Odoslanie dobrej práce do databázy znalostí je jednoduché. Použite nižšie uvedený formulár
Študenti, postgraduálni študenti, mladí vedci, ktorí pri štúdiu a práci využívajú vedomostnú základňu, vám budú veľmi vďační.
Hostené na http://www.allbest.ru/
VZDELÁVACIA INŠTITÚCIA S FEDERÁLNYM ŠTÁTNYM ROZPOČTOM
VYŠŠIE ODBORNÉ VZDELANIE
"ŠTÁTNA POĽNOHOSPODÁRSKA AKADÉMIA IŽEVSK"
FAKULTA VETERINÁRNEHO LEKÁRSTVA
Katedra chémie
Test
v biochémii zvierat
Téma: "Celkový proteín krvného séra. Metódy stanovenia, klinický a diagnostický význam, špecifiká"
Doplnila: Kurochkina V.S.
Študent 3. ročníka FZO
Špecialita: "Veterinárna"
Skontrolované: k.b. PhD, docent
Berestov D.S.
Iževsk 2013
Úvod
Aplikácia
Úvod
V živých bunkách sa syntetizuje veľa organických molekúl, medzi nimi hlavna rola polymérne makromolekuly hrajú - proteíny, nukleové kyseliny, polysacharidy. Proteíny zohrávajú v živote živých organizmov osobitnú úlohu. Genetické informácie sa prenášajú z rodičov na deti špecifická štruktúra a funkcie všetkých bielkovín daný organizmus. Syntetizované proteíny vykonávajú transportné, ochranné, štrukturálne funkcie, podieľajú sa na prenose signálov z jednej bunky do druhej a rovnakým spôsobom implementujú dedičnú informáciu.
Veveričky- vysokomolekulárne organické zlúčeniny obsahujúce dusík, pozostávajúce z viac ako 20 druhov alfa-aminokyselín. Podmienečnou hranicou medzi veľkými polypeptidmi a proteínmi je molekulová hmotnosť 8000-10000. Plazmatické proteíny sa syntetizujú hlavne v pečeni, plazmatických bunkách, lymfatické uzliny, slezina a kostná dreň.
1. Celkový sérový proteín
Sérové proteíny sú pomerne veľká skupina proteínov, ktoré sa líšia štruktúrou, fyzikálne a chemické vlastnosti a funkcie. Ich celkové množstvo sa určuje pomocou refraktometra alebo biuretovej metódy a jednotlivé zložky - elektroforézou. V závislosti od spôsobu distribúcie možno získať 5 až 100 proteínových frakcií. Elektroforéza na papieri v krvnom sére určuje 4-5 frakcií: albumíny, alfa (niekedy alfa-1 a alfa-2), beta- a gama globulíny a elektroforéza v agarových, škrobových a polyakrylamidových géloch - oveľa viac (až 30).
Množstvo celkových bielkovín a pomer medzi jednotlivými frakciami v krvnom sére zvierat odlišné typy kolíše v určitých medziach.
U mladých zvierat je celkový obsah bielkovín nižší ako u dospelých: u teliat vo veku 1-10 dní - 56-70 g / l, novonarodených prasiatok - 45-50, jahniat - 46-54 g / l, pozri prílohu (tabuľka 1 ).
Živočíšna krvná plazma je kvapalina s hustotou 1,02 - 1,06. Pri dehydratácii tela sa pozoruje zvýšenie hustoty krvi. Suchý zvyšok plazmy predstavuje menej ako 10 % a zvyšok tvorí voda. Väčšinu suchého zvyšku tvoria proteíny, ktorých celková koncentrácia v plazme je 60-80 g/l. Súčet koncentrácie albumínu a globulínov je koncentrácia celkového proteínu v krvnej plazme.
celkový proteín je organický polymér zložený z aminokyselín. Rôzne proteíny sa podieľajú na všetkých biochemických reakciách nášho tela ako katalyzátory, transportujú rôzne látky a liečivá, zúčastňujú sa na nich imunitnú ochranu atď.
Celková koncentrácia proteínov v krvnom sére je definovaná pojmom „celkový proteín“.
celkový proteín- najdôležitejšia zložka metabolizmu bielkovín v organizme, je to aj celková koncentrácia albumínu a globulínov v krvnom sére.
Bežný proteín v tele plní nasledujúce funkcie:
Podieľa sa na zrážaní krvi;
Udržiava konštantné pH krvi;
(prenos tukov, bilirubínu, steroidných hormónov do tkanív a orgánov) transportná funkcia;
Podieľa sa na imunitných reakciách a mnohých ďalších funkciách;
Sú rezervou aminokyselín;
V organizme plnia regulačnú funkciu, keďže sú súčasťou hormónov a enzýmov.
Pri dehydratácii sa zvyšuje koncentrácia celkového proteínu v krvnej plazme. Zníženie koncentrácie celkového proteínu v krvnej plazme môže byť výsledkom širokej škály dôvodov - nízky obsah bielkovín v strave, ochorenia obličiek a pečene, pri ktorých sa proteíny strácajú v moči, narušenie procesu absorpcie živiny v tráviacom trakte.
Fyziologickou funkciou plazmatických bielkovín je udržiavať koloidný osmotický tlak, tlmivú kapacitu plazmy, v niektorých prípadoch ukladať (skladovať) lipidové molekuly, metabolické produkty, hormóny, liečivých látok a mikroživín. Niektoré plazmatické proteíny vykonávajú enzymatickú funkciu, imunoglobulíny vykonávajú humorálnu imunitu. Dopĺňať komponenty a C-reaktívny proteín dôležité pre realizáciu nešpecifickej rezistencie, najmä v prípade bakteriálne infekcie. Rovnováha medzi faktormi zrážanlivosti a inhibítormi udržuje krvnú tekutinu v normálnom stave a rýchle zrážanie v prípade poranenia.
Klasifikácia:
Jednoduché (bielkoviny) (obsahujú iba aminokyseliny)
Komplex (proteíny) (aminokyseliny a neaminokyselinové zložky (hém, deriváty vitamínov, lipidy alebo sacharidy)
Fibrilárny (tvorí veľa hustých tkanív)
Globulárne (albumíny (4-5 %), globulíny (2-3 %), fibrinogén (0,2-0,4 %)
2. Metódy stanovenia, klinický a diagnostický význam, špecifiká
Metódy stanovenia celkového proteínu v krvnom sére:
1. Azotmetrický;
2. Stanovenie špecifickej hmotnosti séra;
3. Hmotnosť (gravimetrická), keď sa krvné bielkoviny vyzrážajú, vysušia sa do konštantnej hmotnosti a odvážia sa na analytických váhach;
4. Refraktometrické;
5. kolorimetrické;
6. neflometrické;
7. polarimetrické;
8. Spektrometrické;
1. Refraktometer IRF - 454 B2M
je určený na stanovenie proteínu v krvnom sére, mozgovomiechovom moku, kontrolu koncentrácie liečiv, meranie hustoty moču. bežné bielkovinové krvné zviera
2. Cobas integra - celkový proteín Gen.2
Princíp testu: Dvojmocná meď reaguje v alkalickom roztoku s proteínovými peptidovými väzbami za vzniku charakteristického fialovo sfarbeného biuretového komplexu.
3. Stanovenie proteínových frakcií krvného séra elektroforézou na filme z acetátu celulózy.
Tlmivý roztok je určený na elektroforetickú separáciu proteínov krvného séra na membránach z acetátu celulózy s následným denzitometrickým stanovením proteínových frakcií.
Princípy metódy
Princíp elektroforetickej separácie proteínov je založený na rozdielnej rýchlosti pohybu molekúl proteínov krvného séra v konštantnom elektrické pole určité napätie. Oddelené proteínové frakcie sa zafarbia farbivom. Intenzita farby proteínových frakcií je úmerná ich počtu.
Analyzované vzorky
Sérum bez hemolýzy, lipémie a nie ikterické. Proteínové frakcie krvného séra sú stabilné v tesne uzavretej skúmavke pri 18-25 °C 8 hodín, pri 2-8 °C 3 dni, pri 20 °C 1 mesiac.
Vykonávanie analýzy
1. Uskutočnenie elektroforézy
1.1. suché membrány opatrne položte na povrch elektroforézneho pufra, vyhýbajte sa ich rýchlemu ponoreniu a podržte, kým sa úplne nezmáčajú. Navlhčené membrány jemne vysajte medzi hárkami hrubého filtračného papiera, aby ste zabránili ich vyschnutiu. Pred aplikáciou vzoriek je žiaduce vykonať predforéznu fázu. Za týmto účelom by sa membrána mala umiestniť do elektroforetickej komory a prúd by mal byť zapnutý vo zvolenom režime na 10 minút. Fáza predforézy môže byť nahradená predĺženým namáčaním membrány v tlmivom roztoku (niekoľko hodín).
1.2. pomocou aplikátora naneste analyzované vzorky krvného séra vo vzdialenosti 2-3 cm od okraja katódy membrány. Vložte membránu do elektroforetickej komory a pripojte prúd.
2. Elektroferogramové spracovanie
2.1. farbivo Crimson S.
Po vypnutí prúdu opatrne preneste membránu do roztoku farbiva na 3-5 minút, potom dvakrát na 3 minúty do 5-7% roztoku octová kyselina(pred bielením pozadia).
1.2. spracovať elektroforegram pomocou skenera a počítačového programu.
4. Tymolový test
Princíp metódy
Sérové beta-globulíny, gama-globulíny a lipoproteíny sa vyzrážajú pri pH 7,55 tymolovým činidlom. V závislosti od množstva a vzájomného pomeru proteínových frakcií vzniká pri reakcii zákal, ktorého intenzita sa meria turbidimetricky.
Klinická a diagnostická hodnota:
Tymolový test je vhodnejší na funkčnú štúdiu pečene ako vzorky rezistentné voči koloidom. Predpokladá sa, že je pozitívny v 90-100% prípadov Botkinovej choroby (už v preikterickom štádiu a v anikterickej forme) a pri toxickej hepatitíde. Reakcia je pozitívna pri posthepatitíde a postnekrotickej, najmä ikterickej cirhóze (na rozdiel od iných foriem cirhózy), kolagénových ochoreniach, malárii a vírusových infekciách. Pri obštrukčnej žltačke je (v 75% prípadov) negatívna, čo má diferenciálnu diagnostickú hodnotu.
Pri obštrukčnej žltačke sa test stáva pozitívnym iba vtedy, ak je proces komplikovaný parenchymálnou hepatitídou. Na odlíšenie obštrukčnej žltačky od parenchýmu veľký význam má použitie tymolového testu s Bursteinovým testom (na beta- a pre-betalipoproteíny).
Pri parenchýmovej žltačke sú oba testy pozitívne, pri obštrukčnej žltačke je tymolový test negatívny, Burshteinov test je ostro pozitívny.
Na stanovenie celkového proteínu v krvnom sére zvieraťa odoberte žilovej krvi do špeciálnej skúmavky s aktivátorom zrážanlivosti, pozri prílohu (tabuľka 2). Pred darovaním krvi je zviera držané 8 hodín na hladovej diéte. Darujte krv pred užitím liekov, ktoré môžu ovplyvniť výsledok štúdie. Kvalitatívne zloženie bielkovín krvnej plazmy je veľmi rôznorodé. Celková bielkovina je rozdelená do samostatných frakcií elektroforézou na základe separácie proteínových zmesí na základe rôznych hmotnostných hodnôt a špecifického náboja jedného proteínu. Počas elektroforetickej separácie v závislosti od nosiča nie je počet proteínových frakcií celkového proteínu rovnaký. Menší počet frakcií sa získa pri elektroforéze na papieri 5 frakcií, kým pri elektroforéze na agarovom géli, polyakrylamidovom géli môže byť počet proteínových frakcií výrazne vyšší až do 20 frakcií. Hlavné frakcie sú albumíny a globulíny.
albumíny sú syntetizované v pečeni a sú to jednoduché proteíny obsahujúce až 6 aminokyselinových zvyškov. Sú vysoko rozpustné vo vode. Normalizovaná hodnota je 56,5 - 66,8 (Albumín v krvnom sére tvorí približne 60 % celkových bielkovín. Albumíny sa syntetizujú v pečeni (približne 15g/deň), ich polčas rozpadu je približne 17 dní. Onkotický tlak v plazme je 65 -80% kvôli albumínu Albumíny plnia dôležitú funkciu biologického transportu mnohých účinných látok najmä hormóny. Sú schopné viazať sa na cholesterol, bilirubín. Veľká časť vápnika v krvi je tiež spojená s albumínom. Albumíny sú schopné kombinovať s rôznymi liekmi.
Funkcia albumínov:
Udržiavanie koloidného osmotického tlaku plazmy:
Stálosť koncentrácie vodíkových iónov;
Transport rôznych látok (bilirubín, mastné kyseliny minerálne zlúčeniny a liečivá).
Albumíny krvnej plazmy možno považovať aj za určitú rezervu aminokyselín pre syntézu životne dôležitých špecifických bielkovín pri stavoch nedostatku bielkovín v strave. Albumíny zadržiavajú vodu v krvnom obehu. Pri zápale obličiek albumíny ako bielkoviny s najnižšou molekulovou hmotnosťou prenikajú do moču predovšetkým z krvnej plazmy (molekulárna hmotnosť albumínov je asi 60 000 - 66 000). Normálne tvorí albumín 35 – 55 % z celkového množstva bielkovín krvnej plazmy.
Plazmatické globulíny- je to súprava rôzne bielkoviny. Počas elektroforézy sa pohybujú po albumíne. Vzťah s lipidmi poskytuje komplex globulínov s rozpustným stavom a transportom do rôznych tkanív. Na základe elektroforetickej pohyblivosti sa globulíny delia na b2-, b1-, c- a g-globulíny. (b- a c-globulíny sa syntetizujú v pečeni a sú aktívnymi nosičmi rôznych krvných látok). V období intenzívneho rastu zvieraťa v krvi dochádza k relatívnemu poklesu hladiny albumínu a zodpovedajúcemu zvýšeniu hladiny b- a g-globulínov. B-globulíny aktívne interagujú s krvnými lipidmi g-globulíny, najmenej pohyblivá a najťažšia frakcia zo všetkých globulínov, sú syntetizované B-lymfocytmi pochádzajúcich z časti kmeňových buniek kostnej drene alebo z nich vytvorených plazmatických buniek. Vykonávajú ochrannú funkciu, sú to ochranné protilátky (imunoglobulíny). U vtákov boli študované tri triedy imunoglobulínov: IgG, IgM, IgA, u cicavcov je ich päť - IgG, IgM, IgE, IgD. IgA. Z kvantitatívneho hľadiska prevláda IgG v krvi (80 %). Pomocou metódy imunoelektroforézy sa v krvnom sére izoluje až 30 proteínových frakcií. Všetky imunoglobulíny pozostávajú z dvoch ťažkých polypeptidových reťazcov (M. m. 53 000-75 000) a dvoch ľahkých reťazcov (M. M. 22 500) spojených tromi disulfidovými mostíkmi. Každý typ imunoglobulínu je schopný špecificky interagovať iba s jedným špecifickým antigénom.
Krvné sérum novonarodených teliat, jahniat, kozliatok, prasiatok, žriebät prakticky neobsahuje protilátky. Novonarodené zvieratá nie sú schopné syntetizovať protilátky v prvých dňoch života. Objavujú sa až po vstupe kolostra do gastrointestinálneho traktu. Nezávislá syntéza týchto ochranných proteínov v kostnej dreni, slezine a lymfatických uzlinách sa zaznamenáva od veku 3 alebo 4 týždňov zvieraťa. Preto je dôležité dávať novorodencovi piť kolostrum, ktoré obsahuje 10-20-krát viac imunoglobulínov ako bežné mlieko. Imunoglobulíny kolostra sú schopné preniknúť bez štiepenia cez pinocytózu do črevnej steny a dostať sa do krvného obehu, čím vytvárajú ochranu tela (kolostrálnu alebo kolostrálnu imunitu).
T-lymfocyty spolupracujú s B-lymfocytmi pri syntéze imunoglobulínov, inhibujú imunologické reakcie a lyzujú rôzne bunky. V krvi tvoria T-lymfocyty 70%, B-lymfocyty - asi 30%. Na syntézu imunoglobulínov je potrebná aj tretia populácia buniek – makrofágy. Pôsobia ako primárne faktory nešpecifickej ochrany, vďaka schopnosti zachytávať a tráviť mikroorganizmy, antigény, imunitné komplexy a prenášať o nich informácie T- a B-lymfocytom. Makrofágy pôsobia ako sprostredkovatelia medzi všetkými účastníkmi procesu pomocou lymfokínov a monokínov produkovaných bunkami.
B-lymfocyty tvoria protilátky len ako odpoveď na určité antigény (baktérie, vírusy), ktoré sa dostali do tela. Na to sa štruktúra antigénu a globulínového receptora na povrchu lymfocytu musia navzájom zhodovať, ako kľúč k zámku.
Koncentrácia g-globulínov sa zvyšuje v krvnom sére pri chronických infekčné choroby, pri imunizácii, gravidite zvierat.
Množstvo proteínov krvnej plazmy vykonáva špecifické funkcie. Medzi nimi by sa mali rozlišovať proteíny ako transferín, haptoglobín, ceruloplazmín, properdín, komplementový systém, lyzozým, interferón.
Transferíny sú β-globulíny syntetizované v pečeni. Naviazaním dvoch atómov železa na molekulu proteínu transportujú tento prvok do rôznych tkanív, regulujú jeho koncentráciu a udržujú ho v tele. Podľa veľkosti náboja molekuly proteínu, zloženia aminokyselín sa rozlišuje 19 typov transferínov, ktoré sú spojené s dedičnosťou. Transferíny môžu mať aj priamy bakteriologický účinok. Koncentrácia transferínov v krvnom sére je asi 2,9 g/l. Nízke hladiny transferínov v krvnom sére môžu byť spôsobené nedostatkom bielkovín v potrave zvieraťa.
Haptoglobín je súčasťou b2-globulínu syntetizovaného v pečeni a obsahuje meď (0,3 %). Väzbou medi ceruloplazmín zabezpečuje správnu hladinu tohto mikroelementu v tkanivách. Podiel ceruloplazmínu tvorí 3 % z celkového množstva medi v tele zvieraťa. Pôsobí ako enzým a ako oxidant. Ceruloplazmín je oxidáza adrenalínu, kyselina askorbová. Dôležitá charakteristika ceruloplazmínu je jeho schopnosť oxidovať železo v tkanivách na Fe3+ a ukladať ho v tejto forme.
Systém komplementu je komplex srvátkových bielkovín globulínovej povahy, ktorý sa považuje za systém proenzýmov, ktorých aktivácia vedie k cytolýze, deštrukcii antigénu. Syntéza komplementového systému, ktorý má až 25 rôznych proteínov, sa uskutočňuje hlavne mononukleárnymi fagocytmi, ako aj histiocytmi. Ide o komplexný efektorový systém sérových proteínov, ktorý zohráva dôležitú úlohu pri regulácii imunitnej odpovede a udržiavaní homeostázy, z hľadiska fylogenézy a ontogenézy vznikol skôr ako imunitný systém. Ako súčasť komplementového systému bolo podrobne študovaných 11 komponentov. Kaskáda enzymatických reakcií spúšťaná komplexom antigén-protilátka, ktorá vedie k postupnej aktivácii všetkých zložiek zložky, počnúc prvou, sa nazýva klasická aktivačná dráha. Bypass, ktorý sa vyznačuje aktiváciou neskorších zložiek komplementu, počínajúc od C3, sa nazýva alternatíva. K deštrukcii mikrobiálnej bunky dochádza až po aktivácii zložky C4. Koncové proteíny komplementového systému, ktoré sekvenčne reagujú medzi sebou, sa zavádzajú do lipidovej dvojvrstvy a poškodzujú bunková membrána s tvorbou membránových kanálov, čo vedie k osmotickým poruchám, penetrácii protilátok a komplementu do bunky, po ktorej nasleduje lýza intracelulárnych membrán. Všeobecne sa uznáva, že obsah komplementu v krvnom sére je jedným z najobjektívnejších ukazovateľov stavu nešpecifickej obranyschopnosti organizmu.
Properdin je glykoproteín typu g-globulín s molekulovou hmotnosťou asi 184 000. Tvorí 0,3 % z celkového množstva bielkovín krvného séra. Vďaka vysokej tepelnej labilite sa properdin zničí za 30 minút pri 56 °C. Miesto syntézy properdínu nebolo definitívne objasnené. Je pravdepodobné, že na jeho syntéze sa podieľa lymfoidné tkanivo. Properdin sa objaví prvý baktericídny účinok proti gramnegatívnym mikróbom. Na prejavenie aktivity properdínu je potrebná povinná prítomnosť prvých štyroch zložiek komplementu a iónov horčíka, zodpovedajúcich systému properdinu. Bol odhalený vzťah medzi úrovňou systému properdinu a stupňom odolnosti živočíšneho organizmu.
Interferón je proteín s nízkou molekulovou hmotnosťou (M. m. 24 000-36 000), ktorý je syntetizovaný a vylučovaný tkanivovými bunkami v reakcii na prenikanie vírusov do nich. Z buniek interferón ľahko preniká do krvného obehu a je distribuovaný do všetkých orgánov a tkanív. Po vstupe vírusu do bunky sa uvoľní jednovláknová RNA a na jej základe sa syntetizuje dvojvláknová RNA. Týmto spôsobom sa získa RNA a indukuje syntézu interferónu. Interferón sa viaže na plazmatickú membránu iných buniek v tele a stimuluje ich schopnosť odolávať vírusová infekcia. Antivírusový účinok interferónu je spojený s jeho schopnosťou aktivovať syntézu inhibítorov a enzýmov v bunkách, ktoré blokujú transláciu vírusovej IRNA a následne reprodukciu vírusu. Interferón má tiež imunoregulačné vlastnosti. Existujú tri typy interferónov: a-interferón (leukocyt), ktorý má antivírusové a antiproliferatívne, protinádorové účinky; β-interferón (fibroblast), ktorý má najmä protinádorové a antivírusové účinky; g-interferón (lymfocytárny alebo imunitný), ktorý má prevažne imunomodulačné vlastnosti.
Fyziologické úlohy krvných bielkovín sú početné, hlavné sú nasledovné:
Udržiavať koloidno-onkotický tlak, udržiavať objem krvi, viazať vodu a zadržiavať ju, zabrániť jej odchodu z krvného obehu;
Zúčastnite sa procesov zrážania krvi;
Udržujte stálosť pH krvi, tvoriac jeden z tlmivých systémov krvi;
V spojení s množstvom látok (ChS, bilirubín atď.), Ako aj s liekmi, ich dodávajú do tkanív.
Udržiavať normálnu hladinu katiónov v krvi vytváraním nedialyzovateľných zlúčenín s nimi (napríklad 40 – 50 % vápnika v sére je spojených s bielkovinami, významná časť železa, medi, horčíka a iných stopových prvkov je tiež spojená s proteíny);
Hrať dôležitú úlohu v imunitných procesoch;
Slúži ako rezerva aminokyselín;
Plnia regulačnú funkciu (hormóny, enzýmy a iné biologicky aktívne bielkovinové látky).
Klinická a diagnostická hodnota:
1) Normoproteinémia - normálny obsah celkových bielkovín;
2) Hypoproteinémia – nízky obsah celkových bielkovín;
3) Hyperproteinémia - zvýšený obsah veverička;
Zmena celkového krvného proteínu môže byť relatívna a absolútna.
Hyperproteinémia:
1. Vážna dehydratácia.
2. So zhrubnutím krvi v dôsledku miernej straty tekutiny, čo sa stane, keď hojná hnačka, zvýšené potenie, neodbytné vracanie, diabetes insipidus, s cholerou, črevnou obštrukciou, generalizovanou peritonitídou, ťažkými popáleninami, nedostatkom vody.
3. Pri chronickej polyartritíde a niektorých a niektorých chronických zápalových procesoch.
4. Pretrvávajúca hyperproteinémia do 12 % a vyššia sa pozoruje pri mnohopočetnom myelóme (plazmacytóme), Vandelstromovej makroglobulinémii, pri ktorej sa objavujú ďalšie ložiská v plochých kostiach lebky a tvorba „abnormálnych“, patologických proteínov – paraproteínov.
Hypoproteinémia je takmer vždy spojená s hypoalbuminémiou a hyperproteinémia s hyperglobulinémiou.
Telo kompenzuje hypoalbuminémiu hyperglobulinémiou (aj keď nedochádza k podráždeniu retikuloendotelového systému), aby sa udržala hladina koloidného osmotického tlaku. Naopak, nárast globulínov je kompenzovaný hypoalbuminémiou.
Dôležitou diagnostickou hodnotou je objasnenie kvantitatívnych vzťahov medzi jednotlivými frakciami krvného séra. Ich štúdium umožňuje diferenciáciu chorôb aj vtedy, keď je obsah celkového proteínu v sére nezmenený.
Relatívna hyperproteinémia- spojené so znížením objemu cirkulujúcej krvi v dôsledku dehydratácie.
Absolútna hyperproteinémia- pozorované pri nadmernej syntéze patologických bielkovín, zvýšenej tvorbe imunoglobulínov, zvýšenej syntéze bielkovín akútna fáza zápal.
Okrem obsahu celkových bielkovín je stanovenie bielkovinových frakcií dôležité pre diagnostiku rôznych patologických procesov. Porušenie optimálneho pomeru medzi nimi sa nazýva dysproteinémia. Najvýraznejšie dysproteinémie sa vyskytujú pri poškodení orgánov, kde sa syntetizujú proteíny. Zvlášť často klesá množstvo albumínov (hypoalbuminémia), ktoré plnia dôležité funkcie pri udržiavaní koloidného osmotického tlaku krvi, regulujú výmenu vody medzi krvou a intersticiálnym priestorom, viažu a transportujú sacharidy, lipidy, hormóny, vitamíny, minerály.
Zvýšenie množstva albumínu je zriedkavé - hlavne pri dehydratácii. Pri zmenách množstva albumínov sa narúša ich pomer s globulínmi (mení sa albumín-globulínový koeficient), ktorý sa u zdravých zvierat pohybuje od 0,7 do 1,0 (u psov 1,2).
Množstvo alfa-globulínov sa zvyšuje pri akútnych zápalových procesoch (reumatizmus, pneumónia, glomerulonefritída, artritída) a pri exacerbácii ochorení chronický priebeh(tuberkulóza, hepatitída), keďže do tejto skupiny patria proteíny „akútnej fázy“ (C-reaktívny proteín, ceruloplazmín, haptoglobín, alfa-1-antitrypsín, alfa-2-makroglobulín, kyslý alfa-1-glykoproteín). Ich hladina zriedkavo klesá, najčastejšie pri ťažkých dystrofických procesoch v pečeni, kde sa čiastočne syntetizuje alfa-globulín.
Zvýšenie počtu beta-globulínov sa pozoruje najčastejšie pri infekciách s chronickým priebehom, ochoreniach obličiek (nefróza, glomerulonefritída), cirhóze pečene. Zloženie beta-globulínových frakcií zahŕňa fibrinogén, ktorého obsah sa zvyšuje pri krupóznej pneumónii, bronchopneumónii, leukémii, septická endokarditída a zníženie - pri ochoreniach pečene, kde sa syntetizuje.
Frakcie gama globulínov obsahujú väčšinu protilátok (imunoglobulínov), ktoré poskytujú humorálnu ochranu organizmu, takže ich množstvo v krvnom sére závisí od morfologickej zrelosti a funkčnej užitočnosti imunoreaktívneho tkaniva.
Nízka hladina gama globulínov sa vyskytuje u novorodencov, najmä v prvý deň života, keďže neprechádzajú placentárnou bariérou, ale do tela sa dostávajú len s kolostrom (fyziologická imunodeficiencia), preto pri udržiavaní ich hladiny kvalita mlieko, včasnosť jeho pitia majú veľký význam, stav sliznice tenké črevo. Syntéza vlastných imunoglobulínov začína od 5.-7. dňa života a optimálnu hladinu dosahuje až vo veku 6 mesiacov, takže mláďatá sú náchylné na mnohé ochorenia (salmonelóza, streptokokóza, pasteurelóza, vírusové respiračné ochorenia, zápaly pľúc). Pokles obsahu gama globulínov sa pozoruje aj s rôzne choroby ktoré sú sprevádzané léziami imunitného systému (myelóm, lymfocytová leukémia, Gumborova choroba), stratou imunoglobulínov pri nefróze, enteritíde, chronickom krvácaní v dôsledku potlačenia funkcie imunitného systému rôznymi toxínmi, lieky(imunosupresíva).
Hypoproteinémia:
Nedostatočný príjem potravinových bielkovín, zvyčajne pozorovaný pri podvýžive, hladovaní, nádoroch, zúžení pažeráka, dysfunkcii gastrointestinálneho traktu (v dôsledku zhoršenia trávenia a vstrebávania bielkovinových zložiek potravy), napríklad pri dlhotrvajúcich zápalových procesoch čriev .
Podľa A.A. Pokrovského môže niekedy aj nevyvážené zloženie aminokyselín v potrave viesť k hypoproteinémii.
Na zabezpečenie normálnych životných procesov telo využíva albumínovú frakciu bielkovín krvnej plazmy. Pri zvýšenej konzumácii albumínu (spôsobujúceho najmä onkotický krvný tlak) vzniká takzvaný onkotický alebo hladový edém. Akékoľvek zníženie obsahu bielkovín v krvnej plazme pod 5% je často sprevádzané hypoproteinemickým edémom tkaniva.
2. Zníženie procesov biosyntézy bielkovín (chronická parenchymálna hepatitída, akútne a chronické ochorenia, dlhotrvajúce hnisavé procesy, zhubné novotvary, ťažká tyreotoxikóza atď.).
3. Strata bielkovín organizmom pri akútnom a chronickom krvácaní, s prudko zvýšenou priepustnosťou kapilárnych stien (s ich toxickým poškodením, kedy sa krvné bielkoviny uvoľňujú do tkanív), s krvácaním, tvorbou rozsiahlych exsudátov, seróznych výpotkov dutiny a edémy.
Uvoľňovanie bielkovín (hlavne albumínov) z krvného obehu nastáva, keď je obličkový filter narušený v dôsledku organické choroby obličky (najmä nefróza a amyloidóza), pri ktorých sa bielkovina takmer vždy nachádza v moči, ako aj popáleniny.
4. Defektoproteinémia (albuminémia) - vrodená absencia alebo nedostatočný obsah ceruloplazmínu v krvnej plazme pri Wilsonovej chorobe.
5. U žien počas laktácie a posledných mesiacov tehotenstva.
6. Nefrotický syndróm
7. Kwashiorkor (akútny nedostatok bielkovín)
8. Syndróm retenčnej soli
Relatívna hypoproteinémia- spojené so zvýšením objemu cirkulujúcej krvi v dôsledku vody (s anúriou, srdcovou dekompenzáciou, zvýšenou syntézou antidiuretického hormónu hypotalamu).
Absolútna hypoproteinémia- pozorované pri nedostatočnom príjme bielkovín v tele v dôsledku hladovania, nedostatočnej syntéze bielkovín pri chronických zápalových procesoch pečene, vrodených poruchách syntézy jednotlivých krvných bielkovín, zvýšenom rozklade bielkovín v organizme a tvorbe výraznej množstvo exsudátu.
Bibliografia
1. Babenko O. O., Savchenko T. G., Reznichenko L. V. Prevencia hypovitaminózy A v chove ošípaných. / T. G. Savchenko. / Veterinárne. - Č. 12. - 2008. - S. 38 - 39.
2. Zaitsev S. Yu., Biochemistry of animals / Yu. V. Konopatov - Petrohrad: "Lan", 2004., 384 s.
3. Severina E. S., Biochémia 2. vydanie / E. S. Severina - M .: "Med" 2004., 184 s.
Aplikácia
|
Druh zvieraťa |
Celková bielkovina, g/l |
Podiely bielkovín v percentách |
||||
|
albumíny |
Globulíny |
|||||
|
Hovädzí dobytok |
||||||
Tab. 2. Biochemické parametre krvného séra v rôzne druhy zvierat
|
Alkalický fosfát |
||||||||||||
|
Kreatinínkináza |
||||||||||||
|
Bikarbonáty |
||||||||||||
|
Celkový bilirubín |
||||||||||||
|
chloridy (Cl-) |
||||||||||||
|
Cholesterol |
||||||||||||
|
Kreatinín |
||||||||||||
|
Proteínový albumínový globulín |
55-75 26-40 21-37 |
57-80 24-38 24-47 |
62-82 28-39 29-49 |
57-79 25-38 24-46 |
58-83 23-40 39-60 |
59-78 27-37 32-50 |
61-75 23-36 27-44 |
54-83 24-46 15-28 |
55-70 35-44 17-35 |
|||
|
sodík (Na+) |
||||||||||||
|
Močovina |
Hostené na Allbest.ru
...Podobné dokumenty
Tvorené zložky krvi: erytrocyty, leukocyty, hemoglobín, hematokrit. Metóda počítania počtu erytrocytov na jednotku objemu krvi v Goryaevovej komore, technika odberu krvi. Funkcie: trofické, vylučovacie, dýchacie, ochranné, korelačné.
praktické práce, pridané 10.09.2009
Pečeň je najmasívnejšia žľaza v tele zvierat a ľudí. Klasifikácia a štrukturálne znaky pečene u rôznych živočíšnych druhov. Krvné zásobenie a funkcia pečene, popis štruktúry pečeňový lalôčik, špecifické vlastnosti. Štruktúra žlčových ciest.
abstrakt, pridaný 10.11.2010
Veľké krvné skupiny dobytka ako základ výberového konania. Testovanie krvných skupín a ich použitie na určenie línií a plemien. Využitie imunogenetického monitorovania a biotechnológie transplantácie embryí v reprodukcii.
ročníková práca, pridaná 8.2.2010
Bioekologické vlastnosti a agrotechnika kukurice. Technológia výroby kŕmnych bielkovín z kukurice. Charakteristika jednobunkových mikroorganizmov. Zariadenie používané na výrobu kŕmnych kvasníc. Automatizácia výrobných procesov.
práca, pridané 14.06.2015
Moderné pohľady o imunitnom systéme a nešpecifickej odolnosti organizmu. Posúdenie stavu imunity a korektívna terapia v komplexná liečba chirurgicky choré zvieratá. Špecifické znaky krvného imunogramu pri hnisavých zápaloch.
abstrakt, pridaný 22.12.2011
Popis bielkovín, tukov, sacharidov, vitamínov, minerálov a stopových prvkov. Hodnotenie nutričnej hodnoty krmiva. Metódy na štúdium metabolizmu v tele zvierat, založené na zákone zachovania energie. Rovnováha dusíka, uhlíka a energie u kravy.
abstrakt, pridaný 15.06.2014
Ekonomické škody spôsobené muchami pri chove zvierat, prostriedky a metódy na reguláciu ich počtu. Zásoby hodnotných kŕmnych bielkovín v netradičných krmivách a problematika využitia vtáčieho trusu. Pestovanie a využitie muchy domácej, jej druhy.
dizertačná práca, pridaná 23.07.2010
Obehový a lymfatický systém, príp cievny systém. všeobecné charakteristiky prekrvenie jednotlivých orgánov. Zložené zložky krvi a ich hlavné funkcie. lymfatický systém cicavcov. Priebeh a štruktúra lymfatických ciev.
abstrakt, pridaný 19.06.2014
Vlastnosti prípravných prác na mieste pred zberom zemiakov: určenie celkového stavu celej výsadby, stupeň vývoja kríkov, ich náchylnosť na pleseň. Metódy na určenie približnej hodnoty úrody. Technológia a načasovanie zberu.
článok, pridaný 3.3.2010
Hlavné funkcie krvi: trofické (výživné), vylučovacie (vylučovacie), dýchacie (respiračné), ochranné termoregulačné, korelačné. Krvná plazma, plazmatické bielkoviny, nebielkovinové zlúčeniny obsahujúce dusík, organické látky bez dusíka.
Glykoproteíny dostali svoj názov od slova „glukos“ – sladké, pretože sa zistilo, že obsahujú sacharidy. Protetickú skupinu predstavujú rôzne sacharidy a ich deriváty, jej väzba s proteínom je kovalentná, sacharidovo-peptidová.
Teraz sa zistilo, že takmer všetky bielkoviny (s výnimkou krvných albumínov) obsahujú malé množstvo sacharidov, a preto medzi glykoproteíny patria len tie bielkoviny s koncentráciou sacharidov vyššou ako 4 %.
Všetky glykoproteíny majú vysokú molekulovú hmotnosť (až niekoľko miliónov D), kyslé vlastnosti, rozpustné vo vode, slabé roztoky neutrálnych solí a zásad, zrážané kyselinami a majú vysokú viskozitu. Sú termostabilné, pretože sacharidy, ktoré ich tvoria, výrazne zvyšujú odolnosť molekúl voči rôznym chemikáliám a teplu, chránia ich pred pôsobením proteáz, čím určujú biologická úloha glykoproteíny. Sacharidy dávajú proteínom väčšiu špecifickosť, vďaka týmto skupinám dokážu makromolekuly glykoproteínu rozoznať iné štruktúry.
Glykoproteíny sa nachádzajú vo veľkých množstvách v medzibunkovej látke spojivové tkanivo, krvná plazma, sliny a iné sekréty, ako súčasť cytoplazmatických a rôznych intracelulárnych membrán, v cytosóle. Úloha glykoproteínov je rôznorodá. Prenášajú hydrofóbne látky a ióny kovov; ako súčasť membránových receptorov zabezpečujú špecifickosť bunkových kontaktov, ovplyvňujú diferenciáciu tkanív, podieľajú sa na imunologické reakcie, vykonávať ochrannú úlohu, pokrývajúc sliznice.
Delia sa na pravé glykoproteíny a proteoglykány. Toto delenie je založené na inom % pomere proteínovej časti a protetickej skupiny, ako aj na štruktúre protetickej skupiny.
1. Pravé glykoproteíny, štruktúra, zástupcovia: mucíny; imunoglobulíny; proteíny, ktoré určujú krvnú skupinu; hormóny; transportné proteíny; enzýmy; receptory, ich význam, distribúcia.
Ako súčasť skutočných glykoproteínov proteínová časť predstavuje asi 80 % a podiel protetickej skupiny je asi 20 %. V pravých glykoproteínoch predstavujú prostetickú skupinu polysacharidy, ktoré nemajú pravidelnú štruktúru. Protetická skupina pravých glykoproteínov zahŕňa rôzne monosacharidy a ich aminoderiváty, neuramínové alebo sialové kyseliny v rôzne kombinácie a pomery, t.j. protetická časť pravých glykoproteínov nemá pravidelnú štruktúru. Skutočné glykoproteíny sú široko distribuované v tele a vykonávajú rôzne funkcie.
Skutočné glykoproteíny zahŕňajú: mucíny, proteíny, ktoré určujú krvnú skupinu; receptory, enzýmy, hormóny, transportné proteíny.
Mucins- sú to hlienové bielkoviny, nachádzajúce sa v ústnej dutine, pokrývajú všetky sliznice. Pozostávajú z jednoduchého proteínu a do prostetickej skupiny patria monosacharidy, hexozamíny, kyseliny sialové a neuramínové v rôznych množstvách a v rôznych kombináciách. Z monosacharidov v zložení mucínov sú: glukóza, galaktóza, fukóza atď. Viskozita mucínov závisí od množstva kyselín sialových. Hodnota mucínov: ochranná - pokrýva sliznice tráviaceho traktu, dýchacieho, močového systému - chránia ich pred vysychaním a pred vystavením fyzikálnym a chemickým faktorom.
Bielkoviny, ktoré určujú krvnú skupinu.
Proteíny, ktoré podľa štruktúry prostetickej skupiny určujú skupinovú špecifickosť krvi, patria medzi pravé glykoproteíny, ale líšia sa od nich vysokým (až 85%) obsahom sacharidov, prítomnosťou prostetickej skupiny acetylglukózamín v molekule a veľmi zvláštna konštrukcia proteínovej časti, ktorá sa zjavne podieľa na udržiavaní určitej konformácie sacharidových reťazcov. Zvláštnosť bielkovinovej časti spočíva v tom, že 2/3 všetkých aminokyselín tvoria 4 aminokyseliny: tre, pro, ser, ala, t.j. kvantitatívne zloženie bielkovín, bez ohľadu na ich špecifickosť, je veľmi podobné. Antigénna aktivita týchto proteínov je určená nasledujúcou sekvenciou sacharidov na koncoch sacharidového reťazca: D-galaktóza-N-acetylglukózamín-D-galaktóza-N-acetylglukózamín. Krvná skupina závisí od toho, ktorý sacharid je pripojený k tomuto fragmentu. Pre látku H je to fukóza, pre látku A je to fukóza a N-acetylgalaktózamín, ktorý určuje A-špecifickosť, pre látku B fukóza a terminálna galaktóza, ktorá určuje B-špecifickosť. Rozdiely v špecifickosti uhľohydrátových reťazcov možno teda dosiahnuť pripojením fukózy, N-acetylgalaktozamínu alebo galaktózy na terminálny fragment a látku H možno považovať za prekurzor látok špecifických pre skupinu A a B. Kompletná sérologická reaktivita skupiny -špecifické látky je možné len vtedy, ak je zachovaná celistvosť celej molekuly týchto zlúčenín.
Receptory nachádza sa na vonkajšom povrchu membrán, cytoplazma v membránach organel. Niektoré enzýmy a niektoré hormóny obsahujú sacharidy a medzi glykoproteíny patria aj proteíny ako trankortín, haptoglobín, imunoglobulíny.
2. Proteoglykány, štruktúra, zástupcovia, význam.
V molekule proteoglykánu je naopak podiel bielkovín od 2-2,3% do 10% a sacharidová časť je 90-98%. Proteoglykány sú bežné sacharidy.
Proteoglykány – komplexné bielkoviny, sa nachádzajú v základnej látke spojivového tkaniva. Pretože obsahujú veľké množstvo kyselín vo forme prostetickej skupiny, sú to polyanióny a podieľajú sa na distribúcii a difúzii vody a katiónov. Ako základná membrána sa proteoglykány podieľajú na distribúcii živín. Spojením so štrukturálnymi proteínmi tvoria "molekulárne sito" a tiež tvoria rozdelené priestory (domény), v ktorých sa nachádza voda, vďaka týmto priečkam sa voda nepohybuje. Objem buniek a tkanív závisí od proteoglykánov. Protetická skupina týchto proteínov sa nazýva glykozaminoglykány (GAG). Delia sa na tri typy: hyalurónová, chondroitín kyselina sírová, heparín.
4. Protetická skupina proteoglykánov - glykozaminoglykány - (GAGs) chondroitín sírová, kyselina hyalurónová, heparín. Pojem štruktúry, význam.
Proteoglykány obsahujú malú (2-5%) proteínovú časť a prostetickú skupinu reprezentovanú glykozaminoglykánmi (GAG). Posledne menované majú pravidelnú štruktúru, t. j. pozostávajú zo striedajúcich sa disacharidov, medzi ktoré patria urónové kyseliny a acetylhexozamíny (obr. 7). Existuje 6 typov GAG - kyselina hyalurónová, chondroitín sulfáty A, B, C, keratánsulfáty a heparín, ktoré sa navzájom líšia povahou urónových kyselín, hexozamínov, stupňom sulfatácie, typom chemickej väzby spájajúcej monoméry, molekulová hmotnosť, vlastnosti. V tabuľke sú uvedené hlavné glykozaminoglykány ľudských tkanív.
Tabuľka Chemické zloženie glykozaminoglykány
GLYKOPROTEIDY (glykoproteíny) sú biopolyméry pozostávajúce z kovalentne viazaných peptidových (proteínových) a sacharidových zložiek. V prípadoch, keď sacharidová časť molekuly G. pozostáva z glukózového zvyšku alebo zvyškov, G. sa nazývajú glukoproteíny. G. nachádza v tele zvierat, baktérií a rastlín a predstavuje najrozsiahlejšiu a dobre preštudovanú triedu zlúčenín obsahujúcich sacharidy. G. sú súčasťou bunkovej membrány, cirkulujú v krvnom obehu ako transportné molekuly – napr. transferín, ceruloplazmín (pozri Krv). Glykoproteíny zahŕňajú niektoré hormóny, enzýmy a imunoglobulíny. Jeden z prvých návrhov, prečo proteíny potrebujú sacharidovú zložku, vytvoril Eylar (E. H. Eylar, 1965). Pri zvažovaní pomerne veľkého počtu G. zistil, že všetky sú mimo bunky, v krvnom obehu, slinách, mlieku a iných tajomstvách. Na základe tejto skutočnosti navrhol hypotézu, podľa ktorej je sacharidová zložka akýmsi prechodom, po prijatí to-rogo musí molekula proteínu nutne opustiť bunku. Neskôr sa však získali údaje naznačujúce, že mnohé intracelulárne proteíny sú G. a sú súčasťou rôznych intracelulárnych membrán a cytoplazmatickej membrány. Okrem toho sa v rôznych sekrétoch a krvnom sére našli neglykozylované proteíny (albumín, a-laktalbumín, chymotrypsinogén atď.). Eilarova hypotéza teda nemôže tvrdiť, že je univerzálnym riešením otázky úlohy sacharidovej zložky. V ďalších štúdiách sa zistilo, že ak sa kyselina sialová enzymaticky odštiepi zo sacharidovej časti množstva sérových G. (ceruloplazmín, haptoglobín, fetuín, orosomukoid), potom sa polčas týchto asialo-glykoproteínov zníži z niekoľkých desiatky hodín až niekoľko minút. V tomto prípade sa všetky tieto asialo-glykoproteíny viažu na membrány parenchýmových pečeňových buniek.
Množstvo glykoproteínov - hormónov (napr. gonadotropné a folikuly stimulujúce hormóny) po odstránení sialického až - t veľmi rýchlo zmizne z krvného obehu a podobne ako G. v sére je v pečeňových bunkách. V dôsledku toho sa hormón neviaže na cieľové bunky a jeho biol, pôsobenie je výrazne znížené.
Biochemické metódy stanovenia glykoproteínov
V biol, tekutinách, krvi a moči je zmes rôznych G. Na rozdelenie každého z nich v čistej forme je potrebná náročná technika, dlho, čo sťažuje jeho použitie na sériové štúdie. Preto je v klinovej praxi najbežnejšia úplná definícia G. jednou zo zložiek sacharidovej časti v nich obsiahnutých - hexózy, hexozamíny, fukóza, sialický to-tam alebo schopnosťou dať jódovú reakciu na - to - Schiffovo činidlo (pozri Schiffovo činidlo).
Najpoužívanejšie metódy na stanovenie G. možno rozdeliť do dvoch hlavných skupín: chemické a elektroforetické. Pre špeciálne štúdie sa používajú chromatografické, polarografické a rádioimunologické metódy.
Väčšina chem. metódy sú založené na stanovení sacharidovej časti molekuly G. pomocou rôznych farebných reakcií založených na interakcii monosacharidu s kyselinou sírovou za vzniku derivátu furfuralu (napríklad reakcie s orcínom, anthrónom, tryptofánom, karbazolom, difenylamínom, rezorcinol, alfa-naftol). Takéto reakcie poskytujú farebný produkt s jednou z uvedených zlúčenín alebo aromatickou dusíkatou zásadou. Množstvo vytvoreného farebného produktu sa stanoví fotoelektrokolorimetriou. Najpresnejšia je metóda na stanovenie hexóz, pomocou farebnej reakcie s orcínom alebo rezorcinolom; najcitlivejšia je metóda využívajúca alfa-naftol, ktorá sa však častejšie využíva na indikatívne štúdie.
Takmer všetky metódy používané na stanovenie aminosacharidov sú založené na klasickej metóde Elsona-Morgana (1933). Princíp metódy spočíva v tom, že aminocukor reaguje s acetylacetónom v horúcom mierne alkalickom roztoku. Súčasne sa vytvorí zmes pyrolov, ktorá s činidlom para-dimetylaminobenzaldehyd dáva červenú farbu, ktorej intenzita sa stanoví fotometricky pri 530 nm. Glukozamín dáva takmer rovnakú farbu ako galaktozamín; s manozamínom je farbenie o niečo slabšie. Glukosamín hydrochlorid sa používa hlavne na zostavenie kalibračnej krivky.
Na stanovenie fukózy sa používa reakcia, pri ktorej sa k produktu interakcie G. s kyselinou sírovou pridáva chlorovodíkový cysteín.
Táto reakcia je základom takmer všetkých metód používaných na stanovenie metylpentózy (pozri Discheovu metódu).
Na detekciu a kvantitatívnu definíciu sialického to - t sa ponúka množstvo metód: ortsinová metóda s Bialovým činidlom, rezorcinolová metóda, metóda s tiobarbiturickou to - tou, difenylamínová reakcia a Hessova metóda (pozri Hessova reakcia). Najcitlivejšia a najšpecifickejšia je metóda s kyselinou tiobarbiturovou. G. elektroforézu prvýkrát zaviedli Keiv a Gronwall (E. Koiw, A. Gronwall) v roku 1952. Je opísaných množstvo modifikácií tejto metódy; spoločnou nevýhodou väčšiny z nich je porovnávacia náročnosť metódy či výrazné zafarbenie pozadia na elektroforegramoch. Princíp metódy a techniky vykonávania elektroforézy G sú rovnaké ako pri elektroforetickej separácii proteínových frakcií krvného séra na papieri (pozri Elektroforéza).
Na detekciu glykoproteínových frakcií bolo navrhnutých množstvo metód; farbenie toluidínovou modrou, koloidným železom, ancyánovou modrou atď. Avšak najbežnejší spôsob farbenia glykoproteínov Schiffovým činidlom, ktorý bol založený na reakcii (jód na - fuchzín-síru na - to), pôvodne navrhol Hotchkiss (R. D. Hotchkiss) a Mac Manus (J. F. A. McManus) za G. sfarbenie v gistole, sekcie. Princíp tejto metódy spočíva v tom, že G. sacharidové zložky sa roztokom jódu oxidujú na - vy na aldehydy a pomocou Schiffovho činidla sa aldehydy dostanú na svetlo. Na kvantitatívne stanovenie sa farebné frakcie eluujú z elektroforegramov, po ktorých nasleduje fotometria eluátov alebo sa stanovia pomocou denzitometrie (pozri).
O zdravý človek, podľa rôznych autorov je relatívny obsah G. frakcií (v %) nasledovný: albumín - 10,4-16,6; alfa 1 -globulín - 14,2-18,3; alfa2-globulín - 24,8-31,8; beta-globulín - 21,7-25,0; uglobulín - 16,0-19,2.
Najvyššie percento obsahu sacharidov je zaznamenané v globulínových frakciách, najmä v alfa2 a beta globulínoch (pozri Globulíny).
Sľubná je metóda imunoelektroforézy (pozri), ako aj metóda elektroforézy v polyakrylamidovom géli (PAGE), ktorej rozlíšenie môže byť 10-krát vyššie ako rozlíšenie elektroforézy na papieri.
Výsledky stanovenia glykoproteínov majú významnú diferenciálnu diagnostickú hodnotu pri ochoreniach spojivového tkaniva, kardiovaskulárneho systému, žel.-kiš. trakt, pečeň, obličky, pľúca. Zároveň štúdium zmien v udržiavaní týchto látok v krvnom sére a iných biol, tekutinách okrem klinu, má dáta veľký význam pre odhad aktuálneho patolu, procesu, účinnosti liečby a pre prognózu. Pri zápalových procesoch akútny reumatizmus, tuberkulóza, zápal pľúc, zápal pohrudnice, dochádza k zvýšeniu obsahu všetkých frakcií G. v krvnom sére, najmä alfa 1 - a alfa 2 globulínov. Najvyššia hodnota má definíciu absolútneho a relatívneho udržania G. v krvnom sére pri reumatizme. Koncentrácia G. v krvnom sére sa tiež zvyšuje pri glomerulonefritíde, nádoroch, nekróze a často pri cukrovke.
Histochemické metódy stanovenia glykoproteínov v tkanivách
Metódy detekcie Gistokhim, G. sú založené na identifikácii ich reaktívnych skupín, ako sú 1,2-glykolové skupiny a tiež karboxylové skupiny sialových až - t. Na fixáciu G. je možné použiť 10% roztok formalínu pri t° od 0 do 4° v priebehu 24-48 hodín. Existujú spôsoby fixácie s prídavkom niektorých solí do formalínu, ako aj rôznych katiónových detergentov (pozri), ktoré prispievajú k lepšej konzervácii polysacharidov a ich následnej histochemickej diferenciácii. Uprednostňuje sa metóda lyofilizácie rezov s následným zaliatím do parafínu. Existuje značný počet histochemických metód a ich modifikácií na detekciu polysacharidov, ale nie všetky sú dostatočne spoľahlivé a dostupné v praxi. Najspoľahlivejšia s povinným použitím kontrolných reakcií a opodstatnená z hľadiska chémie je metóda McManus-Hotchkiss-Shabadash. V laboratóriách našej krajiny sa najčastejšie používa modifikácia Shabadash. Metóda je založená na oxidácii 1,2-glykolových skupín polysacharidov jódovou soľou na vás, po ktorej nasleduje identifikácia aldehydov získaných ako výsledok reakcie fuchsín-síry na to (Schiffovo činidlo). V oblastiach lokalizácie muko- a glykoproteínov vzniká purpurovo-červené sfarbenie rôznej intenzity. Okrem týchto zlúčenín reakcia odhalí aj glykogén, glykolipidy a voľné aldehydy. Nešpecifické aldehydy sa môžu objaviť aj ako výsledok oxidácie zlúčenín s nenasýtenými väzbami počas fixácie materiálu formalínom. Na získanie spoľahlivých výsledkov je preto potrebná starostlivá histochemická kontrola: v prvom rade je potrebné vylúčiť prítomnosť voľných a nešpecifických aldehydov a ak sú prítomné, vykonať blokujúcu reakciu. Pomocou sladovej diastázy (v extrémnych prípadoch slinnej amylázy) možno vylúčiť prítomnosť glykogénu.
Potrebné činidlá: kryštalický zásaditý fuchsín (alebo tzv. zásaditý fuchsín pre fuchsín-sírový pre vás), 1 N. HCl, disiričitan draselný alebo sodný (K 2 S 2 O 5 alebo Na 2 S 2 O 5), periodická alebo lepšia draselná soľ (KIO 4), vysoko čistená sladová diastáza, hydroxylamín hydrochlorid. Pre acetylačnú reakciu: bezvodý pyridín a acetanhydrid, 0,1 N. žieravý draslík (KOH), liečivo neuraminidáza. Lipidy sa odstraňujú pôsobením rôznych rozpúšťadiel (napr. horúcou zmesou chloroformu a metylalkoholu).
Pokrok v definícii. Sériové rezy, experimentálne a kontrolné, sa ošetria roztokom jodistanu draselného, rýchlo sa premyjú v destilovanej vode a umiestnia sa do Schiffovho činidla, potom sa premyjú v čerstvo pripravenom roztoku bisulfitu (10 ml 10 % roztoku disiričitanu draselného, 10 ml 1 N HCl a 200 ml destilovanej vody). Rezy sa dôkladne umyjú vo veľkom objeme vody, dehydrujú v alkoholoch, vyčistia v xyléne a vložia do neutrálneho kanadského balzamu.
Reakcia acetylácie glykolových skupín a použitie neuraminidázy potvrdzujú spoľahlivosť získaných výsledkov.
Bibliografia Anasashvili A. Ts. Glykoproteíny krvného séra a moču, M., 1968, bibliogr.; Widershine G. Ya. Zlúčeniny obsahujúce sacharidy, ich biosyntéza a úloha v živočíšnej bunke, Molek. biol., t. 10, č. 5, s. 957, 1976, bibliogr.; Glycoproteins, ed. A. Gottschalk, prekl. z angličtiny, zväzok 1 - 2, M., 1969; D ere-vitskaya V. A. Chémia glykoproteínov, Usp. biol. chem. vyd. B. N. Stepanenko, zväzok 8, s. 168, Moskva, 1967; Smernice o používaní jednotnej klinickej laboratórne metódy Research, ed. V. V. Menshikov, Moskva, 1973. Pierce E. Histochemistry, trans. z angličtiny, s. 741 a ďalší, M., 1962; Princípy a metódy histo-cytochemickej analýzy v patológii, ed. A. P. Avtsyna a ďalší, s. 7, L., 1971; Spiro R. G. Glycoproteins, Advanc. Protein Chem., sv. 27, str. 349, 1973, bibliogr.
G. Ya Wiederschein; A. Ts. Anasashvili (výskum pervitínu), R. A. Simakova (gist.).
- Zvýšenie krvi (séra) [enzýmu] sa nazýva (hyper/enzým/émia). Ak je tento enzým normálne umiestnený vo vnútri buniek, potom je najčastejšie hyper/enzým/émia znamenie zničenia bunky. Dostupnosť enzým v krvi určený rýchlosť chemickej reakcie katalyzovanej týmto enzýmom – keď sa substrát tohto enzýmu pridá do testovacieho séra („in vitro“). Inými slovami, posudzuje sa [enzým] v sére činnosťou enzým.
| № | Enzým (enzým) | Choroba |
| 1. | Amyláza v moči (vstupuje do moču z krvi) | Pankreatitída Pankreatitída |
| 2. | Lipáza | |
| 3. | Amyláza v krvi | Pankreatitída (spolu s močovou lipázou a amylázou) alebo parotitída |
| 4. | Kreatínkináza (CK) | Infarkt alebo patológia kostrového svalstva |
| 5. | LDH 1 | Infarkt (pri angíne pectoris nedochádza k zvýšeniu LDH) |
| 6. | LDH 5 | Patológia pečene (hepatická žltačka) alebo kostrového svalstva |
| 7. | ALT je väčšia ako AST | Patológia pečene (hepatitída atď.; hepatálna žltačka) |
| 8. | AST viac ako ALAT | Srdcový infarkt (alebo závažná deštrukcia hepatocytov: s deštrukciou ich mitochondrií) |
| 9. | Alkalická fosfatáza (AP) | Rachitída alebo iné ochorenie kostí (ak je bez HGT) alebo obštrukčná žltačka(ak spolu s GGT) |
| Gama-glutamyl/transferáza (GGT) | Alkoholizmus (ak je bez ALP) alebo obštrukčná žltačka (ak s ALP) |
V niektorých prípadoch je na stanovenie diagnózy potrebné určiť aktivitu nie jedného enzýmu, ale dvoch.
15. Glukozúria, jej príčiny a diagnostický význam.
Dobre glukózy veľmi málo v moči< 0,5 г/сутки, или < 0,16 г/л), что не определяется обычными методами. Глюкозурией считают наличие в моче glukózy, ktorý sa zisťuje štandardným špecifickým testom. Glykozúria sa vyvíja, keď obsah glukózy v plazme krvi a preto v glomerulárnom filtráte výrazne prevyšuje reabsorpčnú kapacitu renálnych tubulov.
Stáva sa to pri akomkoľvek zvýšení. krvná glukóza najmä v dôsledku rýchlej absorpcie glukózy v čreve (post-gastroektomický dumpingový syndróm, normálne tehotenstvo); pri endokrinné ochorenia(DM, tyreotoxikóza, gigantizmus, akromegália, Cushingov syndróm, hyperplázia kôry nadobličiek); pri veľké zranenie, paralýza, infarkt myokardu, perorálne kortikosteroidy, popáleniny, infekcie, feochromocytóm.
Renálna glukozúria sa pozoruje pri poškodení a zvýšení permeability obličkových tubulov, tubulopatiách (Fanconiho choroba), čo je sprevádzané zvýšením moču urátov, bielkovín, aminokyselín, hydrogénuhličitanov, fosfátov, vápnika, draslíka. Glykozúria je prítomná pri renálnom diabete (mutácia transportéra monosacharidov a znížená reabsorpcia), sekundárna renálna glukozúria, s chronické choroby obličky. U pacientov cukrovka koncentrácie glukózy v moči sa môže pohybovať od 0,5 do 12%. Vymiznutie glukozúrie u pacientov s dlhodobým diabetes mellitus je dôsledkom pridruženého zlyhania obličiek.
Glykozúria môže simulovať laktozúriu u dojčiacich žien, fruktozúriu a galaktozúriu v dedičné choroby metabolizmus uhľohydrátov. Glukozúria sa vyskytuje pri otravách morfínom, strychnínom, chloroformom, fosforom.
16. Význam stanovenia Ca 2+ a fosfátu v krvnom sére.
Rýchlosť vápnika krvi 2,1 -2,6 mmol/l. Hladina nad 3,5-3,75 je život ohrozujúca kríza, náhle zastavenie srdiečka.
Rýchlosť fosforečnanu 0,8- 1 0,4 mmol/l.
- Definičná hodnota KAL T I A A FO S P H A T A v krvnom sére.
Zmeny [vápnika] a [fosfátu] v krvnom sére: po prvé, sú dôsledkom určité porušenia, a preto naznačujú prítomnosť týchto porušení. Po druhé, môžu spôsobiť určité poruchy, a preto naznačujú riziko vzniku týchto porúch.
Príčiny zmien koncentrácií vápnika a fosfátov: 1) podvýživa (nadmerný alebo nedostatočný príjem vápnika a fosfátu a potravy), 2) dysregulácia a [fosfát], spôsobené poruchami produkcie hormónov, ktoré regulujú a [fosfát].
Pri nedostatočnom príjme vápnika a fosfátu z potravy a [fosfátu] v plazme sa môže znížiť, ale nie výrazne, pretože vápnik a fosfát vstupujú do plazmy z kostí (ak [fosfát] klesá aj v plazme - ale to sa deje pod vplyvom hormónov kalcitriol a paratyrín a práve ich nedostatok môže viesť k zníženiu
17. biochemická diagnostika pankreatitídy.
Biochemická analýza krv - detekcia pokročilá úroveň enzýmy amylázy, Vysvetlivky: amyláza je produkovaná PZhZh a slinnými žľazami, z ktorých vstupuje do kanálikov do tráviaceho traktu na trávenie (na trávenie potravinového škrobu: štiepenie škrobu na maltózu) - PZhZh amyláza vstupuje do dvanástnika a amyláza slinné žľazy ide ústna dutina. V krvi by nemala byť amyláza a prítomnosť amylázy v krvi je výsledkom poškodenia SF alebo PG. Do moču sa môže dostať iba amyláza PZhZh (ak je v krvi) a amyláza SJ sa do moču nedostane. Lipáza sa tvorí v pankrease, ale nie v SF. Človek hovorí o α -amyláza. Človek nemá β-amylázu, keďže ide o amylázu, ktorá by umožnila človeku jesť papier rovnako ako chlieb – táto amyláza štiepi β-glykozidové väzby v celulóze. α-amyláza katalyzuje štiepenie maltózy zo škrobu alebo potravinového glykogénu
Podobné informácie.