spôsobené prípady leptospirózy). Šedé potkany a psy zohrávajú významnú úlohu pri infekcii. Existujú spojenia medzi určitými sérovarovými leptospirami a určitými živočíšnymi druhmi (napríklad L.canicola - psy).
Patogenéza lézií.
Leptospiry sa do tela dostávajú cez sliznice alebo poškodenie (mikrotrauma) kože. Patogénne leptospiry vďaka aktívnej pohyblivosti prekonávajú ochranné bariéry, prenikajú do krvi (leptospirémia) a dostávajú sa do rôznych orgánov, najmä do obličiek a pečene. Zvlášť dôležité sú kapilárne endoteliálne lézie s krvácaním rôznej závažnosti až po hemoragický syndróm, poškodenie pečene s rozvojom žltačky spojenej s poškodením hepatocytov a hemolýzou červených krviniek, poškodenie obličiek, predovšetkým epitel renálnych tubulov, kortikálna a subkortikálna substancia s rozvojom zlyhania obličiek (anúria, urémia), meningeálne prejavy.
Laboratórna diagnostika.
Hlavnou metódou mikroskopickej diagnostiky je mikroskopia v tmavom poli.
Izolácia patogénu sa vykonáva plodinami na terskom médiu, biotest na zlatých škrečkoch. Preskúmajte moč, krv, cerebrospinálny mok, kortikálnu vrstvu obličiek.
Hlavnou metódou sérologickej diagnostiky je aglutinačno-lytická reakcia (RAL) so súborom kultúr Leptospira hlavných séroskupín. Metóda je špecifická, ale časovo náročná, keďže je potrebné udržiavať diagnostický súbor leptospir, aglutinovať študované séra s leptospirami všetkých hlavných séroskupín a následne mikroskopovať v tmavom poli. S pozitívnym výsledkom sa pozoruje leptospira vo forme pavúkov alebo guľôčok, po ktorej nasleduje lýza. V súčasnosti sa ELISA používa aj na sérodiagnostiku.
Liečba.
Používajú sa antibiotiká (penicilíny, tetracyklíny).
syfilis
infekčné pohlavná choroba, volal Treponema pallidum charakterizované poškodením kože, vnútorných orgánov, kostí, nervový systém. Existuje získaný a vrodený syfilis.
syfilis. Taxonómia.
Bledý treponém patrí do rodiny Spirochaetaceae, oddelenie Gracilicutes.
syfilis. Morfológia.
Nízka farebná schopnosť. Tenká baktéria špirálovitého tvaru, dlhá 4-14 mikrónov, s rovnomernými malými kučeravkami, je mimoriadne pohyblivá. Zafarbené podľa Romanovského-Giemsa v slabom ružová farba.
syfilis. Kultivácia.
Obligátne anaeróbne, rastie zle na špeciálnych. jamové prostredia.
syfilis. Antigénna štruktúra.
Vyznačuje sa antigénnymi väzbami s inými triponémami, ako aj s lipoidmi živočíšnych a ľudských tkanív. V patogéne bolo nájdených niekoľko AG, jeden z kat. Lipoid AG - identický s lipoidným extraktom z hovädzieho srdca.
syfilis. odpor.
Slabo odolné voči životné prostredie, pri 55 umiera do 15 minút, citlivý na sušenie, svetlo, ortuťové soli, bizmut, arzén, penicilín. Zostáva na domácich predmetoch, kým nezaschne, je dobre zachovaný v tkanive mŕtvoly.
syfilis. Epidemiológia.
Zdrojom nákazy je chorý človek. Infekcia sa prenáša sexuálne, zriedkavo prostredníctvom domácich potrieb, infekcia je možná bozkávaním, mliekom dojčiacej matky a transfúziou krvi.
syfilis. Patogenéza a klinika.
Preniká do tela cez kožu alebo sliznice, šíri sa cez orgány a tkanivá a spôsobuje ich poškodenie. Inkubačná doba je 3-4 týždne. Po inkubačnej dobe prebieha cyklicky vo forme primárnych, sekundárnych a terciárnych období.
V mieste zavedenia (na genitáliách, perách) sa objaví primárna lézia - tvrdý chancre - tesnenie s vredom na povrchu.
Sekundárne obdobie trvá 3-4 roky, je charakterizované vyrážkou, narušenou Všeobecná podmienka organizmu.
Treťohorné obdobie - poškodenie kože, slizníc, vnútorných orgánov, kostí, nervovej sústavy, objavujú sa útvary náchylné na hnilobu, prejav.
syfilis. Imunita.
Vyvíja sa nesterilný, po liečbe nepretrváva, možné sú opakované ochorenia.
syfilis. Laboratórna diagnostika.
Používa sa mikroskopia v tmavom poli. Koncom 1. a 2. periódy sa etablujú Wassermanove sérologické rieky a sedimentárne Kahnove reakcie. Pri hromadných vyšetreniach sa používa mikroreakcia na skle s kvapkou krvi a špeciálne AG. Použite aj imobilizáciu.
syfilis. Liečba.
Penicilínové antibiotiká a prípravky z bizmutu, jódu.
syfilis. Prevencia.
Neexistuje žiadny konkrétny. Nešpecifické: dodržiavanie hygienických pravidiel, ochrana pri pohlavnom styku, komplex sanitárnych a hygienických opatrení všeobecnej povahy.
Obsah článku
Bledý treponém
Morfológia a fyziológia
T.pallidum má špirálovitý tvar, protoplastický valec, ktorý je stočený do 8-12 pralenov. Z koncov bunky vybiehajú 3 periplazmatické bičíky. Bledý treponém nevníma dobre anilínové farbivá, preto je zafarbený farbou Romanovsky-Giemsa. Najúčinnejšou metódou je však štúdium v mikroskope s tmavým poľom alebo mikroskopom s fázovým kontrastom. Mikroaerofilné. Nerastie na umelých živných pôdach. T. pallidum sa kultivuje v tkanive semenníkov králika, kde sa dobre množí a plne si zachováva svoje vlastnosti, čo spôsobuje orchitídu u zvieraťa. Antigény. Antigénna štruktúra T. pallidum je komplexná. Je spojená s proteínmi vonkajšej membrány, lipoproteínmi. Posledne menované sú skrížene reaktívne antigény bežné pre ľudí a dobytok. Používajú sa ako antigén vo Wassermannovom teste na sérodiagnostiku syfilisu.Patogenita a patogenéza
Faktory virulencie Treponema pallidum zahŕňajú proteíny vonkajšej membrány a LPS, ktoré po uvoľnení z bunky prejavujú svoje toxické vlastnosti. Schopnosť treponému tvoriť počas delenia oddelené fragmenty, prenikajúce hlboko do tkanív, možno zároveň pripísať faktorom virulencie. V patogenéze syfilisu existujú tri štádiá. Pri primárnom syfilise sa pozoruje tvorba primárneho ohniska - tvrdého chancre v mieste vstupnej brány infekcie s následným prienikom do regionálnych lymfatických uzlín, kde sa patogén množí a hromadí. Primárny syfilis trvá približne 6 týždňov. Druhé štádium je charakterizované generalizáciou infekcie sprevádzanou penetráciou a cirkuláciou patogénu v krvi, čo je sprevádzané kožné vyrážky. Trvanie sekundárneho syfilisu u neliečených pacientov sa pohybuje od 1 do 2 rokov. V treťom štádiu sa nachádzajú infekčné granulómy (ďasná náchylné na rozpad), lokalizované vo vnútorných orgánoch a tkanivách. Toto obdobie u neliečených pacientov trvá niekoľko rokov a končí sa poškodením centrálneho nervového systému (progresívna paralýza) resp. miecha(chrbtový strapec).Imunita
So syfilisom existuje humorálna a bunková imunitná odpoveď. Výsledné protilátky nemajú ochranné vlastnosti. Bunková imunitná odpoveď je spojená s fixáciou patogénu a tvorbou granulómov. K eliminácii treponému z tela však nedochádza. Nepriaznivé podmienky prostredia zároveň vyvolávajú tvorbu cýst treponémami, ktoré sú lokalizované v stene cievy. Predpokladá sa, že to naznačuje prechod choroby do štádia remisie. Spolu s cystami tvoria treponémy tvar L. Pri syfilise sa tvorí HRT, ktorá sa dá zistiť kožným alergickým testom so suspenziou usmrteného treponému. Predpokladá sa, že prejav terciárneho obdobia syfilisu je spojený s HRT.Ekológia a epidemiológia
Syfilis je typická antroponotická infekcia. Ochoria len ľudia, ktorí sú v prírode rezervoárom infekcie. K prenosu infekcie dochádza sexuálne a oveľa menej často - cez spodnú bielizeň a iné predmety. In vonkajšie prostredie(vzduchový) treponém rýchlo zomrie.Syfilis a iné treponematózy
Syfilis je chronické infekčné pohlavné ochorenie človeka, má cyklický progresívny priebeh, postihuje kožu, sliznice, vnútorné orgány a nervový systém. Pôvodcom ochorenia je Treponema pallidum.V vzniku syfilisu sú tri hlavné obdobia, metódy laboratórna diagnostika ktoré majú svoje vlastné charakteristiky. AT skoré obdobie choroba, materiálom pre laboratórnu diagnostiku je izolácia z tvrdého chancre, bodkovaného s lymfatické uzliny, škrabance s roseolom, syfilid podobne. So sekundárnym a terciárne obdobia vyšetrovať krvné sérum a likvor.Vzhľadom k tomu, že izolácia čistých kultúr treponému v obyč. bakteriologické laboratóriá nemožné, počas primárneho obdobia ochorenia (zriedkavo neskôr) sa vykonáva bakterioskopická diagnostická metóda. Počnúc sekundárnym obdobím sa používajú najmä sérologické metódy.Bakterioskopický výskum
Pred odberom patologického materiálu najskôr utrite syfilitický vred vatovým tampónom, aby ste odstránili mastný povlak a kontaminujúcu mikroflóru. Potom sa skalpelom alebo kovovou špachtľou podráždi dno tvrdého chancre, prípadne sa vred prstami v gumenej rukavici energicky vytlačí zo strán, aby sa vytlačil exsudát z rany. S malým množstvom číra tekutina môže sa pridať do kvapky 0,85 % roztoku chloridu sodného. Ak nie je možné odobrať materiál zo spodnej časti chancre (fimóza, zjazvenie vredu atď.), Regionálne lymfatické uzliny sa prepichnú. tmavé zorné pole (lepšie!), Alebo pomocou fázovo kontrastného alebo anoptrálneho mikroskopu. Bledý treponém v tmavom zornom poli vyzerá ako mierne lesklá tenká jemná špirála so strmými rovnomernými zaoblenými primárnymi kučeravkami. Pohyby sú plynulé, takže sa ohýba pod uhlom. Ale výkyvy podobné kyvadlu, ktoré sú pre ňu obzvlášť charakteristické. Pôvodcu syfilisu treba odlíšiť od Treponema refringens (kolonizuje vonkajšie pohlavné orgány), ktorý je hrubší, drsnejší, s nepravidelnými veľkými kučerami a má aktívne nepravidelné pohyby, ale neohýba sa. Treponémy fusosp-irochetóznej symbiózy sa vyznačujú tenkým vzorom, jemnými kučeravkami a nepravidelným pohybom.Pri diagnostike orálneho syfilisu treba bledý treponém odlíšiť aj od zubných treponém, najmä T. dentium a tiež od T. buccalis. Prvý z nich je vo všeobecnosti ťažké odlíšiť od syfilitického. Je pravda, že je kratší, má 4-8 ostrých kučier, nedochádza k kyvadlovému pohybu. T. buccalis je hrubší, má hrubé počiatočné kučery a nepravidelný pohyb.V prípade akýchkoľvek pochybností treba mať na pamäti, že všetky saprofytické treponémy, na rozdiel od bledých, sa dobre farbia anilínovými farbivami. Neprenikajú do lymfatických uzlín, takže štúdium punkcií má veľkú diagnostickú hodnotu. Detekcia typických treponémov v bodkovaných lymfatických uzlinách nepochybne potvrdzuje diagnózu syfilisu. Jeho výhody spočívajú v tom, že materiál sa rýchlo skúma a morfológia treponémov v živom stave je najcharakteristickejšia. Atramentové šmuhy podľa Burriho metódy sa už nepoužívajú. rôzne metódy farbenie. Bledý treponém nevníma dobre anilínové farbivá. Z mnohých navrhovaných metód farbenia najlepšie skóre získané pomocou farbenia Romanovkim-Giemsa. Vytvorené šmuhy sa fixujú metylalkoholom alebo v Nikiforovovej zmesi. Výsledky jasnosti sa dosiahnu, keď sa do prípravku naleje škvrna Romanovsky-Giemsa. Na tento účel sa do Petriho misky vložia úlomky zápaliek, na ne sa položí sklíčko s náterom nadol a farbivo sa naleje, kým náter nezmáča. Doba farbenia je dvojnásobná. Pod mikroskopom majú bledé treponémy bledoružovú farbu, iné druhy treponémov sa sfarbujú do modra alebo modrofialova, možno použiť aj Morozovovu metódu striebrenia. Treponémy si úplne zachovávajú svoje morfologické znaky a pod mikroskopom vyzerajú hnedo alebo takmer čierno. Ale postriebrené prípravky sa dlho neskladujú. AT nedávne časy metódy farbenia treponému sa používajú zriedkavo.Ak sa syfilis lieči chemoterapeutickými liekmi, je takmer nemožné identifikovať patogén v patologických materiáloch aj pomocou tmavého zorného poľa. Po obdržaní negatívna analýza treba to zopakovať.Sérologická diagnostika syfilisu
Pri vykonávaní sérologických reakcií sa v súčasnosti používajú tieto výskumné metódy zjednotené na Ukrajine: reakcia fixácie komplementu (RCC), imunofluorescencia (RIF), imobilizácia treponému (PIT), precipitačná mikroreakcia (MPR) a enzýmová imunoanalýza (ELISA). za hlavnú a najbežnejšiu reakciu sa považovala reakcia fixácie komplementu alebo Wassermanova reakcia (РВ, RW). Na jej nastavenie sa používa krvné sérum pacienta so syfilisom a likvor pri poškodení nervovej sústavy.Spôsob nastavenia Wassermanovej reakcie sa nelíši od techniky vedenia RSC. Rozdiel je len v tom, že pri RO sa používa nielen špecifický treponém, ale nešpecifický kardiolipínový antigén.Z kubitálnej žily sa odoberá 5-10 ml krvi nalačno alebo najskôr 6 hodín po jedle. Neodberajte krv pacientom s zvýšená teplota, po požití alkoholu a mastných jedál, u tehotných žien 10 dní pred pôrodom a žien pri pôrode. Sérum extrahované z krvi sa zahrieva pri teplote 56 °C počas 30 minút, aby sa inaktivoval vlastný komplement. RO je nevyhnutne nastavený s dvoma antigénmi: špecifickým a nešpecifickým.Špecifický ultrazvukový treponémový antigén sa pripravuje z kultúr svetlého treponému (Reiterov kmeň) pestovaných v skúmavkách a vystavených ultrazvuku. Vyrába sa vo forme lyofilizovaného prášku. Nešpecifický kardiolipínový antigén sa pripravuje alkoholovou extrakciou lipidov zo srdca hovädzieho dobytka a purifikáciou z balastných zmesí, balených v 2 ml ampulkách. Na zavedenie antigénu do RO sa titruje podľa tohto návodu. Bezprostredne pred nastavením RV sa vykoná titrácia komplementu a hemolytického séra podľa rovnakej schémy ako v RSK. Wassermanova reakcia sa hodnotí kvalitatívne aj kvantitatívne. Kvalitatívna reakcia sa uskutočňuje v troch skúmavkách s dvoma antigénmi podľa obvyklej schémy.Výsledky reakcie sa hodnotia podľa systému 4 plus: pozitívna reakcia - keď dôjde k úplnému alebo výraznému oneskoreniu hemolýzy (4 +, 3 +); slabo pozitívna reakcia - čiastočné oneskorenie hemolýzy (2 +); pochybná reakcia - mierne oneskorenie hemolýzy (1 +). V prípade úplnej hemolýzy sa RO považuje za negatívne Každé sérum, ktoré poskytlo pozitívnu kvalitatívnu reakciu, musí byť tiež vyšetrené kvantitatívnou metódou s jeho sekvenčným riedením od 1:10 do 1:640. (3 +) oneskorenie hemolýzy. Kvantitatívna metóda nastavenia RO má dôležitosti na vyhodnotenie účinnosti liečby syfilisu. Rýchly pokles titra reaginu naznačuje úspešnú liečbu. Ak sérový titer dlhodobo neklesá, svedčí to o nedostatočnej účinnosti používaných liekov a potrebe zmeniť taktiku liečby.Pri pylori pre séronegatívny primárny syfilis alebo latentný, terciárny alebo vrodený sa odporúča dať Wassermanova reakcia za studena podľa rovnakej schémy. V prípade podozrenia na neurosyfilis sa RO vykonáva s cerebrospinálnej tekutiny, ktorý je inaktivovaný, pretože neobsahuje vlastný doplnok. Do reakcie sa zavádza nezriedený cerebrospinálny mok a v riedeniach 1 : 2 a 1 : 5. Wassermanova reakcia sa stáva pozitívnou 2-3 týždne po objavení sa tvrdého škrečka. Pri sekundárnom syfilise je pozitívny v 100% prípadov, v terciárnom - v 75%.Okrem toho sa v komplexe sérologických reakcií (CSR) používa ako skríningový test mikroprecipitačná reakcia s krvnou plazmou alebo inaktivovaným sérom.Mikroreakcia zrážania
Precipitačná mikroreakcia s kardiolipínovým antigénom. Princíp reakcie spočíva v tom, že po pridaní emulzie kardiolipínového antigénu do krvnej plazmy alebo séra pacienta so syfilisom sa vytvorí zrazenina (komplex antigén-protilátka), ktorá sa vyzráža vo forme vločiek. biela farba. Používajú túto techniku: tri kvapky plazmy (alebo inaktivovaného séra) sa napipetujú do jamky platne, potom sa pridá jedna kvapka emulzie štandardného kardiolipínového antigénu. Reakčné zložky sa miešajú trepaním doštičky počas 5 minút, potom sa pridajú tri kvapky 0,9 % roztoku chloridu sodného a zmes sa nechá ďalších 5 minút pri teplote miestnosti. Povinná kontrola so slabo pozitívnym krvným sérom. Výsledky sa vyhodnocujú voľným okom nad umelým zdrojom svetla. Keď sa v jamke objavia veľké vločky, reakcia sa považuje za pozitívnu (4 +, 3 +), strednú a malú - za slabo pozitívnu (2 +, 1 +). o negatívny výsledok nevytvára sa žiadna zrazenina Precipitačná mikroreakcia sa môže uskutočniť aj kvantitatívnou metódou na stanovenie titra precipitujúcich protilátok a vyhodnotenie účinnosti liečby na tomto základe. Vyššie titre MRP sa získajú s plazmou ako so sérom. V zahraničí je analógom MRP s pacientskym sérom VDRL (Laboratórium pre výskum pohlavných chorôb) a s plazmou - RPR (Rapid plasma reagin).Imunofluorescenčná reakcia (RIF)
Skupina špecifických reakcií, ktoré sa široko používajú na sérologickú diagnostiku syfilisu, zahŕňa nepriamu imunofluorescenčnú reakciu. Ako antigén používa suspenziu patogénneho bledého treponému kmeňa Nichols z parenchýmu semenníkov králika na 7. deň po infekcii. Reakcia je v dvoch modifikáciách: RIF-ABS a RIF-200. V prvom variante sa používa protilátkový sorbent (sonikat) - ultrazvukový treponémový antigén pre CSC. Vyrába ho podnik Kaunas na výrobu bakteriálnych prípravkov (Litva). Pri voľbe RIF-200 sa pacientovo sérum zriedi 200-krát, aby sa odstránil účinok skupinových antitreponemálnych protilátok.RIF-ABS sa nastaví na tenké, dobre odtučnené podložné sklíčka. Na rubovej strane pohárov orezávačom skla je vyznačených 10 kruhov s priemerom 0,7 cm.V rámci kruhu sa na sklo aplikuje antigén - suspenzia bledých treponém - v takom množstve, aby bolo 50- 60 z nich v zornom poli. Nátery sa sušia na vzduchu, fixujú nad plameňom a 10 minút v acetóne. Do samostatnej skúmavky pridajte 0,2 ml sorbentu (sonikatu) a 0,5 ml krvného séra pacienta, dobre premiešajte. Zmes sa nanesie na náter (antigén) tak, aby ho rovnomerne pokryl, inkubuje sa 30 minút vo vlhkej komore pri 3-7 °C (fáza II reakcie). Potom sa náter premyje fosfátovým tlmivým roztokom, vysuší sa a na 30 minút sa naň aplikuje fluorescenčné antishobulínové sérum, ktoré sa umiestni do vlhkej komory pri 37 °C (fáza II). Prípravok sa opäť premyje fosfátovým pufrom, suší sa a skúma sa pod fluorescenčným mikroskopom. pozitívna reakcia bledé treponémy vyžarujú zlatozelené svetlo, pri negatívnom nežiaria Technika nastavenia RIF-200 je rovnaká ako pri RIF-ABS, len krvné sérum pacienta sa predbežne 200x zriedi fosfátovým pufrom. Pri vykonávaní imunofluorescenčnej reakcie s cerebrospinálnou tekutinou pacienta so syfilisom nervového systému sa používajú RIF-c a RIF-10, t.j. kvapalina sa zavádza do reakcie neinaktivovaná a zriedená alebo zriedená v pomere 1:10.Treponema pallidum imobilizačný test (PIT)
Reakcia imobilizácie bledých treponémov (PIT) je založená na fenoméne straty ich pohyblivosti v prítomnosti imobilizujúcich antitreponemálnych protilátok séra a komplementu pacienta v podmienkach anaerobiózy. Ako antigén v reakcii sa používa suspenzia bledých treponém z tkaniva semenníkov králika infikovaného laboratórnym kmeňom Nichols. Suspenzia sa zriedi sterilným 0,85% roztokom chloridu sodného tak, aby v zornom poli bolo 10-15 spirochét. Na uskutočnenie reakcie sa odoberie 0,05 ml krvného séra pacienta, 0,35 ml antigénu a 0,15 ml komplementu. zmiešané v sterilnej skúmavke. Skúsenosť je sprevádzaná kontrolami séra, antigénu a komplementu. Skúmavky sa umiestnia do anaerostatu, vytvoria sa anaeróbne podmienky a udržiavajú sa v termostate 18-20 hodín pri teplote 35 °C. Potom sa z každej skúmavky pripravia tlakové kvapky, spočíta sa aspoň 25 treponém a koľko sú mobilné a koľkí sú imobilní. Percento špecifickej imobilizácie bledých treponém sa vypočíta podľa vzorca: x = (A-B) / B * 100, kde X je percento imobilizácie, A je počet mobilných treponém v kontrolnej skúmavke, B je počet mobilných treponémy v skúmavke. Reakcia sa považuje za pozitívnu, keď je percento imobilizácie 50 alebo viac, slabo pozitívne - od 30 do 50, pochybné - od 20 do 30 a negatívne - od 0 do 20. Ovčinnikov. Anaeróbne podmienky experimentu sa vytvoria umiestnením reagujúcej zmesi (sérum, antigén, komplement) do melanžúr, ktorých oba konce sú uzavreté gumeným krúžkom. Melangerínová technika umožňuje upustiť od zložitého vybavenia a prístrojov na vytváranie anaerobiózy, ale poskytuje výsledky, ktoré nie sú dostupné klasickej mikroaneurostatickej technike.Imobilizácia treponému a imunofluorescenčné reakcie sa považujú za najšpecifickejšie v sérologickej diagnostike syfilisu. Napriek tomu sa PIT napriek svojej špecifickosti neodporúča používať v širokej praxi kvôli zložitosti nastavenia.Enzýmová imunoanalýza (ELISA)
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) sa vykonáva s antigénom kadriolipínu (nešpecifická, skríningová reakcia) a treponémom (špecifická reakcia), čo potvrdzuje diagnózu syfilisu. Princíp nepriama metóda ELISA spočíva v tom, že testovacie sérum sa pridá k antigénu adsorbovanému na pevnej fáze v jamkách tablety. Ak obsahuje protilátky proti treponému, vzniká komplex antigén-protilátka (fáza II). Po vymytí nenaviazaných nešpecifických protilátok sa do jamiek pridá antiglobulínové sérum konjugované s enzýmom (najčastejšie s chrenovou peroxidázou). Konjugát je pevne naviazaný na komplex antigén-protilátka (fáza II) Po zmytí nenaviazaného konjugátu sa do jamiek pridá substrát farbenia OFD - ortofenyléndiamín (fáza III). Reakcia peroxidázy sa zastaví pridaním kyseliny sírovej. Na kontrolu dali tie isté vzorky s pozitívnym a zjavne negatívnym sérom.Výsledky analýzy sa zohľadňujú pomocou fotometra, ktorý určuje optickú hustotu v dvojvlnnom režime (492 nm a 620 nm). Na nastavenie enzýmovej protilátkovej reakcie sú okrem fotometra potrebné jedno- a osemkanálové automatické pipety s polypropylénovým hrotom a príslušné sady diagnostických testovacích systémov.V sérologickej diagnostike syfilisu je široko používaná metóda ELISA. Je rovnako účinný pri zisťovaní chorôb v inkubačná doba(1-2 týždne po infekcii), s klinickými prejavmi ochorenia a jeho latentných foriem. Veľmi často sa ELISA využíva pri skríningových vyšetreniach populácie najmä na krvných transfúznych staniciach.V laboratórnej praxi sa niekedy využíva aj imunitná adhézna reakcia (RIP) a nepriama hemaglutinačná reakcia (RNHA). Prvý z nich je založený na skutočnosti, že patogénne testikulárne treponémy kmeňa Nichols po zmiešaní so sérom pacienta za prítomnosti komplementu a ľudských erytrocytov adherujú na povrch červených krviniek. RNHA sa široko používa na diagnostiku syfilisu kvôli svojej metodologickej jednoduchosti. Pozitívne sa stáva už tri týždne po infekcii. Pozitívny výsledok reakcie pretrvávajú roky po zotavení. V zahraničí je analógom tejto reakcie TRHA (Treponema pallidum hemoaglutination).treponema palladium; T. entericum
Morfológia: typické treponémy s 8-12 cievkami, motorický aparát - 3 periplazmatické bičíky na každom póle bunky. Gramova škvrna nie je podľa Romanovského-Giemsa vnímaná - mierne ružová, zistená impregnáciou striebrom.
kultúrne vlastnosti: virulentný kmeň domáceho zvieraťa. média nerastú, dochádza k akumulácii kultúry infikovaním králika v semenníku. Virulentné kmene sa kultivujú na médiu s mozgovým a obličkovým tkanivom.
Biochemické vlastnosti : mikroaerofilné
Antigénna štruktúra: slaný, má špecifické proteínové a lipoidné antigény, ktoré sú svojím zložením identické s kardiolipínom extrahovaným z hovädzieho srdca (difosfadylglycerín)
Faktory patogenity: adhezíny sa podieľajú na procese prichytenia, lipoproteíny sa podieľajú na vývoji imunopatologických procesov.
odpor: citlivý na sušenie, slnečné žiarenie, zostáva na predmetoch až do zaschnutia. Za nepriaznivých podmienok prechádza do L-foriem a vytvára cysty.
Patogenéza: Volajú syfilis. Z miesta vstupnej brány sa treponémy dostávajú do regionálnych lymfatických uzlín, kde sa množia. Ďalej T. preniká do krvného obehu, kde sa viaže na endoteliocyty, čo spôsobuje endarteritídu, čo vedie k vaskulitíde a nekróze tkaniva. S krvou sa T. šíri po celom tele, sediace orgány: pečeň, obličky, kosti, kardiovaskulárny a nervový systém.
Imunita: ochranná imunita nie je vyvinutá. V reakcii na antigény patogénov sa vyvíja HRT a autoimunitné procesy. Humorálna imunita je produkovaná proti lipoidnému antigénu T. a je titrom IgA a IgM.
mikroskopické vyšetrenie. Vykonáva sa s primárnym syfilisom počas objavenia sa tvrdého chancre. Materiál na výskum: výtok chancre, obsah regionálnych lymfatických uzlín, z ktorých sa pripravuje "rozdrvený" kvapkový prípravok a skúma sa v tmavom poli. S pozitívnym výsledkom sú viditeľné tenké skrútené nite dlhé 6-14 mikrónov, ktoré majú 10-12 rovnomerných malých kučier správneho tvaru. Bledý treponém je charakterizovaný pohybmi podobnými kyvadlu a dopredu sa ohýbajúcimi pohybmi. S rozvojom lézií na sliznici úst so sekundárnym syfilisom, ako aj s lokalizáciou tvrdého chancre v ústnej dutine je potrebné odlíšiť bledý treponém od saprofytických treponémov, ktoré sú predstaviteľmi normálnej mikroflóry. V tomto prípade je rozhodujúci diagnostická hodnota má detekciu typického treponému v bodke regionálnych lymfatických uzlín.
Serodiagnostika. Wassermanova reakcia je nastavená súčasne s 2 antigénmi: 1) špecifický, obsahujúci antigén patogénu - treponém zničený ultrazvukom; 2) nešpecifické - kardiolipín. Skúmané sérum sa zriedi v pomere 1:5 a RSK sa umiestni podľa všeobecne uznávanej metódy. Pri pozitívnej reakcii sa pozoruje oneskorenie hemolýzy, pri negatívnej reakcii dochádza k hemolýze erytrocytov; intenzita reakcie sa odhaduje podľa toho od (+ + + +) po (-). Prvé obdobie syfilisu je séronegatívne a je charakterizované negatívnou Wassermanovou reakciou. U 50% pacientov sa reakcia stáva pozitívnou najskôr 2-3 týždne po objavení sa tvrdého chancre. V druhom a treťom období syfilisu dosahuje frekvencia pozitívnych reakcií 75-90%. Po ukončení liečby sa Wassermanova reakcia stáva negatívnou. Paralelne s Wassermanovou reakciou sa uskutočňuje mikroprecipitačná reakcia s nešpecifickým kardiolipínovým antigénom a študovaným inaktivovaným krvným sérom alebo plazmou. Do jamky na doštičke z plexiskla (alebo na obyčajnom skle) sa nanesú 3 kvapky séra a pridá sa 1 kvapka kardiolipínového antigénu. Zmes sa dôkladne premieša a zohľadnia sa výsledky. Pozitívna reakcia s krvným sérom pacienta so syfilisom je charakterizovaná tvorbou a stratou vločiek rôzne veľkosti; s negatívnym výsledkom sa pozoruje rovnomerná svetelná opalescencia.
RIF – nepriama imunofluorescenčná reakcia – je špecifická v diagnostike syfilisu. Ako antigén sa používa suspenzia tkanivových treponém. Použije sa reakcia RIF_200. Sérum pacienta sa inaktivuje rovnakým spôsobom ako pri Wassermannovej reakcii a zriedi sa v pomere 1:200. Kvapky antigénu sa aplikujú na sklíčka, vysušia sa a fixujú sa 5 minút v acetóne. Potom sa sérum pacienta aplikuje na liek, po 30 minútach sa umyje a vysuší. Ďalším krokom je ošetrenie preparátu fluorescenčným sérom proti ľudským globulínom. Preskúmajte prípravok pomocou fluorescenčného mikroskopu, pričom si všimnite stupeň luminiscencie treponému.
RIT reakcia na imobilizáciu treponému je tiež špecifická. Živá kultúra treponému sa získava kultiváciou v králičom semenníku. Semenník je rozdrvený v špeciálnom médiu, v ktorom zostávajú treponémy mobilné. Reakcia sa nastaví nasledovne: suspenzia tkanivových (mobilných) treponém sa v skúmavke spojí s testovaným sérom a pridá sa čerstvý komplement. Sérum sa pridá do jednej kontrolnej skúmavky namiesto testovacieho séra. zdravý človek, v inom - namiesto čerstvého komplementu sa pridáva inaktivovaný - neaktívny komplement. Po udržiavaní pri 35 °C v anaeróbnych podmienkach (anaerostat) sa zo všetkých skúmaviek pripraví „rozdrvený“ kvapkový prípravok a v tmavom poli sa stanoví počet mobilných a nepohyblivých treponém.
Liečba: Penicilíny, tetracyklíny, lieky obsahujúce bizmut.
PATOGÉNNE SPIROCHÉTY
Spirochety sú na rozdiel od baktérií menej častou skupinou mikroorganizmov.
Všetky spirochéty netvoria spóry ani kapsuly. Nefarbia sa podľa Grama (gramnegatívne). Je ťažké pestovať na živných pôdach. Spirochety – saprofyty sa nachádzajú v nádržiach bohatých na organický odpad, v bahne, v ústnej dutine a ľudských črevách. Svojimi morfologické znaky patogénne spirochéty sa delia do troch skupín.
- Treponéma, ktorá má tvar pravidelnej špirály. To zahŕňa spirochétu syfilis.
- Borélie, ktoré majú tvar zvlnenej nite s ohybmi a širšími kučerami. Do tejto skupiny patria spirochéty recidivujúca horúčka a Vincentova spirochéta.
- Leptospiry, ktoré majú početné malé kučery a charakteristické háčikovité zakončenia (infekčná žltačka leptospira).
SYPHILIS SPIROCHETE
Pôvodcom syfilisu je svetlá spirochéta Spirochaeta pallida, ktorú prvýkrát opísali F. Shaudin a E. Hoffmann v roku 1905. O 2 roky skôr pri pokusoch na opiciach objavil D. K. Zabolotny syfilisovú spirochétu.
Morfológia a farbiace vlastnosti. Svetlá spirochéta je veľmi jemná tenká niť, ktorá slabo láme svetlo s malými, rovnomernými, pravidelnými ohybmi (obr. 104 a 105 na vložke).
Ryža. 104. Treponema pallidum v tmavom poli.
V priemere má dĺžku od 6 do 14 mikrónov a hrúbku 0,25 mikrónu. Pomenovanie bledá dostala v súvislosti so zlým farbením anilínovými farbivami a zlou viditeľnosťou v živom stave. Tieto vlastnosti sú spôsobené nízkym obsahom nukleoproteínov a bohatosťou lipoidov v tele spirochéty. Na zafarbenie použite metódu Romanovského (obr. 105) alebo zafarbite, pričom ste ho predtým vystavili nejakému moridlu. najlepšia metóda detekcia pallidum spirochete je štúdia v tmavom zornom poli. V čerstvom materiáli, keď sa skúma v ultramikroskope s tmavým zorným poľom, bledá spirochéta vykazuje aktívne pohyby okolo pozdĺžnej osi, ako aj translačné a rotačné pohyby.
Kultivácia. Na bežných živných pôdach sa spirochéta syfilisu nerozmnožuje. V. M. Aristovsky a A. A. Geltser úspešne použili tekuté živné médium pozostávajúce z králičieho séra s pridaním kúska mozgového tkaniva. Povrch média po zasiatí je vyplnený vazelínou. V kultúrach sú spirochéty hrubšie, kratšie a líšia sa polymorfizmom. Výsledné kultúry sú zbavené patogénnych vlastností a nazývajú sa „kultúrne“ na rozdiel od „tkanivových“, ktoré si zachovávajú patogénne vlastnosti.
vlastnosti a sú v laboratóriách podporené pasážami na králikoch.
odpor. Bledá spirochéta nie je veľmi odolná voči vysychaniu a vysoká teplota. Zahriatie na 45-48 ° ho zabije do hodiny, na 55 ° za 15 minút. Komu nízke teploty menej citlivé. Pri 10° zostáva životaschopná až niekoľko dní. Dezinfekčné prostriedky sú škodlivé. Z chemikálií má najsilnejší účinok 1-2% roztok fenolu.
Patogenita pre zvieratá. I. I. Mečnikovovi a D. K. Zabolotnému sa po prvý raz podarilo získať experimentálny syfilis u ľudoopov. Králiky sa môžu infikovať zavedením patologického materiálu do rohovky, prednej komory oka, do kože, sliznice atď. očkovania.
Patogenéza a klinika syfilisu. Jediným zdrojom nákazy je človek so syfilisom. Choroba sa môže prenášať ako priamym kontaktom (najčastejšie sexuálnym), tak aj prostredníctvom predmetov kontaminovaných syfilitickým sekrétom. Jedenie zo spoločného riadu, zdieľanie lyžice atď. (nepriamy kontakt) môže prispieť k šíreniu syfilisu v domácnosti.
Bledá spirochéta sa do tela dostáva cez poškodené sliznice a kožu. Po 3-4 týždňoch sa v mieste vstupnej brány objaví primárna skleróza - tvrdý chancre (vred s hustými okrajmi a dnom - odtiaľ názov tvrdý chancre), ktorý charakterizuje primárne obdobie syfilisu.
V budúcnosti sa mikrób dostane do tela lymfatickými a obehovými cestami a šíri sa po celom tele - začína druhé obdobie. Toto obdobie je charakterizované poškodením kože a slizníc, na ktorých sa objavujú roseoly, papuly, vezikuly a pustuly – syfilidy. Druhé obdobie trvá od 2-3 mesiacov do niekoľkých rokov. Ak sa syfilis neliečil dostatočne, začína sa tretie obdobie – gumovité. Gumy (granulómy) sú bunkové zhluky pozostávajúce z lymfocytov, epiteloidných a plazmatické bunky. Môžu byť v hrúbke kože, slizníc, vnútorných
orgány a pod veľké veľkosti, malé cievy v ich blízkosti postupne klesajú v lúmene a nakoniec sa uzavrú. V tomto ohľade je výživa gumových buniek narušená a dochádza k ich hlbokej deštrukcii s tvorbou vredov a jaziev v akýchkoľvek tkanivách a orgánoch.
V niektorých prípadoch syfilis prechádza do štvrtého obdobia, ktoré je charakterizované léziami centrálneho nervového systému vo forme progresívnej paralýzy a dorzálnych tabes. Klinické prejavy syfilisu sa vyznačujú tým, že vo väčšine prípadov sú lézie kože a slizníc, ktoré sa objavia, bezbolestné, zmiznú aj bez lekárskeho zásahu, opakujú sa a nakoniec dávajú ťažké lézie tretie a štvrté obdobie.
Imunita. vrodená imunita na syfilis u ľudí nie je pozorovaný. Prenesená choroba tiež neopúšťa typ získanej imunity, ktorý charakterizuje väčšinu infekčných ochorení. V prípade sekundárnej infekcie pacienta so syfilisom spirochéty neumierajú, ale pretrvávajú a šíria sa po tele, infikujú orgány a tkanivá spolu so zostávajúcimi spirochétami primárnej infekcie. Pri sekundárnej infekcii syfilisom však neexistuje primárna forma reakcie - chancre. Tento imunologický stav sa nazýva "chanker imunita".
Pod "imunitou" v syfilise sa rozumie imunologická reštrukturalizácia tela, v súvislosti s ktorou sa mení povaha patologických zmien a samotný klinický obraz. Pokiaľ ide o mechanizmus tejto „imunity“, nie je spôsobený humorálnymi faktormi, hoci protilátky (lyzíny, aglutiníny) sa v sére pacientov nachádzajú.
Laboratórna diagnostika. V prvom období syfilisu sa diagnóza robí pomocou bakterioskopického vyšetrenia v tmavom poli alebo v zafarbených náteroch materiálu z tvrdého chancre.
Pre výskum je potrebné extrahovať tkanivový mok z hlbokých častí lézie obsahujúcich väčší počet spirochét. Za týmto účelom sa povrch chancre najprv dôkladne utrie sterilným tampónom namočeným vo fyziologickom roztoku, potom sa z neho vytlačí malé množstvo tkanivového moku ľahkým stlačením dna vredu. Ak sa to nepodarí, podráždi sa spodná časť vredu miernym škrabaním skalpelom alebo ostrou lyžičkou. Vzniknutá kvapalina sa odsaje Pasteurovou pipetou.
Kvapka kvapaliny sa najlepšie skúma v tmavom poli, kde je dobre viditeľná morfológia jasne osvetlených spirochét a ich charakteristické pohyby.
Saprofytické spirochéty nachádzajúce sa na genitáliách a v ústnej dutine (na genitáliách - Sp. refringens, v ústnej dutine - Sp. microdentium) sa od svetlej spirochéty líšia svojou morfológiou a charakterom pohybu. sp. refringens má hrubšie telo s veľkými zákrutami, nemá pohyb vpred, Sp. microdentium sa líši od svetlej spirochéty povahou svojho pohybu.
Je možné pripraviť aj nátery Burri atramentu (pozri stranu 51), kde je na čiernom pozadí jasne viditeľný tvar sivobielych spirochét a ich vírov.
Na štúdium zafarbeného prípravku sa pripravia tenké nátery: kvapku tekutiny umiestnite na podložné sklíčko, rozotrite ju po povrchu okrajom druhého pohára (rovnako ako pri príprave náteru z kvapky krvi). Nátery sa sušia na vzduchu, fixujú v metylalkohole a farbia 12-15 hodín podľa Romanovského (str. 52): bledá spirochéta sa zmení na ružovú, čo umožňuje odlíšiť ju od iných saprofytických spirochét, ktoré sa sfarbujú do modra (pozri obr. 105).
Ryža. 105. Bledá spirochéta vo výboji chancre. Farbenie podľa Romanovského.
Takéto dlhé sfarbenie prípravku sa vysvetľuje skutočnosťou, že bledá spirochéta nevníma dobre anilínové farbivá.
V druhom období syfilisu, keď sa na koži a slizniciach objavia syfilidy, sa z postihnutých miest odoberá aj tkanivová šťava a vyšetruje sa na prítomnosť spirochét.
Po 4-5 týždňoch od začiatku infekcie je možné vykonať sérologické vyšetrenie, ktoré je najbežnejšou metódou diagnostiky syfilisu.
Sérodiagnostika syfilisu je založená na formulácii Wassermanovej reakcie a sedimentárnych reakcií.
Wassermanova reakcia. Technika Wassermannovej reakcie sa nelíši od reakčnej techniky fixácie komplementu. Významným rozdielom je spôsob prípravy antigénov, ako aj ich titrácia.
Lipoidné extrakty z patologických alebo normálnych tkanív sa používajú ako antigény pre Wassermanovu reakciu. Aktívnejšie sú takzvané špecifické antigény pripravené zo syfilitických orgánov, vďaka čomu ich titer zvyčajne dosahuje tisíciny mililitra (titer 0,007, 0,05 na 1 ml atď.). Nešpecifické antigény sú menej aktívne, preto je ich titer nižší a pohybuje sa v rámci stotín mililitra (napríklad titer 0,01, 0,02 na 1 ml).
Pri nastavovaní Wassermanovej reakcie sa používajú 3 antigény (č. 1, 2 a 3 kardiolipín). Antigén č. 1 špecifický. Obsahuje lipidy syfilitickej spirochéty získané extrakciou z tkaniva semenníkov králika infikovaného syfilisom. Antigény č. 2 a 3 sú nešpecifické a obsahujú lipidy normálneho tkaniva (alkoholové extrakty zo srdcových svalov hovädzieho dobytka s prídavkom 0,25-0,3 % cholesterolu). Kardiolipínový antigén je purifikovaný prípravok, musí sa rýchlo riediť a po zriedení by mal byť mierne opaleskujúci, ale nie zakalený. Titer antigénu označuje množstvo, ktoré by malo byť v 1 ml fyziologického roztoku a ktoré nespomalí hemolýzu v prítomnosti hemolytického systému a komplementu.
Napríklad, ak je na ampulke uvedený titer antigénu 0,05 ml, znamená to, že počas prevádzky by sa mal antigén zriediť fyziologickým roztokom tak, aby v ml tekutiny bolo 0,05 ml antigénu.
Vzhľadom na to, že antigény môžu mať rôzne antikomplementárne vlastnosti, pred Wassermanovou reakciou sa komplement titruje nielen v čistej forme, ale aj v prítomnosti antigénov. Keďže Wassermanova reakcia je nastavená na 3 antigény, komplement by sa mal titrovať s každým antigénom samostatne.
Modifikácia Wassermanovej reakcie - Grigoriev-Rapoportova reakcia (tabuľka 25). Táto reakcia je založená na využití komplementárnej aktivity testovaného séra. Reakcia využíva (najneskôr 36 hodín po prijatí) aktívne (nezahriate) sérum pacienta. Na uskutočnenie reakcie sú potrebné antigény, hemolytické sérum a defibrinovaná, nepremytá ovčia krv filtrovaná cez dve vrstvy gázy.
Schéma reakcie Grigoriev - Rapoport
Ingrediencie (v ml) | skúmavky | ||
Aktívne testovacie sérum | |||
Fyziologický roztok | |||
| Antigénne špecifické, zriedené titrom | |||
Antigén nešpecifický, zriedený titrom | |||
Izbová teplota 22 °C počas 25 minút |
|||
Hemolytický systém | |||
Izbová teplota 22 °C počas 25 minút. |
|||
V prípadoch, keď nedochádza k hemolýze v kontrolnom sére, sa reakcia opakuje a do 0,2 ml testovacieho séra sa pridá 0,2 ml zjavne aktívneho negatívneho séra, a preto sa objem pridaného fyziologického roztoku primerane zníži.
Výsledky experimentu sa berú do úvahy ihneď po ukončení reakcie na základe údajov z prvých dvoch skúmaviek obsahujúcich antigén. Pozitívny výsledok je charakterizovaný úplným oneskorením hemolýzy, negatívny výsledok je charakterizovaný úplnou hemolýzou. Kontrolné sérum (3. skúmavka bez antigénu) by malo mať úplnú hemolýzu.
Okrem týchto reakcií sa na sérodiagnostiku syfilisu vo veľkej miere využívajú sedimentárne reakcie, ktorých podstatou je interakcia séra inaktivovaného pacienta s antigénom, v dôsledku čoho sa v skúmavke vyzráža zrazenina. Z nich majú najväčšie uplatnenie Kahnova a Sachs-Vitebského reakcia.
Kahnova reakcia. Na nastavenie Kahnovej reakcie sú potrebné nasledujúce zložky: 1) inaktivované krvné sérum chorého človeka, 2) špeciálny Kahnov antigén a 3) fyziologický roztok.
Kana antigén je lipoidný extrakt z ovčieho srdcového svalu, do ktorého bol pridaný cholesterol. Pred experimentom, v závislosti od titra uvedeného na štítku, sa antigén zriedi nasledujúcim spôsobom. Do jednej čistej a suchej skúmavky sa naleje antigén a do druhej sa naleje fyziologický roztok v množstve uvedenom na štítku (1-1,1-1,2). Potom sa fyziologický roztok z druhej skúmavky rýchlo naleje do prvej skúmavky obsahujúcej antigén (a nie naopak). Výsledná zmes sa mieša, 6-8 krát sa preleje zo skúmavky do skúmavky a nechá sa 10 minút dozrieť pri teplote miestnosti.
Nastavenie zážitku. Šesť aglutinačných skúmaviek sa umiestni do stojana. Prvé tri skúmavky (1., 2. a 3.) sú experimentálne, ďalšie tri (4., 5. a 6.) sú kontrolné (antigénová kontrola). Zriedený antigén sa po jeho zrení zavedie mikropipetou do 3 experimentálnych a 3 kontrolných skúmaviek. Mikropipeta s antigénom by mala byť spustená na dno suchej skúmavky bez toho, aby sa dotkla jej stien – tým je zabezpečená presnosť merania antigénu. 0,5 ml sa naleje do 1. skúmavky, 0,025 a 3. - 0,0125 ml antigénu - rovnaké množstvo antigénu sa naleje do 3 kontrolných skúmaviek, resp. Do všetkých experimentálnych skúmaviek sa pridá 0,15 ml testovacieho séra, do kontrolných skúmaviek sa pridá rovnaké množstvo fyziologického roztoku. Stojan so skúmavkami sa energicky pretrepáva 3 minúty, aby sa sérum zmiešalo s antigénom, a umiestni sa do termostatu pri 37 °C na 10 minút. Po vybratí z termostatu pridajte 1 ml fyziologického roztoku do prvej experimentálnej a prvej kontrolnej skúmavky, 0,5 ml fyziologického roztoku do druhej a tretej experimentálnej, kontrolnej skúmavky. Obsah skúmaviek sa znova pretrepe a zohľadnia sa výsledky reakcií (schéma Cahnovej reakcie je uvedená v tabuľke 26).
Poznámka. Pri akomkoľvek počte testovaných sér sa umiestni jedna kontrola antigénu. V pozitívnych prípadoch reakcie sa umiestni kontrola séra. Za týmto účelom sa naleje do skúmavky v množstve 0,1 ml, pridá sa 0,3 ml fyziologického roztoku a tri minúty sa pretrepáva.
Reakcia sa zaznamenáva voľným okom pomocou lupy alebo aglutinoskopu.
Tabuľka 26
Schéma Cahnovej reakcie 
Keď sa vezme do úvahy reakcia voľným okom, každá skúmavka sa vyberie zo stojana a mierne naklonená sa drží mierne nad úrovňou očí pred zdrojom svetla. Precipitácia vločiek (precipitátu) v skúmavkách s testovacím sérom je indikáciou pozitívnej Kahnovej reakcie a je indikovaná plusmi. Ostro pozitívna reakcia je indikovaná štyrmi plusmi (+ + + +) - je charakterizovaná precipitáciou jasne viditeľných vločiek vo všetkých skúmavkách a mierne opaleskujúcej kvapaliny. Pozitívna reakcia je označená tromi plusmi (+ + +) a je charakterizovaná menej výraznou flokuláciou vo všetkých skúmavkách. Slabo pozitívna reakcia, označená dvoma plusmi (+ +), je charakterizovaná slabšou sedimentáciou a prítomnosťou malých častíc v zakalenej kvapaline. Tvorba veľmi malých suspendovaných častíc v zakalenej kvapaline je označená jedným plus (+). Neprítomnosť sedimentu a voľne suspendovaných častíc v kvapaline je indikátorom negatívnej reakcie a je označená mínusom (-). V kontrolných skúmavkách by sa nemali pozorovať vločky.
CYTOCHOLICKÁ SEDIMENTÁRNA REAKCIA (tabuľka 27) od Zaks-Vitebského. Pre túto reakciu je potrebné mať inaktivované testovacie sérum a Sachsov-Vitebského cytocholový antigén, čo je extrakt lipoidov zo svalov srdca hovädzieho dobytka, do ktorého sa pridáva cholesterol.
Tabuľka 27
Schéma cytocholickej reakcie Sachs - Vitebsky